CN105497420A

CN105497420A - 用补肾健脾化瘀法治疗原发性骨质疏松的药物

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Publication number: CN105497420A
Application number: CN201510999740.5A
Authority: CN
Inventors: 王平平
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2015-12-28
Filing date: 2015-12-28
Publication date: 2016-04-20

Abstract

本发明提供了一种用于治疗原发性骨质疏松的药物，其原料药包括淫羊藿、鹿角胶、龟板胶、菟丝子、肉桂、狗脊、怀牛膝、杜仲、制鳖甲、骨碎补、黄芪、续断、生地黄、山茱萸、山药、茯苓、牡丹皮、泽泻、当归、白芍、丹参、水蛭、芒萁骨、岩姜七、金刀菜和生甘草。其可以通过抑制破骨细胞所引起的骨丢失，改善骨小梁的形态，有效改善骨质疏松性松质骨的超微结构，增加骨量，防止和修复显微骨折，达到防治骨质疏松的疗效。

Description

用补肾健脾化瘀法治疗原发性骨质疏松的药物

技术领域

本发明涉及中医药技术领域，尤其涉及一种用补肾健脾化瘀法治疗原发性骨质疏松的药物。

背景技术

骨质疏松症(Osteoporosis，OP)是一种以骨量减少、骨组织的显微结构退行性改变为特征，骨脆性增加、易发生骨折的一种全身性代谢性骨病。临床将其分为原发性和继发性，原发性骨质疏松症分两型：I型即绝经后骨质疏松症，多发生在50-70岁中老年女性，多发于脊柱和桡骨远端；Ⅱ型为老年性骨质疏松症，70岁以上老年人居多，多发生于椎骨和股骨上端。根据广东省2010年第六次全国人口普查的数据调查资料，估计广东省约有1085万名骨质疏松患者，保守估计平均每年约有50万骨质疏松症患者发生脆性骨折(常见脊柱46.7％、髓部20％、腕部13.3％的脆性骨折发生率)。髋部骨折后果最为严重，多需要行手术处理。单整复与内固定，有20％～30％可发生不愈合，10％～20％可发生缺血性坏死。为此不少患者需行全髋假体置换术，住院时间平均1～2个月。50％髓部骨折患者会终身残疾，生活不能自理，其中20％在髋部骨折后1年内可以并发肺栓塞、肺炎而死亡。椎体骨折常引起慢性腰背痛，或由于脊柱后凸或侧凸畸形、疼痛、运动障碍等需长期卧床，致使生活质量大幅下降。烧骨骨折所致患者疼痛和腕部功能丧失，对生活质量也产生较大影响。

骨质疏松症的诊断是利用双能X线骨密度仪(DXA)测量身体中轴骨腰椎、股骨颈、股骨上端的骨密度(BMD，g/cm²)，是当今国际公认测量骨密度的金标准。但从大部分骨质疏松病人的临床表现来判断，骨质疏松程度，也即骨密度多少，在临床症状上仍不足以成为一项指导用药的指标，病人骨质疏松是由破骨细胞骨吸收与成骨细胞骨形成构成的骨重建失衡所导致，即骨吸收大于骨形成，导致骨量丢失，骨的微结构异常，可分为髙转换型和低转换型。而骨代谢指标中，I型前胶原氨基末端(N端)前肽(PINP)是骨形成特异性和敏感性皆好的指标，其不受激素影响，同样也是监测骨质疏松治疗最有效的生化指标。I型胶原C端肽，即CTX中有骨I型胶原分子间交联物的重要区段和近似交联物的残基，且不被肾脏降解，尿液置-2(rc环境7天，反复冻融5次，结果均不受影响，故成为理想的稳定的骨吸收标记物。与测量骨密度相比，骨代谢指标能更早地反映骨代谢变化及治疗的效果，并且是整体的骨代谢，骨转换生化指标的变化与骨量的丢失、程度及转归相一致。

骨质疏松症属于“骨萎”范畴，以脾肾两虚血瘀为主要病机中医致病因素公认为肾虚、脾虚、血瘀等。中医以肾为先天之本，肾精羸弱与骨的生长发育、强弱息息相关，内经《素问·四时刺逆从论篇》曰：“肾藏精，主骨生髓，其充在骨"，“肾主身之骨髓”，肾精亏虚成为骨质疏松的主要病因病机；另一方面，脾胃乃后天之本，水谷生化之源，主司百骸，化生气血津液以荣骨豁。陈士铎在《辨证录·痿证门》提出：“胃气生而津液自润，自能灌注肾经，分养骨髓矣”，脾胃失养，则骨路干涸；脾肾阳气虚，阳气不能温照，阳虚生寒，温胞、推动失司，血液运行不畅，血凝于脉管，疲血阻络，血之精髓无法到达筋脉，关节及骨豁难以得到儒养，故见疼痛、活动不利，此病乃本虚标实，应标本兼治。课题组前期通过观察原发性骨质疏松患者，并根据临床流行病学调查和调查问卷的方法采用描述性统计、聚类分析和决策树等数据挖掘技术对横断面调查数据进行分析，结合目前公认的《中医虚证参考标准》和《血疲证诊断标准》，以及刘庆思主编的《中西结合诊治骨质疏松症》作为骨质疏松症辨证分型标准，将骨质疏松患者分为肾阳虚证、脾肾阳虚证、肝肾阴虚证和气滞血瘀证。国内中药治疗大多以健脾补肾为主，而活血化瘀较少，其治疗此病，止痛效果较差，因此本发明制剂运用补肾健脾化瘀汤药，改善机体脏腑的整体功能。根据本发明制剂进行的临床观察、动物实验研究以及安全性检测表明，此方法可以通过抑制破骨细胞所引起的骨丢失，改善骨小梁的形态，有效改善骨质疏松性松质骨的超微结构，增加骨量，防止和修复显微骨折，达到防治骨质疏松的疗效，为中医药辨证治疗骨质疏松诊疗方法提供参考依据。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种用补肾健脾化瘀法治疗原发性骨质疏松的药物，对本发明制剂进行的临床观察、动物实验研究以及安全性检测表明，此方法可以通过抑制破骨细胞所引起的骨丢失，改善骨小梁的形态，有效改善骨质疏松性松质骨的超微结构，增加骨量，防止和修复显微骨折，达到防治骨质疏松的疗效，为中医药辨证治疗原发性骨质疏松诊疗方法提供参考依据。

基于此，本发明提供一种用于治疗原发性骨质疏松的药物，其原料药包括淫羊藿、鹿角胶、龟板胶、菟丝子、肉桂、狗脊、怀牛膝、杜仲、制鳖甲、骨碎补、黄芪、续断、生地黄、山茱萸、山药、茯苓、牡丹皮、泽泻、当归、白芍、丹参、水蛭、芒萁骨、岩姜七、金刀菜和生甘草。

