CN105418610A - 一种10-羟基吴茱萸碱类抗肿瘤化合物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种10-羟基吴茱萸碱类抗肿瘤化合物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种10-羟基吴茱萸碱类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的用途,其结构如式I所示,该类化合物是新发现的具有全新结构的拓扑异构酶抑制剂,大部分化合物表现出广谱的抗肿瘤活性,部分衍生物对测试的三株肿瘤的IC50小于0.001μg/mL,优于现有技术中类似结构活性最好的化合物(10-羟基吴茱萸碱)。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域,具体地说,是一种10-羟基吴茱萸碱类抗肿瘤化合物及其制备方法和应用。
背景技术
DNA拓扑异构酶作为一种参与DNA的复制和转录的酶,广泛存在于哺乳动物体内。在闭环状双链DNA的拓扑学转变中,要暂时的将DNA的一个链或两个链切断,根据异构体化的方式而分为二个型。切断一个链而改变拓扑结构的称为Ⅰ型拓扑异构酶(topoisomeraseⅠ),通过切断二个链来进行的称为Ⅱ型拓扑异构酶(topoisomeraseⅡ)。
DNA拓扑异构酶I(topoisomeraseI,TopoI)是细胞DNA复制、转录、重组和修复的必需酶,在肿瘤细胞中,尤其是结肠癌、子宫颈癌、卵巢癌等的TopoI含量大大高于正常组织,选择性抑制TopoI的药物可以对肿瘤细胞具有较高的选择性。该酶的抑制剂现已被美国NCI列为重点研究的六大类抗肿瘤药物之一。DNA拓扑异构酶Ⅱ(topoisomeraseⅡ,TopoⅡ)是广泛存在于原核及真核生物的核酶,在DNA代谢过程中发挥极其重要的作用。因为topoⅡ在DNA复制、重组和基因表达等过程中发挥重要作用,所以通过影响DNA拓扑异构酶的功能,可以达到抗肿瘤作用。由于肿瘤细胞具有快速增殖的特性,其TopoⅡ的含量及活性远远高于正常体细胞,因此抑制TopoⅡ活性能起到阻止肿瘤细胞快速生长增殖,进而杀死肿瘤细胞的作用。喜树碱是经典的拓扑异构酶I抑制剂,目前已有三个喜树碱类化合物进入临床使用,分别是依立替康(Irinotecan)、拓扑替康(Topotecan)和贝洛替康(Belotecan)。然而,该类化合物活性必需的内酯结构在人体内过快的水解成无活性的羧酸盐,而且水溶性差、毒性大。为了克服喜树碱类化合物的缺陷,近年来先后获得苯并菲啶类化合物、茚并异喹啉类、吲哚并咔唑类等非喜树碱类拓扑异构酶I抑制剂。
发明人在前期研究中,对吴茱萸碱进行了结构修饰和改造,合成了一系列吴茱萸碱进类的衍生物,其中已申请专利部分如下:中国专利CN201010117531.0,发明名称为“取代吴茱萸碱类抗肿瘤和抗真菌化合物及其制备方法”,授权公布号为CN101787025B;中国专利CN201110188588.4,发明名称为“吴茱萸碱类化合物及其制备方法与应用”,授权公布号为CN102311434B。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足,提供一种10-羟基吴茱萸碱类化合物。
本发明的再一的目的是,提供如上所述10-羟基吴茱萸碱类化合物的制备方法。
本发明的另一的目的是,提供如上所述10-羟基吴茱萸碱类化合物的用途。
为实现上述目的,本发明采取的技术方案是:
一种10-羟基吴茱萸碱类化合物,其特征在于,所述化合物为式I所示化合物或式I所示化合物的消旋体、d-型或l-型异构体,及其药学上可接受的盐;
其中R表示:
具有1~20个碳原子的直链或支链烷基;三氟甲基、三氟甲氧基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基或丁氧基;氢、低级卤代烷基、低级烷基、低级羟基烷基、低级烷氧基、低级烷基氨基、低级卤代烷基氨基、低级环烷基氨基、低级链炔基氨基、酰胺基、低级环烷基酰胺基、低级酰胺基烷基;带Boc以及脱去Boc的氨基酸;
所述氨基酸可以是:甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸和脯氨酸、色氨酸、丝氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和苏氨酸、天冬氨酸和谷氨酸、赖氨酸、精氨酸和组氨酸等;
R2表示:
氢、卤素、低级卤代烷基、低级烷基、羟基、低级羟基烷基、低级烷氧基、氨基、低级烷基氨基、低级卤代烷基氨基、低级环烷基氨基、低级链炔基氨基、酰胺基、低级环烷基酰胺基、低级酰胺基烷基;
R3表示:
1至6个碳原子的直链或支链饱和脂肪烃基团;
所述的“低级”是指含1至6个碳原子的直链或支链饱和脂肪烃基团;所述的环烷基是指含3至7个碳的环。
酚羟基上的各种取代基;如含氮杂环、琥珀酸单酯、磷酸酯、氨基酸酯、氨基磺酸酯等。
上述水溶性10-羟基吴茱萸碱化合物可以为其消旋体,也可以为其d-型或l-型异构体。
经试验列举出其中抗肿瘤效果较好的化合物的核磁和质谱数据见表1。
一方面,上述药学上可接受的盐是有机酸盐或无机酸盐;其中无机酸包括:盐酸、硫酸、磷酸、二磷酸、氢溴酸或硝酸;有机酸包括:乙酸、马来酸、富马酸、酒石酸、琥珀酸、乳酸、对甲苯磺酸、水杨酸或草酸。
优选的,所述10-羟基吴茱萸碱类化合物可以是如下化合物中的任一种:
10-((3-(叔丁氧基-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-羰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(甲硫基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((2-氨基-3-羟基丙酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((吡咯烷-2-羰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((2-氨基-4-(甲硫基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-氧代-4-(((3R,4R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氨基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((3-羧丙基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-(2-吗啉代乙氧基)-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-氧代-4-(2-(哌啶-1-基)乙氧基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰氧基)吴茱萸碱;
