CN105548340A - 黑磷在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了黑磷作为基质在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF？MS)？检测中的应用。所述应用中的待测物质的分子量为0-1000？Da；黑磷作为基质，对含有季铵基团的小分子具有优越的质谱响应；黑磷质地较软，可以直接涂覆在MALDI靶板上进行分析，无需预先分散在溶剂中，省去耗时的溶剂分散过程，而且不必考虑基质与样品溶剂的相容性问题；在激光的照射下，黑磷会产生很多磷原子簇，用于辅助分析物的解吸和电离过程；与传统有机基质相比，黑磷在小分子区域的干扰很小；结合稳定同位素标记（SIL）策略，本发明将黑磷成功用于唾液、尿样和血清中醛类物质、巯基化合物和酸性植物激素的快速定量和定性分析。

Description

黑磷在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱中的应用
技术领域
本发明属于质谱检测技术领域，具体涉及一种磷基质在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱中的应用。
背景技术
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)自上个世纪八十年代末期被发展以来，已广泛应用于蛋白质，糖类，核酸，多肽等生物大分子以及高分子聚合物的结构分析与分子量测定。相对于其它质谱技术，MALDI具有许多优点，例如操作简便、检测速度快、通量高、抗干扰能力强、有机溶剂消耗少(无需流动相)和样品用量少等。但由于传统的MALDI基质主要为低分子量的有机酸例如：α-氰基-4-羟基肉桂酸(α-cyano-4-hydroxycinnamicacid，α-CHCA)，2,5-二羟基苯甲酸(2,5-dihydroxybenzoicacid，DHB)，芥子酸(sinapinicacid，SA)，烟酸等，它们容易在低分子量区域(<500Da)产生大量基质信号峰，干扰小分子分析物的检测。另一方面，有机基质与样品形成的结晶不均一，严重影响MALDI分析的重现性，因此基于MALDI的定量分析一直是个难题。
黑磷，是最稳定的磷的同素异形体，现今被开发成为一种片层材料。它可以被机械剥离成单层或者多层的纳米片，具有与片层数目相关的光学能带间隙(单层黑磷的能带间隙为1.5eV,块状黑磷为0.3eV)，因此能够吸收来自紫外到红外区域的电磁光谱，而且表现出很高的电子迁移率。由于这些独特的特性，近年来黑磷在半导体、电极材料、光电传感和气体传感等领域均得到广泛的关注。基于对紫外/可见光的吸收能力和可控的光学能带间隙，黑磷有望成为一种新型MALDI基质。而且，黑磷的内部结构很稳定，在激光照射下，低分子量区域的背景干扰很小，几乎不会影响对小分子物质的检测。然而，至今未见到黑磷作为MALDI基质的文献报道。
在过去的一些报道中，为了解决质谱信号的不稳定性问题，通常会加入同位素内标。但是，同位素内标往往价格昂贵，而且并不是所有分析物的同位素内标都能买到。稳定同位素标记(SIL)策略，一种新兴的用于质谱定量分析的技术，采用衍生化反应对样品/内标分别做轻/重同位素标记，然后将两份样品混合进样分析。这种策略不仅有利于提高质谱检测的灵敏度，而且校正了质谱响应不稳定的问题。因此，SIL同样可以用来解决MALDI-TOFMS分析中灵敏度差和定量分析不准确的问题。
发明内容
本发明的目的是提供黑磷在作为基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)中的基质的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
1)将黑磷直接涂抹在MALDI靶板上；