其中，所述药物中各原料药的重量份分别为淫羊藿25重量份～35重量份、鹿角胶30重量份～45重量份、龟板胶25重量份～45重量份、菟丝子15重量份～25重量份、肉桂10重量份～20重量份、狗脊20重量份～35重量份、怀牛膝15重量份～30重量份、杜仲10重量份～20重量份、制鳖甲15重量份～25重量份、骨碎补25重量份～45重量份、黄芪20重量份～30重量份、续断10重量份～20重量份、生地黄15重量份～25重量份、山茱萸10重量份～20重量份、山药25重量份～35重量份、茯苓10重量份～20重量份、牡丹皮15重量份～25重量份、泽泻5重量份～15重量份、当归20重量份～30重量份、白芍15重量份～25重量份、丹参10重量份～15重量份、水蛭10重量份～15重量份、芒萁骨5重量份～10重量份、岩姜七10重量份～15重量份、金刀菜10重量份～15重量份和生甘草10重量份～15重量份。

其中，所述药物中各原料药的重量份分别为淫羊藿30重量份～35重量份、鹿角胶40重量份～45重量份、龟板胶35重量份～40重量份、菟丝子15重量份～20重量份、肉桂10重量份～15重量份、狗脊25重量份～30重量份、怀牛膝20重量份～25重量份、杜仲15重量份～20重量份、制鳖甲15重量份～20重量份、骨碎补30重量份～35重量份、黄芪25重量份～30重量份、续断15重量份～20重量份、生地黄15重量份～20重量份、山茱萸15重量份～20重量份、山药30重量份～35重量份、茯苓15重量份～20重量份、牡丹皮15重量份～20重量份、泽泻10重量份～15重量份、当归25重量份～30重量份、白芍20重量份～25重量份、丹参10重量份～15重量份、水蛭10重量份～15重量份、芒萁骨5重量份～10重量份、岩姜七10重量份～15重量份、金刀菜10重量份～15重量份和生甘草10重量份～15重量份。

其中，所述药物中各原料药的重量份分别为淫羊藿30重量份、鹿角胶40重量份、龟板胶40重量份、菟丝子20重量份、肉桂15重量份、狗脊30重量份、怀牛膝20重量份、杜仲20重量份、制鳖甲20重量份、骨碎补30重量份、黄芪30重量份、续断20重量份、生地黄20重量份、山茱萸20重量份、山药30重量份、茯苓20重量份、牡丹皮20重量份、泽泻10重量份、当归30重量份、白芍25重量份、丹参10重量份、水蛭10重量份、芒萁骨10重量份、岩姜七10重量份、金刀菜10重量份和生甘草10重量份。

其中，所述药物为内服用药方式。

其中，药物剂型优选为片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、丸剂、糖浆剂、分散片、泡腾片、煎煮液。

本发明还提供了上述用于治疗骨质疏松的药物的制备方法，其包括：

第一步，按上述重量份取淫羊藿、鹿角胶、龟板胶、狗脊、怀牛膝、制鳖甲、骨碎补、续断、水蛭、芒萁骨、岩姜七和金刀菜，混合在一起，采用乙醇浸泡后渗漉提取，提取液浓缩获得浸膏；

第二步，按上述重量份取余下原料药组分，混合在一起，采用水提取，收集挥发油和滤液，挥发油采用β-环糊精包合，滤液浓缩成浸膏；

第三步，将第一步获得的浸膏和第二步获得的浸膏以及挥发油的β-环糊精包合物混匀，添加辅料制备成不同的剂型。

其中，所述第一步进一步具体为将各原料药分别洗净，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到100目，混合在一起，采用渗漉法用醇浓度为70％乙醇作溶剂，浸渍24小时后以每分钟3ml的速度进行渗漉，收集渗漉液，滤过，浓缩至60℃相对密度为1.20的浸膏，乙醇的施用量为该步混合物质量的10～15倍；

其中，所述第二步进一步具体为将各原料药分别洗净，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到100目，混合在一起，加入相对于混合物质量6～8的水，水蒸气蒸馏提取4～6小时，过滤，收集挥发油，滤液收集备用，挥发油加入相对于其质量2～5倍的β-环糊精，加水1～3倍，研磨1小时，40℃的条件下干燥，采用超微粉碎机粉碎成300目细粉，滤液浓缩成60℃的条件下相对密度为1.30的浸膏。

其中，当制备的剂型为口服液时，所述第三步进一步具体为将第一步获得的浸膏与第二步获得的浸膏以及挥发油的β-环糊精包合物混匀，加无水乙醇使含醇体积量达70％，冷藏，滤过，滤液回收乙醇，获得干膏，采用超微粉碎机粉碎成300目细粉，取500g加水至700ml，冷藏24小时，滤过，滤液添加甜菊素和苯甲酸钠，每100g细粉加甜菊素0.2g，防腐剂苯甲酸钠0.2g，调节pH值为7，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌封，灭菌，即得。

有益的技术效果

本发明提供的用于治疗骨质疏松的药物可以通过抑制破骨细胞所引起的骨丢失，改善骨小梁的形态，有效改善骨质疏松性松质骨的超微结构，增加骨量，防止和修复显微骨折，达到防治骨质疏松的疗效。

具体实施方式

本发明提供了一种用补肾健脾化瘀法治疗骨质疏松的药物，其原料药包括淫羊藿、鹿角胶、龟板胶、菟丝子、肉桂、狗脊、怀牛膝、杜仲、制鳖甲、骨碎补、黄芪、续断、生地黄、山茱萸、山药、茯苓、牡丹皮、泽泻、当归、白芍、丹参、水蛭、芒萁骨、岩姜七、金刀菜和生甘草。

进一步优选，所述药物仅由上述原料药制备而成。

原发骨质疏松古代有许多记载，古《素问·疫论》有云：“骨枯而髓虚，故足不任身，发为骨疹。”《灵枢·本藏篇》曰：“血和则经脉流行，营复阴阳，筋骨劲强，关节清利矣”。吴崖的《医方考》中说：“脾胃者，土也。土为万物之母，诸脏腑百骸受气于脾胃而后能强。若脾胃虚亏，则众体皆无以受气，日见赢弱矣。故治杂证者，宜以脾胃为主。”张猫在《名医方论》中言：“无论寒热补泻，先培中土，使药气四达，则周身气机运流通，水谷之精微敷布，何患其药之不效哉”。“多虚夹瘀”的状态，是中老年人，特别是绝经期妇女的病理特点。由肾虚引起的肾精虚弱，肾气亏虚为根，气为血帅，肾气虚则气的推动作用失司，血脉运行动力无源，故血易凝于脉络引起血瘀，血瘀又可影响身体之气血的运作，瘀血既是五脏六腑亏虚的病理产物，其一旦出现又可成为致病因素，又反作用加深人体脏腑的病理状态。

