CN112858516B

CN112858516B - 一种快速分析动物源性食品中利尿剂残留量的方法

Info

Publication number: CN112858516B
Application number: CN202110097747.3A
Authority: CN
Inventors: 张海超; 艾连峰; 王敬; 闫永欢; 张婧雯; 黄雪静
Original assignee: Shijiazhuang Customs Technology Center
Current assignee: Shijiazhuang Customs Technology Center
Priority date: 2021-01-25
Filing date: 2021-01-25
Publication date: 2022-10-04
Anticipated expiration: 2041-01-25
Also published as: CN112858516A

Abstract

本发明提供了一种快速分析动物源性食品中利尿剂残留量的方法。本方法采用乙腈提取目标化合物，经氮吹浓缩后采用Cyclone‑p在线固相萃取柱净化，流动相采用乙腈‑水进行梯度洗脱，在正负离子全扫描/数据依赖二级扫描(FullScan/ddMS2)模式下进行质谱分析，一级扫描准分子离子峰定量。结果表明，10种利尿剂在各自线性范围内呈良好线性关系，相关系数大于0.99，检出限为0.3‑1μg/kg，定量限为1‑3μg/kg。待测物在平均回收率在70.8％～117.5％之间，相对标准偏差在4.0％～14.5％之间。该方法前处理简单，快速，灵敏度高，可用于动物源性食品中利尿剂的快速定性定量分析。

Description

一种快速分析动物源性食品中利尿剂残留量的方法

技术领域

本发明涉及利尿剂残留量的检测方法技术领域，尤其涉及一种快速分析动物源性食品中利尿剂残留量的方法。

背景技术

利尿剂在畜禽养殖常被用作治疗奶牛乳房炎、改善禽蛋蛋白比例，以及治疗心、肝、肾等各类水肿。在GB31650-2019中明确规定允许将氢氯噻嗪用于牛的养殖过程，且不需要制定残留限量。利尿剂的广泛应用，再加之有一些不法商贩利用该类药物可以迅速排尿的功能来掩盖其使用的其他违禁药物，这就导致动物体内存在残留利尿剂的风险。但是利尿利是被世界反兴奋剂机构(WADA)列为禁用药物清单里的一类兴奋剂。如果运动员误食了残留利尿剂的动物源性食品会造成兴奋剂尿检阳性，严重影响运动员的职业生涯。因此，为保证体育赛事的食品安全性，2019年8月，体育总局反兴奋剂中心在《大型赛事食源性兴奋剂防控工作指南(暂行)》的通知中，将乙酰唑胺等10种利尿剂列为肉食品兴奋剂建议检测项目。然而，目前关于利尿剂的检测多为血液、尿液、饲料、中草药制剂和保健食品样本，对于动物源性食品中利尿剂的检测报道较少，仅见“超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡肉和猪肉中利尿剂残留量”薛颖等采用液相色谱串联质谱法测定了鸡肉和猪肉中呋塞米、螺内酯和布美他尼3种化合物，该研究测定的基质范围和化合物种类都非常有限，难以满足当前监管需求。因此，建立动物源性食品中利尿剂残留的检测技术对于营造健康安全消费环境，保障体育运动的食品安全具有重要意义。

目前关利尿剂检测有液相色谱法、气相色谱-质谱法和液相色谱-串联质谱法。以上测定方法中液相色谱法灵敏度低、定性能力差；气相色谱-质谱法需要衍生化处理才能检测，检测项目有限；液相色谱-串联质谱法虽然灵敏度高、抗干扰能力强，但与高分辨质谱相比在选择性和阳性确证方面仍存在不足。在前处理方面，利尿剂多采取不净化、QuEChERS或者固相萃取的净化方式。对于含有较多的蛋白、磷脂的动物源性食品仍需要较好的净化方式以降低对目标物的基质干扰。

因此，如何提供一种快速分析动物源性食品中利尿剂残留量的方法，使对多种利尿剂残留量检测方法简单、灵敏度高、实现对动物源性食品中利尿剂进行快速的定性定量分析，是本领域亟待解决的难题。

发明内容

有鉴于此，本发明公开了一种快速分析动物源性食品中利尿剂残留量的方法，本发明解决了现有技术中对动物源性食品残留利尿剂检测方法报道较少，没有公开同时对多种利尿剂进行检测的问题。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

