CN105543345A - 玉米赤霉烯酮的检测方法及检测试剂盒 - Google Patents

玉米赤霉烯酮的检测方法及检测试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN105543345A
CN105543345A CN201510947194.0A CN201510947194A CN105543345A CN 105543345 A CN105543345 A CN 105543345A CN 201510947194 A CN201510947194 A CN 201510947194A CN 105543345 A CN105543345 A CN 105543345A
Authority
CN
China
Prior art keywords
zearalenone
nucleic acid
acid aptamer
stranded
dna
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201510947194.0A
Other languages
English (en)
Inventor
易守军
邓克勤
林雨欢
任婕凤
唐春然
符方芬
黄盛茂
曾云龙
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hunan University of Science and Technology
Original Assignee
Hunan University of Science and Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hunan University of Science and Technology filed Critical Hunan University of Science and Technology
Priority to CN201510947194.0A priority Critical patent/CN105543345A/zh
Publication of CN105543345A publication Critical patent/CN105543345A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/115—Aptamers, i.e. nucleic acids binding a target molecule specifically and with high affinity without hybridising therewith ; Nucleic acids binding to non-nucleic acids, e.g. aptamers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/16—Aptamers

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种检测玉米赤霉烯酮的方法及试剂盒，该方法包括如下步骤：(A)使玉米赤霉烯酮核酸适体(Apt)和可与玉米赤霉烯酮核酸适体杂交的单链信号探针DNA(Sp)杂交，形成杂交链；(B)使该杂交链与待测样品接触，当待测样品中有玉米赤霉烯酮存在时，杂交链与玉米赤霉烯酮反应释放出单链信号探针DNA；(C)利用DNA扩增，使杂交链成双链DNA，然后用外切酶，将双链DNA切成碎片，留下单链信号探针DNA；(D)在银离子还原检测体系中检测体系荧光强度，从而测定待测样品中的真菌毒素玉米赤霉烯酮的含量。所述方法可以消除干扰，提高了玉米赤霉烯酮的检测灵敏度和精度。