10-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((2-氨基-3-甲基丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-(叔丁氧基)-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-(异丁酰氧基)吴茱萸碱;
10-((5-氨基-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氧代戊酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((3-(苄氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-氧代-4-(((3R,4R,6R)-3,4,5-三(苄氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧)丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-甲氧基-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-((4-溴苄基)氧基)-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-氧代-4-(丙硫基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-((2-氯苄基)硫基)-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-(环戊基)硫基-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-氧代-4-(噻吩-2-基硫基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-羰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((2-氨基-3-(苄氧基)丙酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-(3-羧基)吴茱萸碱;
10-((4-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-(1,4'-联哌啶-1'-基)-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((氨基磺酰基)氧基)吴茱萸碱;或
10-((磷酸基)氧基)吴茱萸碱。
相较于化合物EVO,本发明提供的化合物在蒸馏水中的溶解性均有效增强,有利于药物注射剂的制备和应用。
为实现上述第二个目的,本发明采取的技术方案是:
如上所述10-羟基吴茱萸碱类化合物的制备方法,所述式I结构的化合物制备方法包括如下步骤:
1)将化合物1与甲酸乙酯反应生成化合物2;
2)将化合物2与三氯氧磷反应生成化合物3;
3)化合物3与化合物3’反应生成化合物4;
4)化合物4进行脱甲基反应生成化合物5;
5)化合物5与不同取代的羧酸反应生成化合物6;
6)化合物6脱去保护基叔丁氧羰基和叔丁基得到目标化合物7;
当通式I中R为时,采用如下方法合成:
7)化合物5与丁二酸酐反应生成化合物8;
8)化合物8与化合物R2H反应生成目标化合物9;
当通式I中R为时,采用如下方法合成:
9)化合物5与反应生成化合物10;
10)化合物10脱甲基反应生成目标化合物11;
所述式I结构的化合物制备方法具体步骤为:
1)5-甲氧基色胺(化合物1)在甲酸乙酯中80℃回流6小时,得到取代的N-甲酰基色胺(化合物2);
2)化合物2与三氯氧磷0-5℃反应2小时,再在室温下反应4小时得到化合物3;
3)化合物3与化合物3’在二氯甲烷中室温搅拌反应12小时得到中间体4;
4)以二氯甲烷作溶剂,在-78℃氮气保护条件下,化合物4与BBr3反应脱去10位甲基,得到目标化合物10-羟基吴茱萸碱(化合物5);
5)不同取代的羧酸和EDCI、DMAP在二氯甲烷中搅拌活化30分钟,再加入化合物5,继续反应2小时,得到酚酯化合物6;
6)化合物6在三氟乙酸作用下反应4小时,脱去保护基叔丁氧羰基和叔丁基,得到目标化合物7;
当通式I中R为时,采用如下方法合成:
7)化合物5与EDCI、DMAP在二氯甲烷中搅拌活化30分钟,再加入化合物丁二酸酐反应4小时,得到化合物8;
8)化合物8与EDCI、DMAP在二氯甲烷中搅拌活化30分钟,再加入化合R2H,继续反应2小时,得到目标产物9;
当通式I中R为时,采用如下方法合成:
9)在碳酸钾碱性条件下,化合物5与在DMF中,60℃反应6小时,得到化合物10;
10)化合物10在THF:CH3OH:H2O(3:2:1)的溶液中反应2小时,脱掉甲基得到目标化合物11。
本发明化合物反应流程如下:
Scheme1:(a)Ethylformate,reflux,6h,98%;(b)POCl3,CH2Cl2,0℃,6h,yield74~79%;(c)CH2Cl2,rt,12h,yield52~70%;(d)BBr3,CH2Cl2,-78℃,2.5h,yield49~60%.
Scheme2:(a)ROOH,EDCI,DMAP,CH2Cl2,2h,yield78~95%;(b)TFA,CH2Cl2,0℃,4h,yield51~90%.
Scheme3:(a)EDCI,DMAP,CH2Cl2,2h,yield78~95%;(b)RXH,EDCI,DMAP,CH2Cl2,2h,yield76~91%.
Scheme4:(a)K2CO3,DMF,60℃,6h,68%;(b)LiOH,CH3OH,H2O,THF,2h,yield61%.