本发明补肾健脾化瘀法治疗骨质疏松的方剂，是在综合分析本病病机而创制：方中以鹿角胶、龟板胶益精养血、益肾助阳，鹿角胶甘咸而温，善于温肾壮阳，益精补血；龟板胶甘咸而寒，长于填补精髓，滋养阴血，两者为血肉有情之品，最能峻补阴阳而化生精血，两药共为君药；骨碎补、淫羊霍、菟丝子、怀牛膝、杜仲、续断、生地黄、山茱萸、山药、狗脊、制鳖甲，可以补肾壮骨，大量试验表明，此药物组合具有强肾健骨的功效，而对老年性骨质疏松既能活跃成骨细胞，又能抑制破骨细胞，联合其它补肾药物，能有效抗骨质疏松，其中骨碎补功善补肾强骨，续伤止痛、补肾活血、止血力强，《本草新编》中提到：“骨碎补，味苦，气温，无毒。入骨，用之以补接伤碎最神。疗风血积疼，破血有功，止血亦效。同补血药用之尤良，其功用真有不可思议之妙；同补肾药用之，可以固齿；同失血药用之，可以填齊，不止祛风接骨独有奇功也。”诸药合用为臣药；加入肉桂、黄芪、茯苓、生甘草、山药可以健脾养胃，使气血生化有源，运化正常，以后天养先天为佐药；加入牡丹皮、泽泻、当归、白芍、丹参、芒萁骨、岩姜七、金刀菜、水蛭，共奏活血祛瘀，养血通络功效，其中水蛭为虫类药，具有很强的通络功效，引药入全身血脉，为使药。共奏补肾壮骨、健脾益气、活血化瘀之效。通过相应的临床研究及实验研究证明，本发明制剂在治疗骨质疏松疾病中，其作用不可忽视，适用于临床推广。

淫羊藿：拉丁名EpimediiFolium，味辛、甘，性温，入肝、肾经，具有补肾阳，强筋骨，祛风湿的功效，主治肾虚阳痿、遗精早泄、腰膝痿软、肢冷畏寒；寒湿痹痛或四肢拘挛麻木等证。

鹿角胶：拉丁名cervicornuscolla，味甘、咸，性温，归肾、肝经，具有补温肝肾，益精养血的功效，主治肝肾不足所致的腰膝酸冷，阳痿遗精，崩漏下血，便血尿血等证。

龟板胶：拉丁名TestudinisCarapacisetPlastriColla，味咸、甘，性凉，归肝、肾、心经，具有滋阴、养血、止血的功效，主治阴虚潮热，骨蒸盗汗，腰膝酸软，血虚萎黄，崩漏带下等证。

菟丝子：味甘、辛，性平，入肝、肾、脾经，有补肾益精，养肝明目的作用，主要用于肾阳不足之阳痿，遗精早泄，小便频数，头晕耳鸣；肾虚腰疼，妇人带下，胎气不固；肝肾两亏、肝血不足之双目昏花、视物不清；脾肾两虚之便溏腹痛，完谷不化等证。

肉桂：味辛、甘，性大热，归肾、脾、心、肝经，具有补火助阳，引火归源，散寒止痛，活血通经，暖脾胃，除积冷，通血脉的功效。治命门火衰，肢冷脉微，亡阳虚脱，腹痛泄泻，寒疝奔豚，腰膝冷痛，经闭症瘕，阴疽，流注，及虚阳浮越，上热下寒等证。

狗脊：味苦、甘，性温，入肝、肾经，具有祛风湿，补肝肾，强腰膝的作用，用于腰膝酸软，关节疼痛，屈利不利，肾阳不足、尿频遗尿，遗精滑精，白带过多等证。

怀牛膝：味苦酸，性平，入心、肝、大肠三经，具有活血散瘀，祛湿利尿，清热解毒的功效。主治淋病，尿血，妇女经闭，症瘕，风湿关节痛，脚气，水肿，痢疾，疟疾，白喉，痈肿，跌打损伤等证。

杜仲：味甘、微辛，性温，入肝、肾经，具有降血压、补肝肾，强筋骨，安胎气的作用，用于肝肾亏虚、证见眩晕、腰膝酸痛、筋骨痿弱；肾气不固、尿频或尿有余沥、阴下湿痒、阳痿、孕妇体弱、胎动不安或腰坠痛；慢性关节疾病、骨结核、痛经、功能失调性子宫出血、慢性盆腔炎等证。

制鳖甲：味咸，性寒，具有滋肾潜阳，软坚散结的功效，主治阴虚发热，劳热骨蒸，热病伤阴，虚风内动，小儿惊痫，疟母，经闭，溃疡，水火烫伤等证。

骨碎补：味苦、性温，入肝、肾经，具有补肾壮骨、续伤止痛的作用，用于肾虚腰膝酸痛、下肢痿软，肝肾阴虚，虚阳上亢而致的耳聋耳鸣，牙齿松动疼痛或牙龈渗血，脾肾两虚而致久泻，久痢，跌打损伤、骨折等证。

黄芪：味苦、性寒，归心、肺、胃、胆、大肠经，具有补气升阳，益卫固表，托毒生肌，利水消肿的功效，主治湿热所致之腹泻、痢疾、黄疸、热淋；肺热咳嗽，口渴咽痛，还可用于胎热不安，热毒火邪侵淫皮肤之疮痈毒肿之证。

续断：味苦、辛，性微温，入肝、肾经，具有补肝肾、强筋骨、调血脉、续折伤、止崩漏的作用，用于肝肾不足之腰膝酸痛，肾阳不足、阳痿遗精、遗尿尿频、肾虚胎动不安、胎漏下血，跌打损伤，骨折等证。

生地黄：味甘、苦，性寒，归心、肝、肾经，具有清热凉血、去瘀生新，养阴生津的功效，主治热如营分之身热口渴等真阴被劫之证；或热病后期低热不退；慢性疾病证属阴虚内热者；肺胃蕴热之口渴引饮，消渴心烦，胃阴受伤之口渴少津；血热妄行之便血、崩漏下血；血热毒盛之发斑紫黑等证。

山茱萸：拉丁名cornifructus，味酸、涩，性微温，归肝、肾经，具有补益肝肾，涩精固脱的功效。用于眩晕耳鸣，腰膝酸痛，阳痿遗精，遗尿尿频，崩漏带下，大汗虚脱。内热消渴等证。

山药：拉丁名dioscoreaerhizoma，味甘、性平，入肺、脾、胃经，有补脾养胃，益肺固肾，养阴生津的作用，主治脾胃虚弱，脾失健运之食少纳差，脘闷腹泻等证。

茯苓：味甘、淡，性平，入脾、肺、膀胱、心经，有渗湿利水、健脾宁心的作用，主要用于水湿停滞之水肿，小便不利；湿热蕴结之热淋，脾虚湿困之食少便溏、痰饮停滞、癫痫等证。

牡丹皮：拉丁名MoutanCortex，味苦、辛，性微寒，入心、肝、肾经，有清热凉血、活血化瘀的作用，用于热毒炽盛之阴虚发热、湿热结毒之肠痈、气结血瘀、口干、舌红绛等证；以及肝火目赤肿痛，胃火牙龈疼痛。

泽泻：味甘、淡，性寒，入肾、膀胱经，有利水渗湿、泻热通淋，清心肺、泻肾火的作用，主要用于脾虚水湿停滞、水湿泛滥之全身水肿；水饮痰湿之邪困阻，致清阳不升浊音不降之眩晕；湿热下注之小便不利，赤短涩痛，以及湿热黄疸等证。

当归：拉丁名angelicaesinensisradix，味甘、辛，性温，入肝、心、脾经，有补血活血，调经止痛，润肠通便的作用，主要用于心血不足之头晕目眩，倦怠乏力，心悸气短，及其他血虚证；血海空虚，冲任虚寒或淤血阻滞之月经不调，经痛，产或腹痛，及其他血瘀作痛及阴虚血少肠燥之便秘等证。

