CN105408355A - 用于提高免疫球蛋白a水平的方法 - Google Patents

Abstract

本文提供了用于提高患有免疫球蛋白A(IgA)缺乏症的受试者的免疫球蛋白A水平的方法，所述方法是通过向所述受试者施用抑制CXCL13活性的药剂，如抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体来实现的。还提供了用于治疗缺乏IgA的受试者的炎症性病症的方法，所述方法是通过向所述受试者施用抑制CXCL13活性的药剂来实现的。

Description

用于提高免疫球蛋白A水平的方法

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技术领域

本发明大体上涉及提高患有免疫球蛋白A(IgA)缺乏症的受试者的免疫球蛋白A水平。

背景技术

免疫球蛋白是一组由包含可变域和恒定域的重链和轻链构成的结构相关蛋白质。重链和轻链的可变区决定了完整分子的分子特异性。免疫球蛋白基于它们的重链恒定区的种类而被分为IgG、IgM、IgE、IgD、或IgA。免疫球蛋白A(IgA)在它的重链中包含α恒定区。

IgA是由沿着呼吸道、胃肠道、以及生殖泌尿道的粘膜内层定位的浆细胞产生的。IgA分子与入侵的病原体结合并且削弱它们穿透粘膜层以及进入宿主的内部组织和血流的能力。一般参见J.G.Nedrud等人,“佐剂和粘膜免疫系统(AdjuvantsandtheMucosalImmuneSystem)”,《疫苗佐剂研究课题》(TopicsinVaccineAdjuvantResearch),(Spiggs,D.E.,Koff,W.C.编著)CRCPress,BocaRaton,Fla.(1990)。IgA与吞噬性白细胞的细胞表面上的受体结合并且从而促进抗体依赖性细胞介导的对入侵的病原体的杀灭。IgA还可以结合致敏物质，从而阻止过敏原结合IgE或激活引起迟发型超敏反应的T细胞。

IgA缺乏症可以短暂地存在，例如在暴露于某些药物或响应于各种感染时，或永久地存在，如在患有先天性IgA缺乏症的患者中。

已经发现，具有低的IgA产生的个体比具有正常的IgA水平的个体更易患各种炎症性疾病，如自身免疫性疾病和过敏。因此，提高总IgA或抗原特异性IgA的水平可以治疗或预防炎症性疾病。

发明内容

本文提供了用于提高患有免疫球蛋白A(IgA)缺乏症的受试者的免疫球蛋白A水平的方法，所述方法是通过施用抑制CXCL13活性的药剂，如抗CXCL13抗体来实现的。还提供了用于治疗缺乏IgA的受试者的炎症性病症的方法，所述方法是通过向所述受试者施用抑制CXCL13活性的药剂来实现的。IgA缺乏症可以是一种由遗传决定的永久性缺乏症或可以继发于感染或对药物的暴露。施用CXCL13抑制剂可以预防炎症性病症，如自身免疫性病症的产生，或可以治疗活动性炎症性病症。

本发明涵盖了以下实施方案。

1.一种用于提高患有免疫球蛋白A(IgA)缺乏症的受试者的免疫球蛋白A水平的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的抑制CXCL13活性的药剂。

2.实施方案1的方法，其中所述IgA缺乏症继发于感染或对药物的暴露。

3.实施方案2的方法，其中所述感染是粘膜感染。

4.实施方案2或3的方法，其中所述感染是细菌感染。

5.实施方案4的方法，其中所述细菌感染是螺杆菌(Heliobacter)感染。

6.实施方案5的方法，其中所述螺杆菌选自由以下各项组成的组：幽门螺杆菌(Heliobacterpylori)、海尔曼螺杆菌(Heliobacterheilmannii)以及猪螺杆菌(Heliobactersuis)。

7.实施方案6的方法，其中所述螺杆菌是猪螺杆菌。

8.实施方案1的方法，其中所述IgA缺乏症是原发性IgA缺乏症。

9.一种用于治疗患有免疫球蛋白A(IgA)缺乏症的受试者的炎症性病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的抑制CXCL13活性的药剂。

10.实施方案9的方法，其中所述炎症性病症是由粘膜感染所引起。

11.实施方案9或10的方法，其中所述炎症性病症是由细菌感染所引起。

12.实施方案11的方法，其中所述方法降低了所述受试者的所述细菌感染的负荷。

13.实施方案11或12的方法，其中所述细菌感染是螺杆菌感染。

14.实施方案13的方法，其中所述螺杆菌选自由以下各项组成的组：幽门螺杆菌、海尔曼螺杆菌以及猪螺杆菌。

15.实施方案14的方法，其中所述螺杆菌是猪螺杆菌。

16.实施方案10至15中任一个的方法，其中所述粘膜感染是胃粘膜感染。

17.实施方案9至16中任一个的方法，其中所述炎症性病症是MALT淋巴瘤。

18.实施方案17的方法，其中所述MALT淋巴瘤是胃MALT淋巴瘤。

19.实施方案9至16中任一个的方法，其中所述炎症性病症是胃溃疡或十二指肠溃疡。

20.实施方案9的方法，其中所述炎症性病症是自身免疫性病症。

21.实施方案20的方法，其中所述自身免疫性病症选自由以下各项组成的组：类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、格雷夫斯氏病(Gravesdisease)、1型糖尿病、重症肌无力以及乳糜泻。

22.实施方案1至21中任一个的方法，其中在施用所述抑制CXCL13活性的药剂后所述受试者的分泌型IgA水平升高。

23.实施方案22的方法，其中在施用所述抑制CXCL13活性的药剂后所述受试者的胃IgA水平升高。

24.实施方案1至23中任一个的方法，其中所述方法增加了所述受试者的粘膜组织中的IgA抗体反应。

25.实施方案1至24中任一个的方法，其中所述药剂是特异性结合CXCR5的结合分子。

26.实施方案1至24中任一个的方法，其中所述药剂是特异性结合CXCL13的结合分子。

27.实施方案1至26中任一个的方法，其中所述结合分子包括抗体或其抗原结合片段。

28.实施方案27的方法，其中所述抗体是嵌合抗体、人类抗体、或人源化抗体。

29.实施方案27或28的方法，其中所述抗体特异性结合CXCL13并且包含与SEQIDNO:10或14中所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变(VH)域。

30.实施方案29的方法，其中所述特异性结合CXCL13的抗体包含具有SEQIDNO:14中所示的序列的VH域。

31.实施方案27至30中任一个的方法，其中所述抗体特异性结合CXCL13并且包含与SEQIDNO:15、19或21中所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变(VL)域。

