CN105418609A

CN105418609A - 4-(1,2,3-三氮唑取代苯胺基)-吡啶骈嘧啶酮衍生物及其制备方法与应用

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Publication number: CN105418609A
Application number: CN201511030119.4A
Authority: CN
Inventors: 刘新泳; 张凌子; 展鹏; 孙林; 高萍
Original assignee: Shandong University
Current assignee: Shandong University
Priority date: 2015-12-31
Filing date: 2015-12-31
Publication date: 2016-03-23
Anticipated expiration: 2035-12-31
Also published as: CN105418609B

Abstract

本发明提供了一种4-(1,2,3-三氮唑取代苯胺基)-吡啶骈嘧啶酮衍生物，具有如下通式Ⅰ所示的结构。其中，1,2,3-三氮唑环为胺基苯邻位取代、间位取代；R为4-氟苄基、4-甲基苄基、苯乙基、苯丙基、1-萘基、苯胺酰基甲基、4-氟-苯胺酰基甲基、4-氟-苯酰基甲基、4-三氟甲基-苯胺酰基甲基。本发明还涉及该类衍生物的制备方法及其作为HIV抑制剂在制备抗艾滋病药物中的应用。

Description

4-(1,2,3-三氮唑取代苯胺基)-吡啶骈嘧啶酮衍生物及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及一种衍生物及其制备方法，具体涉及4-(1,2,3-三氮唑取代苯胺基)-吡啶骈嘧啶酮衍生物的制备及其在抗HIV药物领域内的应用，属于有机合成与医药应用技术领域。

背景技术

艾滋病，又名获得性免疫缺陷综合征(AcquiredImmunodeficiencySyndrome，AIDS)，是严重威胁人类生命健康安全的全球重大传染性疾病，其主要病原体是I型人类免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiencyvirustypeI，HIV-1)。由于HIV遗传物质的整合特质以及高度变异性，自上世纪八十年代首次发现其在人类社会流行以来，HIV感染的治疗一直是全球医药化学领域的一大难题。九十年代起出现的多种抗HIV药物联用的高效抗转录病毒联合疗法(highlyactiveantiretroviraltherapy，HAART)的应用使HIV-1感染引起的发病率和死亡率大大降低，然而，随着HAART的普及，剂量复杂性、病人依从性以及药物相互作用等问题日益突出。同时，大量耐药突变株依旧不断涌现，耐药性向更加复杂的方向发展，使得具有新作用机制的抗逆转录药物的研制迫在眉睫。

整合酶(integrase,IN)由病毒的3’端pol基因编码、共含有288个氨基酸的分子量为32kD的蛋白质，它作用于HIV-1生命周期中病毒基因组整合入宿主DNA的过程，是近几年抗艾滋病药物研究的新靶点。其功能结构主要分为N端区、催化核心区和C端区。该酶主要催化两个反应：病毒DNA的3’端加工反应(3’-P)及链转移反应(ST)。N端区由1～50位氨基酸组成，含有保守的HHCC锌指结构域，具有病毒DNA识别功能，此外还有促进IN四聚化和增强催化活性的功能。核心区由52～210位氨基酸组成，含有3个非常保守的氨基酸残基(Asp64\Asp116\Glu152，即DDE序列)，是内核酶和核酸转移酶的位点。该部位与辅助因子一个或两个二价阳离子(Mg²⁺或Mn²⁺)结合，这是IN发挥催化功能所必需。目前应用于临床的整合酶抑制剂Raltegravir(RAL)、Elvitegravir(EVG)、Dolutegravir(DTG)均出现了耐药性问题。为发现新一代HIV整合酶抑制剂，本发明根据IN催化位点的三维结构特征，通过合理药物设计、化学合成、生物活性评价发现了全新结构的4-(1,2,3-三氮唑取代苯基胺基)-吡啶骈嘧啶酮类HIV整合酶抑制剂，有望缓解现有抗艾滋病药物的耐药性问题。

发明内容

本发明提供了4-(1,2,3-三氮唑取代苯胺基)-吡啶骈嘧啶酮衍生物及其制备方法，本发明还提供了上述化合物的部分活性筛选结果及其用途。

本发明的技术方案如下：

一、4-(1,2,3-三氮唑取代苯胺基)-吡啶骈嘧啶酮衍生物

本发明的4-(1,2,3-三氮唑取代苯基胺基)-吡啶骈嘧啶酮衍生物，具有如下通式Ⅰ所示的结构：

其中，1,2,3-三氮唑环为胺基苯邻位取代或间位取代；R为4-氟苄基、4-甲基苄基、苯乙基、苯丙基、1-萘基、苯胺酰基甲基、4-氟-苯胺酰基甲基、4-氟-苯酰基甲基或4-三氟甲基-苯胺酰基甲基。

根据本发明优选的，4-(1,2,3-三氮唑取代苯胺基)-吡啶骈嘧啶酮衍生物，是下列之一：

4-(2-(1-(4-氟苄基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)-1-二氢吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(7a1)、

1-羟基-4-(2-(1-(4-甲基苄基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(7a2)、

1-羟基-4-(3-(1-苯乙基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(7b1)、

4-(3-(1-(4-氟苄基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)-1-羟基吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(7b2)、

1-羟基-4-(3-(1-(3-苯基丙基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(7b3)、

1-羟基-4-(3-(1-(萘-1-基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(7b4)、

2-(4-(3-(1-羟基-2-氧-1,2-二氢吡啶骈[2,3-d]嘧啶-4-基胺基)苯基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-N-苯基乙酰胺(7b5)、

N-(4-氟苯基)-2-(4-(3-(1-羟基-2-氧-1,2-二氢吡啶骈[2,3-d]嘧啶-4-基胺基)苯基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰胺(7b6)、

4-(3-(1-(2-(4-氟苯基)-2-氧乙基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)-1-羟基吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(7b7)、