Description

玉米赤霉烯酮的检测方法及检测试剂盒
技术领域
本发明属纳米生物传感以及生物检测技术领域，涉及玉米赤霉烯酮的检测方法及检测试剂盒。
背景技术
玉米赤霉烯酮主要由禾谷镰刀菌产生，粉红镰刀菌、窜珠镰刀菌、三线镰刀菌等多种镰刀菌也能产生这种毒素。李季伦1980年研究发现，许多农作物如小麦、大豆等植物中也存在玉米赤霉烯酮。玉米赤霉烯酮主要污染玉米、小麦、大米、大麦、小米和燕麦等谷物。其中玉米的阳性检出率为45％，最高含毒量可达到2909mg/kg；小麦的检出率为20％，含毒量为0.364～11.05mg/kg。玉米赤霉烯酮的耐热性较强，110℃下处理1h才被完全破坏。
玉米赤霉烯酮具有雌激素样作用，能造成动物急慢性中毒，引起动物繁殖机能异常甚至死亡，可给畜牧场造成巨大经济损失。
因此对玉米赤霉烯酮检测显得十分必要。
现有分析方法有色谱、免疫法，前者灵敏度不够，后者存在试剂贵、易失活等缺点。中国专利CN102443585A公开了一种玉米赤霉烯酮核酸适体及其应用，其可用于玉米赤霉烯酮的检测，但存在生物标记的DNA价格昂贵的问题。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中存在的问题，提供一种检测玉米赤霉烯酮的方法，该方法包括如下步骤：
(A)使玉米赤霉烯酮核酸适体(Apt)和可与玉米赤霉烯酮核酸适体杂交的单链信号探针DNA(Sp)杂交，形成杂交链；
(B)使该杂交链与待测样品作用，当待测样品中有玉米赤霉烯酮存在时，杂交链选择性地与玉米赤霉烯酮反应释放出单链信号探针DNA；
(C)为了消除杂交链的干扰，利用DNA扩增，使杂交链成双链DNA，然后用外切酶，将双链DNA切成碎片，留下单链信号探针DNA；
(D)利用银离子在玉米赤霉烯酮核酸适体-玉米赤霉烯酮结合体中不能被还原生成荧光发射峰在630nm左右的银纳米簇，银离子只在单链信号探针DNA(Sp)中还原并生成被Sp修饰的在630nm左右(发射峰位置)有强的荧光发射的银纳米簇的原理，在银离子还原检测体系中检测体系的荧光强度，从而测定待测样品中的真菌毒素玉米赤霉烯酮的含量。
所述银离子还原检测体系包括先后添加的银离子和使银离子迅速还原成单质银的还原剂，例如硼氢化物。例如硼氢化钠。步骤(D)的检测例如包括依次先后向体系中加入银离子溶液和硼氢化钠溶液，反应后生成荧光发射峰在630nm左右的银纳米簇。
在一个实施方式中，所述玉米赤霉烯酮核酸适体为5’-GCATCACTACAGTCATTACGCATCGTGGGGATGGGAGGTTGTTTACGCAGGAGATGTTAATCGTGTGAAGTGC-3’。
在一个实施方式中，所述可与玉米赤霉烯酮核酸适体杂交的单链信号探针DNA为5’-CCCCCCACACCCGATCCCCCCGCACTTCACACGATT-3’。
本发明的检测原理如下：先让Apt与Sp杂交(下划线部分)；当有玉米赤霉烯酮存在时，杂交链与玉米赤霉烯酮反应释放出Sp；体系中存在Apt-Sp(剩余的)，Apt-玉米赤霉烯酮和Sp。银离子在Apt-玉米赤霉烯酮中不能被还原生成荧光发射峰在630nm左右的银纳米簇，Apt-玉米赤霉烯酮的存在对测定无干扰；杂交链可能有干扰；为了消除杂交链的干扰：a.利用DNA扩增，使杂交链成双链DNA，b.用外切酶，将双链DNA切成碎片。此时体系中只留下Sp，银离子在Sp存在下还原并生成被Sp修饰的荧光发射峰在630nm左右的银纳米簇，通过检测体系的荧光强度，从而可以测定真菌毒素玉米赤霉烯酮的含量。由于消除体系中背景荧光的干扰，可以提高检测的灵敏度和精度。
本发明另外提供了一种检测玉米赤霉烯酮的试剂盒，其至少包括：玉米赤霉烯酮核酸适体、可与玉米赤霉烯酮核酸适体杂交的单链信号探针DNA、DNA扩增体系、外切酶、银离子还原检测体系。
在上述试剂盒的一个实施方式中，所述玉米赤霉烯酮核酸适体为5’-GCATCACTACAGTCATTACGCATCGTGGGGATGGGAGGTTGTTTACGCAGGAGATGTTAATCGTGTGAAGTGC-3’。
在上述试剂盒的一个实施方式中，所述可与玉米赤霉烯酮核酸适体杂交的单链信号探针DNA为5’-CCCCCCACACCCGATCCCCCCGCACTTCACACGATT-3’。