32.实施方案31的方法，其中所述特异性结合CXCL13的抗体包含具有SEQIDNO:19中所示的序列的VL域。

33.实施方案32的方法，其中所述特异性结合CXCL13的抗体包含具有SEQIDNO:14中所示的序列的VH域和具有SEQIDNO:19中所示的序列的VL域。

34.实施方案27或28的方法，其中所述抗体特异性结合CXCL13并且包含具有以下互补决定区(CDR)中的至少一个的VH域：

a)与SEQIDNO:11具有至少90％序列同一性的CDR1；

b)与SEQIDNO:12具有至少90％序列同一性的CDR2；以及

c)与SEQIDNO:13具有至少90％序列同一性的CDR3。

35.实施方案34的方法，其中所述特异性结合CXCL13的抗体包含VH域，所述VH域包含具有SEQIDNO:11中所示的序列的CDR1、具有SEQIDNO:12中所示的序列的CDR2、以及具有SEQIDNO:13中所示的序列的CDR3。

36.实施方案27、28、34以及35中任一个的方法，其中所述抗体特异性结合CXCL13并且包含具有以下互补决定区(CDR)中的至少一个的VL域：

a)与SEQIDNO:20具有至少90％序列同一性的CDR1；

b)与SEQIDNO:17具有至少90％序列同一性的CDR2；以及

c)与SEQIDNO:18具有至少90％序列同一性的CDR3。

37.实施方案36的方法，其中所述特异性结合CXCL13的抗体包含VL域，所述VL域包含具有SEQIDNO:20中所示的序列的CDR1、具有SEQIDNO:17中所示的序列的CDR2、以及具有SEQIDNO:18中所示的序列的CDR3。

38.实施方案27或28的方法，其中所述抗体选自由以下各项组成的组：MAb5261、MAb5378、MAb5080、MAb1476以及MAb3D2。

39.实施方案38的方法，其中所述抗体是mAb5378。

40.实施方案1至24中任一个的方法，其中所述药剂是CXCR5的可溶形式。

41.实施方案1至40中任一个的方法，其中所述药剂抑制CXCL13与CXCL13受体的相互作用。

42.实施方案41的方法，其中所述CXCL13受体是CXCR5。

43.实施方案1至42中任一个的方法，其中所述药剂抑制CXCR5受体内化。

44.实施方案1至43中任一个的方法，其中将所述药剂与药学上可接受的载体一起施用。

45.实施方案1至44中任一个的方法，其中所述受试者是动物。

46.实施方案45的方法，其中所述动物是哺乳动物。

47.实施方案46的方法，其中所述哺乳动物是人类。

附图说明

图1示出了如通过实时定量PCR所测定的在接受抗CXCL13抗体或同种型对照抗体处理的受猪螺杆菌感染的小鼠的胃粘膜中猪螺杆菌特异性16S核糖体RNA的水平。

图2A和2B示出了受猪螺杆菌感染的小鼠在接受同种型对照或抗CXCL13抗体处理之后胃中TGF-β(图2A)和IL-6(图2B)mRNA的表达。

图3A和3B示出了接受抗CXCL13抗体或同种型对照抗体处理的受猪螺杆菌感染的小鼠的抗猪螺杆菌IgG(图3A)和IgA(图3B)的血清水平。

图4A和4B示出了在接受抗CXCL13抗体或同种型对照抗体处理的受猪螺杆菌感染的小鼠的胃液中抗猪螺杆菌IgG(图4A)和IgA(图4B)的水平。

具体实施方式

如本文所证实，抑制CXCL13活性的药剂(例如抗CXCL13抗体或其结合片段)可以在胃感染动物模型(即受螺杆菌属细菌感染的小鼠(参见Nobutani等人(2010)))的粘膜组织中降低细菌负荷并且提高对感染因子具有特异性的免疫球蛋白A(IgA)的水平。施用抗CXCL13抗体还提高了未受感染的小鼠的胃中TGF-β和IL-6的表达水平，它们涉及IgA水平的上调。因此，抑制CXCL13活性的药剂还可用于总体上调缺乏IgA的受试者的IgA水平。

术语“免疫球蛋白A”或“IgA”指的是在重链中具有α恒定区的免疫球蛋白。术语“免疫球蛋白A”和“IgA”涵盖了单体IgA(即单个分子)和多聚IgA(由超过一个分子构成)，包括但不限于二聚IgA(由两个分子构成)和三聚IgA(由三个分子构成)。IgA单体在它们的重链恒定区处由J链连接在一起形成多聚体(例如二聚体)。IgA多聚体中J链的存在允许IgA多聚体与分泌组分，即由上皮细胞产生的蛋白质连接。

术语“免疫球蛋白A”和“IgA”指的是IgA的两个亚类，即IgA1和IgA2。IgA1的轻链与它的重链共价结合。然而，IgA2的轻链彼此经由二硫键结合并且通过非共价相互作用与它的重链结合。在血清中以IgA1为主，其中它大部分以单体形式存在。分泌型淋巴组织比非分泌型淋巴组织产生更多的IgA2。

IgA还可以基于它的位置来分类。术语“免疫球蛋白A”和“IgA”指的是血清型IgA(即存在于血清中)和分泌型IgA这两者，所述分泌型IgA存在于粘膜分泌物(例如泪液、唾液、初乳、汗液、以及生殖泌尿道、胃肠道、前列腺以及呼吸道上皮的分泌物)中。分泌型IgA一般以由J链连接的并且包含分泌组分的二聚体或三聚体的形式存在。分泌型IgA的分泌组分保护免疫球蛋白防止由蛋白水解酶，如胃肠道环境中存在的那些蛋白水解酶降解。术语“分泌型免疫球蛋白A”和“分泌型IgA”指的是在粘膜分泌物中存在的IgA。因此，术语“分泌型IgA”和“分泌型免疫球蛋白A”可以指的是IgA、连接单体的J链、以及分泌组分的多聚体。

初始B细胞最初在它们的表面上表达IgM和/或IgD，并且一旦被激活，最初产生的抗体就主要是IgM同种型。如果这些激活的B细胞遇到特异性信号转导分子，那么B细胞可以进行“类别转换”而分化成表达IgG受体、IgA受体或IgE受体的细胞。在类别转换期间，免疫球蛋白重链的恒定区发生变化，但可变区以及因此抗原特异性保持相同。

多项研究已经表明转化生长因子-β(TGF-β)诱导IgA类别转换并且白细胞介素-6(IL-6)刺激IgA合成(Sonoda等人(1989)JExpMed170:1415-1420；Beagley等人(1989)JExpMed169:2133-2148，这些文献中的每一篇以引用的方式整体并入本文)。虽然不受任何理论或作用机制所束缚，但认为抑制CXCL13活性的药剂通过提高TGF-β和IL-6的水平来提高IgA水平。