取待检测样品，采用TurboFlow在线固相萃取-液相色谱-高分辨质谱法对其进行检测；

所述在线固相萃取条件如下：净化柱为Cyclone-P聚合物柱(0.5×50mm，60μmparticle size，

pore size)

流动相：A相为乙酸铵+乙酸溶液、B相为乙腈、C相为丙酮+乙腈+异丙醇；

0-1min 100％A，0％B，0％C；

1-3min 60％A，40％B，0％C；

3-9min 0％A，0％B，100％C；

9-18.5min 0％A，100％B，0％C；

18.5-20.5min 0％A，100％B，0％C；

20.5-22min 0％A，0％B，100％C；

22-24min 60％A，40％B，0％C；

24-26min 100％A，0％B，0％C；

流速：0.3ml/min；

进样量：50μL；

液相色谱条件如下：HPLC的分析柱为资生堂CAPCELL PAKADME(150×2.1mm，5μm)

流动相：D相为水溶液、E相为乙腈；

0-1min 95％D，5％E；

1-3min 95％D，5％E；

3-9min 60％D，40％E；

9-18.5min 45％D，55％E；

18.5-20.5min 40％D，60％E；

20.5-22min 10％D，90％E；

22-24min 10％D，90％E；

24-26min 95％D，5％E；

流速：0.3ml/min；

进样量：50μL；

高分辨质谱条件如下：电喷雾离子源(HESI)温度：350℃；喷雾电压：3200V(正离子模式)/2500V(负离子模式)；正负离子同时扫描模式；扫描范围：m/z为100-500；一级质谱全扫描分辨率：R＝70000；C-trap最大容量(AGC target)：5×10⁵；C-trap最大注入时间：100ms；数据依赖二级子离子全扫描(ddms2)分辨率：R＝17500；归一化碰撞能量：40eV±50％；C-trap最大容量(AGC target)：5×10⁴；C-trap最大注入时间：50ms；动态排除：5s。

优选的，所述待检测样品的制备过程为：

1)称取2-5g动物源性食品均匀试样，置于50mL离心管中，加入20-25mL乙腈和4-5g氯化钠，立即摇匀，得到试样混合液；

2)将步骤1)中所述的试样混合液用均质器以8000-10000r/min均质1-3min后，用离心机在8000-10000r/min下离心4-10min；移取5mL提取液加入5mL乙腈饱和正己烷溶液进行萃取，静置分层；

3)取步骤2)中下层有机相，在40℃水浴中氮气流吹干，加入1mL乙腈-0.1％甲酸水溶液，涡旋1-3min，得到待检测样品。

优选的，所述乙腈-0.1％甲酸水溶液中乙腈与0.1％甲酸水溶液的体积比为1：1。

优选的，所述在线固相萃取在程序中每步的变化采用瞬变模式；所述液相色谱条件在程序中每步的变化除最后一步采用瞬变模式外其他步骤间改变采用渐变模式。

优选的，所述利尿剂为乙酰唑胺、坎利酮、氯噻酮、呋塞米、螺内酯、苄氟噻嗪、氯噻嗪、氢氯噻嗪、氨苯蝶啶、精磺胺中的一种或几种。

优选的，高分辨质谱条件中化合物提取精确质量数及二级特征碎片离子如下：

优选的，所述动物源性食品包括猪肉、牛肉、羊肉、鸡蛋、牛奶。

优选的，所述在线固相萃取流动相A相为10mmol/L乙酸铵+0.02％乙酸溶液。

优选的，所述在线固相萃取流动相C相中丙酮、乙腈、异丙醇体积比为1:1:1。

本发明的有益效果：

1、本发明基于Turboflow在线净化技术，建立了动物源性食品中10种利尿剂的四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱检测方法；本发明对洗脱条件，色谱柱进行了选择、对流动相进行了优化；本发明所述的方法前处理简单，选择性强，自动化程度高。

2、本发明在一定质量浓度范围内的测试结果呈良好的线性关系，相关系数大于0.99，对10种利尿剂的检出限为0.3-1.0μg/kg，定量限为1-3μg/kg。可对动物源性食品中10种利尿剂的风险监测提供技术支持。

