CN105482808B - 检测食源性水中s2‑的荧光探针的制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

检测食源性水中S2‑的荧光探针及其制备方法和应用，所述荧光探针由Cu2+与含有至少3个组氨酸和至少1个色氨酸的多肽络合而成，且色氨酸的位置在组氨酸之间。所述制备方法是将多肽水溶液和CuSO4的H2SO4溶液与4‑羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液混合，即成。本发明所述荧光探针主要用于食源性水中S2‑的检测。本发明荧光探针检测灵敏度高，检出限0.01μmol/L，检测范围为0.05～20μmol/L，检测速度快，不受常见阴离子干扰，成本低，选择性好；在检测过程中，无需复杂且昂贵的仪器设备，分析过程简单易行，耗样少，无需添加有机溶剂，环境友好；本发明制备方法步骤简单、成本低。

Description

检测食源性水中S2-的荧光探针的制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种荧光探针及其制备方法和应用，具体涉及一种检测食源性水中S2-的荧光探针及其制备方法和应用。
背景技术
含硫有机物分解或硫酸盐类物质还原而生成的硫化物，即含有S2-的物质具有一定的毒性，微摩尔浓度的含S2-物质的存在已可对水生生物和人类造成伤害（Wang F et.al.Env. Toxi. Chem. 1999, 18(11): 2526-2532.）。S2-超标的水或者食物可造成人体内细胞色素、氧化酶等物质中二硫键的破坏，造成细胞组织严重缺氧，导致人体四肢麻痹甚至休克。《地表水环境质量标准》要求食用水源中硫化物的含量不得高于0.05mg/L，因此，检测食用性水源中S2-的含量越来越受到重视。
目前，水中S2-的检测方法发展迅速，已报道的有毛细管电泳法，光纤传感器法，离子色谱法，离子选择性电极法，气相色谱法，流动注射分析法、电感耦合等离子体原子发射光谱法等，被用于国家标准的有气相分子吸收光谱法（HJ/T200-2005）、对氨基二甲基苯胺比色法（GB/T 30376-2013）和碘量法（MT/T 371-2005）。这些分析方法中，要么需要用复杂的仪器设备，要么分析过程步骤繁杂，且有的方法的灵敏度并不高，比如对氨基二甲基苯胺比色法对水中硫离子的浓度检测范围为0.08～1.00 mg/L，碘量法测定水中硫离子的浓度范围为1.00 mg以上（参见MT/T 371-2005）。因此，发展简单易行、检测成本低、选择性好、灵敏度高的硫化物分析方法具有重要的应用价值。
近年来，荧光化学传感器技术的发展带动了一批有机荧光物质的出现，例如三氰基二氧呋喃，2,7-二醋酸汞基荧光素，α,β-不饱和醛酮等有机类化合物用于检测水溶液中S2-的浓度。但是，此类化合物水溶液中溶解度低，需要用有机溶剂溶解，且此类化合物合成步骤复杂，合成过程需要大量的有机试剂，造成环境污染。因此，研发环境友好型可用于食用性水源检测的荧光传感器具有非常重要的意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种检测灵敏度高，成本低，选择性好，抗干扰，环境友好的检测食源性水中S2-的荧光探针。
本发明进一步要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种步骤简单、成本低的检测食源性水中S2-的荧光探针的制备方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下：一种检测食源性水中S2-的荧光探针，由Cu2+与含有至少3个组氨酸和至少1个色氨酸的多肽络合而成，且色氨酸的位置在组氨酸之间。
进一步，所述含有至少3个组氨酸和至少1个色氨酸，且色氨酸的位置在组氨酸之间的多肽氨基酸序列为：组氨酸-组氨酸-色氨酸-组氨酸、组氨酸-丝氨酸-色氨酸-甘氨酸-组氨酸-谷氨酰胺-组氨酸或丝氨酸-组氨酸-色氨酸-组氨酸-甘氨酸-组氨酸-谷氨酸等。
进一步，所述Cu2+与组氨酸-组氨酸-色氨酸-组氨酸络合所得荧光探针的分子结构式如下所示：
；
所述Cu2+与组氨酸-丝氨酸-色氨酸-甘氨酸-组氨酸-谷氨酰胺-组氨酸络合所得荧光探针的分子结构式如下所示：
；
所述Cu2+与丝氨酸-组氨酸-色氨酸-组氨酸-甘氨酸-组氨酸-谷氨酸络合所得荧光探针的分子结构式如下所示：
。
进一步，所述多肽采用多肽固相合成法。