如本文所证实，抑制CXCL13活性会使得TGF-β和IL-6的表达水平以及IgA的水平升高并且因此可用于提高缺乏IgA的受试者的IgA水平。如本文所用的“IgA缺乏症”指的是与对照受试者相比免疫球蛋白A的水平降低。与合适的对照受试者相比，患有IgA缺乏症的受试者可以经受血清型IgA水平降低、分泌型IgA水平降低、或这两者。所述受试者可以在所有分泌物中以及所有粘膜表面处或仅在一种或多种类型的粘膜表面和/或分泌物中具有降低的分泌型IgA水平。在一些实施方案中，患有IgA缺乏症的受试者与合适的对照相比具有降低的胃IgA水平。

在一些实施方案中，患有IgA缺乏症的受试者与对照受试者相比具有约95％、约90％、约85％、约80％、约75％、约70％、约65％、约60％、约55％、约50％、约45％、约40％、约35％、约30％、约25％、约20％、约15％、约10％或更少的IgA(血清型、分泌型或总IgA)。

本领域的普通技术人员将了解如何选择将与被认为患有IgA缺乏症的受试者相比较的合适的对照受试者。合适的对照受试者的非限制性实例包括表现为健康个体的受试者、未患或被认为未患活动性感染(例如粘膜感染)或炎症性病症的个体、以及没有IgA缺乏症的遗传易感性或家族史的受试者。

在其中受试者患有血清型IgA缺乏症的那些实施方案中，IgA的血清水平小于约0.1g/L、小于约0.09g/L、小于约0.08g/L、小于约0.07g/L、小于约0.06g/L、小于约0.05g/L、小于约0.04g/L、小于约0.03g/L、小于约0.02g/L、小于约0.01g/L或更小。

虽然术语“IgA缺乏症”涵盖了与对照受试者相比具有降低的IgA水平的所有个体，但是许多患有IgA缺乏症的个体具有另外正常的IgM和IgG水平。

IgA缺乏症可以是原发性的(遗传性)或继发性的(获得性)。原发性IgA缺乏症是由遗传决定的并且主要是先天性的，如大多数形式的选择性IgA缺乏症。选择性IgA缺乏症已经由泛美免疫缺陷病组(Pan-AmericanGroupforImmunodeficiency)和欧洲免疫缺陷病协会(EuropeanSocietyforImmunodeficiencies)定义为大于或等于4岁的个体的血清型IgA水平小于0.07g/L而伴有正常的IgM和IgG水平(Notarangelo等人(2009)JAlergyClinImmunol124:1161-1178，该文献以引用的方式整体并入本文)。

某些感染或某些类型的药物或抑制免疫系统的其它药剂可以导致继发性IgA缺乏症，所述继发性IgA缺乏症一般是短暂的。暴露于例如免疫抑制剂、D-青霉胺(D-penicillamine)、柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)、金硫葡萄糖(aurothioglucose)、芬氯酸(fenclofenac)、金(gold)、卡托普利(captopril)、唑尼沙胺(zonisamide)、苯妥英(phenytoin)、丙戊酸(valproicacid)、甲状腺素(thyroxine)、氯喹(chloroquine)、卡马西平(carabamazepine)、乙内酰脲(hydantoin)、左旋咪唑(levamisole)、布洛芬(ibuprofen)、水杨酸、苯、以及环孢素A(cyclosporinA)可能引起短暂的IgA缺乏症，该IgA缺乏症在药物清除后消退。可以引起继发性IgA缺乏症的感染的非限制性实例包括风疹、巨细胞病毒、刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)、以及埃-巴二氏病毒(Epstein-Barrvirus)。

在一些实施方案中，所述受试者患有继发于粘膜感染的IgA缺乏症。在这些实施方案中的一些中，所述粘膜感染是细菌感染。在某些实施方案中，引起继发性IgA缺乏症的细菌感染是螺杆菌感染，如幽门螺杆菌、海尔曼螺杆菌或猪螺杆菌。

在本发明所公开的方法的一些实施方案中，向患有IgA缺乏症的受试者施用抑制CXCL13活性的药剂使得总IgA(血清型和分泌型)增加。在其它实施方案中，施用CXCL13抑制剂使得分泌型IgA增加。在具体实施方案中，已经接受CXCL13抑制剂施用的受试者经历胃IgA水平的升高。在其中受试者正经受感染因子侵袭的那些实施方案中，施用CXCL13抑制剂可以提高对所述感染因子具有特异性的IgA的水平，这在一些实施方案中可以引起所述感染因子的清除率提高。

在某些实施方案中，施用抑制CXCL13活性的药剂使受试者的血清型IgA、分泌型IgA、或总IgA水平提高约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约10％、约15％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约100％或更多。

鉴于CXCL13活性的抑制剂可以提高IgA水平，抑制CXCL13活性的药剂可以用于治疗患有IgA缺乏症的受试者的炎症性病症。炎症性疾病的特征在于炎症和组织破坏或其组合。“抗炎活性”意指炎症的减轻或预防。“炎症性疾病”或“炎症性病症”包括任何炎症免疫介导的过程，其中免疫反应的起始事件或靶标涉及一种或多种非自体抗原，包括例如同种异体抗原、异种抗原、病毒抗原、细菌抗原、自体抗原、未知抗原、或过敏原。在一些实施方案中，所述炎症性病症是感染性疾病。在一个实施方案中，所述炎症性病症与粘膜感染(例如细菌、病毒)有关和/或由粘膜感染所引起。在一些实施方案中，所述炎症性疾病与细菌感染有关和/或由细菌感染所引起，例如大肠杆菌或螺杆菌感染，例如幽门螺杆菌、海尔曼螺杆菌、豹螺杆菌(H.acinonychis)、鹅螺杆菌(H.anseris)、金仓鼠螺杆菌(H.aurati)、棒状螺杆菌(H.baculiformis)、胆型螺杆菌(H.bilis)、毕氏螺杆菌(H.bizzozeronii)、白雁螺杆菌(H.brantae)、加拿大螺杆菌(H.candadensis)、犬螺杆菌(H.canis)、胆囊螺杆菌(H.cholecystus)、同性恋螺杆菌(H.cinaedi)、犬胃螺杆菌(H.cynogastricus)、马螺杆菌(H.equorum)、猫螺杆菌(H.felis)、芬奈尔螺杆菌(H.feneliae)、蛇形螺杆菌(H.ganmani)、肝螺杆菌(H.hepaticus)、仓鼠螺杆菌(H.mesocricetorum)、旱獭螺杆菌(H.marmotae)、小家鼠螺杆菌(H.muridarum)、雪貂螺杆菌(H.mustelae)、帕美特螺杆菌(H.pametensis)、鸡螺杆菌(H.pulorum)、羊螺杆菌(H.rappini)、啮齿类螺杆菌(H.rodentium)、所罗门螺杆菌(H.salomonis)、猪螺杆菌、大鼠结肠螺杆菌(H.trogontum)、盲肠螺杆菌(H.typhlonius)以及温哈门螺杆菌(H.winghamensis)感染。在某些实施方案中，螺杆菌感染是幽门螺杆菌、海尔曼螺杆菌、或猪螺杆菌感染。