本发明的化合物可进一步制备药学上可接受的盐。如用含有10-酚羟基的化合物与等摩尔量的碱如NaOH反应制备钠盐;用含有10-酚羟基的化合物与磷酸反应制备磷酸盐等。
本发明的化合物可通过手性柱拆分的方法制备d-型或l-型异构体。以化合物L217为例进行说明。采用OJ-H手性柱(ChiralCelOJ-H,流速35mL/min)进行拆分。流动相为乙醇:CO2=30:70。两个异构体的保留时间分别为7.4min和11.3min。
为实现上述第三个目的,本发明采取的技术方案是:
如上任一所述的10-羟基吴茱萸碱类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。所述的肿瘤为肺癌、肠癌、乳腺癌、肝癌。
如上任一所述的10-羟基吴茱萸碱类化合物在制备拓扑异构酶抑制剂中的应用。
在本发明的另一个方面,本发明提出了一种药物组合物,包含治疗有效量的一种或多种上述所述的10-羟基吴茱萸碱类化合物以及药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。由此,可以有效预防或治疗肿瘤疾病(包括肺癌、肠癌、乳腺癌、肝癌)。
本发明优点在于:
对本发明的化合物进行了肿瘤细胞增殖抑制试验,试验方法采用常规的MTT法,细胞株选用A549(人肺癌细胞)、HCT116(人肠癌细胞)、MDA-MB-435(人乳腺癌细胞)。培养液为DMEM+15%NBS+双抗。实验结果表明,本发明的化合物具有良好的抗肿瘤活性,大部分化合物的抗肿瘤活性优于拓扑替康,部分化合物的抗肿瘤活性优于喜树碱,因此本发明化合物及其盐类可以用于制备抗肿瘤药物。
附图说明
附图1为本发明化合物对拓扑异构酶I的酶活性抑制试验结果。其中条带1为超螺旋质粒DNApBR322;条带2为DNA+Top1;条带3为DNA+Top1+CPT;(A)条带4-12,DNA+Top1+目标化合物(L213、L215、L216、L217、L226、L258、L259,L260,L253,L255,L257,L297);(B)条带4-18,DNA+Top1+目标化合物(L220,L231,L241,L247,L230,L278,L279,L283,L289,L291,L292,L293,L295,L297,L398,L409,L209)。
附图2为本发明化合物对拓扑异构酶II的酶活性抑制试验结果。其中条带1为超螺旋质粒DNApBR322;条带2为DNA+Top2;条带3为DNA+Top2+Eto;(A)条带4-18,DNA+Top2+目标化合物(L213,L215,L216,L217,L226,L258,L259,L260,L253,L255,L257,L397,L415,L220,L231);(B)条带4-18,DNA+Top2+目标化合物(L241,L247,L230,L278,L279,L283,L289,L291,L292,L293,L295,L297,L398,L409,L209)。
图3为本发明化合物L217及对照化合物10羟基吴茱萸碱的体内抗肿瘤活性实验结果。其中左图为本发明化合物L217,右图为10羟基吴茱萸碱。
具体实施方式
下面结合具体实施方式,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解,在阅读了本发明公开的内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
下述实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件或制造厂商所建议的条件进行。
下述实施例所涉及化合物对应通式I的化学结构、1H-NMR和MS数据详见表1。
表1:本发明部分优选化合物的1H-NMR和MS数据
实施例110-羟基吴茱萸碱的合成
1.N-甲酰基-5-甲氧基色胺制备
在50mL三颈瓶中,加入4g(21mmol)5-甲氧基色胺和13g甲酸乙酯,80℃回流6小时,反应完后蒸干溶剂,得到棕色油状物,室温放置2-3天,晶体慢慢出现,抽滤得到产物4.5g,收率98.3%。
2.3,4-二氢-5-甲氧基-β-咔啉制备
在100mL三颈瓶中,加入50mL二氯甲烷,在搅拌条件下,加入4.0g(18mmol)N-甲酰基-5-甲氧基色胺,冰水浴冷却至5℃左右,然后,缓慢加入5.0mL三氯氧磷,冰浴下反应2小时,再在室温下反应2小时,反应完后,减压蒸馏回收二氯甲烷和未反应的三氯氧磷,残留的固体用120mL10%的乙酸水溶液分三次萃取。合并萃取液用氨水调节pH至9-10,抽滤、水洗、减压烘干得到黄色粉末3,4-二氢-5-甲氧基-β-咔啉3.26g,收率88.8%。
3.10-甲氧基吴茱萸碱制备
在100mL圆底烧瓶中,加入2.67g(15mmol)N-甲基靛红酸酐和3.0g(15mmol)3,4-二氢-5-甲氧基-β-咔啉,加入50mL二氯甲烷,室温下反应5小时,反应完后,减压蒸干,得到黄色固体粉末10-甲氧基吴茱萸2.53g,收率50.6%。
4.10-羟基吴茱萸碱制备
在100mL三颈瓶中,加入2g10-甲氧基吴茱萸碱,加入40mL二氯甲烷使其溶解,在干冰丙酮-78℃以及氮气保护条件下,加入2mLBBr3进行反应,脱去10-甲氧基吴茱萸碱10位甲基,得到目标化合物10-羟基吴茱萸碱0.98g,收率51.04%。
实施例210-((3-(叔丁氧基-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)氧基)吴茱萸碱(L209)的合成
在100mL圆底烧瓶中,加入(3-(叔丁氧基-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸0.49g,EDC0.36g,DMAP0.23g,溶于40mLDCM中,室温搅拌30min,再加入10-羟基吴茱萸碱0.50g(1.57mmol),反应过夜,点板监测。反应完毕,直接蒸干溶剂拌样,柱层析纯化,洗脱剂为石油醚:乙酸乙酯=3:1,得到10-((3-(叔丁氧基-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)氧基)吴茱萸碱0.80g,收率为90.74%。
实施例310-((1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-羰基)氧基)吴茱萸碱(L215)的合成
参照实施例2,N-叔丁氧基羰基脯氨酸与10-羟基吴茱萸碱反应,得到10-((1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-羰基)氧基)吴茱萸碱0.74g,总收率为92.0%。
实施例410-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(甲硫基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱(L216)的合成
参照实施例2,2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(甲硫基)丁酸与10-羟基吴茱萸碱反应,得到10-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(甲硫基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱0.61g,收率为71.4%。
实施例510-((2-氨基-3-羟基丙酰基)氧基)吴茱萸碱(L213)的合成
在100mL圆底烧瓶中,加入10-((3-(叔丁氧基-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)氧基)吴茱萸碱0.5g,加入约40mlDCM使其溶解,加入约5mlTFA,反应过夜,加入饱和NaHCO3溶液中和过量的TFA,用DCM萃取3次,合并有机相,蒸干溶剂拌样,柱层析纯化,洗脱剂为二氯甲烷:甲醇=100:5,得到10-((2-氨基-3-羟基丙酰基)氧基)吴茱萸碱0.23g,总收率为62.3%。