白芍：味苦、酸，性微寒，入肝、脾经，有养血合营，柔肝止痛，平抑肝阳的作用，主要用于肝阴不足、肝阳上亢之头痛脑胀、眩晕耳鸣、烦躁易怒；肝血不足，营卫空虚之月经不调，崩中漏下；肝虚血滞湿阻之痛经；营卫不和，营阴外越之自汗盗汗；肝气郁结之脘腹胁肋疼痛，泻痢腹痛；肝阴亏虚，经脉失养之手足痉挛疼痛等证。

丹参：味苦、性寒，入心、肝经，有活血化瘀、祛瘀生新、凉血宁心的作用，主要用于血瘀气滞之心胸，胸胁刺痛，胸闷气短，腹胀；妇女气血不和之月经不调，经痛经闭；气血瘀滞，心腹疼痛等症状，丹参对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌有抑制作用。

水蛭：味咸、苦，性平，入肝经，具有破血逐瘀的功效，用于血淤闭经，症瘕腹痛、蓄血、损伤瘀血作痛、痈肿丹毒等症的治疗，水蛭能消除动脉周扬硬化斑块，增加心肌营养性血流量，改善心率失常。

芒萁骨：为里白科芒萁属植物芒萁的幼叶、叶柄，味微苦，涩，性凉，具有化瘀止血，利尿消肿的功效，主治妇女血崩，跌打损伤，外伤出血，热淋涩痛，白带，小儿腹泻，目赤肿痛，烫火伤，毒虫咬伤等证。

岩姜七：为水龙骨科星蕨属植物膜叶星蕨带根茎的全草，味苦，性寒，具有清热利尿，散瘀消肿的功效，主治膀胱炎，尿道炎，水肿，跌打损伤，痈肿，热结便秘等证。

金刀菜：为马鞭草科紫珠属植物广东紫珠的茎、叶，味酸，性涩，具有祛风止痛，散瘀止血的功效，主治偏头风痛，吐血，跌打肿痛，外伤出血等证。

所述药物中各原料药的重量份分别为淫羊藿25重量份～35重量份、鹿角胶30重量份～45重量份、龟板胶25重量份～45重量份、菟丝子15重量份～25重量份、肉桂10重量份～20重量份、狗脊20重量份～35重量份、怀牛膝15重量份～30重量份、杜仲10重量份～20重量份、制鳖甲15重量份～25重量份、骨碎补25重量份～45重量份、黄芪20重量份～30重量份、续断10重量份～20重量份、生地黄15重量份～25重量份、山茱萸10重量份～20重量份、山药25重量份～35重量份、茯苓10重量份～20重量份、牡丹皮15重量份～25重量份、泽泻5重量份～15重量份、当归20重量份～30重量份、白芍15重量份～25重量份、丹参10重量份～15重量份、水蛭10重量份～15重量份、芒萁骨5重量份～10重量份、岩姜七10重量份～15重量份、金刀菜10重量份～15重量份和生甘草10重量份～15重量份。

进一步优选，所述药物中各原料药的重量份分别为淫羊藿30重量份～35重量份、鹿角胶40重量份～45重量份、龟板胶35重量份～40重量份、菟丝子15重量份～20重量份、肉桂10重量份～15重量份、狗脊25重量份～30重量份、怀牛膝20重量份～25重量份、杜仲15重量份～20重量份、制鳖甲15重量份～20重量份、骨碎补30重量份～35重量份、黄芪25重量份～30重量份、续断15重量份～20重量份、生地黄15重量份～20重量份、山茱萸15重量份～20重量份、山药30重量份～35重量份、茯苓15重量份～20重量份、牡丹皮15重量份～20重量份、泽泻10重量份～15重量份、当归25重量份～30重量份、白芍20重量份～25重量份、丹参10重量份～15重量份、水蛭10重量份～15重量份、芒萁骨5重量份～10重量份、岩姜七10重量份～15重量份、金刀菜10重量份～15重量份和生甘草10重量份～15重量份。

最优选，所述药物中各原料药的重量份分别为淫羊藿30重量份、鹿角胶40重量份、龟板胶40重量份、菟丝子20重量份、肉桂15重量份、狗脊30重量份、怀牛膝20重量份、杜仲20重量份、制鳖甲20重量份、骨碎补30重量份、黄芪30重量份、续断20重量份、生地黄20重量份、山茱萸20重量份、山药30重量份、茯苓20重量份、牡丹皮20重量份、泽泻10重量份、当归30重量份、白芍25重量份、丹参10重量份、水蛭10重量份、芒萁骨10重量份、岩姜七10重量份、金刀菜10重量份和生甘草10重量份。

本发明提供的药物是通过对上述原料药提取后获得的提取成分，加入药学上可接受的载体或赋形剂制成各种常规剂型。

所述药物为内服用药方式，药物剂型优选为片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、丸剂、糖浆剂、分散片、泡腾片、煎煮液，进一步优选为口服液。

所述第一步进一步具体为将各原料药分别洗净，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到100目，混合在一起，采用渗漉法用醇浓度为70％乙醇作溶剂，浸渍24小时后以每分钟3ml的速度进行渗漉，收集渗漉液，滤过，浓缩至60℃相对密度为1.20的浸膏，乙醇的施用量为该步混合物质量的10～15倍；

所述第二步进一步具体为将各原料药分别洗净，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到100目，混合在一起，加入相对于混合物质量6～8的水，水蒸气蒸馏提取4～6小时，过滤，收集挥发油，滤液收集备用，挥发油加入相对于其质量2～5倍的β-环糊精，加水1～3倍，研磨1小时，40℃的条件下干燥，采用超微粉碎机粉碎成300目细粉，滤液浓缩成60℃的条件下相对密度为1.30的浸膏。

当制备的剂型为口服液时，所述第三步进一步具体为将第一步获得的浸膏与第二步获得的浸膏以及挥发油的β-环糊精包合物混匀，加无水乙醇使含醇体积量达70％，冷藏，滤过，滤液回收乙醇，获得干膏，采用超微粉碎机粉碎成300目细粉，取500g加水至700ml，冷藏24小时，滤过，滤液添加甜菊素和苯甲酸钠，每100g细粉加甜菊素0.2g，防腐剂苯甲酸钠0.2g，调节pH值为7，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌封，灭菌，即得。

以下采用实施例来详细说明本发明的实施方式，借此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题，并达成技术效果的实现过程能充分理解并据以实施。

实施例1口服液1

将淫羊藿30g、鹿角胶40g、龟板胶40g、狗脊30g、怀牛膝20g、制鳖甲20g、骨碎补30g、续断20g、水蛭10g、芒萁骨10g、岩姜七10g和金刀菜10g分别洗净，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到100目，混合在一起，采用渗漉法用醇浓度为70％乙醇作溶剂，浸渍24小时后以每分钟3ml的速度进行渗漉，收集渗漉液，滤过，浓缩至60℃相对密度为1.20的浸膏，乙醇的施用量为3.2kg，将菟丝子20g、肉桂15g、杜仲20g、黄芪30g、生地黄20g、山茱萸20g、山药30g、茯苓20g、牡丹皮20g、泽泻10g、当归30g、白芍25g、丹参10g、生甘草10g分别洗净，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到100目，混合在一起，加入2kg水，水蒸气蒸馏提取6小时，过滤，收集挥发油，滤液收集备用，挥发油加入相对于其质量3倍的β-环糊精，加水2倍，研磨1小时，40℃的条件下干燥，采用超微粉碎机粉碎成300目细粉，滤液浓缩成60℃的条件下相对密度为1.30的浸膏，将前面获得的浸膏以及挥发油的β-环糊精包合物混匀，加无水乙醇使含醇体积量达70％，冷藏，滤过，滤液回收乙醇，获得干膏，采用超微粉碎机粉碎成300目细粉，取500g加水至700ml，冷藏24小时，滤过，滤液添加甜菊素和苯甲酸钠，每100g细粉加甜菊素0.2g，防腐剂苯甲酸钠0.2g，调节pH值为7，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌封，灭菌，即得。