附图说明

图1附图为乙酰唑胺(A)、氯噻嗪(B)和氢氯噻嗪(C)优化后的在线净化条件色谱图(不接分析柱)；

图2附图为流动相的比较对10种利尿剂灵敏度的影响；

图3附图为10利尿剂的选择离子流图，A:乙酰唑胺；B:坎利酮(19.19min)和螺内酯(19.76min)；C：氯噻酮；D：呋塞米；E：苄氟噻嗪；F:氯噻嗪；H：氢氯噻嗪；I：氨苯蝶啶；J：精磺胺；

图4附图为10种利尿剂的基质效应；

图5附图为阳性样品中氢氯噻嗪的提取离子色谱图。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

仪器与试剂：

TurboFlow在线净化液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱仪Q-Exactive(美国ThermoFisher公司)，由CTC多功能自动进样器(配有200μL定量环)、两个耐压1250bar的四元梯度液相泵、六通阀切换装置和Q-Orbitrap四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱仪组成；Sigma3K-15型离心机(Sigma公司，美国)；PT2100型均质器(KINEMATICA公司，瑞士)；涡旋混合器(ScientificIndustries，美国)；Milli-Q纯水系统(Millipore公司，美国)。

乙腈、甲醇、丙酮、异丙醇、甲酸、乙酸、乙酸铵均为色谱纯，无水硫酸钠、氯化钠均为分析纯，水为Milli-Q高纯水。

标准品：乙酰唑胺、坎利酮、氯噻酮、呋塞米、螺内酯、苄氟噻嗪、氯噻嗪、氢氯噻嗪、氨苯蝶啶、精磺胺标准品均购于德国Dr.Ehrenstorfer公司，纯度大于97％。

分别称取10种利尿剂标准品10mg于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解、定容，得到浓度为1mg/mL的单标储备液，于4℃下避光保存。根据需要，准确移取10种利尿剂标准储备液，用甲醇稀释成10μg/mL混合标准工作液，待用。

称取5.0g均匀试样，置于50mL离心管中，加入25mL乙腈，5g氯化钠迅速摇匀，用均质器以10000r/min均质1min后，在10000r/min下离心5min。移取5mL提取液加入5mL乙腈饱和正己烷液液萃取，静置分层，取下层有机相在40℃水浴中氮气流吹干。加入1mL乙腈-0.1％甲酸水(1:1，V/V)涡旋1min，进样测定。

在线净化及HPLC条件：

在线净化程序由净化(TFC)和分离(HPLC)两部分组成。净化柱为Cyclone-P聚合物柱(0.5×50mm，60μm particle size，

pore size)；流动相A为10mmol/L乙酸铵+0.02％乙酸溶液、B为乙腈、C为丙酮+乙腈+异丙醇(1：1：1，V/V)，进样量为50μL；HPLC的分析柱为资生堂CAPCELL PAK ADME(150×2.1mm，5μm)；流动相D为水溶液，流动相E为乙腈，其在线净化梯度洗脱程序见表1。TFC在程序中每步的变化采用瞬变模式，HPLC每步的变化除最后一步采用瞬变模式外其他步骤间改变采用渐变模式。整个运行时间为26min。

表1.在线净化及色谱分离的梯度洗脱程序

A：10mmol/L乙酸铵-0.02％乙酸水溶液；B：乙腈；C：丙酮+乙腈+异丙醇(1：1：1，V/V)。D：水；E：乙腈。

高分辨质谱条件：

电喷雾离子源(HESI)温度：350℃；喷雾电压：3200V(正离子模式)/2500V(负离子模式)；正负离子同时扫描模式；扫描范围：m/z为100-500；化合物提取精确质量数及二级特征碎片离子见表2；一级质谱全扫描分辨率：R＝70000；C-trap最大容量(AGC target)：5×10⁵；C-trap最大注入时间：100ms；数据依赖二级子离子全扫描(ddms2)分辨率：R＝17500；归一化碰撞能量：40eV±50％；C-trap最大容量(AGC target)：5×10⁴；C-trap最大注入时间：50ms；动态排除：5s。