在另一个实施方案中，螺杆菌相关的炎症性疾病是MALT淋巴瘤(例如胃MALT淋巴瘤)、胃癌(例如食道癌或胃癌)、胃溃疡或十二指肠溃疡、胃炎(胃壁炎症)、或胃损伤(参见例如Chen等人,JClinPathol55(2):133-7(2002)；Genta等人,HumPathol24(6):577-83(1993)；Okiyama等人,PatholInt55(7):398-404(2005))。

在一些实施方案中，施用抑制CXCL13活性的药剂使得受试者体内感染因子(例如细菌)的负荷降低。在这些实施方案中的一些中，施用抗CXCL13剂使得粘膜中感染因子(例如细菌)的负荷降低并且在这些实施方案中的一些中，至少一种粘膜分泌物中感染因子(例如细菌)的水平降低。在这些实施方案中的一些中，向患有感染的受试者施用抗CXCL13剂使得受试者体内感染因子(例如细菌)的水平降低了至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或更多。

在其中向患有IgA缺乏症的受试者施用CXCL13抑制剂的那些实施方案中的一些中，CXCL13抑制剂增加了所述受试者的粘膜组织中的IgA抗体反应。在这些实施方案中，抗原特异性IgA(例如特异性识别感染因子的IgA)的水平升高，这在一些实施方案中引起对感染因子的更高效的清除。术语“炎症性病症”或“炎症性疾病”包括但不限于对过敏原的过敏性反应。过敏性反应是由免疫球蛋白E(IgE)介导的。IgA可以结合致敏物质，从而阻止过敏原结合IgE或激活引起迟发型超敏反应的T细胞。因此，抑制CXCL13活性，从而引起IgA水平升高的药剂的施用可以用于治疗或预防响应于各种过敏原的过敏性反应，包括但不限于哮喘、过敏性鼻炎、过敏性窦炎、接触性皮炎、湿疹、荨麻疹、呼吸困难、呕吐、腹胀以及腹泻，所述过敏原包括但不限于某些食物、药物、昆虫叮咬、花粉、胶乳以及植物毒素。

此外，出于本发明的目的，术语“一种或多种炎症性疾病”包括但不限于“一种或多种自身免疫性疾病”，在本文也被称为“一种或多种自身免疫性病症”。如本文所用的术语“自身免疫”一般被理解为涵盖涉及“自体”抗原的炎症免疫介导的过程。在自身免疫性疾病中，一种或多种自体抗原触发宿主免疫反应。

在一些实施方案中，所述炎症性疾病是由遗传决定的选择性IgA缺乏症的结果，所述缺乏症可能阻止对感染因子的清除或促成自身免疫性疾病，包括但不限于类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、格雷夫斯氏病、1型糖尿病、重症肌无力、舍格伦综合征(Sjogrensyndrome)、多发性硬化、或乳糜泻(Wang等人(2011)MolMed17(11-12):1383-1396，这篇文献以引用的方式整体并入本文)。在一些实施方案中，所述炎症性疾病是B细胞介导的炎症性疾病。如本文所用的术语“B细胞介导的炎症性疾病”是如本文所述的炎症性疾病，其中所述疾病的发病、进展、或发病和进展这两者主要取决于B细胞的活性。B细胞介导的炎症性疾病的非限制性实例包括特征在于产生自身抗体的那些疾病。

“B细胞”是一种在骨髓内成熟的淋巴细胞，并且包括初始B细胞、记忆B细胞、或效应B细胞(浆细胞)。在本文中B细胞可以是正常的或非恶性的B细胞。

在本文中“B细胞表面标志物”或“B细胞表面抗原”是在B细胞的表面上表达的抗原，所述抗原可以用与其结合的拮抗剂所靶向。示例性B细胞表面标志物包括例如CD10、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD37、CD40、CD53、CD72、CD73、CD74、CDw75、CDw76、CD77、CDw78、CD79a、CD79b、CD80、CD81、CD82、CD83、CDw84、CD85和CD86、以及CXCR5。与哺乳动物的其它非B细胞组织相比，所特别关注的B细胞表面标志物优先在B细胞上表达，并且可以在前体B细胞和成熟B细胞这两者上表达。在本文中优选的B细胞表面标志物是CD19和CXCR5。出于本发明的目的，术语“一种或多种炎症性疾病”包括但不限于“一种或多种自身免疫性疾病”。

根据本发明所公开的方法，向患有IgA缺乏症的受试者施用抑制CXCL13活性的药剂。在某些实施方案中，向有需要的受试者施用药剂以治疗炎症性病症。

在一些实施方案中，治疗包括向受试者应用或施用抑制CXCL13活性的药剂(例如抗CXCL13或抗CXCR5结合分子)、或向从受试者分离的组织或细胞系应用或施用所述药剂，其中所述受试者患有炎症性病症、炎症性病症的症状、或对炎症性病症有易感性。在另一个实施方案中，治疗还意图包括向受试者应用或施用包含抑制CXCL13活性的药剂(例如抗CXCL13或抗CXCR5结合分子)的药物组合物、或向从受试者分离的组织或细胞系应用或施用包含所述药剂的药物组合物，所述受试者患有炎症性病症、炎症性病症的症状、或对炎症性病症有易感性。