实施例610-((吡咯烷-2-羰基)氧基)吴茱萸碱(L217)的合成
参照实施例5,加入10-((1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-羰基)氧基)吴茱萸碱与TFA进行反应,得到10-((吡咯烷-2-羰基)氧基)吴茱萸碱0.34g,收率为85.1%。
实施例710-((2-氨基-4-(甲硫基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱(L226)的合成
参照实施例5,加入10-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(甲硫基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱与TFA进行反应,得到10-((2-氨基-4-(甲硫基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱0.30g,总收率为74.2%。
实施例810-((4-氧代-4–(((3R,4R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氨基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱(L220)的合成
在100mL圆底烧瓶中,加入10-((3-羧丙基)氧基)吴茱萸碱0.5g,EDC0.27g,DMAP0.18g,溶于40mLDCM中,室温搅拌30min,再加入4-氧代-4–(((3R,4R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)胺反应2小时,得到目标产物10-((4-氧代-4–(((3R,4R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氨基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱0.79g,收率为89.1%。
实施例910-((3-羧丙基)氧基)吴茱萸碱(L231)的合成
参照实施例5,加入10-((4-(叔丁氧基)-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱与TFA进行反应,得到10-((3-羧丙基)氧基)吴茱萸碱0.33g,总收率为74.1%。
实施例1010-((4-(2-吗啉代乙氧基)-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱(L241)的合成
参照实施例8,加入10-((3-羧丙基)氧基)吴茱萸碱与2-吗啉代乙醇反应得到10-((4-(2-吗啉代乙氧基)-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱0.32g,收率为50.1%。
实施例1110-((4-氧代-4-(2-(哌啶-1-基)乙氧基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱(L247)的合成
参照实施例8,加入10-((3-羧丙基)氧基)吴茱萸碱与2-哌啶基乙醇反应得到10-((4-氧代-4-(2-(哌啶-1-基)乙氧基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱0.33g,总收率为52.1%。
实施例1210-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰氧基)吴茱萸碱(L258)的合成
参照实施例2,2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酸与10-羟基吴茱萸碱反应,得到10-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰氧基)吴茱萸碱0.64g,收率为86.3%。
实施例1310-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)氧基)吴茱萸碱(L259)的合成
参照实施例2,2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酸与10-羟基吴茱萸碱反应,得到10-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)氧基)吴茱萸碱0.75g,总收率为92.1%。
实施例1410-((2-氨基-3-甲基丁酰基)氧基)吴茱萸碱(L260)的合成
参照实施例5,加入10-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)氧基)吴茱萸碱与TFA进行反应,得到10-((2-氨基-3-甲基丁酰基)氧基)吴茱萸碱0.29g,总收率为71.1%。
实施例1510-((4-(叔丁氧基)-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱(L230)的合成
参照实施例2,4-(叔丁氧基)-4-氧代丁酸与10-羟基吴茱萸碱反应,得到10-((4-(叔丁氧基)-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱0.72g,收率为96.3%。
实施例1610-(异丁酰氧基)吴茱萸碱(L238)的合成
参照实施例2,异丁酸与10-羟基吴茱萸碱反应,得到10-(异丁酰氧基)吴茱萸碱0.60g,总收率为98.3%。
实施例1710-((5-氨基-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氧代戊酰基)氧基)吴茱萸碱(L253)的合成
参照实施例2,5-氨基-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氧代戊酸与10-羟基吴茱萸碱反应,得到10-((5-氨基-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氧代戊酰基)氧基)吴茱萸碱0.78g,总收率为91.1%。
实施例1810-((3-(苄氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)氧基)吴茱萸碱(L255)的合成
参照实施例2,3-(苄氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸与10-羟基吴茱萸碱反应,得到10-((3-(苄氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)氧基)吴茱萸碱0.84g,收率为90.0%。
实施例1910-((4-氧代-4-(((3R,4R,6R)-3,4,5-三(苄氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧)丁酰基)氧基)吴茱萸碱(L278)的合成
参照实施例8,加入10-((3-羧丙基)氧基)吴茱萸碱与(3R,4R,6R)-3,4,5-三(苄氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-2-醇反应,得到10-((4-氧代-4-(((3R,4R,6R)-3,4,5-三(苄氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧)丁酰基)氧基)吴茱萸碱0.97g,收率为87.1%。
实施例2010-((4-甲氧基-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱(L279)的合成