实施例2口服液2

将淫羊藿30g、鹿角胶40g、龟板胶35g、狗脊25g、怀牛膝20g、制鳖甲15g、骨碎补30g、续断15g、水蛭10g、芒萁骨10g、岩姜七10g和金刀菜10g分别洗净，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到100目，混合在一起，采用渗漉法用醇浓度为70％乙醇作溶剂，浸渍24小时后以每分钟3ml的速度进行渗漉，收集渗漉液，滤过，浓缩至60℃相对密度为1.20的浸膏，乙醇的施用量为3kg，将菟丝子15g、肉桂10g、杜仲15g、黄芪25g、生地黄15g、山茱萸15g、山药30g、茯苓15g、牡丹皮15g、泽泻10g、当归25g、白芍20g、丹参10g、生甘草10g分别洗净，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到100目，混合在一起，加入1.6kg水，水蒸气蒸馏提取6小时，过滤，收集挥发油，滤液收集备用，挥发油加入相对于其质量3倍的β-环糊精，加水2倍，研磨1小时，40℃的条件下干燥，采用超微粉碎机粉碎成300目细粉，滤液浓缩成60℃的条件下相对密度为1.30的浸膏，将前面获得的浸膏以及挥发油的β-环糊精包合物混匀，加无水乙醇使含醇体积量达70％，冷藏，滤过，滤液回收乙醇，获得干膏，采用超微粉碎机粉碎成300目细粉，取500g加水至700ml，冷藏24小时，滤过，滤液添加甜菊素和苯甲酸钠，每100g细粉加甜菊素0.2g，防腐剂苯甲酸钠0.2g，调节pH值为7，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌封，灭菌，即得。

实施例3口服液3

将淫羊藿35g、鹿角胶45g、龟板胶40g、狗脊30g、怀牛膝25g、制鳖甲20g、骨碎补35g、续断20g、水蛭15g、芒萁骨15g、岩姜七15g和金刀菜15g分别洗净，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到100目，混合在一起，采用渗漉法用醇浓度为70％乙醇作溶剂，浸渍24小时后以每分钟3ml的速度进行渗漉，收集渗漉液，滤过，浓缩至60℃相对密度为1.20的浸膏，乙醇的施用量为3.5kg，将菟丝子20g、肉桂15g、杜仲20g、黄芪30g、生地黄20g、山茱萸20g、山药35g、茯苓20g、牡丹皮20g、泽泻15g、当归30g、白芍25g、丹参15g、生甘草15g分别洗净，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到100目，混合在一起，加入2kg水，水蒸气蒸馏提取6小时，过滤，收集挥发油，滤液收集备用，挥发油加入相对于其质量3倍的β-环糊精，加水2倍，研磨1小时，40℃的条件下干燥，采用超微粉碎机粉碎成300目细粉，滤液浓缩成60℃的条件下相对密度为1.30的浸膏，将前面获得的浸膏以及挥发油的β-环糊精包合物混匀，加无水乙醇使含醇体积量达70％，冷藏，滤过，滤液回收乙醇，获得干膏，采用超微粉碎机粉碎成300目细粉，取500g加水至700ml，冷藏24小时，滤过，滤液添加甜菊素和苯甲酸钠，每100g细粉加甜菊素0.2g，防腐剂苯甲酸钠0.2g，调节pH值为7，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌封，灭菌，即得。

实施例4理学急毒性试验

实验材料

实验动物

SPF级，昆明小鼠，40只，20±2g，雌雄各半，由山东中医药大学动物实验中心提供，动物合格证号SCXK(鲁)2013-0140。

受试药物

实验组：本发明实施例1制备的口服液1，配成生药含量2.0g/ml的溶液，4℃保存备用。

对照组：灌胃生理盐水，其余条件同本发明药物组。

实验方法

分组

取SPF级，昆明小鼠40只，雌雄各半，饲养于山东中医药大学动物实验中心，适应性饲养一周。按随机数表法，将小鼠分为2组，分别是对照组20只，实验组20只，雌雄各半，分笼饲养。

给药方法

实验前，各组小鼠禁食不禁水12h，对照组灌胃蒸馏水0.2ml/20g体重，3次/日，实验组，灌胃本发明实施例1制备的口服液1，0.2ml/20g体重，3次/日，给药间隔4h。连续给药7天，停药观察3天。

观察指标

一般情况

观察给药期间及停药观察期间，各组小鼠的一般情况，如发育情况(体温、体重、心率)，皮毛情况，精神状态，各天然孔情况，自主活动情况。

脏器检查及理化检测

根据实验要求，给药期间出现动物死亡，立即解剖，观察各脏器情况，剥离各脏器，称重，并计算脏器指数，心脏取血理化检测；如无死亡，则根据实验要求，在观察期后，予10％水合氯醛麻醉，打开腹腔，观察各脏器情况，腹主动脉取血处死，做理化检测，剥离各脏器，称重，并计算脏器指数。

结果

实验期间无小鼠死亡，根据实验安排进行相关检测。

一般情况

给药期间及停药观察期间，各组小鼠在体重、体温等基础体征，无明显异常，两组比较，无统计学差异，外观正常，无畸形，皮毛色泽正常，精神状态良好，各天然孔干净，无异常分泌物，自主活动正常，无异常行为。

脏器检查及理化检测

根据实验要求，在观察期后，予10％水合氯醛麻醉，腹主动脉取血处死，打开腹腔，观察各脏器情况，各组小鼠脏器排列正常，无粘连，无出血，所取血液做理化检测，各组小鼠血常规无异常，肝功、肾功检查无异常，剥离各脏器，称重，计算脏器指数，经统计学分析，无统计学差异，两组同期进行比较，统计学无差异。

结论

通过小鼠急性毒性试验，小鼠给药量为60g/kg/d，换算成正常成人给药量600g/kg/d(小鼠与60kg健康成人换算系数为10.0)，为正常成人每日给药量的150倍(正常60kg成人中药摄入量为4g/kg/d)，一般认为，动物实验中，给药为人100倍以上，而无明显毒副作用，可以认为药物是安全的。通过本实验可以证实，本发明中药在急性毒性试验中，无急性毒性反应，无迟发毒性，基本可以认为是安全的，故临床使用是安全的。

实施例5本发明小鼠长期毒性试验

实验材料

实验动物

受试药物

实验组：本发明实施例1制备的口服液1，水溶解配成生药含量1.0g/ml、0.75g/ml、0.5g/ml的溶液，4℃保存备用。

对照组：灌胃生理盐水，其余条件同本发明药物组。

实验方法

分组

取SPF级，昆明小鼠40只，雌雄各半，饲养于山东中医药大学动物实验中心，适应性饲养一周。按随机数表法，将小鼠分为2组，分别是对照组10只、高剂量组10只、中剂量组10只、低剂量组10只，雌雄各半，分笼饲养。