本发明进一步解决其技术问题所采用的技术方案如下：检测食源性水中S2-的荧光探针的制备方法，将多肽水溶液和CuSO4的H2SO4溶液以多肽:Cu2+的摩尔比为1.0～1.2:1的比例，与4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液混合，即成。
进一步，所述多肽水溶液的浓度为100～400μmol/L。多肽水溶液浓度若低于100μmol/L，不利于后面多肽、Cu2+和4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液的混合，而多肽水溶液浓度若高于400μmol/L，由于多肽在水溶液中的溶解度不高，多肽在水中的有效浓度降低，造成多肽-Cu2+络合物浓度的不准确，最终导致对S2-检测的不准确。
进一步，所述CuSO4的H2SO4溶液是指溶解于0.2～4.0 mmol/LH2SO4溶液中，CuSO4浓度为0.2～4.0mmol/L的溶液。CuSO4的H2SO4溶液浓度不能过大，过大会影响最终测试溶液的pH。
进一步，所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液的浓度为10～50mmol/L，pH值为7.0～7.8。4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液的浓度若低于10 mmol/L，不能发挥缓冲溶液的效果，即CuSO4的H2SO4溶液和多肽水溶液的加入会造成最终溶液pH值的改变， 4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液的浓度若高于50 mmol/L，则会影响多肽与Cu2+的络合，影响本方法的灵敏度。而4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液pH值过高或过低都会影响多肽与Cu2+的络合，影响本方法对S2-的检测。缓冲溶液的用量不需要严格限制。
进一步，所述混合的温度为20～37℃，时间为1～2min。混合的温度若低于20℃，会影响多肽的溶解度，若高于37℃，则会影响多肽与Cu2+的络合。多肽与Cu2+的络合物可以迅速络合，混合时间并不需要太长。
将本发明所述荧光探针用于检测食源性水中S2-。具体操作为：将所述荧光探针配制成浓度为10μmol/L的标准检测溶液，向该标准检测溶液中加入待测溶液，分别测定加入待测溶液前标准检测溶液的本征信号和加入待测溶液后标准检测溶液的荧光光谱的输出信号，前后信号之差即为待测溶液中S2-的含量。
本发明的原理是：含有至少3个组氨酸和至少1个色氨酸，且色氨酸的位置在组氨酸之间的多肽具有荧光，Cu2+与该多肽络合后淬灭了该多肽的荧光，而S2-可以和Cu2+与该多肽的络合产物多肽-Cu2+中的Cu2+结合生成沉淀，释放出多肽，增强溶液中自由多肽的含量，从而使荧光强度增强。本发明以含有至少3个组氨酸和至少1个色氨酸，且色氨酸的位置在组氨酸之间的多肽-Cu2+为荧光材料，用F-4600荧光分光光度计检测其在不同S2-浓度下的多肽荧光光谱，根据所测数据绘制标准曲线，测得待测溶液在多肽-Cu2+络合物溶液中的荧光信号后，即可从标准曲线上得出待测溶液中的S2-浓度。
本发明的有益效果如下：
（1）本发明荧光探针检测灵敏度高，检出限为0.01μmol/L，检测范围为0.05～20μmol/L，检测速度快，不受常见阴离子干扰，成本低，选择性好；
（2）本发明荧光探针在检测过程中，无需复杂且昂贵的仪器设备，分析过程简单易行，耗样少，无需添加有机溶剂溶解，可用于食源性水中S2-的检测，环境友好；
（3）本发明制备方法步骤简单、成本低。
附图说明
图1是10μmol/L HHWH溶液，实施例1所得10μmol/L HHWH-Cu2+溶液以及在其中加入不同浓度S2-后的荧光发射谱图（图中S2-浓度由下至上依次为0.5，1.0，2.0，2.5，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0和9.5μmol/L）；
图2是不同浓度S2-在实施例1所得10μmol/L HHWH-Cu2+中355nm处的标准曲线（线性方程为：y= 99.00x+85.68 其中，y为荧光强度值，x为S2-的浓度，R2为0.999）；