在一个实施方式中，所述DNA扩增体系包括缓冲溶液(Tris-HCl、MgCl2、(NH4)2SO4)、三磷酸脱氧单核苷酸混合溶液(dNTP)和Phi29DNA聚合酶。
在一个实施方式中，所述外切酶为ExoIII核酸外切酶。
本发明还提供了一种可用于检测玉米赤霉烯酮的玉米赤霉烯酮核酸适体，其碱基序列为5’-GCATCACTACAGTCATTACGCATCGTGGGGATGGGAGGTTGTTTACGCAGGAGATGTTAATCGTGTGAAGTGC-3’。
本发明的优点
根据本发明的检测方法和试剂盒，可以消除干扰，提高玉米赤霉烯酮的检测灵敏度和精度。
附图说明
图1为Sp-Ag纳米簇荧光激发与发射光谱。
具体实施方式
以下通过具体实施方式来说明本发明。
本发明的检测玉米赤霉烯酮的试剂盒至少包括：使玉米赤霉烯酮核酸适体、可与玉米赤霉烯酮核酸适体杂交的单链信号探针DNA、DNA扩增体系、外切酶、银离子还原检测体系。
在上述试剂盒的一个实施方式中，所述玉米赤霉烯酮核酸适体为5’-GCATCACTACAGTCATTACGCATCGTGGGGATGGGAGGTTGTTTACGCAGGAGATGTTAATCGTGTGAAGTGC-3’。
在上述试剂盒的一个实施方式中，所述可与玉米赤霉烯酮核酸适体杂交的单链信号探针DNA为5’-CCCCCCACACCCGATCCCCCCGCACTTCACACGATT-3’。
在一个实施方式中，所述DNA扩增体系包括缓冲溶液(Tris-HCl、MgCl2、(NH4)2SO4)、dNTP和Phi29DNA聚合酶。
在一个实施方式中，所述外切酶为ExoIII核酸外切酶。
使Apt与Sp杂交(下划线部分)；当有玉米赤霉烯酮存在时，杂交链与玉米赤霉烯酮反应释放出Sp；体系中存在Apt-Sp(剩余的)，Apt-玉米赤霉烯酮和Sp。银离子在Apt-玉米赤霉烯酮中不能被还原生成荧光发射峰在630nm左右的银纳米簇，Apt-玉米赤霉烯酮的存在对玉米赤霉烯酮的测定无干扰；杂交链可能有干扰；为了消除杂交链的干扰：a.利用DNA扩增，使杂交链成双链DNA，b.用外切酶，将双链DNA切成碎片。此时体系中只留下Sp，银离子在Sp存在下还原并生成被Sp修饰的荧光发射峰在630nm左右的银纳米簇，通过检测体系的荧光强度，从而可以测定真菌毒素玉米赤霉烯酮的含量。由于消除了背景荧光，可以提高检测的灵敏度和精度。
具体操作过程如下：
将各DNA储备液在95℃下经加热处理5分钟，使用前，并在室温下放置30分钟。然后，分别取含2.5μmol玉米赤霉烯酮核酸适体(Apt)的杂交缓冲溶液50μL和2.5μmol信号探针DNA(Sp)的杂交缓冲溶液50μL置于2ml离心管中，在37℃下杂交1小时，生成玉米赤霉烯酮核酸适体-信号探针杂交物(Apt-Sp)。
在37℃下，分别依次将浓度为0～50ng/mL的玉米赤霉烯酮添加到Apt-Sp溶液中，玉米赤霉烯酮与玉米赤霉烯酮核酸适体反应，生成核酸适体-玉米赤霉烯酮，释放出Sp。这时，体系中有Sp、剩余(未反应的)AP-Sp和核酸适体-玉米赤霉烯酮等物质。
加入10μL缓冲溶液(缓冲溶液组成为50mMTris-HCl,10mMMgCl2，10mM(NH4)2SO4,pH7.5)，然后加入dNTP(10mM)20μL。再向体系中加入2μLPhi29DNA聚合酶(10u/μl),在37℃下反应15分钟，使得以玉米赤霉烯酮核酸适体-信号探针杂交序列(Ap-Sp)为摸板扩增成双链DNA。在65℃下保持10分钟使Phi29DNA去活。
再向该反应体系中加入2μLExoIII核酸外切酶(20u/μL)，在37℃下反应30分钟，使选择性地将双链DNA切割成碎片，单链探针Sp不被切割而保留下来。溶液加热至95℃保持5分钟使核酸外切酶ExoIII失活，并将溶液放置于冰浴中迅速冷却至室温。
向反应液中加入25μL1mmol硝酸银和200μL柠檬酸钠缓冲液(10mM，pH7.0)。然后，混合物在室温下避光或暗室中放置10分钟后，在快速搅拌下，加入100μL浓度为350μM的新制备的硼氢化钠溶液。然后在45℃下反应5min。将溶液转移至微量比色皿，以波长为585nm光为激发光，测定体系荧光发射(610-800nm)光谱的荧光强度，进行玉米赤霉烯酮的定量测定，结果如图1所示。
线性范围0.008–0.50ng/mL，检测限1pg/mL，回收率在96.5～106.2％。其它真菌毒素、维生素C、葡萄糖等生物小分子对玉米赤霉烯酮检测无干扰。