给药方法

实验前，各组小鼠禁食不禁水12h，对照组灌胃蒸馏水0.2ml/20g体重，2次/日，高、中、低剂量组，分别灌胃本发明实施例1制备的口服液1.0g/ml、0.75g/ml、0.5g/ml，0.2ml/20g体重，2次/日，给药间隔6h。连续给药14天，停药观察7天。

观察指标

一般情况

脏器检查及理化检测

结果

实验期间无小鼠死亡，根据实验安排进行相关检测。

一般情况

脏器检查及理化检测

结论

通过小鼠长期毒性试验，小鼠给药量为20g/kg/d、15g/kg/d、10g/kg/d，换算成正常成人给药量200g/kg/d、150g/kg/d、100g/kg/d，为正常成人每日给药量的50倍、37.5倍、25倍，通过本实验可以证实，本发明中药在长期毒性试验中，无蓄积毒性，无迟发毒性，基本可以认为是安全的，故临床使用是安全的。

实施例6临床研究

材料与方法

病例选择

全部病人来源于骨科门诊及住院部2013年～2014年收治患者，符合原发性骨质疏松症诊断的患者483例，其中男性205例，女性278例，将患者随机分为两组，治疗组(本发明制剂)250人、对照组233人.治疗组中，男124人，女126，年龄在45.18±9.48岁，病程在1～29年；对照组中，男118人，女115人，年龄在44.12±8.18岁，病程在1～31年，经统计学分析，两组性别、年龄、病程无统计学差异，具有可比性。

纳入标准

观察病例纳入标准骨密度符合骨量减少及骨质疏松症诊断标准并符合本研究中医辨证分型，自愿观察治疗随访1年的患者。

排除标准

有以下之一者可排除：

①近半年内服用过或注射过如维生素D、钙剂、骨化醇、肾上腺素、甲状腺激素、糖皮质激素、二膦酸盐等影响骨代谢药物者；

②患有影响骨转换指标疾病，如糖尿病，甲充、骨髓瘤、甲旁亢、骨肿瘤等；

③不愿意配合系统治疗，或患有严重内科疾病及精神病患者。

脱落标准

①受试者依从性差，不能坚持检测方案、治疗方案者；

②治疗期间发生严重其它内科疾病、或特殊生理变化不宜继续接受治疗者。

剔除标准

三个月为一个阶段，纳入后不能完成至少一个阶段检测及治疗的患者。

诊断标准

西医诊断标准

根据WHO建议标准采用HOLOGIC双能X线骨密度仪对患者腰椎、髋部进行检测，骨量减少-2.5SD<BMD≤-1SD；骨质疏松BMD≤-2.5SD；严重骨质疏松症＝骨质疏松症+骨折。

中医诊断标准

采用目前公认的《中医虚证参考标准》和《血瘀证诊断标准》，以及中西结合诊治骨质疏松症》作为辨证标准，分为肾阳虚证、脾肾阳虚证、肝肾阴虚证和气滞血瘀证四种，本实验研究药物补肾健脾化瘀法，针对临床中脾肾阳虚、肝肾阴虚、气滞血瘀证型

治疗方法

基础治疗：

钙尔奇D片，600mg，口服，1次/日，(600mg钙/片，江苏惠氏百宫生产，国药准字H10950029)

罗钙全，0.25mg，口服，2次/日，(上海罗氏制药有限公司、BH20020224)

治疗组：

使用本发明实施例1制备的口服液1，每次20ml，2次/日，早、晚温服，并适当走动、避免躺卧，3个月为一个疗程，共服用4个疗程。

对照组：

使用阿仑膦酸钠(福善美片，杭州默沙东制药有限公司、国药准字J20080073)口服，70mg，1次/周，每天早餐前或服用药物前半小时，用温幵水送服，并适当走动、避免躺卧，3个月为一个疗程，共服用4个疗程。

疗效评定

双光能X线骨密度检测

采用美国HOLOGIC双能X线骨密度仪(DXA)对患者腰椎、髋部进行检测，并记录患者治疗前、治疗后第6个月、12个月腰椎、髋部骨密度。

骨代谢指标

所有患者于入组前、入组后第3月、12月检测骨形成指标-I型前胶原氨基末端(N端)前肽(PINP)、骨吸收指标-I型胶原C端肽(CTX)，空腹时(或同时点，建议早晨)用普通干燥玻璃管抽取静脉血左右，3000bpra，5min离心出血清，-20℃保存，通过罗氏RochecobasE601电化学发光分析仪，采用ELISA(酶联免疫吸附法)测定。

骨质疏松专科调查表及QUALEFFO-41量表评估

治疗前、第3月、6月、12月釆集骨质疏松专科调查表及采用有良好信度、效度与敏感性的专科生存质量QUALEFF0-41量表评估患者的生存质量，其中包括功能状况、健康满意程度以及健康的总评价，共计七个纬度，四十一个分项。遵照IOF计分规则，按百分制取各纬度结果之和换算，评分越高，说明总的生存质量或对应纬度质量越好，满分为一百分。

满意度评价

两组治疗后的满意程度，按患者及家属在1年采集量表时做出综合评定，可分4个等级：(1)很满意；(2)满意；(3)—般；(4)不满意。

不良反应评定

治疗前、第3个月、12个月检测血韩浓度和肝肾功能，包括谷草转氨酶AST、谷丙转氨酶ALT、碱性磷酸酶ALP、血肌酐Cr，观察询问并记录两组病例在服药后1天内有无出现腹痛，腹湾，恶心，便秘，消化不良，皮肤瘙痒、头晕等不良反应，有异常的病例。

病例记录

所有病例及中医证候通过专人负责，按编号进行随机分配，设盲，由专科医师、专科研究生进行中医四诊资料的收集整理，填写调查表，当中医辨证分型有改变时，需做标明，以免影响统计。参加临床研究的医师对中止原因及评价予认真记录。

依从性解决方法

第一，定期随访，包括每月至少一次电话随访，询问服药情况、检查结果等；

第二，健康宣教，包括骨质疏松常识的宣教、用药注意事项及不良反应处理方法，如发放宣传册、小贴士等，对象包括患者及其陪同家属；

第三，增加预约率，提前电话通知提示，帮助电脑预约，分批次安排就诊时间，对失约患者，再次电话确认，保证应诊率。

统计学分析

数据采用SPSS17.0统计软件进行收录分析，数据进行正态性K-S检验，计量资料用平均数士标准差表示，计数资料采用卡方检验，等级资料采用秩和检验；配对资料使用配对t检验；正态分布资料，组间方差齐用独立t检验，大于两个以上比较釆用单因素方差分析(onewayANOVA)，方差不齐或非正态资料使用非参数秩和检验；两两比较根据方差齐性用SNK法进行，方差非齐性用多个独立样本非参数检验；显著水平设P<0.05。