2)将溶剂分散后的样品滴加到黑磷基质层上，待溶剂挥发后，进行MALDI-TOFMS分析。
上述的应用中，所述基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱中的待测物质的分子量范围为1-1000Da。
上述的应用中，所述基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱中的待测物质可为酸性染料、酸性表面活性剂、脂肪酸、碱性染料、阳离子表面活性剂、氨基酸、多肽及多环芳烃中任一种。
上述的应用中，所述基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱中的待测物质为含季铵基团的物质时，效果最好。
本发明的另一目的是提供黑磷作为MALDI基质用于醛类化合物、巯基化合物和羧酸类化合物的检测，包括如下步骤：分别用季铵盐衍生化试剂4-(2-(trimethylammonio)ethoxy)–benzenaminiumhalide(4-APC),ω-bromoacetonylquinoliniumbromide(BQB)和3-bromoactonyltrimethylammoniumbromide(BTA)衍生醛类化合物、巯基化合物和羧酸类化合物，使这些化合物带上季铵基团，然后以黑磷为基质进行MALDI分析。
本发明的另一目的是提供黑磷作为MALDI基质结合稳定同位素标记用于生物样品中目标检测物的定量分析：
(1)建立目标检测物的线性回归方程及相关系数：以对照样品为样品基质，添加一系列浓度的目标检测物(0.1-20μM，每个浓度平行三组实验)，用相应的衍生化试剂进行轻标记，再加入一定量的重标记目标检测物做为内标(内标的浓度最好与所测样品中该目标检测物的浓度在同一个数量级上)，以黑磷为基质进行MALDI-TOFMS分析；以目标检测物的浓度为横坐标，轻标记目标检测物与重标记内标的平均峰强度比值为纵坐标进行线性回归，得到线性回归方程及相关系数。
(2)待测样品中目标检测物的测定：通过以黑磷为基质进行的MALDI-TOFMS分析，获得轻标记目标检测物与重标记内标的平均峰强度比值，将该比值代入线性回归方程中，即可算出样品中该目标检测物的浓度。
本发明的另一目的是提供黑磷作为MALDI基质结合稳定同位素标记用于生物样品中目标检测物的定性分析：
待测生物样品分别用轻/重衍生化试剂进行标记，衍生之后，这两份样品以1：1的体积比进行混合，以黑磷为基质进行MALDI-TOFMS分析。潜在目标检测物定性分析的两个依据：轻/重标记的目标检测物为一对分子量相差4Da的离子对；这个离子对的峰强度比值在0.8-1.2之间。根据以上两个判断依据，可在质谱图中找到潜在目标检测物。
上述的检测，可用于醛类物质、巯基化合物和酸性植物激素的检测。
所述的生物样品为唾液、尿液和血清。
本发明具有如下优点和效果：
1)黑磷的质地较软，可以均匀地涂抹在MALDI靶板上，省去耗时的溶剂分散过程，而且不必考虑基质与样品溶剂的相容性问题；
2)黑磷作为MALDI基质，在小分子区域背景干扰小；
3)与碳材料基质(碳纳米管(CNTs)，氧化石墨烯(GO)，富勒烯(C60))相比，黑磷对含季铵基团的物质表现出优越的检测灵敏度，选择性好，抗基质干扰能力很强，耐盐性好；
4)结合稳定同位素标记(SIL)策略，能够被黑磷检测的分析物种类得到很好的拓展，而且我们将黑磷成功用于生物样品(唾液、尿样和血清)中醛类物质的快速定量和定性分析。
附图说明
图1是黑磷用于选择性检测季铵物质的示意图。
图2是分别用CNTs,GO,C60和黑磷检测小分子物质的质谱图：
(a)苯并芘(BaP,1000ng/mL),(b)隐性孔雀石绿(LMG,1000ng/mL),(c)十六烷基二甲基苄基氯化铵(HDBAC,10ng/mL)和(d)罗丹明B(RhB,1ng/mL)；图中给出黑磷作为基质时各种物质的检出限。
图3是分别用CNTs,GO,C60和黑磷检测三种季铵盐衍生化试剂的质谱图：