Claims (9)

1.一种玉米赤霉烯酮的检测方法，该方法包括如下步骤：
(A)使玉米赤霉烯酮核酸适体(Apt)和可与玉米赤霉烯酮核酸适体杂交的单链信号探针DNA(Sp)杂交，形成杂交链；
(B)使该杂交链与待测样品作用，当待测样品中有玉米赤霉烯酮存在时，杂交链选择性地与玉米赤霉烯酮反应释放出单链信号探针DNA；
(C)为了消除杂交链的干扰，利用DNA扩增，使杂交链成双链DNA，然后用外切酶，将双链DNA切成碎片，留下单链信号探针DNA；
(D)利用银离子不能在玉米赤霉烯酮核酸适体-玉米赤霉烯酮结合体中被还原生成荧光发射峰在630nm左右的银纳米簇，银离子只在单链信号探针DNA(Sp)中还原并生成被Sp修饰的在630nm左右有强的荧光发射的银纳米簇的原理，在银离子还原检测体系中检测体系的荧光强度，从而测定待测样品中的真菌毒素玉米赤霉烯酮的含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述玉米赤霉烯酮核酸适体为5’-GCATCACTACAGTCATTACGCATCGTGGGGATGGGAGGTTGTTTACGCAGGAGATGTTAATCGTGTGAAGTGC-3’。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述可与玉米赤霉烯酮核酸适体杂交的单链信号探针DNA为5’-CCCCCCACACCCGATCCCCCCGCACTTCACACGATT-3’。
4.一种检测玉米赤霉烯酮的试剂盒，其至少包括：使玉米赤霉烯酮核酸适体、可与玉米赤霉烯酮核酸适体杂交的单链信号探针DNA、DNA扩增体系、外切酶、银离子还原检测体系。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其中，所述玉米赤霉烯酮核酸适体为5’-GCATCACTACAGTCATTACGCATCGTGGGGATGGGAGGTTGTTTACGCAGGAGATGTTAATCGTGTGAAGTGC-3’。
6.根据权利要求4或5所述的试剂盒，其中，所述可与玉米赤霉烯酮核酸适体杂交的单链信号探针DNA为5’-CCCCCCACACCCGATCCCCCCGCACTTCACACGATT-3’。
7.根据权利要求4-6中任一项所述的试剂盒，其中，所述DNA扩增体系包括缓冲溶液(Tris-HCl、MgCl2、(NH4)2SO4)、dNTP和Phi29DNA聚合酶。
8.根据权利要求4-7中任一项所述的试剂盒，其中，所述外切酶为ExoIII核酸外切酶。
9.一种可用于检测玉米赤霉烯酮的玉米赤霉烯酮核酸适体，其碱基序列为5’-GCATCACTACAGTCATTACGCATCGTGGGGATGGGAGGTTGTTTACGCAGGAGATGTTAATCGTGTGAAGTGC-3’。
CN201510947194.0A 2015-12-17 2015-12-17 玉米赤霉烯酮的检测方法及检测试剂盒 Pending CN105543345A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510947194.0A CN105543345A (zh) 2015-12-17 2015-12-17 玉米赤霉烯酮的检测方法及检测试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510947194.0A CN105543345A (zh) 2015-12-17 2015-12-17 玉米赤霉烯酮的检测方法及检测试剂盒

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105543345A true CN105543345A (zh) 2016-05-04

Family

ID=55822902

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510947194.0A Pending CN105543345A (zh) 2015-12-17 2015-12-17 玉米赤霉烯酮的检测方法及检测试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105543345A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105713966A (zh) * 2016-01-24 2016-06-29 湖南科技大学 一种快速检测玉米赤霉烯酮的方法
CN109676128A (zh) * 2019-02-28 2019-04-26 湖南科技大学 一种四硫化三钼包覆金纳米棒的制备方法及应用
CN110261363A (zh) * 2019-08-06 2019-09-20 青岛农业大学 一种检测玉米赤霉烯酮的生物传感器、其制备方法与使用该传感器检测玉米赤霉烯酮的方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102443585A (zh) * 2011-11-25 2012-05-09 国家纳米技术与工程研究院 玉米赤霉烯酮核酸适体及其应用
CN102830113A (zh) * 2012-06-14 2012-12-19 青岛科技大学 目标诱导链释放和限制性内切酶酶切循环的信号放大技术建立及赭曲霉素a的检测