结果

发放生存质量表总计600份，共收回531份，有效完成生存量表509份，量表回收率为88.5％，完成率为84.83％。共收集2013年1月至2014年12月，诊断为原发性骨质疏松、并可纳入统计病例共483例，严格遵照临床纳入标准、排除标准、项目脱落标准，剔除了不合格病例7例(2例不配合治疗及检查、2例因内科病入院、3例出国)，失访5例。实验结束后，治疗组243例(肾阳虚型54例、脾肾阳虚型57例、肝肾阴虚型76例、气滞血瘀型56例，且治疗期间未发现中医证型转换)，对照组238例(肾阳虚型50例、脾肾阳虚型58例、肝肾阴虚型79例、气滞血瘀型51例，且治疗期间未发现中医证型转换)。经过统计学分析，两组除基本资料无统计学差异外，在证型分类统计无统计学差异，具有可比性。

治疗前后疗效对比

经K-S检验，治疗前后数据符合正态分布，采用配对t检验；两组骨密度在6个月、12个月时，骨代谢在3个月、12个月，生存质量在3个月、6个月及12个月时，与治疗前比较，差异有统计学意义(P<0.05)

表1各组治疗前后各部位骨密度比较(g/cm²)

^*与同组治疗前，统计学有差异，P<0.05；^#与对照组比较，统计学有统计学差异，P<0.05

表2治疗组治疗前后各CTX、PINP比较(ng/ml)

表3治疗组治疗前后生存质量比较

中药组生存质量分析

表4治疗前后四种证型的生存质量纬度的分析比较

纬度/证型	肾阳虚型	脾肾阳虚型	肝肾阴虚型	气滞血瘀型
					N	54	57	76	56
治疗前	56.1±9.8	55.4±8.8	56.1±8.3	55.0±7.9
					治疗后(12个月)	15.3±3.1	15.9±1.8	14.8±1.1	15.1±1.3

治疗前资料符合正态分布，治疗后资料不符合正态分布，采用多样本非参数秩和检验，治疗1年后观察各证型间纬度变化，在躯体疼痛、自理能力、健康观念、精神状态纬度及总分评价上证型间有统计学差异(P<0.01)。

安全性评价

安全性方面，补肾健脾化瘀组与阳性对照组在谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、血肌酐(Cr)指标检测方面无1例患者出现有异常临床意义的临床表现，试验过程中亦无不良事件发生，此次研究应用是安全的。

满意度调查

表5治疗组与对照组间满意度对比(例)

组别	很满意	满意	一般	不满意	满意率％
						治疗组	93	101	48	1	99.59
对照组	60	87	76	15	93.70

经统计学分析，治疗组与对照组总体满意率有统计学差异，P<0.05，总体满意率治疗组高于对照组。

结论

本发明提供的中药口服液能有效提高原发性骨质疏松患者腰椎、髋部骨密度，降低骨转换速度，改善患者生存质量，提高患者治疗满意度，同时副作用少，疗效确切，值得临床推广。

实施例7动物实验研究

材料和方法

实验动物与分组

雌性Westar大鼠，60只(4～15月龄，未曾交配)，体重240～270g，由山东中医药大学动物实验中心提供，动物合格证号SCXK(鲁)2013-0382。按体重分层，随机分组，每组15只，除正常组外，余者进行造模处理。双侧卵巢切除术后10d将存活者按体重分层随机分为4组(每组15只)，即模型空白组、治疗(本发明实施例1制备的口服液)组、中药对照组(骨疏康颗粒)组，同步进行平行对照研究。

模型的建立方法与评价

造模方法经腹腔注射盐酸氯胺酮麻醉后，从背部切除双侧卵巢。术后常规肌肉注射青霉素，连续3d。造模后，13周后处死。取左后肢股骨，测定股骨的骨密度。

动物给药方法

治疗组：本发明实施例1制备的口服液1，配置成含中药生药量0.75g/ml水溶液，2ml/kg，2次/d，连续给药12周；

中药对照组：购自于辽宁康辰药业有限公司，配制成为中药生药量0.75g/ml水溶液，2ml/kg，2次/d连续给药12周；

模型对照组：灌胃给予等体积的生理盐水。

造模后10d开始灌胃给药，每天1次，连续给药12周后处死。

指标测定

动物处死后，取左后肢股骨测定骨密度，取下丘脑，置于Trizol液中或组织冰冻，-70℃保存。

大鼠左后肢股骨骨密度测定

取左后肢股骨，使用NORLAND公司XR-36型双能X线骨密度仪，采用小动物骨密度测定软件(TheSmallSubjectScoutScan)，测定股骨的骨密度。扫描宽度15cm，长度可任意调节，扫描速度40mmPsec，分辨率为110～110mm。

大鼠下丘脑的BMP-4、Smad6mRNA表达检测

RT-PCR法

大鼠下丘脑中BMP-4、Smad6蛋白表达检测

Westernblotting法蛋白质提取及SDS-PAGE电泳基本参照《分子克隆》的方法进行蛋白质提取、分离、转移，免疫化学反应抗为BMP-4兔抗鼠多克隆抗体(1：400)，Ⅱ抗为辣根过氧化物酶耦联的羊抗兔(1B5000)；采用ChemiImager5500型电泳成像分析仪对杂交带进行密度扫描分析，比较BMP-4，Smad6蛋白表达水平。

统计学处理计量

数据采用SPSS17.0统计软件进行收录分析，数据进行正态性K-S检验，计量资料用平均数士标准差表示，计数资料采用卡方检验，等级资料采用秩和检验。

结果

骨密度(BMD)变化的比较

表6各组药物对肾虚骨质疏松大鼠骨密度的影响

组别	N	骨密度(g/cm²)
			正常组	15	0.128±0.013^*
模型空白组	15	0.101±0.007
			中药对照组	15	0.118±0.012^*
治疗组	15	0.127±0.015^*#

^*与模型组比较，统计学有差异，P<0.05；^#与对照组比较，统计学有统计学差异，P<0.05

股骨的骨密度检测统计结果显示：模型空白组骨密度值明显低于正常组(P<0.01)，说明肾虚骨质疏松症实验动物模型的成功。与正常组比较，除治疗组与正常组没有差异，P>0.05，其他组大鼠均有显著差异，P<0.05；与模空组比较，其他各组大鼠均有非常显著提高，提示：治疗组和中药对照组均能提高去卵巢实验大鼠股骨的骨密度值，治疗组可以达到正常大鼠的骨密度值，其效果最优。

RT-PCR检测下丘脑中BMP-4和Smad6mRNA的表达结果

PCR产物经琼脂糖电泳后，BMP-4mRNA可分别于245bp(BMP-4)、700bp(B-actin)见到条带，Smad6mRNA可分别于451bp(Smad₆)、700bp(B-actin)见到条带，与设计引物相符。

半定量RT-PCR显示，与正常组比较，模型空白组BMP-4mRNA表达水平明显增强P<0.01。与模型空白组比较，治疗组mRNA表达明显降低P<0.05，治疗组的mRNA表达最强，优于中药对照组。

与正常组比较，模型空白组Smad6mRNA表达水平明显降低P<0.01。与模型空白组比较，治疗组mRNA表达水平明显增强P<0.05。治疗组间，治疗组的mRNA表达最强，优于中药对照组。