2-(4-(3-(1-羟基-2-氧-1,2-二氢吡啶骈[2,3-d]嘧啶-4-基胺基)苯基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-N-(4-(三氟甲基)苯基)乙酰胺(7b8)。

二、4-(1,2,3-三氮唑取代苯胺基)-吡啶骈嘧啶酮衍生物的制备方法

以2-氟烟酸甲酯(1)为原料，与O-苄基羟胺经芳香性亲核取代反应，环合得到中间体1-(苄氧基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(3)，再依次经氯代、与炔取代苯胺的亲核取代反应、与叠氮取代基的环加成反应、脱苄基反应得到目标化合物。

合成路线如下：

反应试剂与反应条件：(i)二异丙基乙胺，O-苄基羟胺，140℃，微波，120min；(ii)三氯乙酰异氰酸酯，二氯乙烷，三乙胺，甲醇钠，室温；(iii)二异丙基乙胺，三氯氧磷，100℃；(iv)N,N-二甲基甲酰胺，相应炔基取代的苯胺，室温；(v)相应的叠氮取代基，维生素C钠盐，五水合硫酸铜，四氢呋喃，水，室温；(vi)三氟乙酸，60℃，过夜。

其中，1,2,3-三氮唑环为氨基苯邻位取代、间位取代、对位取代；R如上述通式Ⅰ中所述。

所述的相应炔基取代的苯胺选自：邻炔基苯胺、间炔基苯胺；

所述的相应的叠氮取代基选自：4-氟苄基叠氮、4-甲基苄基叠氮、苯乙基叠氮、苯丙基叠氮、1-萘基叠氮、苯胺酰基甲基叠氮、4-氟-苯胺酰基甲基叠氮、4-氟-苯酰基甲基叠氮、4-三氟甲基-苯胺酰基甲基叠氮。

本发明4-(1,2,3-三氮唑取代苯胺基)-吡啶骈嘧啶酮衍生物的制备方法，具体步骤如下：

(1)将2-氟烟酸甲酯(1)，O-苄基羟胺和二异丙基乙胺加入反应瓶，140℃条件下微波反应120min，反应完毕，减压条件下蒸除过量二异丙基乙胺，所得粗品经硅胶柱层析分离纯化得到中间体2-(苄基氧基胺基)烟酸酯(2)；

(2)向2-(苄基氧基胺基)烟酸酯(2)的二氯乙烷溶液中加入三氯乙酰异氰酸酯的二氯乙烷溶液，室温搅拌反应50min，加入三乙胺，30min后，减压蒸除多余溶剂，向反应瓶中加入甲醇钠的甲醇溶液，质量溶度为25％，室温搅拌5min，加入甲醇后继续反应3小时；反应完毕后将溶剂减压蒸除，用1N盐酸溶液将反应混合物pH调至3，得到的悬浊液用乙酸乙酯萃取，合并有机相；将合并的有机相用饱和食盐水洗涤后无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析分离纯化后，重结晶得中间体1-(苄氧基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(3)；

(3)向1-(苄氧基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(3)的二异丙基乙胺溶液中滴加三氯氧磷，完毕后反应温度升至100℃，45min后将多余的溶剂减压蒸除得到黑色油状物(中间体4)；将中间体4的粗品立即溶于N,N-二甲基甲酰胺，随后向上述混合溶液中加入相应炔基取代的苯胺的N,N-二甲基甲酰胺溶液，室温搅拌反应50min～2h；反应完毕，将反应液倾入水中，乙酸乙酯萃取；不溶物过滤并收集，合并的有机相用无水硫酸镁或无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后与上述不溶物滤饼合并；所得粗品用适当溶剂重结晶或经硅胶柱层析分离纯化分别得到中间体5a,b；所述的相应炔基取代的苯胺选自：邻炔基苯胺、间炔基苯胺。

(4)将相应的叠氮取代基、维生素C钠盐和五水合硫酸铜依次加入相应炔基取代片段(5a,b)的四氢呋喃/水混合溶液；所得反应混合液室温搅拌反应，薄层层析监测反应进度；反应完毕后用乙酸乙酯萃取，不溶物分离用N,N-二甲基甲酰胺溶解后与萃取得到的有机相合并，无水硫酸镁或无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，所得粗品经快速柱分离得到相应的中间体6a,b；所述叠氮取代基选自：4-氟苄基叠氮、4-甲基苄基叠氮、苯乙基叠氮、苯丙基叠氮、1-萘基叠氮、苯胺酰基甲基叠氮、4-氟-苯胺酰基甲基叠氮、4-氟-苯酰基甲基叠氮、4-三氟甲基-苯胺酰基甲基叠氮；

(5)将中间体6a,b分别加入反应瓶，三氟乙酸作溶剂60℃过夜反应；反应完毕减压蒸除溶剂，所得固体用甲醇洗涤，过滤得到相应的目标化合物粗品，经制备液相分离得到目标化合物4-(1,2,3-三氮唑取代苯基胺基)-吡啶骈嘧啶酮衍生物(7a,b)。

所得目标化合物7a1-7a2，7b1-7b8结构见表1。

表1目标化合物的结构式

三、4-(1,2,3-三氮唑取代苯基胺基)-吡啶骈嘧啶酮衍生物的应用

活性测试结果表明，4-(1,2,3-三氮唑取代苯基胺基)-吡啶骈嘧啶酮衍生物是一系列结构新颖的HIV-1整合酶抑制剂，大部分表现出显著的HIV-1整合酶抑制活性，其中化合物7b2活性最高，说明该类化合物具有进一步的研究价值。