图3是不同常见阴离子在实施例1所得10μmol/L HHWH-Cu2+中355nm处的荧光强度（图中1为HHWH-Cu2+溶液中直接加入S2-的溶液，2～13依次为HHWH-Cu2+溶液中分别加入SO4 2-，SO3 2-，S2O3 2-，S2O8 2-，HCO3 -，CH3COO-，NO2 -，Cl-，Br-，I-，L-半胱氨酸或PO4 3-后，再加入S2-的溶液，其中，常见阴离子在混合溶液中的浓度为1 mmol/L，S2-在混合溶液中的浓度为5μmol/L）。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步说明。
本发明实施例所使用的4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液（HEPES缓冲液）购于Sigma-Aldrich；其它所使用的化学试剂，如无特殊说明，均通过常规商业途径获得。
参考例1
多肽组氨酸-组氨酸-色氨酸-组氨酸（HHWH）的制备方法为：（1）将1g 2-氯三苯甲基氯树脂放入反应管中，加入15 mL二氯甲烷（DCM）溶胀，振荡30min；（2）通过沙芯抽滤掉DCM，先加入6.5g保护组氨酸氨基酸（Fmoc-His(Trt)-OH），再加入10 mL N,N二异丙基乙胺（DIEA），最后加入15 mL二甲基甲酰胺（DMF）溶解，振荡30min后，加入5mL甲醇，震荡30min；（3）抽滤，向固体中加20 mL 20%哌啶DMF溶液，反应5min，过滤后，再加20 mL 20%哌啶DMF溶液，反应15min；（4）抽掉20%哌啶DMF溶液，用20 mL DMF冲洗2次，20 mL甲醇冲洗2次，20 mLDMF再冲洗2次；（5）将5mL DMF溶解的6 g保护色氨酸氨基酸（Fmoc-Trp(Boc)-OH），5mL DMF溶解的7g O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯（HBTU）加入反应管，再立刻加入30mL DIEA，反应30min；（6）用20 mL DMF冲洗2次，20 mL甲醇冲洗2次，20 mL DMF再冲洗2次；（7）重复（3）～（6）的操作，从右到左依次连接序列中的氨基酸；（8）用20 mL DMF冲洗两次，20 mL甲醇冲洗2次，20 mL DMF再冲洗2次，抽干10min；（9）加200 mL 切割液（三氟乙酸（TFA）95wt%，水2wt%，1,2-乙二硫醇（EDT）2wt%，三异丙基硅烷（TIS）1wt%）避光切割120min；（10）抽滤得到固体，将裂解液用氮气尽量吹干，用乙醚洗所得固体6次，然后常温挥发干燥，得待纯化的多肽；（11）用高效液相色谱（HPLC）通过C18柱纯化多肽：以含0.1wt%TFA的乙氰和含0.1wt%TFA的水作为流动相，洗涤时间为40 min，流速为4.75 mL/min，产物的出峰时间为17.8 min；（12）最后将纯化后的溶液冻干，即得到成品；（13）鉴定：分别取少量的成品多肽，做质谱（MS）的分子量鉴定；（14）密封避光包装白色粉末状的多肽，-20℃保存。
参考例2
多肽组氨酸-丝氨酸-色氨酸-甘氨酸-组氨酸-谷氨酰胺-组氨酸（HSWGHQH）的制备方法与参考例1的区别仅在于：在步骤（2）与步骤（5）加入氨基酸时，按照本参考例中的氨基酸序列按照从右至左的顺序加入相应的Fmoc保护的氨基酸即可。余同参考例1。
参考例3
多肽丝氨酸-组氨酸-色氨酸-组氨酸-甘氨酸-组氨酸-谷氨酸（DHWHGHE）的制备方法与参考例1的区别仅在于：在步骤（2）与步骤（5）加入氨基酸时，按照本参考例中的氨基酸序列按照从右至左的顺序加入相应的Fmoc保护的氨基酸即可。余同参考例1。
实施例1
HHWH-Cu2+荧光探针的分子结构式如下所示：
。
制备方法：将10μL参考例1所得HHWH配制的浓度为200 μmol/L的 HHWH水溶液和2μL 溶解于1 mmol/L H2SO4溶液中CuSO4浓度为1 mmol/L的溶液与188μL 的HEPES缓冲液（浓度10 mmol/L，pH值7.4）在25℃下，混合1min，即得浓度为10μmol/L的HHWH-Cu2+络合物荧光探针。
不同条件下荧光强度的测定：
（1）空白荧光强度测定：
用移液枪分别吸取0.2mL浓度为10μmol/L 的HHWH和实施例1所得浓度为10μmol/L的HHWH-Cu2+溶液置于微量比色皿中，分别测定HHWH和HHWH-Cu2+的荧光光谱。