根据本发明的方法，使用抑制CXCL13活性的至少一种药剂(例如抗CXCL13或抗CXCR5结合分子)来促进积极的治疗反应以治疗或预防IgA缺乏症和/或炎症性病症。针对炎症性疾病的“积极的治疗反应”意指与所施用的药剂的抗炎活性、抗血管生成活性、抗细胞凋亡活性等相关的疾病改善和/或与所述疾病相关的症状的改善。也就是说，可以观测到抗增殖作用、防止了表达CXCL13的细胞进一步增殖、炎症反应的减少，包括但不限于炎症性细胞因子、粘附分子、蛋白酶、免疫球蛋白(在带有CXCL13的细胞是B细胞的情况下)、其组合等的分泌减少、抗炎蛋白的产生增加、自身反应性细胞数目减少、免疫耐受性增加、抑制了自身反应性细胞存活、细胞凋亡减少、内皮细胞迁移减少、自发单核细胞迁移增加、异位淋巴滤泡数目减少、受影响的组织中存在的B细胞数目减少、B细胞向受影响的组织中的迁移减少、由刺激表达CXCL13的细胞所介导的一种或多种症状减轻和/或减少。针对感染性疾病的“积极的治疗反应”意指感染因子，例如细菌的清除以及与感染相关的疾病症状的改善。

这些积极的治疗反应不限于施用途径并且可以包括向供体施用、向供体组织施用(例如像器官灌注)、向宿主施用、其任何组合等。临床反应可以使用筛选技术来评估，所述筛选技术诸如磁共振成像(MRI)扫描、x射线照相成像、计算机断层(CT)扫描、流式细胞术或荧光激活细胞分选仪(FACS)分析、组织学、宏观病理学、以及血液化学，包括但不限于可由ELISA、RIA、色谱法等检测的变化。除了这些积极的治疗反应之外，接受使用抑制CXCL13活性的药剂(例如抗CXCL13或抗CXCR5结合分子)进行的疗法的受试者还可以经历与炎症性病症相关的症状改善的有益作用。

如本文所用的术语“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”指的是治疗性处理和防治性或预防性措施这两者，其中目的在于预防或减缓(减轻)不希望有的生理变化或病症、减少不希望有的生理变化或病症加重、或预防不希望有的生理变化或病症复发，所述不希望有的生理变化或病症诸如炎症性病症的进展。有益的或所需的临床结果包括但不限于减轻症状、降低疾病程度、使疾病状态稳定(即不恶化)、延迟或减缓疾病进展、改善或缓和疾病状态以及缓解(无论是部分还是完全)，无论是可检测的或是不可检测的。“治疗”还可以意指使存活期与在不接受治疗的情况下的预期存活期相比延长。需要治疗的那些包括已经患有所述病况或病症的那些以及易患所述病况或病症的那些或有待预防所述病况或病症的那些。

“受试者”或“个体”或“动物”或“患者”或“哺乳动物”意指需要被诊断、预后、或治疗的任何受试者，特别是哺乳动物受试者。哺乳动物受试者包括人类、家畜、农畜以及动物园动物、竞技动物或宠物动物，如狗、猫、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、马、母牛等。

如本文所用的短语如“将受益于抑制CXCL13活性的药剂的施用的受试者”和“需要治疗的动物”包括将受益于抑制CXCL13活性的药剂(例如抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体)的施用以治疗，即缓和或预防炎症性病症的受试者，如哺乳动物受试者。如本文所更详细地描述，抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体可以未缀合的形式使用或可以是与例如药物、前药或同位素缀合的。

本发明所公开的方法利用了抑制CXCL13活性的药剂。CXCL13(另外被称为稳态B细胞虏获性趋化因子(homeostaticBCell-attractingchemokine)1(BCA-1)或ANGIE、BLC、BLR1L、ANGIE2、或Scyb13)在次级淋巴器官(例如脾脏、淋巴结以及派尔集合淋巴结(Peyer'spatch))中由滤泡树突状细胞(FDC)和巨噬细胞组成型表达。参见Gunn等人,Nature391:799-803(1998)；以及Carlsen等人,Blood104(10):3021-3027(2004)。CXCL13主要经由G蛋白偶联CXCR5受体(伯基特氏淋巴瘤受体1(Burkitt'slymphomareceptor1))起作用。CXCR5表达在例如成熟B淋巴细胞、CD4+滤泡辅助性T细胞(Thf细胞)、CD8+T细胞的小子集以及激活的扁桃体调节性T细胞上。参见Legler等人,J.Exp.Med.187:655-660(1998)；等人,Blood84:830-840(1994)；Fazilleau等人,Immunity30:324-335(2009)；Ansel等人,J.Exp.Med.190:1123-1134(1999)；Lim等人,J.Clin.Invest.114(11):1640-1649(2004)；以及R.学术出版社细胞因子参考文献中的章节(ChapterinAcademicPressCytokineReference),2000年8月。

如本文所用的术语“CXCL13”和“CXCL13多肽”可互换使用。在某些实施方案中，CXCL13可以包括全尺寸的CXCL13或其片段、或CXCL13变体多肽，其中CXCL13的片段或CXCL13变体多肽保留全尺寸的CXCL13的一些或所有功能特性。人类CXCL13多核苷酸和多肽序列(分别是SEQIDNO:1和2)已经有所描述，参见例如Legler等人,J.Exp.Med.187(4):655-660(1998)。小鼠CXCL13多核苷酸和多肽序列(分别是SEQIDNO:3和4)已经有所描述，参见例如Gunn等人,Nature391(6669):799-803(1998)。此外，食蟹猴CXCL13多肽序列已经有所描述，如SEQIDNO:5中所示。

如本文所用的术语“CXCR5”和“CXCR5多肽”可互换使用。在某些实施方案中，CXCR5可以包括全尺寸的CXCR5或其片段、或CXCR5变体多肽，其中CXCR5的片段或CXCR5变体多肽保留全尺寸的CXCR5的一些或所有功能特性。术语“CXCR5”和“CXCR5多肽”还涵盖CXCR5的可溶形式。如本文所用的术语“CXCR5的可溶形式”是没有与质膜结合的CXCR5形式。全长CXCR5是七次跨膜受体。因此，CXCR5的可溶形式的非限制性实例包括基本上由细胞外域组成的CXCR5片段(例如约前60个氨基酸)。人类CXCR5多核苷酸和多肽序列是本领域已知的并且在本文分别作为SEQIDNO:6和7提供。鼠类CXCR5多核苷酸和多肽序列是本领域已知的并且在本文分别作为SEQIDNO:8和9提供。

可用于抑制CXCL13活性的药剂包括小分子、多肽以及多核苷酸。在某些实施方案中，所述药剂阻断CXCL13与它的受体结合。在一些实施方案中，所述药剂阻断CXCL13与CXCR5之间的相互作用。在具体实施方案中，所述药剂是特异性结合CXCL13或CXCR5的特异性结合分子。在这些实施方案中的一些中，所述药剂是抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体或其抗原结合片段。在其它实施方案中，所述药剂是CXCR5的可溶形式。