因此，本发明还提供了本发明所提供的4-(1,2,3-三氮唑取代苯基胺基)-吡啶骈嘧啶酮衍生物可作为HIV-1整合酶抑制剂用于制备抗艾滋病药物。

一种抗HIV-1的药物组合物，含有上述的4-(1,2,3-三氮唑取代苯基胺基)-吡啶骈嘧啶酮衍生物及其药学上可接受的盐与药用辅料，制成不同剂型的药物。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明，所有目标化合物的编号与表1相同，所述百分比数均为质量百分比。

实施例1：中间体甲基2-(苄基氧基胺基)烟酸酯(2)的制备

将2-氟烟酸甲酯(1.32g，8.51mmol，1.05eq)，O-苄基羟胺(1.00g，8.12mmol，1eq)和二异丙基乙胺(DIPEA，12mL，68.7mmol，8.09eq)加入反应瓶，140℃条件下微波反应120min(分三次反应)。反应完毕，减压条件下蒸除过量二异丙基乙胺，所得粗品经硅胶柱层析分离纯化(洗脱剂为石油醚/乙酸乙酯＝10:1)得到中间体2-(苄基氧基胺基)烟酸酯(2，产率:34.3％)，黄色油状物。

产物光谱分析数据：

ESI-MS:m/z259.0(M+1),281.3(M+23).C₁₄H₁₄N₂O₃[258.27]。

实施例2：中间体1-(卞氧基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(3)的制备

向2-(苄基氧基胺基)烟酸酯(2，0.18g，0.70mmol，1eq)的二氯乙烷(9.79mL)溶液中加入三氯乙酰异氰酸酯(0.28g，1.49mmol，2.1eq)的二氯乙烷(1.89mL)，室温搅拌反应50min，加入三乙胺(204μL，1.47mmol，2.1eq)，30min后，减压蒸除多余溶剂。向反应瓶中加入甲醇钠的甲醇溶液(质量溶度25％，760μL，3.5mmol，5eq)，室温搅拌5min，加入5mL甲醇后继续反应3小时。反应完毕后将溶剂减压蒸除，用1N盐酸溶液将反应混合物pH调至3，得到的悬浊液用乙酸乙酯萃取三遍，合并有机相。将合并的有机相用饱和食盐水洗涤后无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析分离(洗脱剂为1.5:1)纯化后，从EA/MeOH体系重结晶得中间体1-(卞氧基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(3，产率:21.1％)，白色固体，熔点：197-199℃。

产物光谱分析数据：

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ11.93(s,1H,NH),8.79(dd,J＝4.8,1.7Hz,1H,C₂-Py-H),8.36(dd,J＝7.7,1.7Hz,1H,C₄-Py-H),7.70-7.56(m,2H,C₅-Py-H,Ph-H),7.49-7.33(m,4H,Ph-H),5.18(s,2H,CH₂).ESI-MS:m/z270.5(M+1),292.5(M+23).C₁₄H₁₁N₃O₃[269.26].

实施例3：中间体1-(苄基氧)-4-(2-乙炔基苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(5a)和1-(苄基氧)-4-(3-乙炔基苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(5b)的制备

向中间体3(1eq)的二异丙基乙胺(5eq)溶液中滴加三氯氧磷(5eq)，完毕后反应温度升至100℃，45min后将多余的溶剂减压蒸除得到黑色油状物(中间体4)。将中间体4的粗品立即溶于N,N-二甲基甲酰胺，随后向上述混合溶液中加入相应炔基取代的苯胺(1.6eq)的N,N-二甲基甲酰胺溶液，室温搅拌反应50min～2h。反应完毕，将反应液倾入水中，乙酸乙酯萃取3次。不溶物过滤并收集，合并的有机相用无水硫酸镁或无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后与上述不溶物滤饼合并。所得粗品用适当溶剂重结晶或经硅胶柱层析分离纯化分别得到中间体5a和5b。

1-(苄基氧)-4-(2-乙炔基苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(5a)

洗脱剂二氯甲烷:乙酸乙酯＝10:1，甲醇/乙酸乙酯/石油醚重结晶，棕色针状晶体，收率：17.4％，熔点：187-189℃。

波谱数据：

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ10.22(s,1H,NH),8.83(d,J＝3.9Hz,1H,C₂-Py-H),8.76(d,J＝7.9Hz,1H,C₄-Py-H),7.62(d,J＝7.3Hz,3H,Ar-H),7.57-7.50(m,2H,Ar-H),7.46-7.37(m,5H,Ar-H),5.12(s,2H,CH₂),4.33(s,1H,C≡CH).ESI-MS:m/z369.2(M+1),391.4(M+23).C₂₂H₁₆N₄O₂[368.39].

1-(苄基氧)-4-(3-乙炔基苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(5b)

乙酸乙酯/甲醇提醒重结晶得部分中间体5b，硅胶柱层析分离(洗脱剂石油醚:乙酸乙酯＝5:3)得部分中间体5b，合并，白色固体，收率72.1％，熔点：205-207℃。

波谱数据：

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ10.08(s,1H,NH),8.82(d,J＝5.4Hz,2H,Ar-H),8.03(s,1H,Ar-H),7.86(d,J＝8.0Hz,1H,Ar-H),7.65(d,J＝6.5Hz,2H,Ar-H),7.51-7.39(m,5H,Ar-H),7.32(d,J＝7.6Hz,1H,Ar-H),5.15(s,2H,CH₂),4.27(s,1H,C≡CH).ESI-MS:m/z369.3(M+1),391.4(M+23).C₂₂H₁₆N₄O₂[368.39].

实施例4：中间体6a1-6a2和6b1-6b8的制备

将相应的叠氮取代基(2.1eq)、维生素C钠盐(0.3eq)和五水合硫酸铜(0.1eq)依次加入相应炔基取代片段(5a-5c，1eq)的四氢呋喃/水混合溶液。所得反应混合液室温搅拌反应，薄层层析监测反应进度。反应完毕后用EA萃取，不溶物分离用N,N-二甲基甲酰胺溶解后与萃取得到的有机相合并，无水硫酸镁或无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，所得粗品经快速柱分离得到相应的中间体。

炔基取代片段选用1-(苄基氧)-4-(2-乙炔基苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(5a)，叠氮取代基选用4-氟苄基叠氮，制得1-(苄基氧)-4-(2-(1-(4-氟苄基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(中间体6a1)。白色固体，收率21.4％。

波谱数据：

ESI-MS:m/z520.7(M+1),542.5(M+23).C₂₉H₂₂FN₇O₂[519.53].