参照实施例8,加入10-((3-羧丙基)氧基)吴茱萸碱与甲醇反应得到10-((4-甲氧基-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱0.43g,总收率为83.9%。
实施例2110-((4-((4-溴苄基)氧基)-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱(L283)的合成
参照实施例8,加入10-((3-羧丙基)氧基)吴茱萸碱与4-溴苄醇反应得到10-((4-((4-溴苄基)氧基)-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱0.29g,总收率为40.9%。
实施例2210-((4-氧代-4-(丙硫基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱(L289)的合成
参照实施例8,加入10-((3-羧丙基)氧基)吴茱萸碱与乙基硫醇反应得到10-((4-氧代-4-(丙硫基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱0.47g,收率为81.9%。
实施例2310-((4-((2-氯苄基)硫基)-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱(L291)的合成
参照实施例8,加入10-((3-羧丙基)氧基)吴茱萸碱与2-氯苄基硫醇反应得到10-((4-((2-氯苄基)硫基)-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱(L291)0.57g,总收率为85.8%。
实施例2410-((4-(环戊基)硫基-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱(L292)的合成
参照实施例8,加入10-((3-羧丙基)氧基)吴茱萸碱与环戊基硫醇反应得到10-((4-(环戊基)硫基-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱0.36g,总收率为59.6%。
实施例2510-((4-氧代-4-(噻吩-2-基硫基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱(L293)的合成
参照实施例8,加入10-((3-羧丙基)氧基)吴茱萸碱与4-噻吩-2-基硫醇反应得到10-((4-氧代-4-(噻吩-2-基硫基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱0.24g,总收率为39.8%。
实施例2610-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-羰基)氧基)吴茱萸碱(L295)的合成
参照实施例2,1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-羧酸与10-羟基吴茱萸碱反应,得到10-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-羰基)氧基)吴茱萸碱0.73g,总收率为88.3%。
实施例2710-((2-氨基-3-(苄氧基)丙酰基)氧基)吴茱萸碱(L257)的合成
参照实施例5,加入10-((3-(苄氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)氧基)吴茱萸碱与TFA进行反应,得到10-((2-氨基-3-(苄氧基)丙酰基)氧基)吴茱萸碱0.30g,收率为73.2%。
实施例2810-(3-羧基)吴茱萸碱(L398)的合成
在100mL圆底烧瓶中,加入碳酸钾提供碱性条件,然后加入10-羟基吴茱萸碱0.5g和4-溴丁酸甲酯,加入少量DMF使其溶解,在60℃加热条件下反应6小时,得到中间体,中间体再在THF:CH3OH:H2O(3:2:1)溶液中反应2小时,脱掉甲基得到目标化合物10-(3-羧基)吴茱萸碱0.44g,总收率为69.2%。
实施例2910-((4-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱(L313)的合成
参照实施例2,4-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)丁酸与10-羟基吴茱萸碱反应,得到10-((4-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱0.87g,总收率为92.1%。
实施例3010-((4-(1,4'-联哌啶-1'-基)-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱(L409)的合成
参照实施例8,加入10-((3-羧丙基)氧基)吴茱萸碱与1,4'-联哌啶-1'胺反应得到10-((4-(1,4'-联哌啶-1'-基)-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱0.50g,总收率为73.7%。
实施例3110-((氨基磺酰基)氧基)吴茱萸碱(L410)的合成
在100mL圆底烧瓶中,加入10-羟基吴茱萸碱0.16g和氨基磺酰氯1.2ml,加入少量DMF使其溶解,室温下反应2h,水洗,乙酸乙酯萃取三次,合并有机层,蒸干拌样,柱层析,展开剂二氯甲烷:甲醇=100:1得到目标化合物10-((氨基磺酰基)氧基)吴茱萸碱0.10g,总收率为50.0%。
实施例3210-((磷酸基)氧基)吴茱萸碱(L411)的合成
在100mL圆底烧瓶中,加入10-羟基吴茱萸碱0.16g和氨基磺酰氯1.2ml,加入少量DMF使其溶解,室温下反应2h,冰浴条件下加入210μl的过氧化氢叔丁醇,反应1h后向其中加入10%的焦亚硫酸钠水溶液,有黄色固体析出,抽滤得到黄色固体。用石油醚:乙酸乙酯=2:1柱层析,得到黄色固体。然后将该黄色固体溶于二氯甲烷中,加入钯/碳,通入氢气,反应过夜,硅藻土过滤,得到目标化合物10-((磷酸基)氧基)吴茱萸碱0.08g,总收率为60.1%。
实施例33化合物L217钠盐的合成
取10-((吡咯烷-2-羰基)氧基)吴茱萸碱(化合物L217)0.12g(0.34mmol)加入到10mL水中,室温下加入等摩尔当量的NaOH,在50℃下加热20min。溶液澄清后,进行冷冻干燥。得到化合物L217的钠盐为白色固体粉末0.12g。其他化合物的钠盐制备参照实施例33的方法。
实施例34化合物L217的d-和l-型异构体的制备
取10-((吡咯烷-2-羰基)氧基)吴茱萸碱(化合物L217)0.10g进行手性柱拆分。选取手性柱OJ-H(购自大赛璐公司),流动相为乙醇:CO2=30:70,流速为35mL/min。两个异构体的保留时间分别为7.4min和11.3min。
实施例35本发明化合物对拓扑异构酶I的酶活性抑制试验
选取部分化合物进行拓扑异构酶I的酶活性抑制试验,试验方法采用凝胶电泳法(如JMedChem.2012,55:7593-7613)。
试验材料为:小牛胸腺DNA拓扑异构酶I、负超螺旋DNA质粒pBR322:均购自Takara公司。
仪器:凝胶电泳采用BioRad公司PowerPac电泳仪和Sub-CellModel96电泳槽,凝胶扫描定量采用BioRad公司的GelDocEZ全自动凝胶成像系统。
其它材料:
琼脂糖:GENETECH进口分装
DMSO:Merck
10×buffer缓冲液:Takara
0.1%BSA:Takara
EtBr:GENETECH
样品配置:待测样品用DMSO(Merck)溶解,按所需稀释成不同浓度待测溶液。
试验方法:
a)用1×TAE溶液配制成浓度为0.8%的琼脂糖凝胶。
b)依次向1.5mL样品管中加入10μL水,2μLbuffer,2μL0.1%BSA,Top10.5U,DNA0.5μL,不同的药物0.2μL,定容到20μL.