如本文所用的术语“多肽”意图涵盖单数形式“多肽”以及复数形式“多肽”，并且指的是由以酰胺键(也被称为肽键)线性连接的单体(氨基酸)构成的分子。术语“多肽”指的是具有两个或更多个氨基酸的任何一条链或多条链，并且不指产物的具体长度。因此，肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白质”、“氨基酸链”或用于指具有两个或更多个氨基酸的一条链或多条链的任何其它术语被包括在“多肽”的定义内，并且术语“多肽”可以代替这些术语中的任一个或与这些术语中的任一个互换使用。术语“多肽”还意图指多肽的表达后修饰的产物，包括而不限于糖基化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、由已知的保护基/阻隔基衍生化、蛋白水解切割、或由非天然存在的氨基酸修饰。多肽可以源自于天然的生物来源或通过重组技术产生，但是未必由所指定的核酸序列翻译而来。它可以任何方式产生，包括通过化学合成。

可用于本发明所公开的方法中的多肽可以具有以下尺寸：约3个或更多个、5个或更多个、10个或更多个、20个或更多个、25个或更多个、50个或更多个、75个或更多个、100个或更多个、200个或更多个、500个或更多个、1,000个或更多个、或2,000个或更多个氨基酸。多肽可以具有确定的三维结构，尽管它们并不一定具有这种结构。具有确定的三维结构的多肽被称为折叠多肽，并且不具有确定的三维结构，而是可以采用很多不同的构象的多肽被称为未折叠多肽。如本文所用的术语糖蛋白指的是与至少一种碳水化合物部分连接的蛋白质，所述碳水化合物部分经由氨基酸残基，例如丝氨酸残基或天冬酰胺残基的含氧侧链或含氮侧链与蛋白质连接。

“分离的”多肽或片段、变体、或其衍生物意指不处在它的天然环境中的多肽。不需要特定水平的纯化。举例来说，分离的多肽可以从它的原生环境或天然环境中被取出。在宿主细胞中表达的重组产生的多肽和蛋白质出于本发明的目的被认为是分离的，已经通过任何合适的技术分离、分级分离、或者部分地或基本上纯化的原生多肽或重组多肽也如此。

作为可用于本发明所公开的方法中的多肽，还包括多肽的片段、衍生物、类似物、或变体以及其任何组合。在提到抗CXCL13或抗CXCR5抗体或抗体多肽时，术语“片段”、“变体”、“衍生物”以及“类似物”包括保留相应抗体或抗体多肽的至少一些抗原结合特性的任何多肽。除了本文别处所论述的特异性抗体片段之外，多肽的片段还包括蛋白水解片段以及缺失片段。抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体的变体包括如上文所述的片段以及具有由于氨基酸取代、缺失或插入而发生改变的氨基酸序列的多肽。变体可以天然存在或非天然存在。非天然存在的变体可以使用本领域已知的诱变技术而产生。变体多肽可以包含保守的或非保守的氨基酸取代、缺失或添加。变体多肽在本文还可以被称为“多肽类似物”。如本文所用的抗CXCL13或抗CXCR5抗体或抗体多肽的“衍生物”指的是具有通过功能性侧基的反应而化学衍生的一个或多个残基的主题多肽。作为“衍生物”，还包括含有二十种标准氨基酸的一种或多种天然存在的氨基酸衍生物的那些肽。举例来说，4-羟脯氨酸可以取代脯氨酸；5-羟赖氨酸可以取代赖氨酸；3-甲基组氨酸可以取代组氨酸；高丝氨酸可以取代丝氨酸；并且鸟氨酸可以取代赖氨酸。抗CXCL13和抗CXCR5抗体和抗体多肽的衍生物可以包括已经发生改变以表现出在参考抗体或抗体多肽上不存在的另外的特征的多肽。

在多肽的背景下，“线性序列”或“序列”是在氨基端至羧基端的方向上多肽中氨基酸的顺序，其中在序列中彼此相邻的残基在多肽的一级结构中是连续的。

术语“多核苷酸”意图涵盖单数形式核酸以及复数形式核酸，并且指的是分离的核酸分子或构建体，例如信使RNA(mRNA)或质粒DNA(pDNA)。多核苷酸可以包含常规的磷酸二酯键或非常规的键(例如酰胺键，如在肽核酸(PNA)中所存在)。术语“核酸”指的是多核苷酸中存在的任何一个或多个核酸段，例如DNA片段或RNA片段。“分离的”核酸或多核苷酸意指已经从它的原生环境中取出的核酸分子、DNA或RNA。举例来说，载体中所含的编码抗CXCL13或抗CXCR5结合分子，例如抗体或其抗原结合片段的重组多核苷酸出于本发明的目的被认为是分离的。分离的多核苷酸的另外的实例包括维持在异源宿主细胞中的重组多核苷酸或溶液中(部分地或基本上)纯化的多核苷酸。分离的RNA分子包括本发明的多核苷酸的体内或体外RNA转录物。根据本发明的分离的多核苷酸或核酸还包括合成产生的这些分子。此外，多核苷酸或核酸可以是或可以包括调节元件，如启动子、核糖体结合位点、或转录终止子。

如本文所用的“编码区”是核酸中由被翻译成氨基酸的密码子组成的部分。尽管“终止密码子”(TAG、TGA或TAA)不被翻译成氨基酸，但它可以被认为是编码区的一部分，但是任何侧接序列，例如启动子、核糖体结合位点、转录终止子、内含子等不是编码区的一部分。可用于本发明所公开的方法中的两个或更多个编码区可以存在于单个多核苷酸构建体中，例如单个载体上，或存在于独立的多核苷酸构建体中，例如独立的(不同的)载体上。此外，任何载体可以含有单个编码区，或可以包含两个或更多个编码区，例如单个载体可以分别编码免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区。此外，可用于本发明所公开的方法中的载体、多核苷酸或核酸可以编码异源编码区，所述异源编码区与编码抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体或其片段、变体或衍生物的核酸融合或未融合。异源编码区包括而不限于专用的元件或基序，如分泌信号肽或异源功能域。

在某些实施方案中，可用于本发明所公开的方法中的多核苷酸或核酸是DNA。在DNA的情况下，包含编码多肽的核酸的多核苷酸通常可以包括与一个或多个编码区可操作地缔合的启动子和/或其它转录或翻译控制元件。可操作的缔合是指基因产物，例如多肽的编码区以某种方式与一个或多个调节序列缔合以使得所述基因产物的表达处在所述一个或多个调节序列的影响或控制之下。如果诱导启动子功能会引起编码所需基因产物的mRNA的转录以及如果两个DNA片段之间的键合的性质不干扰表达调节序列引导基因产物表达的能力或不干扰DNA模板进行转录的能力，那么这两个DNA片段(如多肽编码区和与其缔合的启动子)是“可操作地缔合的”。因此，如果启动子能够实现编码多肽的核酸的转录，那么所述启动子区将与该核酸可操作地缔合。启动子可以是仅在预定的细胞中引导DNA显著转录的细胞特异性启动子。除启动子之外的其它转录控制元件，例如增强子、操纵子、阻遏子以及转录终止信号可以与多核苷酸可操作地缔合以引导细胞特异性转录。本文公开了合适的启动子和其它转录控制区。