表2. 10种利尿剂的名称、分子式及部分质谱参数

前处理的选择和优化：

10种利尿剂大多同时含有酸性和碱性基团，性质差异较大。实验对比了乙酸乙酯和乙腈的提取效果，二者提取效果差异不大。考虑到与后续处理方法的兼容性，所以本实验选择乙腈作为提取溶剂。由于测定的动物源性基质含有较多油脂，提取液直接氮吹浓缩有无法吹干的现象，给样品复溶带来一定困难。实验选择在氮吹前用乙腈饱和的正己烷液液萃取进行脱脂净化。同时，定容液的选择对化合物的复溶和在净化柱柱上的保留情况有着重要的影响，实验对乙腈和0.1％甲酸水溶液不同比例的上样溶液在净化柱上的保留情况进行了考察。发现化合物随着乙腈比例的减小，在净化柱上的保留行为增强。当乙腈和0.1％甲酸水溶液比例在1：1时化合物在净化柱的保留部分不再增加，且该定容液可完全溶解目标物。

高分辨质谱条件的选择和优化：

本实验采用全扫描和正、负离子切换模式进行测定。通过一级质谱的精确质量数进行定性定量，并设置自动触发二级模式提高定性的准确性。在一级扫描质谱图中发现这10种化合物在ESI^-和ESI⁺模式下响应各不相同，坎利酮和氨苯蝶啶只在正离子模式有响应，为[M+H]⁺峰。螺内酯在高温源内不稳定，容易脱去一分子乙酰基硫基后生成质荷比为341.2111的正离子峰，与坎利酮母离子相同。乙酰唑胺、氯噻酮和氯噻嗪在正负离子模式下均有响应，但负模式响应值较高，选择[M-H]^-峰作为母离子。其他4种化合物呋塞米、苄氟噻嗪、氢氯噻嗪和精磺胺仅在负离子模式下灵敏度较高，母离子均为[M-H]^-峰。故本方法采用正负离子同时全扫描模式和数据依赖扫描模式(FullScan/ddMS2)进行化合物的测定，采用较高的分辨率(70000)在一定的质量数范围做一级质谱全扫描，以保证目标化合物具有更好的质量准确度。在扫描范围内母离子的强度达到设定阈值(1×10⁵)时自动触发行二级子离子质谱扫描，采用40eV±50％的碰撞能量可得到二级质谱信息，选用丰度较高的碎片离子作为特征离子，最终建立的高分辨质谱条件如表2所示。

在线净化条件的优化：

在线净化过程主要包括上样、淋洗和洗脱三个步骤。考虑到10种利尿剂多为中等弱极性化合物，所以选择10mmol/L乙酸铵+0.01％乙酸水溶液为上样溶液，比较了具有类似反相柱性质的Cyclone-P、C18-XL、C18三种净化柱对利尿剂的保留情况，发现均可对60％目标化合物实现完全保留，但是C18-XL和C18净化柱对乙酰唑胺、氯噻嗪和氢氯噻嗪均无法实现保留，Cyclone-P对这三种化合物保留更好一些，如图2所示，但仍有一定损失。同时实验又比较了5mmol/L乙酸铵、水作为上样溶液时对化合物的保留情况，发现与10mmol/L乙酸铵+0.01％乙酸水溶液相当。但10mmol/L乙酸铵+0.01％乙酸水溶液作为上样溶液时氨苯蝶啶的峰形最好。在保证化合物灵敏度的情况下，允许上样过程存在一定损失。洗脱这一步要将目标化合物从在线固相萃取柱转移至分析柱，与分析柱流动相合并切入质谱，所以在保证化合物洗脱的情况下，流动相乙腈比例不能过高，以免化合物在分析柱上产生溶剂效应，经过优化采用40％乙腈进行洗脱。在淋洗步骤中，采用乙腈和丙酮+乙腈+异丙醇(1∶1∶1，V/V)反复洗掉TFC柱上的强保留杂质。最后再用洗脱溶剂充满定量环，并以TFC流动相A初始化在线净化柱，以备下一个样品的分析，最后建立了表1的梯度条件。