c)将样品管放入37℃水浴中,孵化15分钟。
d)加入3.5μL6×loadingbuffer至样品管中。
e)110V电泳40~50min,用0.5μg/mLEtBr染色15min,凝胶成像系统观察电泳结果。
选取的化合物包括:化合物(L213、L215、L216、L217、L226、L258、L259、L260、L253、L255、L257、L297、L220、L231、L241、L247、L230、L278、L279、L283、L289、L291、L292、L293、L295、L297、L398、L409、L209)。测试浓度为100μM。结果如图1所示,上述测试的化合物中(L213、L215、L216、L217,L226、L258、L259、L260、L253、L255、L257、L297、L278、L279、L283、L291、L292、L293、L295)在100Μmxia能够明显抑制拓扑异构酶I对DNA的解螺旋作用。因此,水溶性类吴茱萸碱衍生物可以作为新型的拓扑异构酶I抑制剂进行深入的研究。
实施例36本发明化合物对拓扑异构酶Ⅱ的酶活性抑制试验
选取部分化合物进行拓扑异构酶Ⅱ的酶活性抑制试验,试验方法采用凝胶电泳法(如JMedChem.2012,55:7593-7613)。
试验材料为:小牛胸腺DNA拓扑异构酶Ⅱ、负超螺旋DNA质粒pBR322:均购自Takara公司。
仪器:凝胶电泳采用BioRad公司PowerPac电泳仪和Sub-CellModel96电泳槽,凝胶扫描定量采用BioRad公司的GelDocEZ全自动凝胶成像系统。
其它材料:
琼脂糖:GENETECH进口分装
DMSO:Merck
10×bufferA缓冲液:Takara
10×bufferB缓冲液:Takara
EtBr:GENETECH
样品配置:待测样品用DMSO(Merck)溶解,按所需稀释成不同浓度待测溶液。
试验方法:
a)用1×TAE溶液配制成浓度为0.8%的琼脂糖凝胶。
b)依次向1.5mL样品管中加入10μL水,2μLbufferA,1μLbufferB,TopⅡ0.5U,DNA0.5μL,不同的药物0.2μL,定容到20μL。
c)将样品管放入37℃水浴中,孵化30分钟。
d)加入3.5μL6×loadingbuffer至样品管中。
e)110V电泳40~50min,用0.5μg/mLEtBr染色15min,凝胶成像系统观察电泳结果。
选取的化合物包括:化合物(L213、L215、L216、L217、L226、L258、L259、L260、L253、L255、L257、L397、L415、L220、L231、L241、L247、L230、L278、L279、L283、L289、L291、L292、L293、L295、L297、L398、L409、L209)。测试浓度为100μM。如图2所示,所测试的化合物中(L213、L215、L216、L217、L226、L258、L259、L260、L253、L255、L257、L397、L415、L220、L231、L230、L278、L279、L283、L289、L291、L292、L293、L295、L297、L398、L209)在100μM浓度下都能够明显抑制拓扑异构酶Ⅱ对DNA的解螺旋作用。因此,本发明的10羟基-吴茱萸碱类化合物可以作为新型的拓扑异构酶Ⅱ抑制剂进行深入的研究。
实施例37本发明化合物的抗肿瘤活性实验
1.实验细胞株
A549(人肺癌细胞)、HCT116(人肠癌细胞)、MDA-MB-435(人乳腺癌细胞)、SK-Hep-1(人肝癌细胞),均购自上海市医药工业研究院。
培养液为DMEM+15%NBS+双抗。
2.仪器
WellscanMK-2全自动酶标仪(生产厂商LabsystemsDragon)。
3.实验方法
样品液配制:用DMSO(Merck)溶解后,加入PBS(-)配成100μg/mL的溶液或均匀的混悬液,然后用DMSO的PBS(-)稀释,最终浓度分别为10μg/mL、1μg/mL、0.1μg/mL、0.01μg/mL、0.001μg/mL、0.0001μg/mL。
将上市的抗肿瘤药物喜树碱(CPT)和多柔比星(DOX)以同样的条件配成对照品溶液。
96孔板每孔加入浓度为3×104个/mL的细胞悬液100μL,即3000个细胞/孔,置37℃、5%CO2培养箱内。24小时后,分别加入样品液和对照品液,10μL/孔,37℃作用72小时。每孔加入5mg/mL的MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑翁溴化物)溶液20μL,作用4小时后加入溶解液DMSO,100μL/孔,置培养箱内,次日用MK-2全自动酶标仪测570nmOD值,计算半数抑制浓度IC50。
IC%=(空白对照孔OD值-给药孔OD值)/空白对照孔OD值×100%。根据各个浓度的IC%值,进行线性回归,算出抑制细胞生长50%的药物浓度,即IC50。
部分优选化合物的抗肿瘤活性详见表2,其中,样品是指相应实施例中制备的吴茱萸碱类化合物,如化合物1表示在实施例1中所得到的吴茱萸碱类化合物,同理类推。
阳性药选取喜树碱(CPT)和多柔比星(DOX)和10-羟基吴茱萸碱(10-Evo)作为对照。在我们课题组申请的专利CN201110188588.4中,编号为51的化合物即10-羟基吴茱萸碱表现出很好的体外抗肿瘤活性,因此我们将本发明的10-羟基吴茱萸碱类化合物与10-羟基吴茱萸碱(10-EVO)进行了比较。
体外抗肿瘤实验结果显示,大部分化合物表现出广谱的抗肿瘤活性特点。部分衍生物对测试的三株肿瘤株的IC50小于0.001μg/mL,要优于对照药喜树碱、多柔比星,并优于我们之前所报道的活性最好的化合物(10-羟基吴茱萸碱)。
表2:10-羟基吴茱萸碱酯类水溶性衍生物体外抗肿瘤活性(MTT法,IC50,μM)
NT:NotTest