如图1所示，在280 nm的激发光下，HHWH在355 nm处有较强发射峰，当等量的Cu2+加入后，HHWH与Cu2+形成络合物，HHWH在355 nm处的荧光发射光谱强度降低，HHWH有较强的荧光发射光谱，而实施例1所得浓度为10μmol/L的HHWH-Cu2+几乎没有荧光。
（2）标准曲线测定：
用移液枪分别吸取0.2 mL浓度为10μmol/L 的HHWH-Cu2+至13个离心管中，再用移液枪分别吸取1μL，浓度分别为0.1，0.2，0.4，0.5，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6，1.8和1.85mmol/L 的Na2S溶液加入上述13个离心管中，震荡使之混合均匀，此时混合溶液的S2-浓度分别为0.5，1.0，2.0，2.5，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0和9.5μmol/L，分别测定HHWH在上述S2-浓度下，355nm处的荧光光谱，测量3次，取平均值，绘制标准曲线图。通过改变HHWH-Cu2+的浓度测得本实施例所得HHWH-Cu2+荧光探针的检测范围为0.05～20μmol/L。
如图2所示，当加入S2-后，S2-与Cu2+生成CuS沉淀，溶液中自由的HHWH浓度升高，因此，HHWH在355 nm处的荧光发射强度升高，且溶液的荧光强度随S2-的浓度从0.5μmol/L增加到10μmol/L呈线性关系，根据3倍空白标准偏差（3σ）计算该方法检测S2-的检出限为0.01μmol/L。
（3）不同常见阴离子在HHWH-Cu2+中的荧光强度：
分别称取阴离子盐Na2SO4，Na2SO3，Na2S2O3，K2S2O8，NaHCO3，CH3COONa，NaNO2，NaCl，NaBr，KI，L-半胱氨酸和Na3PO4各2 mmol，溶解于10 mL去离子水中，配置成浓度为200 mmol/L的阴离子溶液。
用移液枪分别吸取0.2mL浓度为10μmol/L 的HHWH-Cu2+溶液至13个0.6 mL的离心管中，再用移液枪分别吸取1μL浓度为 200 mmol/L 的Na2SO4，Na2SO3，Na2S2O3，K2S2O8，NaHCO3，CH3COONa，NaNO2，NaCl，NaBr，KI，L-半胱氨酸和Na3PO4溶液加入上述2～13号离心管中，再用移液枪分别吸取1μL，浓度为1mmol/L 的Na2S溶液加入上述13个离心管中，震荡使之混合均匀，此时混合溶液的阴离子浓度为1 mmol/L，S2-浓度为5μmol/L，HHWH-Cu2+与常见干扰阴离子的摩尔浓度比均为1:100，将离心管中样品转移到微量比色皿中，分别测定HHWH的荧光强度。
如图3所示，当S2-与常见阴离子同时存在于HHWH-Cu2+水溶液时，混合溶液的荧光强度与仅存在S2-的HHWH-Cu2+水溶液的荧光强度相比，基本一致，表明其它常见阴离子并不会干扰S2-的检测结果。
食源性水中S2-浓度的测定：
用移液枪分别吸取0.2mL实施例1所得浓度为10μmol/L的HHWH-Cu2+溶液至3个0.6mL的离心管中，用移液枪分别吸取1μL湘江水，自来水，水稻灌溉用水加入上述3个离心管中，震荡使之混合均匀，将离心管中样品转移到微量比色皿中，分别测定HHWH的荧光强度，根据图2的标准曲线得出相应的S2-浓度；再分别取5mL湘江水，自来水，水稻灌溉用水，按照HJ/T200-2005，用气相分子吸收光谱法分别测定水中S2-的浓度，如表1所示。
表1 利用实施例1所得HHWH-Cu2+溶液和气相分子吸收光谱法检测实际水样品中的S2-浓度
由表1可知，用HHWH-Cu2+络合物法与气相分子吸收光谱法检测相同食源性水中S2-的数据高度一致，说明本发明方法食源性水中S2-的方法准确、可靠。
实施例2
HSWGHQH-Cu2+荧光探针的分子结构式如下所示：
。
制备方法：将1μL参考例2所得HSWGHQH配制的浓度为200 μmol/L的HSWGHQH水溶液和1μL 溶解于0.2 mmol/L H2SO4溶液中CuSO4浓度为0.2 mmol/L的溶液与198 μL 的HEPES缓冲液（浓度50 mmol/L，pH值7.0）在20℃下，混合2 min，即得浓度为1μmol/L的HSWGHQH-Cu2+络合物荧光探针。
标准曲线测定：