色谱柱的选择：

分析色谱柱将净化柱洗脱下来的目标物进行分离，由于本研究采用一级全扫描色谱图的峰面积进行定量，因此具有相同母离子的化合物坎利酮和螺内酯必须进行有效地色谱分离才能保证定性和定量的准确性。本研究比对了Thermo Accucore AQ(2.1×150mm，2.6μm)、Agilent poroshell 120PFP(2.1×150mm，2.6μm)、资生堂CAPCELL PAK ADME(2.1×150mm，5μm)的分析效果，Thermo AccucoreAQ柱对坎利酮和螺内酯分离效果最好，但是该色谱柱保留行为较其他两种分析柱较差，产生导致乙酰唑胺、氯噻嗪和氢氯噻嗪峰形较差产生溶剂效应，Agilent poroshell 120PFP保留行为最好，但是无法分离坎利酮和螺内酯，资生堂CAPCELL PAK ADME色谱柱兼顾两者性能，通过对洗脱条件的不断优化，采用表1梯度洗脱条件可实现对化合物的保留和分离。

流动相的优化：

分析流动相的组成、初始比例和梯度洗脱条件对目标化合物的峰形及分离度都会产生影响。实验为保证各化合物最佳的分析效果，对流动相水-乙腈，乙腈-0.1％甲酸水溶液，5mM乙酸铵-乙腈，水-甲醇进行了比较，各化合物响应如图3所示，由图2可看出采用水-乙腈是对各化合物响应值最高，同时对流动相初始比例和梯度洗脱条件进行了优化，最后采用表1梯度洗脱条件时，10种利尿剂的响应和峰形均满足分析要求。

基质效应评价：

基质效应(ME)指测定目标物以外的其余组分对测定结果的影响。实验通过比较基质标准曲线和溶剂标准曲线的斜率比来判断基质效应的强弱。计算公式如下：ME＝基质标准曲线斜率/溶剂标准曲线斜率。如图5显示，氯噻酮基质效应最强，表现为基质抑制，在0.23-0.52之间。螺内酯基质效应最弱，在0.82-1.01之间。各化合物在不同基质中离子化效率表现不同，为消除基质效应的影响，本方法采用基质标准溶液对结果进行校正，使目标物在标准工作溶液和样品溶液中均具有相似的离子化环境，确保方法定性和定量的准确性。

线性范围、检出限和定量限：

根据分析物的灵敏度，选用猪肉、牛肉、羊肉、鸡蛋和牛奶的空白基质溶液配制了基质匹配标准溶液，以待测物峰面积(Y)为纵坐标，对应质量浓度(X，ng/mL)为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，10种利尿剂在一定的质量浓度范围内均成良好线性关系，相关系数(r²)均大于0.99，采用逐级稀释的方式，并结合信噪比S/N>3以及S/N>10的要求，确定方法的检出限(LOD)和定量限(LOQ)。结果表明，10种利尿剂的检出限为0.3-1.0μg/kg，定量限为1-3μg/kg。代表性基质牛肉的线性方程、线性范围、相关系数、检出限和定量限，见表3。

表3. 10种利尿剂的线性范围、相关系数、检出限和定量限

本发明采用标准加入法，取已制备均匀的空白样品，准确加入10种利尿剂的混合标准溶液，分别添加浓度为3、10和50μg/kg的样品各6份，按上述优化后的方法进行分析。采用各空白基质溶液配制系列标准溶液，外标法进行定量分析，计算平均回收率和相对标准偏差(RSD)。10种利尿剂的回收率均在70.8％～117.5％之间，RSD在4.0％～14.5％之间，能够满足动物源性食品中利尿剂的定性和定量的要求。代表性基质牛肉的加标回收率和相对标准偏差见表4。

表4.本发明对牛肉的加标回收率及相对标准偏差(n＝6)

实施例1

1)取市售猪肉粉碎，称取5.0g市售猪肉均匀试样，置于50mL离心管中，加入25mL乙腈和5g氯化钠，立即摇匀，得到试样混合液；

2)将步骤1)中所述的试样混合液用均质器以10000r/min均质1min后，用离心机在10000r/min下离心5min。移取5mL提取液加入5mL乙腈饱和正己烷溶液进行萃取，静置分层；