(a)4-APC(100ng/mL),(b)BQB(100ng/mL)和(c)BTA(100ng/mL)；黑磷检测这三种衍生化试剂分别标记的(d)醛类物质(100nM),(e)巯基化合物(100nM)和(f)酸性植物激素(100nM)。
图4是黑磷结合稳定同位素用于检测4-APC标记唾液样品的质谱图：
空白唾液(a)，唾液中4-APC加标五种醛类物质的浓度：0.5μM(b)和1.0μM(c)，每份样品中4-APC-d4标记的醛类物质的浓度均为1.0μM，五种醛类包括：丁醛、己醛、庚醛、辛醛、壬醛。
图5是黑磷结合稳定同位素用于检测4-APC标记尿样的质谱图：
空白尿样(a)，尿样中4-APC加标庚醛：0.5μM(b)和1.0μM(c)，每份样品中4-APC-d4标记的庚醛的浓度均为1.0μM。
图6是黑磷结合稳定同位素用于检测4-APC标记血清的质谱图：
空白尿样(a)，血清中4-APC加标庚醛：0.5μM(b)和1.0μM(c)，每份样品中4-APC-d4标记的庚醛的浓度均为1.0μM。
图7是吸烟者唾液样品中醛类物质的质谱图：
未衍生的唾液(a),4-APC标记唾液和4-APC-d4标记唾液等体积混样(b)。序号1-8依次代表：戊醛、己醛、庚醛、苯乙醛、辛醛、苯丙醛、壬醛和癸醛。
具体实施方式
通过以下详细说明结合附图可以进一步理解本发明的特点和优点。所提供的实施例仅是对本发明方法的说明，而不以任何方式限制本发明揭示的其余内容。
【实施例1】黑磷作为基质检测小分子化合物
本发明所用的黑磷购自先丰纳米材料科技有限公司(南京，中国)。将黑磷直接涂抹在MALDI靶板上，得到直径约为2mm的涂层。作为比较，分别配制2mg/mL的CNTs,GO和C60基质分散液，取0.5μL的分散液点在板上作为基质。
分析物为三十多种分子量范围在1-1000Da的物质，包括酸性物质(酸性染料、酸性表面活性剂和脂肪酸)，碱性物质(碱性染料和阳离子表面活性剂)，两性物质(氨基酸和多肽)和多环芳烃等化合物。取0.5μL分析物溶液点在基质层上，待溶剂挥发干了之后再进行MALDI-TOFMS分析。
所有的质谱分析都采用日本Shimadzu公司的AximaTOF2型基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱仪(MALDI-TOFMS)。MALDIMS分析时采用波长为337nm的氮气激光器，其脉冲宽度为3ns；采用20kV的加速电压，在正离子模式下进行检测，采用反射模式。每张谱图是200次激光扫描的平均结果。
检测示意图和代表性的检测结果分别如图1，2所示：我们选择了三十多种分析物用于考察黑磷作为MALDI基质的效果，从结果中我们发现，黑磷对含季铵基团的物质可以选择性地响应(如示意图1)。分析非季铵物质(BaP和LMG)时，黑磷与碳基质的效果差不多，检出限较高(100ng/mL)(图2a-b)；分析季铵物质(RhB和HDBAC)时，黑磷表现出明显的优势，检出限低至0.01ng/mL(图2c-d)，说明黑磷对季铵物质具有很高的检测灵敏度。
【实施例2】黑磷检测4-APC标记的醛类物质
在之前的工作中，我们开发了含有季铵基团的衍生化试剂4-APC[1]，可以用于衍生醛类物质，因此在本发明中我们用黑磷来检测4-APC以及4-APC标记的五种醛类物质：丁醛、己醛、庚醛、辛醛和壬醛。
4-APC标记醛类物质的步骤如下：在10μL的醛类混标中加入10μL的NaBH3CN甲醇溶液(1mg/mL)和20μL的4-APC甲醇溶液(1mg/mL)，用50mM醋酸铵溶液(pH5.7)定容至100μL。在25℃和1500rpm的恒温震荡仪中反应1h,取0.5μL反应产物进行MALDI-TOFMS分析。
检测结果如图3所示：黑磷对4-APC的检出限为51nM(图3a),同时对4-APC标记的醛类物质均具有较好的检测效果(图3d)。说明结合衍生化反应，黑磷可以用于分析醛类物质。