用移液枪分别吸取0.2 mL浓度为1μmol/L 的HSWGHQH-Cu2+至13个离心管中，再用移液枪分别吸取1μL，浓度分别为0.01，0.02，0.04，0.05，0.06，0.08，0.10，0.12，0.14，0.16和0.18 mmol/L 的Na2S溶液加入上述13个离心管中，震荡使之混合均匀，此时混合溶液的S2-浓度分别为0.05，0.1，0.2，0.25，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8和0.9μmol/L，分别测定HSWGHQH在上述S2-浓度下，355nm处的荧光光谱，测量3次，取平均值，绘制标准曲线图。当加入S2-后，S2-与Cu2+生成CuS沉淀，溶液中自由的HSWGHQH浓度升高，因此，HSWGHQH在355 nm处的荧光发射强度升高，且溶液的荧光强度随S2-的浓度从0.05μmol/L增加到1μmol/L呈线性关系。线性方程为：y= 87.46x+97.15，其中，y为荧光强度值，x为S2-的浓度，R2为0.999。
用本实施例所得HSWGHQH-Cu2+检测S2-的检出限为0.01μmol/L，通过改变HSWGHQH-Cu2+的浓度测得检测范围为0.05～20μmol/L，与气相分子吸收光谱法检测相同食源性水中S2-的数据高度一致，说明本发明方法食源性水中S2-的方法准确、可靠。
实施例3
DHWHGHE-Cu2+荧光探针的分子结构式如下所示：
。
制备方法：将10 μL参考例3所得DHWHGHE配制的浓度为480 μmol/L的DHWHGHE水溶液和1μL溶解于4 mmol/L H2SO4溶液中CuSO4浓度为4 mmol/L的溶液与189 μL的HEPES缓冲液（浓度25 mmol/L，pH值7.8）在37℃下，混合2 min，即得浓度为20μmol/L的DHWHGHE-Cu2+络合物荧光探针。
标准曲线测定：
用移液枪分别吸取0.2 mL浓度为20μmol/L 的DHWHGHE-Cu2+至13个离心管中，再用移液枪分别吸取1μL，浓度分别为0.2，0.4，0.8，1.0，1.2，1.6，2.0，2.4，2.8，3.2，3.6和4.0mmol/L 的Na2S溶液加入上述13个离心管中，震荡使之混合均匀，此时混合溶液的S2-浓度分别为1，2，4，5，6，8，10，13，14，16，18和20μmol/L，分别测定DHWHGHE在上述S2-浓度下，355nm处的荧光光谱，测量3次，取平均值，绘制标准曲线图。当加入S2-后，S2-与Cu2+生成CuS沉淀，溶液中自由的DHWHGHE浓度升高，因此，DHWHGHE在355 nm处的荧光发射强度升高，且溶液的荧光强度随S2-的浓度从1μmol/L增加到20μmol/L呈线性关系。线性方程为：y= 132.46x+196.41，其中，y为荧光强度值，x为S2-的浓度，R2为0.999。
用本实施例所得DHWHGHE-Cu2+检测S2-的检出限为0.01μmol/L，通过改变DHWHGHE-Cu2+的浓度测得检测范围为0.05～20μmol/L，与气相分子吸收光谱法检测相同食源性水中S2-的数据高度一致，说明本发明方法食源性水中S2-的方法准确、可靠。

Claims (13)

1.一种检测食源性水中S2-的荧光探针，其特征在于：由Cu2+与含有至少3个组氨酸和至少1个色氨酸的多肽络合而成，且色氨酸的位置在组氨酸之间；所述含有至少3个组氨酸和至少1个色氨酸，且色氨酸的位置在组氨酸之间的多肽氨基酸序列为：组氨酸-组氨酸-色氨酸-组氨酸、组氨酸-丝氨酸-色氨酸-甘氨酸-组氨酸-谷氨酰胺-组氨酸或丝氨酸-组氨酸-色氨酸-组氨酸-甘氨酸-组氨酸-谷氨酸。
2.根据权利要求1所述检测食源性水中S2-的荧光探针，其特征在于，所述Cu2+与组氨酸-组氨酸-色氨酸-组氨酸络合所得荧光探针的分子结构式如下所示：
所述Cu2+与组氨酸-丝氨酸-色氨酸-甘氨酸-组氨酸-谷氨酰胺-组氨酸络合所得荧光探针的分子结构式如下所示：
所述Cu2+与丝氨酸-组氨酸-色氨酸-组氨酸-甘氨酸-组氨酸-谷氨酸络合所得荧光探针的分子结构式如下所示：
3.根据权利要求1或2所述检测食源性水中S2-的荧光探针，其特征在于：所述多肽采用多肽固相合成法。
4.如权利要求1～3之一所述检测食源性水中S2-的荧光探针的制备方法，其特征在于：将多肽水溶液和CuSO4的H2SO4溶液以多肽:Cu2+的摩尔比为1.0～1.2:1的比例，与4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液混合，即成。
5.根据权利要求4所述检测食源性水中S2-的荧光探针的制备方法，其特征在于：所述多肽水溶液的浓度为100～400μmol/L。