3)取步骤2)中下层有机相，在40℃水浴中氮气流吹干，准确加入1mL乙腈-0.1％甲酸水溶液，涡旋1min，进样测定；

4)采用TurboFlow在线固相萃取-液相色谱-高分辨质谱法检测。

本实施例从猪肉样品中检出氢氯噻嗪，检出量为25μg/kg，阳性样品的提取离子图见图5。

实施例2

1)取市售牛奶，称取4.0g牛奶均匀试样，置于50mL离心管中，加入20mL乙腈和4g氯化钠，立即摇匀，得到试样混合液；

2)将步骤1)中所述的试样混合液用均质器以10000r/min均质1min后，用离心机在10000r/min下离心10min。移取5mL提取液加入5mL乙腈饱和正己烷溶液进行萃取，静置分层；

4)采用TurboFlow在线固相萃取-液相色谱-高分辨质谱法检测。

未从牛奶中检测出利尿剂成分。

实施例3

1)取市售鸡蛋，将蛋清与蛋黄搅匀，称取2.0g均匀试样，置于50mL离心管中，加入25mL乙腈和5g氯化钠，立即摇匀，得到试样混合液；

2)将步骤1)中所述的试样混合液用均质器以8000r/min均质3min后，用离心机在8000r/min下离心4min。移取5mL提取液加入5mL乙腈饱和正己烷溶液进行萃取，静置分层；

3)取步骤2)中下层有机相，在40℃水浴中氮气流吹干，准确加入1mL乙腈-0.1％甲酸水溶液，涡旋3min，进样测定；

4)采用TurboFlow在线固相萃取-液相色谱-高分辨质谱法检测。

未从鸡蛋中检测出利尿剂成分。

由以上实施例可知，本发明提供了一种快速分析动物源性食品中利尿剂残留量的方法，本发明提供的方法前处理简单，选择性强，自动化程度高，检测速度快，检测结果精准。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种快速分析动物源性食品中利尿剂残留量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

所述在线固相萃取条件如下：净化柱为Cyclone-P聚合物柱，0.5×50mm，60μmparticle size，

pore size；

流速：0.3ml/min；

进样量：50μL；

液相色谱条件如下：HPLC的分析柱为资生堂CAPCELL PAKADME，150×2.1mm，5μm；

流动相：D相为水溶液、E相为乙腈；

流速：0.3ml/min；

进样量：50μL；

高分辨质谱条件如下：电喷雾离子源温度：350℃；喷雾电压：正离子模式：3200V/负离子模式：2500V；正负离子同时扫描模式；扫描范围：m/z为100-500；一级质谱全扫描分辨率：R＝70000；C-trap最大容量：5×10⁵；C-trap最大注入时间：100ms；数据依赖二级子离子全扫描分辨率：R＝17500；归一化碰撞能量：40eV±50％；C-trap最大容量：5×10⁴；C-trap最大注入时间：50ms；动态排除：5s；

所述利尿剂为乙酰唑胺、坎利酮、氯噻酮、呋塞米、螺内酯、苄氟噻嗪、氯噻嗪、氢氯噻嗪、氨苯蝶啶、精磺胺中的一种或几种。

2.根据权利要求1所述的一种快速分析动物源性食品中利尿剂残留量的方法，其特征在于，所述待检测样品的制备过程为：

3.根据权利要求1所述的一种快速分析动物源性食品中利尿剂残留量的方法，其特征在于，所述在线固相萃取在程序中每步的变化采用瞬变模式；

所述液相色谱条件在程序中每步的变化除最后一步采用瞬变模式外其他步骤间改变采用渐变模式。

4.根据权利要求1所述的一种快速分析动物源性食品中利尿剂残留量的方法，其特征在于，高分辨质谱条件中化合物提取精确质量数及二级特征碎片离子如下：

5.根据权利要求1所述的一种快速分析动物源性食品中利尿剂残留量的方法，其特征在于，所述动物源性食品包括猪肉、牛肉、羊肉、鸡蛋、牛奶。

6.根据权利要求2所述的一种快速分析动物源性食品中利尿剂残留量的方法，其特征在于，所述乙腈-0.1％甲酸水溶液中乙腈与0.1％甲酸水溶液的体积比为1:1。

7.根据权利要求1所述的一种快速分析动物源性食品中利尿剂残留量的方法，其特征在于，所述在线固相萃取流动相A相为10mmol/L乙酸铵+0.02％乙酸溶液。

8.根据权利要求1所述的一种快速分析动物源性食品中利尿剂残留量的方法，其特征在于，所述在线固相萃取流动相C相中丙酮、乙腈、异丙醇体积比为1:1:1。