Western印迹杂交检测下丘脑中BMP-4和Smad₆的蛋白表达结果

Western杂交结果显示，大鼠下丘脑组织可检测到BMP-4和Smad6的蛋白表达。

BMP-4的蛋白表达：与正常组比较，模型空白组明显增强P<0.01；与模型空白组比较，各组蛋白表达明显下调P<0.01。

Smad₆的蛋白表达：与正常组比较，模型空白组的表达降低P<0.01；与模型空白组比较，其他治疗各组蛋白表达水平明显增强P<0.01。治疗组间，实验中药中剂量组表达最增强。

3结论

在本实验研究中，将雌性大鼠切除双侧卵巢造成骨质疏松，模拟女性由于雌激素缺乏而引起的骨质疏松症的临床特征。由于切除卵巢导致性激素平急剧下降，在局部，对骨重建相关的BMP-4、Smads的基因蛋白表达出现降低P升高的异常变化；而在整体，可能由于性激素分泌过少而致对下丘脑的反馈抑制减少，反而出现下丘脑组织的BMP-4、Smads基因蛋白表达的异常变化，下丘脑可能通过释放过多的BMPs，以及影响信号转导通路，而调控神经-内分泌网络。这种实验结果耐人寻味，令人思索。

内分泌激素的反馈调控机制与中医阴阳相互关系，即阴阳二气在运动变化中“此消彼长，此长彼消”颇相一致，可能解释人体生命活动的复杂现象。今后将进一步深入研究，以期能有更新的发现，更好地阐述肾虚骨质疏松症的病理机制和补肾中药的调控作用。

综上所述，本发明制剂在骨发生和形成过程中对BMP-4、Smads具有一定的调控作用，有助于从基因和蛋白质活性层面的改善来治疗骨质疏松症方面的疾病。

所有上述的首要实施这一知识产权，并没有设定限制其他形式的实施这种新产品和/或新方法。本领域技术人员将利用这一重要信息，上述内容修改，以实现类似的执行情况。但是，所有修改或改造基于本发明新产品属于保留的权利。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims

1.一种用于治疗原发性骨质疏松的药物，其特征在于：原料药包括淫羊藿、鹿角胶、龟板胶、菟丝子、肉桂、狗脊、怀牛膝、杜仲、制鳖甲、骨碎补、黄芪、续断、生地黄、山茱萸、山药、茯苓、牡丹皮、泽泻、当归、白芍、丹参、水蛭、芒萁骨、岩姜七、金刀菜和生甘草。

2.如权利要求1所述的用于治疗骨质疏松的药物，其特征在于：各原料药的重量份分别为淫羊藿25重量份～35重量份、鹿角胶30重量份～45重量份、龟板胶25重量份～45重量份、菟丝子15重量份～25重量份、肉桂10重量份～20重量份、狗脊20重量份～35重量份、怀牛膝15重量份～30重量份、杜仲10重量份～20重量份、制鳖甲15重量份～25重量份、骨碎补25重量份～45重量份、黄芪20重量份～30重量份、续断10重量份～20重量份、生地黄15重量份～25重量份、山茱萸10重量份～20重量份、山药25重量份～35重量份、茯苓10重量份～20重量份、牡丹皮15重量份～25重量份、泽泻5重量份～15重量份、当归20重量份～30重量份、白芍15重量份～25重量份、丹参10重量份～15重量份、水蛭10重量份～15重量份、芒萁骨5重量份～10重量份、岩姜七10重量份～15重量份、金刀菜10重量份～15重量份和生甘草10重量份～15重量份。

3.如权利要求1或2所述的用于治疗骨质疏松的药物，其特征在于：各原料药的重量份分别为淫羊藿30重量份～35重量份、鹿角胶40重量份～45重量份、龟板胶35重量份～40重量份、菟丝子15重量份～20重量份、肉桂10重量份～15重量份、狗脊25重量份～30重量份、怀牛膝20重量份～25重量份、杜仲15重量份～20重量份、制鳖甲15重量份～20重量份、骨碎补30重量份～35重量份、黄芪25重量份～30重量份、续断15重量份～20重量份、生地黄15重量份～20重量份、山茱萸15重量份～20重量份、山药30重量份～35重量份、茯苓15重量份～20重量份、牡丹皮15重量份～20重量份、泽泻10重量份～15重量份、当归25重量份～30重量份、白芍20重量份～25重量份、丹参10重量份～15重量份、水蛭10重量份～15重量份、芒萁骨5重量份～10重量份、岩姜七10重量份～15重量份、金刀菜10重量份～15重量份和生甘草10重量份～15重量份。

4.如权利要求1至3所述的用于治疗骨质疏松的药物，其特征在于：各原料药的重量份分别为淫羊藿30重量份、鹿角胶40重量份、龟板胶40重量份、菟丝子20重量份、肉桂15重量份、狗脊30重量份、怀牛膝20重量份、杜仲20重量份、制鳖甲20重量份、骨碎补30重量份、黄芪30重量份、续断20重量份、生地黄20重量份、山茱萸20重量份、山药30重量份、茯苓20重量份、牡丹皮20重量份、泽泻10重量份、当归30重量份、白芍25重量份、丹参10重量份、水蛭10重量份、芒萁骨10重量份、岩姜七10重量份、金刀菜10重量份和生甘草10重量份。

5.如权利要求1至4所述的用于治疗骨质疏松的药物，其特征在于：所述药物为内服用药方式。

6.如权利要求1至5所述的用于治疗骨质疏松的药物，其特征在于：所述药物剂型优选为片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、丸剂、糖浆剂、分散片、泡腾片、煎煮液。

7.权利要求1至6所述用于治疗骨质疏松的药物的制备方法，其特征在于，包括：

8.权利要求7所述的用于治疗骨质疏松的药物的制备方法，其特征在于：所述第一步进一步具体为将各原料药分别洗净，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到100目，混合在一起，采用渗漉法用醇浓度为70％乙醇作溶剂，浸渍24小时后以每分钟3ml的速度进行渗漉，收集渗漉液，滤过，浓缩至60℃相对密度为1.20的浸膏，乙醇的施用量为该步混合物质量的10～15倍。

9.权利要求7或8所述的用于治疗骨质疏松的药物的制备方法，其特征在于：所述第二步进一步具体为将各原料药分别洗净，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到100目，混合在一起，加入相对于混合物质量6～8的水，水蒸气蒸馏提取4～6小时，过滤，收集挥发油，滤液收集备用，挥发油加入相对于其质量2～5倍的β-环糊精，加水1～3倍，研磨1小时，40℃的条件下干燥，采用超微粉碎机粉碎成300目细粉，滤液浓缩成60℃的条件下相对密度为1.30的浸膏。

10.权利要求7至9所述的用于治疗骨质疏松的药物的制备方法，其特征在于：当制备的剂型为口服液时，所述第三步进一步具体为将第一步获得的浸膏与第二步获得的浸膏以及挥发油的β-环糊精包合物混匀，加无水乙醇使含醇体积量达70％，冷藏，滤过，滤液回收乙醇，获得干膏，采用超微粉碎机粉碎成300目细粉，取500g加水至700ml，冷藏24小时，滤过，滤液添加甜菊素和苯甲酸钠，每100g细粉加甜菊素0.2g，防腐剂苯甲酸钠0.2g，调节pH值为7，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌封，灭菌，即得。