炔基取代片段选用1-(苄基氧)-4-(2-乙炔基苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(5a)，叠氮取代基选用4-甲基苄基叠氮，制得1-(苄基氧)-4-(2-(1-(4-甲基苄基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(中间体6a2)。淡黄色固体，收率100％。

波谱数据：

ESI-MS:m/z516.6(M+1),538.5(M+23).C₃₀H₂₅N₇O₂[515.57].

炔基取代片段选用1-(苄基氧)-4-(3-乙炔基苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(5b)，叠氮取代基选用苯乙基叠氮，制得1-(苄基氧)-4-(3-(1-苯乙基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(中间体6b1)。乳白色固体，收率100％。

波谱数据：

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ10.16(s,1H),8.87(d,J＝7.8Hz,1H),8.82(d,J＝4.4Hz,1H),8.53(s,1H),8.21(s,1H),7.89(d,J＝7.9Hz,1H),7.65(d,J＝6.5Hz,2H),7.59(d,J＝7.7Hz,1H),7.50(t,J＝7.9Hz,1H),7.47-7.39(m,4H),7.32-7.26(m,2H),7.23(dd,J＝7.6,3.1Hz,3H),5.16(s,2H),4.68(t,J＝7.3Hz,2H),3.24(t,J＝7.3Hz,2H).ESI-MS:m/z516.7(M+1),533.6(M+18),538.6(M+23).C₃₀H₂₅N₇O₂[515.57].

炔基取代片段选用1-(苄基氧)-4-(3-乙炔基苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(5b)，叠氮取代基选用4-氟苄基叠氮，制得1-(苄基氧)-4-(3-(1-(4-氟苄基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(6b2)。淡黄色固体，收率21.4％。

波谱数据：

ESI-MS:m/z520.5(M+1),537.6(M+18),542.5(M+23).C₂₉H₂₂FN₇O₂[519.53].

炔基取代片段选用1-(苄基氧)-4-(3-乙炔基苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(5b)，叠氮取代基选用苯丙基叠氮，制得1-(苄基氧)-4-(3-(1-(3-苯基丙基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(6b3)。白色固体，收率85.7％。

波谱数据：

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ10.17(s,1H),8.88(d,J＝7.0Hz,1H),8.85-8.80(m,1H),8.63(s,1H),8.26(s,1H),7.89(d,J＝8.0Hz,1H),7.65(d,J＝6.8Hz,3H),7.52(d,J＝7.9Hz,1H),7.48-7.39(m,4H),7.30(d,J＝7.3Hz,2H),7.28-7.17(m,3H),5.16(s,2H),4.44(t,J＝7.0Hz,2H),2.70-2.55(m,2H),2.31-2.15(m,2H).ESI-MS:m/z530.4(M+1),552.6(M+23).C₃₁H₂₇N₇O₂[529.59].

炔基取代片段选用1-(苄基氧)-4-(3-乙炔基苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(5b)，叠氮取代基选用1-萘基叠氮，制得1-(苄基氧)-4-(3-(1-(萘-1-基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(6b4)。黄色固体，收率53.3％。

波谱数据：

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ10.24(s,1H),9.17(s,1H),8.90(d,J＝7.0Hz,1H),8.83(d,J＝4.7Hz,1H),8.42(s,1H),8.24(d,J＝8.2Hz,1H),8.16(d,J＝7.3Hz,1H),7.96(d,J＝8.1Hz,1H),7.85(d,J＝7.2Hz,1H),7.82-7.72(m,2H),7.72-7.62(m,5H),7.59(dd,J＝16.3,8.3Hz,1H),7.49-7.39(m,4H),5.17(s,2H).ESI-MS:m/z538.6(M+1),555.5(M+18),560.5(M+23).C₃₂H₂₃N₇O₂[537.57].

炔基取代片段选用1-(苄基氧)-4-(3-乙炔基苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(5b)，叠氮取代基选用苯胺酰基甲基叠氮，制得2-(4-(3-(1-(苄基氧)-2-氧-1,2-二氢吡啶骈[2,3-d]嘧啶-4-胺基)苯基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-N-苯基乙酰胺(6b5)。乳白色固体，收率26.7％。

波谱数据：

ESI-MS:m/z545.5(M+1),562.6(M+18),567.6(M+23).C₃₀H₂₄N₈O₃[544.56].

炔基取代片段选用1-(苄基氧)-4-(3-乙炔基苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(5b)，叠氮取代基选用4-氟-苯胺酰基甲基叠氮，制得2-(4-(3-(1-(苄基氧)-2-氧-1,2-二氢吡啶骈[2,3-d]嘧啶-4-基胺基)苯基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-N-(3-氟苯基)乙酰胺(6b6)。黄白色固体，收率66.7％。

波谱数据：

ESI-MS:m/z563.5(M+1),580.5(M+18),585.5(M+23).C₃₀H₂₃FN₈O₃[562.55].

炔基取代片段选用1-(苄基氧)-4-(3-乙炔基苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(5b)，叠氮取代基选用4-氟-苯酰基甲基叠氮，制得1-(苄基氧)-4-(3-(1-(2-(4-氟苯基)-2-氧乙基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(6b7)。白色固体，收率33.3％。

波谱数据：

ESI-MS:m/z548.6(M+1),565.6(M+18),570.6(M+23),586.5(M+39).C₃₀H₂₂FN₇O₃[547.54].