多种转录控制区是本领域技术人员已知的。这些包括而不限于在脊椎动物细胞中起作用的转录控制区，诸如但不限于来自巨细胞病毒(立即早期启动子，联同内含子-A一起)、猿猴病毒40(早期启动子)以及逆转录病毒(如劳氏肉瘤病毒(Roussarcomavirus))的启动子段和增强子段。其它转录控制区包括源自于脊椎动物基因，如肌动蛋白、热休克蛋白、牛生长激素以及兔β-球蛋白的那些以及能够控制真核细胞中的基因表达的其它序列。另外的合适的转录控制区包括组织特异性启动子和增强子以及淋巴因子诱导型启动子(例如可由干扰素或白细胞介素诱导的启动子)。

类似地，多种翻译控制元件是本领域的普通技术人员已知的。这些包括但不限于核糖体结合位点、翻译起始密码子和终止密码子以及源自于小核糖核酸病毒的元件(特别是内部核糖体进入位点或IRES，也被称为CITE序列)。

在其它实施方案中，可用于本发明所公开的方法中的多核苷酸是RNA，例如呈信使RNA(mRNA)的形式。

可用于本发明所公开的方法中的多核苷酸和核酸编码区可以与编码分泌肽或信号肽的另外的编码区缔合，所述肽引导由本发明的多核苷酸所编码的多肽分泌。根据信号假说，由哺乳动物细胞分泌的蛋白质具有信号肽或分泌前导序列，在增长的蛋白质链已经开始穿过粗面内质网输出时，该信号肽或分泌前导序列从成熟蛋白质上被切除。本领域的普通技术人员知道的是，由脊椎动物细胞分泌的多肽一般具有与多肽的N末端融合的信号肽，所述信号肽从完整的或“全长”多肽上被切除以产生分泌或“成熟”形式的多肽。在某些实施方案中，使用原生信号肽，例如免疫球蛋白重链信号肽或轻链信号肽，或该序列的功能性衍生物，该衍生物保留引导与它可操作地缔合的多肽分泌的能力。或者，可以使用异源哺乳动物信号肽或其功能性衍生物。举例来说，野生型前导序列可以被人类组织纤溶酶原激活物(TPA)或小鼠β-葡萄糖醛酸酶的前导序列取代。

如本文所用的术语“表达”指的是基因产生生化物质，例如多肽的过程。该过程包括细胞内基因的功能呈现的任何表现形式，包括而不限于基因敲落以及瞬时表达和稳定表达这两者。它包括而不限于基因被转录成信使RNA(mRNA)以及这种mRNA被翻译成一种或多种多肽。如果最终的所需产物是生化物质，那么表达包括该生化物质和任何前体的形成。基因的表达产生“基因产物”。如本文所用的基因产物可以是核酸，例如由基因转录所产生的信使RNA，或从转录物翻译而来的多肽。本文所述的基因产物还包括具有转录后修饰(例如多聚腺苷酸化)的核酸或具有翻译后修饰的多肽，所述翻译后修饰例如甲基化、糖基化、脂质添加、与其它蛋白亚基的缔合、蛋白水解切割等。

“结合分子”或“抗原结合分子”在它最广泛的意义上指的是特异性结合抗原决定簇的分子。在一个实施方案中，所述结合分子特异性结合CXCL13(也被称作BCA-1)。在另一个实施方案中，所述结合分子特异性结合CXCR5。在另一个实施方案中，可用于本发明所公开的方法中的结合分子是抗体或其抗原结合片段，例如抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体。在另一个实施方案中，结合分子包含抗体分子的至少一个重链CDR或轻链CDR。在另一个实施方案中，结合分子包含来自一种或多种抗体分子的至少两个CDR。在另一个实施方案中，结合分子包含来自一种或多种抗体分子的至少三个CDR。在另一个实施方案中，结合分子包含来自一种或多种抗体分子的至少四个CDR。在另一个实施方案中，结合分子包含来自一种或多种抗体分子的至少五个CDR。在另一个实施方案中，结合分子包含来自一种或多种抗体分子的至少六个CDR。在某些实施方案中，这些CDR中的一个或多个来自于MAb5261、MAb5378、MAb5080、MAb1476或3D2。

在一些实施方案中，本发明所公开的方法涉及某些抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物。除非确切地提到全尺寸的抗体，如天然存在的抗体，否则术语“抗CXCL13抗体”和“抗CXCR5抗体”涵盖全尺寸的抗体以及这些抗体的抗原结合片段、变体、类似物或衍生物，例如天然存在的抗体或免疫球蛋白分子或以类似于抗体分子的方式结合抗原的工程抗体分子或片段。

如本文所用的“人类”抗体或“完全人类”抗体包括具有人类免疫球蛋白的氨基酸序列的抗体并且包括从人类免疫球蛋白文库或针对一种或多种人类免疫球蛋白转基因的并且不表达内源性免疫球蛋白的动物分离的抗体，如下文以及例如Kucherlapati等人的美国专利号5,939,598中所述。“人类”抗体或“完全人类”抗体还包括至少包含重链的可变域、或至少包含重链和轻链的可变域的抗体，其中该一个或多个可变域具有一个或多个人类免疫球蛋白可变域的氨基酸序列。

“人类”抗体或“完全人类”抗体还包括如上文所述的“人类”抗体或“完全人类”抗体，这些抗体包含已知的抗CXCL13抗体分子或抗CXCR5抗体分子(例如VH区和/或VL区)的变体(包括衍生物)、基本上由所述变体组成、或由所述变体组成，所述抗体或其片段免疫特异性结合CXCL13或CXCR5多肽或其片段或变体。可以使用本领域技术人员已知的标准技术在编码人类抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体的核苷酸序列中引入突变，包括但不限于定点诱变和PCR介导的诱变，从而引起氨基酸取代。优选地，所述变体(包括衍生物)编码相对于参考VH区、VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VL区、VLCDR1、VLCDR2或VLCDR3少于50处氨基酸取代、少于40处氨基酸取代、少于30处氨基酸取代、少于25处氨基酸取代、少于20处氨基酸取代、少于15处氨基酸取代、少于10处氨基酸取代、少于5处氨基酸取代、少于4处氨基酸取代、少于3处氨基酸取代、或少于2处氨基酸取代。