实施例38本发明化合物L217的体内抗肿瘤活性研究
根据体外抗肿瘤活性结果,采用肠癌HCT116裸鼠移植瘤模型研究化合物L217的体内抗肿瘤活性。拓扑替康(TPT)作为阳性对照药,给药剂量为0.5mg/kg,化合物L217给药剂量为16mg/kg,腹腔注射,给药16天后,该化合物表现出显著的抑制肿瘤生长效果,抑瘤率为55%,与10-羟基吴茱萸碱相比(图3),有较为显著的提高。
根据体外抗肿瘤活性结果,采用肠癌HCT116裸鼠移植瘤模型研究化合物10-羟基吴茱萸碱的体内抗肿瘤活性。拓扑替康(TPT)作为阳性对照药,给药剂量为0.5mg/kg,10-羟基吴茱萸碱给药剂量为2mg/kg,腹腔注射,给药16天后,该化合物表现出显著的抑制肿瘤生长效果,抑瘤率为39%。
以上实验结果表明,本发明的化合物具有良好的抗肿瘤活性,部分化合物的抗肿瘤活性优于喜树碱和10-羟基吴茱萸碱,因此本发明化合物及其盐类可以用于制备抗肿瘤药物。
实施例39本发明化合物的溶解性实验
按照常规的溶解度测试方法测定本发明化合物及对照化合物(吴茱萸碱)的溶解度,确定其溶解度等级。溶解度具体测定方法如下:
1)准确称量干燥的蒸发皿的质量并记录;
2)在恒温水浴加热下,配制待试化合物的饱和溶液,溶剂为蒸馏水;
3)取一定量的待试化合物饱和溶液倾入蒸发皿中,称量并记录(溶液质量=总质量-蒸发皿的质量);
4)加热蒸发皿中的溶液至干,放入干燥器内冷却后称量并记录(溶质质量=此时的总质量-蒸发皿的质量,溶剂质量=溶液质量-溶质质量);
5)用溶解度公式求出该化合物的溶解度,溶解度计算公式为:S=m(溶质)/m(溶剂);
6)重复上述操作,测定两次,求平均值。
溶解度等级包括以下各级别:
经测试,本发明化合物及对照化合物(10-羟基吴茱萸碱)的溶解度等级如表4所示。
表4本发明的化合物的溶解等级
由上表可见,本发明化合物相比于对照化合物吴茱萸碱(EVO),其在蒸馏水中的溶解性均增强,有利于药物注射剂的制备和应用。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员,在不脱离本发明方法的前提下,还可以做出若干改进和补充,这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种10-羟基吴茱萸碱类化合物,其特征在于,所述10-羟基吴茱萸碱类化合物为式I所示化合物或式I所示化合物的消旋体、d-型或l-型异构体,及其药学上可接受的盐;
其中R表示:
三氟甲基、三氟甲氧基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基或丁氧基;低级羟基烷基、低级烷基氨基、低级卤代烷基氨基、低级环烷基氨基、低级链炔基氨基、酰胺基、低级环烷基酰胺基、低级酰胺基烷基;带Boc以及脱去Boc的氨基酸;
R2表示:
氢、卤素、低级卤代烷基、低级烷基、羟基、低级羟基烷基、低级烷氧基、氨基、低级烷基氨基、低级卤代烷基氨基、低级环烷基氨基、低级链炔基氨基、酰胺基、低级环烷基酰胺基、低级酰胺基烷基;
R3表示:
1至6个碳原子的直链或支链饱和脂肪烃基团;
所述的“低级”是指含1至6个碳原子的直链或支链饱和脂肪烃基团;所述的环烷基是指含3至7个碳的环。
2.根据权利要求1所述的10-羟基吴茱萸碱类化合物,其特征在于,所述的药学上可接受的盐是有机酸盐或无机酸盐;所述的无机酸包括:盐酸、硫酸、磷酸、二磷酸、氢溴酸或硝酸;所述的有机酸包括:乙酸、马来酸、富马酸、酒石酸、琥珀酸、乳酸、对甲苯磺酸、水杨酸或草酸。
3.根据权利要求1所述的10-羟基吴茱萸碱类化合物,其特征在于,所述的取代基R表示:
R2表示:
氢、卤素、低级卤代烷基、低级烷基、羟基、低级羟基烷基、低级烷氧基、氨基、低级烷基氨基、低级卤代烷基氨基、低级环烷基氨基、低级链炔基氨基、酰胺基、低级环烷基酰胺基、低级酰胺基烷基;
R3表示:
1至6个碳原子的直链或支链饱和脂肪烃基团;
所述的“低级”是指含1至6个碳原子的直链或支链饱和脂肪烃基团;所述的环烷基是指含3至7个碳的环。
4.根据权利要求1所述的10-羟基吴茱萸碱类化合物,其特征在于,所述的10-羟基吴茱萸碱类化合物是:
10-((3-(叔丁氧基-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-羰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(甲硫基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((2-氨基-3-羟基丙酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((吡咯烷-2-羰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((2-氨基-4-(甲硫基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-氧代-4-(((3R,4R,6R)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氨基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((3-羧丙基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-(2-吗啉代乙氧基)-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-氧代-4-(2-(哌啶-1-基)乙氧基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰氧基)吴茱萸碱;