炔基取代片段选用1-(苄基氧)-4-(3-乙炔基苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(5b)，叠氮取代基选用4-三氟甲基-苯胺酰基甲基叠氮，制得2-(4-(3-(1-(苄基氧)-2-氧-1,2-二氢吡啶骈[2,3-d]嘧啶-4-胺基)苯基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-N-(4-(三氟甲基)苯基)乙酰胺(6b8)。乳色固体，收率47.1％。

波谱数据：

ESI-MS:m/z613.5(M+1),630.6(M+18),635.4(M+23).C₃₁H₂₃F₃N₈O₃[612.56].

实施例5：4-(1,2,3-三氮唑取代苯基胺基)-吡啶骈嘧啶酮衍生物(7a1-7a2和7b1-7b8)的制备

将中间体6a1-6a2，6b1-6b8分别加入反应瓶，三氟乙酸作溶剂60℃过夜反应。反应完毕减压蒸除溶剂，所得固体用甲醇洗涤，过滤得到相应的目标化合物粗品，经制备液相分离得到目标化合物。

反应物选用1-(苄基氧)-4-(2-(1-(4-氟苄基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(6a1)，制得4-(2-(1-(4-氟苄基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)-1-二氢吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(7a1)。洗脱剂水:甲醇(1/1000的三氟乙酸)＝20：80，保留时间：6.044s。黄色固体，收率33.3％，熔点：233-235℃。

波谱数据：

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ10.96(s,1H,OH),10.57(s,1H,NH),8.76(s,1H),8.62(s,1H),8.54(s,1H),8.12(d,J＝6.1Hz,1H),7.94(s,1H),7.45(s,1H),7.41-7.28(m,4H),7.16(t,J＝7.8Hz,2H),5.64(s,2H,CH₂).IR(thinfilm)3432(NH,OH),3133,2923,2853,1648(C＝O),1614,1589(-N＝N),1540,1453,1384,1288,1219,1159,774,761cm^-1.ESI-MS:m/z430.5(M+1).C₂₂H₁₆FN₇O₂[429.41].

反应物选用1-(苄基氧)-4-(2-(1-(4-甲基苄基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(6a2)，制得1-羟基-4-(2-(1-(4-甲基苄基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(7a2)。洗脱剂水:甲醇(1/1000的TFA)＝20:80，保留时间：3.693s。淡黄色固体，收率7.1％，熔点：225-227℃。

波谱数据：

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ11.02(s,1H,OH),10.57(s,1H,NH),8.77(d,J＝3.9Hz,1H),8.60(d,J＝7.4Hz,1H),8.52(s,1H),8.18(d,J＝7.8Hz,1H),7.94(d,J＝7.2Hz,1H),7.45(t,J＝7.4Hz,1H),7.37(dd,J＝15.7,8.7Hz,2H),7.15(dd,J＝18.4,7.7Hz,4H),5.59(s,2H,CH₂),2.27(s,3H,CH₃).¹³CNMR(101MHz,DMSO)δ157.50,154.68,153.26,151.77,145.50,138.03,135.48,133.42,133.08,129.73,128.87,128.39,128.32,126.56,126.26,124.25,123.58,118.32,106.57,53.36(CH₂),21.18(CH₃).IR(thinfilm)3432(NH,OH),3089,2923,2853,1652(C＝O),1614,1590(-N＝N),1540,1453,1384,1293,763cm^-1.ESI-MS:m/z426.4(M+1).C₂₃H₁₉N₇O₂[425.44].

反应物选用1-(苄基氧)-4-(3-(1-苯乙基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(6b1)，制得1-羟基-4-(3-(1-苯乙基-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(7b1)。灰色固体，HPLC纯度：98.7％，收率37.5％。

波谱数据：

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ10.56(s,1H,OH),10.02(s,1H,NH),8.83(d,J＝6.7Hz,1H,C₂-Py-H),8.75(d,J＝3.9Hz,1H,C₄-Py-H),8.51(s,1H,Ar-H),8.20(s,1H,Ar-H),7.91(d,J＝7.5Hz,1H,Ar-H),7.56(d,J＝7.3Hz,1H,Ar-H),7.49(d,J＝7.9Hz,1H,Ar-H),7.37(s,1H,CH),7.26(m,5H,Ar-H),4.68(t,J＝7.0Hz,2H,N-CH₂-C),3.24(t,J＝6.9Hz,2H,C-CH₂-C).¹³CNMR(101MHz,DMSO)δ156.99,154.69,153.22,151.76,146.37,139.39,138.10,134.13,131.65,129.57,129.16,128.92,127.08,122.95,121.94,119.93,118.09,106.40,51.15(CH₂),36.06(CH₂).IR(thinfilm)3440(NH,OH),3304,3129,2922,1652(C＝O),1607,1587(-N＝N),1529,1492,1451,1432,1384,1359,1300,769,698cm^-1.ESI-MS:m/z426.4(M+1),443.7(M+18),448.5(M+23).C₂₃H₁₉N₇O₂[425.44].

反应物选用1-(苄基氧)-4-(3-(1-(4-氟苄基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(6b2)，制得4-(3-(1-(4-氟苄基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)-1-羟基吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(7b2)。灰色固体，HPLC纯度：97.5％，收率100％。

波谱数据：

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ10.58(s,1H,OH),10.03(s,1H,NH),8.83(d,J＝7.6Hz,1H,C₂-Py-H),8.75(d,J＝4.0Hz,1H,C₄-Py-H),8.64(s,1H),8.24(s,1H),7.92(d,J＝7.7Hz,1H),7.61(d,J＝7.6Hz,1H),7.48-7.41(m,3H),7.37(dd,J＝7.6,4.8Hz,1H),7.24(t,J＝8.8Hz,2H),5.67(s,2H,CH₂).¹³CNMR(101MHz,DMSO)δ156.97,154.69,153.22,151.75,146.92,139.39,134.14,132.67,131.45,130.82,130.74,129.58,123.03,122.08,119.97,118.11,116.24,116.03,106.40,52.74(CH₂).IR(thinfilm)3432(NH,OH),1652(C＝O),1607,1587(-N＝N),1530,1511,1489,1450,1420,1384,1356,1299,1224,1159,1095,1062,791,771,692cm^-1.ESI-MS:m/z430.5(M+1),447.5(M+18),452.4(M+23).C₂₂H₁₆FN₇O₂[429.41].