【实施例3】黑磷检测BQB标记的巯基化合物
在之前的工作中，我们开发了含有季铵基团的衍生化试剂BQB[2]，可以用于衍生巯基化合物的巯基，因为在本发明中我们用黑磷来检测BQB以及BQB标记的四种巯基化合物：N-乙酰半胱氨酸(Nac),谷胱甘肽(GSH),半胱氨酸(Cys)和高半胱氨酸(HCys)。
BQB标记巯基化合物的步骤如下：在10μL巯基化合物混标中加入10μL的BQB甲醇溶液(5mM)，用甘氨酸盐酸盐缓冲溶液(5.0mM,pH3.5)定容至100μL。在60℃和1500rpm的恒温震荡仪中反应1h,取0.5μL反应产物进行MALDI-TOFMS分析。
检测结果如图3所示：黑磷对BQB的检出限为37nM(图3b),同时对BQB标记的巯基化合物均具有较好的检测效果(图3e)。结果表明，结合衍生化反应，黑磷可以用于分析巯基化合物。
【实施例4】黑磷检测BTA标记的羧酸化合物
在之前的工作中，我们开发了含有季铵基团的衍生化试剂BTA[2]，可以用于衍生羧酸化合物的羧基，因为在本发明中我们用黑磷来检测BTA以及BTA标记的四种酸性植物激素：吲哚乙酸(IAA),脱落酸(ABA),茉莉酸(JA)和水杨酸(SA)。
BTA标记酸性植物激素的步骤如下：在10μL酸性植物激素混标中加入10μL的BQB乙腈溶液(20mM)和10μL的三乙胺乙腈溶液(20mM)，然后用乙腈定容至100μL。在35℃和1500rpm的恒温震荡仪中反应0.5h,取0.5μL反应产物进行MALDI-TOFMS分析。
检测结果如图3所示：黑磷对BTA的检出限为51nM(图3c),同时对BTA标记的巯基化合物均具有较好的检测效果(图3f)。结果表明，结合衍生化反应，黑磷可以用于分析羧酸化合物。
【实施例5】黑磷结合稳定同位素标记用于唾液样品中五种醛(丁醛、己醛、庚醛、辛醛和壬醛)的定量分析
样品准备：唾液样品取自1个正常人和1个吸烟者(一天多于十根烟)。所有样品都取自漱口之后两个小时不进食。唾液样品装于离心管中，12,000g(4℃)离心5min，上清液保存在-80℃中备用。
唾液样品中醛类物质的检测步骤如下：取20μL唾液样品，用乙腈稀释两倍，涡旋混匀之后12,000g(4℃)离心5min。上清液进一步稀释2.5倍进行衍生，衍生化试剂采用4-APC或d4-4-(2-(trimethylammonio)ethoxy)-benzenaminiumhalide(4-APC-d4)。取0.5μL衍生产物进行MALDI-TOFMS分析。
检测结果：我们以4-APC-d4标记的醛类物质为内标做了一系列关于线性和检出限的实验以验证我们建立的方法在唾液样品分析中的可行性。我们以不吸烟者的唾液为样品基质，添加不同浓度的4-APC标记的醛类物质(每个浓度平行三组实验)，以得到的平均峰强度比值对样品浓度进行线性回归，得到线性回归方程及相关系数。实验结果如表1所示：五种醛类物质在所考察的线性范围内线性关系良好，线性系数R2在0.9928到0.9974之间，五种醛类物质的方法检出限在20～100nM之间。代表性的质谱图如图4所示，这三个样品中4-APC-d4标记醛类物质的浓度均为1μM，而4-APC标记的醛类物质的浓度逐渐增加(0,0.5μM,1μM)，如图4所示，4-APC和4-APC-d4标记的醛类物质的质荷比相差4Da，峰强度比值(I4-APC/I4-APC-d4)与4-APC标记的醛类物质的浓度呈较好的线性关系。最后，我们将建立的方法应用到非吸烟者和吸烟者唾液样品中，以检测其中醛类物质的含量。结果如表2所示，吸烟者唾液样品中的五种醛类均能被定量检测，而且含量明显高于不吸烟者。综上结果表明，黑磷结合稳定同位素标记的检测方法可以应用于唾液样品中醛类物质的定量分析。
表1.唾液样品中4-APC标记五种醛类物质的校正曲线和检出限，尿样和血清样品中4-APC标记庚醛的校正曲线和检出限
表2唾液样品中五种醛类物质的定量分析
aNotquantified.