10-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((2-氨基-3-甲基丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-(叔丁氧基)-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-(异丁酰氧基)吴茱萸碱;
10-((5-氨基-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氧代戊酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((3-(苄氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-氧代-4-(((3R,4R,6R)-3,4,5-三(苄氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧)丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-甲氧基-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-((4-溴苄基)氧基)-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-氧代-4-(丙硫基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-((2-氯苄基)硫基)-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-(环戊基)硫基-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-氧代-4-(噻吩-2-基硫基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-羰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((2-氨基-3-(苄氧基)丙酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-(3-羧基)吴茱萸碱;
10-((4-(4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((4-(1,4'-联哌啶-1'-基)-4-氧代丁酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((氨基磺酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-((磷酸基)氧基)吴茱萸碱;
10-((甲基磺酰基)氧基)吴茱萸碱;
10-甲氧基-N-甲基磺酰基吴茱萸碱;或
10-羟基-N-甲基磺酰基吴茱萸碱。
5.如权利要求1所述的10-羟基吴茱萸碱类化合物的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)将化合物1与甲酸乙酯反应生成化合物2;
2)将化合物2与三氯氧磷反应生成化合物3;
3)化合物3与化合物3’反应生成化合物4;
4)化合物4进行脱甲基反应生成化合物5;
5)化合物5与不同取代的羧酸反应生成化合物6;
6)化合物6脱去保护基叔丁氧羰基和叔丁基得到目标化合物7;
当通式I中R为时,采用如下方法合成:
7)化合物5与丁二酸酐反应生成化合物8;
8)化合物8与化合物R2H反应生成目标化合物9;
当通式I中R为时,采用如下方法合成:
9)化合物5与反应生成化合物10;
10)化合物10脱甲基反应生成目标化合物11;
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述式I结构的化合物制备方法为:
1)5-甲氧基色胺(化合物1)在甲酸乙酯中80℃回流6小时,得到取代的N-甲酰基色胺(化合物2);
2)化合物2与三氯氧磷0-5℃反应2小时,再在室温下反应4小时得到化合物3;
3)化合物3与化合物3’在二氯甲烷中室温搅拌反应12小时得到中间体4;
4)以二氯甲烷作溶剂,在-78℃氮气保护条件下,化合物4与BBr3反应脱去10位甲基,得到目标化合物10-羟基吴茱萸碱(化合物5);
5)不同取代的羧酸和EDCI、DMAP在二氯甲烷中搅拌活化30分钟,再加入化合物5,继续反应2小时,得到酚酯化合物6;
6)化合物6在三氟乙酸作用下反应4小时,脱去保护基叔丁氧羰基和叔丁基,得到目标化合物7;
当通式I中R为时,采用如下方法合成:
7)化合物5与EDCI、DMAP在二氯甲烷中搅拌活化30分钟,再加入化合物丁二酸酐反应4小时,得到化合物8;
8)化合物8与EDCI、DMAP在二氯甲烷中搅拌活化30分钟,再加入化合R2H,继续反应2小时,得到目标产物9;
当通式I中R为时,采用如下方法合成:
9)在碳酸钾碱性条件下,化合物5与在DMF中,60℃反应6小时,得到化合物10;
10)化合物10在THF:CH3OH:H2O(3:2:1)的溶液中反应2小时,脱掉甲基得到目标化合物11。
7.权利要求1-4任一所述的10-羟基吴茱萸碱类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述的肿瘤为肺癌、肠癌、乳腺癌、肝癌。
9.权利要求1-4任一所述的10-羟基吴茱萸碱类化合物在制备拓扑异构酶抑制剂中的应用。
10.一种药物组合物,其特征在于,包含治疗有效量的一种或多种权利要求1-4任一所述的化合物以及药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
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