反应物选用1-(苄基氧)-4-(3-(1-(3-苯基丙基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(6b3)，制得1-羟基-4-(3-(1-(3-苯基丙基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(7b3)。洗脱剂水:甲醇(1/1000的TFA)＝30:70，保留时间：5.796s。黄色固体，收率16.7％，熔点：215-217℃。

波谱数据：

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ10.59(s,1H,OH),10.06(s,1H,NH),8.85(d,J＝7.2Hz,1H),8.75(d,J＝4.2Hz,1H),8.63(s,1H),8.26(s,1H),7.91(d,J＝7.8Hz,1H),7.62(d,J＝7.5Hz,1H),7.49(t,J＝7.8Hz,1H),7.37(dd,J＝7.4,4.7Hz,1H),7.25(qd,J＝14.5,7.1Hz,5H,Ph-H),4.44(t,J＝6.9Hz,2H,N-CH₂-C),2.63(t,J＝7.5Hz,2H,Ph-CH₂-C),2.27-2.15(m,2H,CH₂).¹³CNMR(101MHz,DMSO)δ157.00,154.69,153.26,151.76,146.62,141.23,139.38,134.15,131.70,129.55,128.88,128.83,126.49,122.98,122.10,121.92,120.02,118.11,106.41,49.60(N-CH₂),32.39(CH₂),31.72(CH₂).IR(thinfilm)3432(NH,OH),2923,2853,1652(C＝O),1607,1587(-N＝N),1529,1488,1450,1384,1360,1291,1157,1095,1062,791,770,698cm^-1.ESI-MS:m/z440.5(M+1),457.6(M+18),462.5(M+23).C₂₄H₂₁N₇O₂[439.47].

反应物选用1-(苄基氧)-4-(3-(1-(萘-1-基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(6b4)，制得1-羟基-4-(3-(1-(萘-1-基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(7b4)。洗脱剂水:甲醇(1/1000的三氟乙酸)＝30:70，保留时间：6.187s。淡黄色固体，收率12.5％，熔点：263-265℃。

波谱数据：

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ10.61(s,1H,OH),10.14(s,1H,NH),9.16(s,1H),8.89(s,1H),8.76(d,J＝4.0Hz,1H),8.43(s,1H),8.24(d,J＝8.1Hz,1H),8.16(d,J＝7.6Hz,1H),7.98(d,J＝7.2Hz,1H),7.85(d,J＝6.8Hz,1H),7.81-7.51(m,7H,Ar-H),7.39(s,1H).¹³CNMR(101MHz,DMSO)δ157.07,154.72,153.28,151.77,146.93,139.51,134.18,133.76,131.19,130.86,129.68,128.85,128.59,128.39,127.66,125.95,124.85,124.43,123.41,122.58,122.46,120.32,118.13,106.43.IR(thinfilm)3432(NH,OH),2923,2852,1640(C＝O),1608,1586(-N＝N),1529,1469,1448,1384,1362,1292,1155,1095,1061,1035,799,771,690cm^-1.ESI-MS:m/z448.6(M+1),465.5(M+18),470.5(M+23).C₂₅H₁₇N₇O₂[447.45].

反应物选用2-(4-(3-(1-(苄基氧)-2-氧-1,2-二氢吡啶骈[2,3-d]嘧啶-4-基胺基)苯基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-N-苯基乙酰胺(6b5)，制得2-(4-(3-(1-羟基-2-氧-1,2-二氢吡啶骈[2,3-d]嘧啶-4-基胺基)苯基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-N-苯基乙酰胺(7b5)。洗脱剂水:甲醇(1/1000的TFA)＝38:62，保留时间：6.502s。黄色固体，收率100％，熔点：185-187℃。

波谱数据：

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ10.59(s,2H),10.06(s,1H),8.86(s,1H),8.75(d,J＝3.3Hz,1H),8.61(s,1H),8.29(s,1H),7.96(d,J＝6.2Hz,1H),7.72-7.57(m,3H),7.51(t,J＝7.4Hz,1H),7.41-7.29(m,3H),7.10(t,J＝7.1Hz,1H),5.43(s,2H,CH₂).¹³CNMR(101MHz,DMSO)δ164.64(C＝O),156.98,154.68,153.25,151.76,146.46,139.46,138.90,134.18,131.55,129.95,129.62,129.39,128.84,124.29,123.67,122.91,122.03,119.89,119.76,118.10,106.44,52.90(CH₂).IR(thinfilm)3432(NH,OH),3138,2924,2853,1671(C＝O),1609,1534(-N＝N),1498,1446,1384,1359,1298,1257,1200,1155,1097,1066,771,756,721,691cm^-1.ESI-MS:m/z455.5(M+1),472.5(M+18),477.4(M+23).C₂₃H₁₈N₈O₃[454.44].