【实施例6】黑磷结合稳定同位素标记用于尿样中庚醛的定量分析
样品准备：尿样取自10个肺癌患者和10个空白对照，由湖北肿瘤医院提供。收集晨尿，5000g(4℃)离心5min，除去细胞和杂物。上清液过滤膜(13mm×0.22μM,ANPELScientificInstrumentCo.,Shanghai,China)之后，保存在-80℃中备用。
尿样中醛类物质的检测步骤：取20μL尿样，用乙腈稀释两倍，涡旋混匀之后12,000g(4℃)离心5min。上清液进一步稀释2.5倍进行衍生，衍生化试剂采用4-APC或d4-4-(2-(trimethylammonio)ethoxy)-benzenaminiumhalide(4-APC-d4)。取0.5μL衍生产物进行MALDI-TOFMS分析。
检测结果：我们以4-APC-d4标记的庚醛为内标做了线性和检出限的实验以验证我们建立的方法在尿样分析中的可行性。我们以健康人尿样为样品基质，添加不同浓度的4-APC标记的庚醛(每个浓度平行三组实验)，以得到的平均峰强度比值对样品浓度进行线性回归，得到线性回归方程及相关系数。实验结果如表1所示：庚醛在所考察的线性范围内线性关系良好，线性系数R2为0.9995，方法检出限为50nM。代表性的质谱图如图5所示，这三个样品中4-APC-d4标记的庚醛的浓度均为1μM，而4-APC标记的庚醛的浓度逐渐增加(0,0.5μM,1μM)，如图5所示，4-APC和4-APC-d4标记的庚醛的质荷比分别为293和297，峰强度比值(I293/I297)与4-APC标记庚醛的浓度呈较好的线性关系。最后，我们将建立的方法应用到10个肺癌患者混样及其空白对照中，结果表明肺癌患者尿样中庚醛的含量为5.42μmol庚醛/μmol肌酐(RSD＝1.7％,n＝3)，明显高于空白对照(不能被定量)。综上结果表明，黑磷结合稳定同位素标记的检测方法可以拓展到尿样中醛类物质的定量分析。
【实施例7】黑磷结合稳定同位素标记用于血清样品中庚醛的定量分析
样品准备：血清样品取自2个糖尿病患者和2个空白对照，由武汉大学附属中南医院提供。保存在-80℃中备用。
血清样品中醛类物质的检测步骤：取20μL血清样品，用乙腈稀释两倍，涡旋混匀之后12,000g(4℃)离心5min。上清液进一步稀释2.5倍进行衍生，衍生化试剂采用4-APC或d4-4-(2-(trimethylammonio)ethoxy)-benzenaminiumhalide(4-APC-d4)。取0.5μL衍生产物进行MALDI-TOFMS分析。
检测结果：我们以4-APC-d4标记的庚醛为内标做了线性和检出限的实验以验证我们建立的方法在血清分析中的可行性。我们以健康人血清为样品基质，添加不同浓度的4-APC标记的庚醛(每个浓度平行三组实验)，以得到的平均峰强度比值对样品浓度进行线性回归，得到线性回归方程及相关系数。实验结果如表1所示：庚醛在所考察的线性范围内线性关系良好，线性系数R2为0.9937，方法检出限为50nM。代表性的质谱图如图6所示，这三个样品中4-APC-d4标记的庚醛的浓度均为1μM，而4-APC标记的庚醛的浓度逐渐增加(0,0.5μM,1μM)，如图6所示，4-APC和4-APC-d4标记的庚醛的质荷比分别为293和297，峰强度比值(I293/I297)与4-APC标记的庚醛的浓度呈较好的线性关系。最后，我们将建立的方法应用到2个糖尿病患者血清混样及其空白对照中，结果表明糖尿病患者血清中庚醛的含量为0.57μM(RSD＝1.7％,n＝3)，与空白对照(0.42μM,RSD＝1.7％)差不多。综上结果表明，黑磷结合稳定同位素标记的检测方法可以拓展到血清中醛类物质的定量分析。
【实施例8】黑磷结合稳定同位素标记用于唾液样品中醛类物质的定性分析
样品准备：唾液样品取自1个吸烟者(一天多于十根烟)。取样步骤同实例5。
唾液样品中醛类物质的检测步骤：取两份20μL的唾液样品，用乙腈稀释两倍，涡旋混匀之后12,000g(4℃)离心5min。上清液进一步稀释2.5倍进行衍生，衍生化试剂分别采用4-APC和4-APC-d4。衍生之后，这两份样品以1：1的体积比进行混合，取0.5μL混合样品进行MALDI-TOFMS分析。
潜在醛类物质定性分析的两个依据：4-APC/4-APC-d4标记的醛类物质为一对分子量相差4Da的离子对；这个离子对的信号强度比值在0.8-1.2之间。
检测结果如图7所示：4-APC/4-APC-d4标记的醛类物质的质荷比相差4Da。在吸烟者唾液样品中，共检测到了8种潜在的醛类物质，它们分别是戊醛、己醛、庚醛、苯乙醛、辛醛、苯丙醛、壬醛和癸醛，在质谱图中的标峰序号依次是1-8，而且质谱图中杂峰较少(图7)。结果表明，黑磷结合稳定同位素标记法可以用于复杂生物样品中醛类物质的快速定性分析。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
参考文献
(1)Yu,L.；Liu,P.；Wang,Y.L.；Yu,Q.W.；Yuan,B.F.；Feng,Y.Q.Analyst.2015,140,5276-5286.