6.根据权利要求4或5所述检测食源性水中S2-的荧光探针的制备方法，其特征在于：所述CuSO4的H2SO4溶液是指溶解于0.2～4.0mmol/LH2SO4溶液中，CuSO4浓度为0.2～4.0mmol/L的溶液。
7.根据权利要求4或5所述检测食源性水中S2-的荧光探针的制备方法，其特征在于：所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液的浓度为10～50mmol/L，pH值为7.0～7.8。
8.根据权利要求6所述检测食源性水中S2-的荧光探针的制备方法，其特征在于：所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液的浓度为10～50mmol/L，pH值为7.0～7.8。
9.根据权利要求4或5所述检测食源性水中S2-的荧光探针的制备方法，其特征在于：所述混合的温度为20～37℃，时间为1～2min。
10.根据权利要求6所述检测食源性水中S2-的荧光探针的制备方法，其特征在于：所述混合的温度为20～37℃，时间为1～2min。
11.根据权利要求7所述检测食源性水中S2-的荧光探针的制备方法，其特征在于：所述混合的温度为20～37℃，时间为1～2min。
12.根据权利要求8所述检测食源性水中S2-的荧光探针的制备方法，其特征在于：所述混合的温度为20～37℃，时间为1～2min。
13.如权利要求1～3之一所述检测食源性水中S2-的荧光探针的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114920800B (zh) * 2022-04-20 2024-04-16 中南林业科技大学 一种含色氨酸的5肽荧光探针及其应用
CN115165821A (zh) * 2022-06-14 2022-10-11 华南师范大学 一种基于氧化铜纳米材料的大肠杆菌检测方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102608091A (zh) * 2012-03-22 2012-07-25 中国科学院广州生物医药与健康研究院 一种快速免标记检测硫离子的方法
CN103194212A (zh) * 2013-03-30 2013-07-10 渤海大学 一种接力识别Zn2+和S2-的比率型荧光探针及其合成方法和应用
CN103323440A (zh) * 2013-06-14 2013-09-25 山西大学 一种检测硫离子的方法
CN104530102A (zh) * 2014-12-08 2015-04-22 辽宁科技大学 一种检测生物体内硫离子的荧光铜配合物及其应用

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4623166B2 (ja) * 2008-08-25 2011-02-02 ソニー株式会社 標識化合物及びこれを用いた検出方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102608091A (zh) * 2012-03-22 2012-07-25 中国科学院广州生物医药与健康研究院 一种快速免标记检测硫离子的方法
CN103194212A (zh) * 2013-03-30 2013-07-10 渤海大学 一种接力识别Zn2+和S2-的比率型荧光探针及其合成方法和应用
CN103323440A (zh) * 2013-06-14 2013-09-25 山西大学 一种检测硫离子的方法
CN104530102A (zh) * 2014-12-08 2015-04-22 辽宁科技大学 一种检测生物体内硫离子的荧光铜配合物及其应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
五肽Pro-Gly-His-Glu-Tyr的合成及与铜(II)离子的作用;王召璐等;《化学研究与应用》;20150331;第27卷(第3期);第315-319页 *
四肽Trp-Gly-Gly-His的合成及其对铜离子的检测;肖俊等;《广东化工》;20140515;第41卷(第11期);第3-4页 *
基于多肽识别基团的水溶性荧光探针的合成及其对Cu2+与H2S的检测;肖俊;《中国优秀硕士学位论文全文数据库》;20150315(第3期);第B014-769页 *

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