反应物选用2-(4-(3-(1-(苄基氧)-2-氧-1,2-二氢吡啶骈[2,3-d]嘧啶-4-基胺基)苯基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-N-(3-氟苯基)乙酰胺(6b6)，制得N-(4-氟苯基)-2-(4-(3-(1-羟基-2-氧-1,2-二氢吡啶骈[2,3-d]嘧啶-4-基胺基)苯基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰胺(7b6)。洗脱剂：水:甲醇(1/1000的TFA)＝45:55，保留时间：6.898s。黄色固体，收率10.0％，熔点：181-183℃。

波谱数据：

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ10.63(s,1H),10.60(s,1H),10.06(s,1H),8.85(s,1H),8.75(d,J＝4.0Hz,1H),8.61(s,1H),8.29(s,1H),7.95(d,J＝7.2Hz,1H),7.64(s,1H),7.51(t,J＝7.7Hz,1H),7.43(d,J＝7.0Hz,1H),7.38(d,J＝6.6Hz,1H),7.19(t,J＝8.4Hz,3H),5.42(s,2H,CH₂).¹³CNMR(101MHz,DMSO)δ164.60,159.95,157.56,154.76,146.47,135.29,131.55,129.88,129.65,129.17,128.78,123.66,122.30,121.62,121.54,120.18,119.87,118.83,116.12,115.90,52.82(CH₂).IR(thinfilm)3432(NH,OH),2924,2853,1640(C＝O),1608,1588(-N＝N),1533,1508,1489,1450,1410,1384,1304,1214,1157,1096,1062,837,771,690cm^-1.ESI-MS:m/z473.4(M+1),490.6(M+18),495.5(M+23).C₂₃H₁₇FN₈O₃[472.43].

反应物选用1-(苄基氧)-4-(3-(1-(2-(4-氟苯基)-2-氧乙基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(6b7)，制得4-(3-(1-(2-(4-氟苯基)-2-氧乙基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)苯胺基)-1-羟基吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(7b7)。洗脱剂：水:甲醇(1/1000的TFA)＝46:54，保留时间：7.082s。淡黄色固体，收率40.0％，熔点：261-263℃。

波谱数据：

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ10.58(s,1H,OH),10.05(s,1H,NH),8.85(d,J＝7.8Hz,1H),8.75(d,J＝4.1Hz,1H),8.52(s,1H),8.30(s,1H),8.25-8.14(m,2H),7.95(d,J＝7.9Hz,1H),7.65(d,J＝7.7Hz,1H),7.54-7.45(m,3H),7.37(dd,J＝7.8,4.6Hz,1H),6.28(s,2H,CH₂).¹³CNMR(101MHz,DMSO)δ191.34(C＝O),156.96,154.69,153.23,152.38,151.77,146.57,139.48,134.17,131.89,131.79,131.54,129.65,123.63,122.89,122.01,119.88,118.10,116.73,116.51,106.43,56.45(CH₂).IR(thinfilm)3432(NH,OH),2925,2853,1704,1654(C＝O),1606,1586(-N＝N),1530,1450,1384,1357,1301,1232,1159,1096,1062,843,774,691,594cm^-1.ESI-MS:m/z458.5(M+1),475.4(M+18),480.4(M+23).C₂₃H₁₆FN₇O₃[457.42].

反应物选用2-(4-(3-(1-(苄基氧)-2-氧-1,2-二氢吡啶骈[2,3-d]嘧啶-4-基胺基)苯基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-N-(4-(三氟甲基)苯基)乙酰胺(6b8)，制得2-(4-(3-(1-羟基-2-氧-1,2-二氢吡啶骈[2,3-d]嘧啶-4-基胺基)苯基)-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-N-(4-(三氟甲基)苯基)乙酰胺(7b8)。洗脱剂水:甲醇(1/1000的TFA)＝30:70，保留时间：7.299s。淡黄色固体，收率37.5％，熔点>300℃。

波谱数据：

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ10.92(s,1H),10.06(s,1H),8.85(d,J＝12.8Hz,1H),8.76(s,1H),8.62(s,1H),8.29(s,1H),7.94(s,1H),7.83(d,J＝7.9Hz,2H),7.73(d,J＝8.0Hz,2H),7.66(d,J＝7.0Hz,2H),7.59-7.47(m,1H),7.43(d,J＝7.2Hz,1H),5.48(s,2H,CH₂).IR(thinfilm)3432(NH,OH),2925,2854,1670(C＝O),1611,1586(-N＝N),1537,1490,1412,1384,1326,1166,1116,1068,1018,844,790,771,722,689,596cm^-1.ESI-MS:m/z523.5(M+1),540.6(M+18),545.5(M+23).C₂₄H₁₇F₃N₈O₃[522.44].

实施例6：整合酶活性测试

测试原理：整合酶活性试验采用XpressBio公司的非放射性试剂盒XpressBioHIV-1IntegraseAssayKit，其测试原理为：链霉亲和素覆盖的96孔板上附上末端经生物素标记的双链HIV-1LTRU5供体(DS)DNA。全长重组HIV-1整合酶蛋白结合到DSDNA上。测试化合物加入到酶反应中，然后一个3’-末端修饰过的双链靶标(TS)DNA也被加入到反应混合物中。整合酶经化合物抑制后，不能发挥正常作用，经washingbuffer洗涤除去未结合的TSDNA后，kit反应就此终止；在正常的kit流程中，HIV-1整合酶从HIV-1LTRDSDNA暴露的3’-末端裂解末端的两个碱基然后催化链转移重组反应，将DSDNA整合入TSDNA。接下来加入的HRP-标记的TSDNA3’-末端修饰物的抗体就会结合到反应链上，加入HRP底物后即可通过酶标仪比色读数，经进一步计算得出抑制率。

实验材料：

XpressBio公司购买的HIV-1IntegraseAssayKit，14.3M的β-巯基乙醇，移液枪，枪头，一次性手套，纸巾，去离子水，37℃孵育器，37℃水浴，酶标仪(Thermo，VarioskanFlash)。

实验方法：

(1)预热试剂

实验前将reactionbuffer和blockingsolution置于37℃水浴10min，除HIV-1整合酶以外，将kit里所有其他成分放至室温条件预热。

(2)DSDNA覆盖

将需要量的DSDNA用reactionbuffer稀释100倍(10μL100×DSDNA+990μLreactionbuffer)。每孔加入100μL1×DSDNA溶液，37℃孵育30分钟，将reactionbuffer再放入37℃水浴。