(2)Huang,Y.Q.；Ruan,G.D.；Liu,J.Q.；Gao,Q.；Feng,Y.Q.Anal.Biochem.2011,416,159-166.

Claims (9)

1.黑磷在作为基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)中的基质的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱中的待测物质的分子量范围为1-1000Da。
3.根据权利要求1或2所述的应用，所述基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱中的待测物质可为酸性染料、酸性表面活性剂、脂肪酸、碱性染料、阳离子表面活性剂、氨基酸、多肽及多环芳烃中任一种。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱中的待测物质为含季铵基团的物质。
5.一种黑磷作为MALDI基质用于醛类化合物、巯基化合物和羧酸类化合物的检测的方法，包括如下步骤：分别用季铵盐衍生化试剂4-(2-(trimethylammonio)ethoxy)–benzenaminiumhalide(4-APC)、ω-bromoacetonylquinoliniumbromide(BQB)和3-bromoactonyltrimethylammoniumbromide(BTA)衍生醛类化合物、巯基化合物和羧酸类化合物，使这些化合物带上季铵基团，然后以黑磷为基质进行MALDI分析。
6.一种黑磷作为MALDI基质结合稳定同位素标记对生物样品中目标检测物进行定量分析的方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)建立目标检测物的线性回归方程及相关系数：以对照样品为样品基质，添加一系列浓度的目标检测物(0.1-20μM，每个浓度平行三组实验)，用相应的衍生化试剂进行轻标记，再加入一定量的重标记目标检测物做为内标(内标的浓度最好与所测样品中该目标检测物的浓度在同一个数量级上)，以黑磷为基质进行MALDI-TOFMS分析；以目标检测物的浓度为横坐标，轻标记目标检测物与重标记内标的平均峰强度比值为纵坐标进行线性回归，得到线性回归方程及相关系数；
(2)待测样品中目标检测物的测定：通过以黑磷为基质进行的MALDI-TOFMS分析，获得轻标记目标检测物与重标记内标的平均峰强度比值，将该比值代入线性回归方程中，即可算出样品中该目标检测物的浓度；
所述的生物样品为唾液、尿液和血清。
7.权利要求6所述的定量分析方法，其特征在于：所述的衍生化试剂为季铵盐衍生化试剂4-(2-(trimethylammonio)ethoxy)–benzenaminiumhalide(4-APC)、ω-bromoacetonylquinoliniumbromide(BQB)和3-bromoactonyltrimethylammoniumbromide(BTA)衍生醛类化合物、巯基化合物和羧酸类化合物，使这些化合物带上季铵基团，可用于醛类物质、巯基化合物或酸性植物激素的检测。
8.一种黑磷作为MALDI基质结合稳定同位素标记对生物样品中目标检测物进行定性分析的方法，其特征在于：将待测生物样品分别用轻/重衍生化试剂进行标记，衍生之后，这两份样品以1：1的体积比进行混合，以黑磷为基质进行MALDI-TOFMS分析；潜在目标检测物定性分析的两个依据：(1)轻/重标记的目标检测物为一对分子量相差4Da的离子对；(2)这个离子对的峰强度比值在0.8-1.2之间；据此两个判断依据，可在质谱图中找到潜在目标检测物；
所述的生物样品为唾液、尿液和血清。
9.权利要求8所述的定性分析方法，其特征在于：所述的衍生化试剂为季铵盐衍生化试剂4-(2-(trimethylammonio)ethoxy)–benzenaminiumhalide(4-APC)、ω-bromoacetonylquinoliniumbromide(BQB)和3-bromoactonyltrimethylammoniumbromide(BTA)衍生醛类化合物、巯基化合物和羧酸类化合物，使这些化合物带上季铵基团，可用于醛类物质、巯基化合物或酸性植物激素的检测。
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