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102443585A (zh) * 2011-11-25 2012-05-09 国家纳米技术与工程研究院 玉米赤霉烯酮核酸适体及其应用
CN102830113A (zh) * 2012-06-14 2012-12-19 青岛科技大学 目标诱导链释放和限制性内切酶酶切循环的信号放大技术建立及赭曲霉素a的检测

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANPING CAO等: ""Real-time detection of transcription factors using target-converted helicase-dependent amplification assay with zero-background signal"", 《ANALYTICAL CHEMISTRY》 *
JINGHUA CHEN等: ""A fluorescent aptasensor based on DNA-scaffolded silver-nanocluster for ochratoxin A detection"", 《BIOSENSORS AND BIOELECTRONICS》 *
陈宏 主编: "《基因工程 第2版》", 31 August 2011, 中国农业出版社 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105713966A (zh) * 2016-01-24 2016-06-29 湖南科技大学 一种快速检测玉米赤霉烯酮的方法
CN105713966B (zh) * 2016-01-24 2020-08-11 湖南科技大学 一种快速检测玉米赤霉烯酮的方法
CN109676128A (zh) * 2019-02-28 2019-04-26 湖南科技大学 一种四硫化三钼包覆金纳米棒的制备方法及应用
CN109676128B (zh) * 2019-02-28 2021-05-04 湖南科技大学 一种四硫化三钼包覆金纳米棒的制备方法及应用
CN110261363A (zh) * 2019-08-06 2019-09-20 青岛农业大学 一种检测玉米赤霉烯酮的生物传感器、其制备方法与使用该传感器检测玉米赤霉烯酮的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Ma et al. Femtogram ultrasensitive aptasensor for the detection of OchratoxinA
CN101328498B (zh) 一种通用、实时的核酸酶荧光检测方法
CN108359714B (zh) 一种检测汞离子的生物传感器
CN105543376A (zh) 赭曲霉毒素a的快速检测方法
CN104818319B (zh) 黄曲霉毒素b1的实时定量pcr检测方法
CN105695473B (zh) 真菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测方法及检测试剂盒
Ying et al. Light-up RNA aptamer enabled label-free protein detection via a proximity induced transcription assay
CN105543345A (zh) 玉米赤霉烯酮的检测方法及检测试剂盒
CN103667448A (zh) 双功能适配体检测试剂盒以及检测方法
CN105296598A (zh) 基于8-17DNAzyme原理的铅离子荧光检测方法及其应用
CN108398406B (zh) 一种检测尿嘧啶糖基化酶（udg）的生物传感器及其应用
Zhu et al. Ultrasensitive detection of lead ions based on a DNA-labelled DNAzyme sensor
Lee et al. A simple and sensitive detection of small molecule–protein interactions based on terminal protection-mediated exponential strand displacement amplification
CN103305605B (zh) 基于dna自组装的非酶离子检测方法
Wu et al. A simple fluorescence biosensing strategy for ultrasensitive detection of the BCR–ABL1 fusion gene based on a DNA machine and multiple primer-like rolling circle amplification
CN105044067A (zh) 一步放大法荧光检测汞离子的方法
CN105543375A (zh) 棒曲霉素的检测方法及检测试剂盒
CN105713966B (zh) 一种快速检测玉米赤霉烯酮的方法
CN105543344A (zh) 一种检测赭曲霉毒素a的方法及试剂盒
CN105606574B (zh) T-2毒素的检测方法及检测试剂盒
CN104087655B (zh) 基于滚环扩增的限制性核酸内切酶单链切割的分析方法
Chen et al. New method for detection of T4 polynucleotide kinase phosphatase activity through isothermal EXPonential amplification reaction
CN105675569B (zh) 一种检测金黄色葡萄菌肠毒素a的方法及检测试剂盒
Chen et al. A sequential injection fluorometric procedure for rapid determination of total protein in human serum
Guetschow et al. Detection of prolactin inducible protein mRNA, a biomarker for breast cancer metastasis, using a molecular beacon-based assay

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20160504

RJ01 Rejection of invention patent application after publication