(3)封板

将液体从96孔板中吸出，用300μL1×washbuffer洗5次。每孔加入200μLblockingbuffer并于37℃孵育30分钟。

(4)加入整合酶

用前将整合酶在湿冰上解冻(或2-8℃)5min并用离心机简单离心(10000rpm×5sec)。用reactionbuffer将酶稀释300倍(2μLHIV-1整合酶+598μLreactionbuffer)。

吸出96孔板中的液体，用200μLreactionbuffer洗3次。每孔加入100μL的reactionbuffer(空白对照)或整合酶溶液(阴性对照和实验组)37℃孵育30min。空白对照做复孔。将reactionbuffer重新置于37℃水浴。

(5)加入抑制剂

将要测试的化合物用reactionbuffer稀释至终浓度的两倍。例如，如果实验需要10μM或10μg/mL，就准备20μM或20μg/mL的溶液并连续用reactionbuffer稀释。叠氮溶液稀释至0.3％(2×浓度或0.15％终1×浓度)大概抑制50％整合酶的活性。设50μLreactionbuffer的空白和阴性(不加化合物)对照复孔。化合物最多可含5％DMSO体积比的终浓度。

将液体从孔里吸出，用200μLreactionbuffer洗三次。每孔加入50μL化合物的reactionbuffer溶液(空白和阴性对照只有reactionbuffer)，室温下孵育5min。

(6)加入TSDNA

将需要量的100×TSDNA用reactionbuffer稀释100倍(10μL+990μL)，每孔加50μL1×TSDNA，在桌上水平轻摇平板3-5次将反应液混匀，37℃孵育30min。

(7)加入HRP抗体

吸出孔里的液体，用300μLwashsolution洗五遍。每孔加入100μL辣根抗体溶液，37℃孵育30min。

(8)加入TMB过氧化物酶底物

吸出板孔中的液体，用300μLwashsolution洗五遍。每孔加入100μLTMB过氧化物酶底物溶液，室温下孵育10min。

(9)加入TMB终止液

向含有TMB底物的孔里直接加入100μLTMB终止液。用枪头把大气泡戳破。用酶标仪读取450nm下的吸光度值。读数应在加入TMB终止液后10min内完成。

(10)数据处理

①吸光度校正

计算空白对照的平均吸光度(一般小于0.25OD单位)作为背景吸光度(A₀)。阴性对照与实验组每个孔的吸光度读数(A)都减去这个背景吸光度得到校正过的吸光度(A_校正)。

A_校正＝A-A₀

②吸光度平均值与误差计算

阴性对照及实验组经背景校正后，计算吸光度平均值以及SD值和CV值(SD/mean×100％)。

③抑制率计算

首先计算活性百分比

整合酶活性＝测试化合物的平均吸光度/阴性对照的平均吸光度值×100％。

SD_校正＝整合酶活性×CV_阴性对照

抑制率＝1–整合酶活性±SD_校正

实验结果：

对表1所示10个化合物进行抗HIV-1整合酶活性筛选，其HIV-1整合酶抑制活性数据见表2。阳性对照药设为埃替拉韦、雷特格韦。

表25μg/mL时目标化合物对野生型HIV-1IN的抑制活性

如表2所示，目标化合物在5μg/mL浓度下对野生型HIV-1整合酶的抑制率在48.43％～86.22％区间内。除化合物7a1(48.43％)外，所有化合物在该浓度下对整合酶的抑制率均达到50％以上，其中三个化合物(7b1、7b2和7b7)抑制率达到80％以上。化合物7b2在5μg/mL浓度下对野生型HIV-1整合酶的抑制率最高，为86.2％，接近于整合酶抑制剂上市药物雷特格韦(RAL)(90.6％)和埃替拉韦(EVG)(94.1％)。

Claims

1.4-(1,2,3-三氮唑取代苯胺基)-吡啶骈嘧啶酮衍生物，具有如下通式I所示的结构：

其中，

1,2,3-三氮唑环为胺基苯邻位取代或间位取代；

R为4-氟苄基、4-甲基苄基、苯乙基、苯丙基、1-萘基、苯胺酰基甲基、4-氟-苯胺酰基甲基、4-氟-苯酰基甲基或4-三氟甲基-苯胺酰基甲基。

2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，化合物为下列之一：

3.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，其制备方法如下：

以2-氟烟酸甲酯(1)为原料，与O-苄基羟胺经芳香性亲核取代反应，环合得到中间体1-(苄氧基)吡啶骈[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(3)，再依次经氯代、与炔取代苯胺的亲核取代反应、与叠氮取代基的环加成反应、脱苄基反应得到目标化合物；

合成路线如下：

反应试剂与反应条件：(i)二异丙基乙胺，O-苄基羟胺，140℃，微波，120min；(ii)三氯乙酰异氰酸酯，二氯乙烷，三乙胺，MeONa，室温；(iii)二异丙基乙胺，三氯氧磷，100℃；(iv)N,N-二甲基甲酰胺，相应炔基取代的苯胺，室温；(v)相应的叠氮取代基，维生素C钠盐，五水合硫酸铜，四氢呋喃，水，室温；(vi)三氟乙酸，60℃，过夜；

其中，1,2,3-三氮唑环为氨基苯邻位取代、间位取代、对位取代；R如上述通式Ⅰ中所述；

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

5.如权利要求1-2所述的4-(1,2,3-三氮唑取代苯胺基)-吡啶骈嘧啶酮衍生物在制备HIV-1整合酶抑制剂中的应用。

6.一种抗HIV药物组合物，其特征在于用权利要求1-2所述的4-(1,2,3-三氮唑取代苯胺基)-吡啶骈嘧啶酮衍生物或其可药用盐与药用辅料制成不同剂型的药物制剂。