在某些实施方案中，所述氨基酸取代是下文进一步论述的保守氨基酸取代。或者，可以沿着编码序列的全部或一部分，如通过饱和诱变随机地引入突变，并且可以针对生物活性对所得的突变体进行筛选以鉴定保留活性(例如结合CXCL13或CXCR5多肽，例如人类、鼠类或人类和鼠类这两者的CXCL13或CXCR5的能力)的突变体。“人类”抗体或“完全人类”抗体的这些变体(或其衍生物)也可以被称为“优化”或“针对抗原结合优化”的人类抗体或完全人类抗体并且包括对抗原具有提高的亲和力的抗体。

术语“抗体”和“免疫球蛋白”在本文可互换使用。抗体或免疫球蛋白至少包含重链的可变域，并且通常至少包含重链和轻链的可变域。脊椎动物系统中的基本免疫球蛋白结构是相对充分了解的。参见例如Harlow等人(1988)《抗体：实验室手册》(Antibodies:ALaboratoryManual)(第2版；ColdSpringHarborLaboratoryPress)。

如下文将更详细地论述，术语“免疫球蛋白”包含可以在生化上加以区分的各种广泛类别的多肽。本领域技术人员将了解的是，重链被分类为γ、μ、α、δ、或ε，在它们当中存在一些亚类(例如γ1-γ4)。正是这条链的性质决定了抗体的“类别”分别是IgG、IgM、IgA、IgD或IgE。免疫球蛋白亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1等被充分表征并且已知赋予了功能特化。鉴于本公开，这些类别和同种型中的每一种的修饰型式容易由本领域技术人员辨别并且因此，在本发明的范围内。所有的免疫球蛋白类别的使用均明确地在本发明所公开的方法的范围内，然而，以下论述将大体上涉及IgG类别的免疫球蛋白分子。对于IgG，标准的免疫球蛋白分子包含具有约23,000道尔顿的分子量的两个相同的轻链多肽和具有分子量53,000-70,000的两个相同的重链多肽。四条链通常由二硫键连接成“Y”构型，其中轻链在“Y”的开口处开始外托重链并且继续通过可变区。

轻链被分类为κ或λ。每一种重链类别均可以与κ轻链或λ轻链结合。一般来说，在免疫球蛋白由杂交瘤、B细胞或遗传工程宿主细胞产生时，轻链和重链彼此共价键合，并且两条重链的“尾区”部分通过共价二硫键或非共价键彼此键合。在重链中，氨基酸序列从Y构型的叉端处的N末端延伸到每一条链尽头处的C末端。

轻链和重链这两者均被分成具有结构和功能同源性的区域。术语“恒定”和“可变”是在功能上使用的。在这方面，将了解的是，轻链(VL或VK)和重链(VH)部分这两者的可变域决定了抗原识别和特异性。相反，轻链(CL)和重链(CH1、CH2或CH3)的恒定域赋予了重要的生物特性，如分泌、经胎盘移动性、Fc受体结合、补体结合等。按照惯例，恒定区结构域的编号随着它们变得离抗体的抗原结合位点或氨基末端更远而增大。N末端部分是可变区并且在C末端部分处是恒定区；CH3域和CL域实际上分别包含重链和轻链的羧基末端。

如本文所示，可变区允许抗体选择性地识别并且特异性地结合抗原上的表位。也就是说，抗体的VL域和VH域、或这些可变域内的互补决定区(CDR)的子集组合形成限定了三维抗原结合位点的可变区。这种四级抗体结构形成了存在于Y的每条臂的末端处的抗原结合位点。更确切地说，抗原结合位点是由VH链和VL链中的每一个上的三个CDR限定的。在一些情况下，例如源自于骆驼科动物物种或基于骆驼科动物免疫球蛋白工程化的某些免疫球蛋白分子，完整的免疫球蛋白分子可以仅由重链组成而没有轻链。参见例如Hamers-Casterman等人,Nature363:446-448(1993)。

在天然存在的抗体中，每一个抗原结合域中存在的六个“互补决定区”或“CDR”是短的不连续的氨基酸序列，它们被特定地定位以在抗体在水性环境中呈现它的三维构型时形成抗原结合域。抗原结合域中其余的氨基酸被称为“框架”区，显示出较小的分子间变异性。框架区基本上采用β-折叠构象并且CDR形成环，这些环连接β-折叠结构并且在一些情况下，形成β-折叠结构的一部分。因此，框架区用以形成通过链间非共价相互作用使得CDR在正确的取向上定位的支架。由定位的CDR形成的抗原结合域限定了与免疫反应性抗原上的表位互补的表面。这一互补表面促进了抗体与它的关联表位的非共价结合。任何给定的重链可变域或轻链可变域中分别构成CDR和框架区的氨基酸可以容易由本领域的普通技术人员鉴定，这是因为它们已经被精确定义(参见下文)。

在其中本领域内使用和/或接受的术语存在两种或更多种定义的情况下，除非明确地有相反的说明，否则如本文所用的术语的定义意图包括所有这些含义。具体实例是使用术语“互补决定区”(“CDR”)描述了重链多肽和轻链多肽这两者的可变区内存在的不连续的抗原结合位点。这个特定的区域已经由Kabat等人(1983)美国卫生与公众服务部(U.S.Dept.ofHealthandHumanServices),“免疫相关的蛋白质的序列(SequencesofProteinsofImmunologicalInterest)”以及Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987)描述，这些文献以引用的方式并入本文，其中在将所述定义彼此相比较时，所述定义包括氨基酸残基的重叠或子集。尽管如此，应用任何一种定义来指抗体或其变体的CDR均意图落入如本文所定义和使用的术语的范围内。构成了如由上文所引用的参考文献中的每一篇所定义的CDR的适当的氨基酸残基作为比较阐述于下表1中。构成具体CDR的精确残基数目将不同，这取决于CDR的序列和尺寸。本领域技术人员可以鉴于抗体的可变区氨基酸序列常规地确定哪些残基构成了具体的CDR。

表1.CDR的定义¹

Kabat

Chothia

VH CDR1	31-35	26-32
			VH CDR2	50-65	52-58
VH CDR3	95-102	95-102
			VL CDR1	24-34	26-32
VL CDR2	50-56	50-52
			VL CDR3	89-97	91-96

¹表1中所有CDR定义的编号是根据由Kabat等人(参见下文)所阐述的编号惯例。

Kabat等人还限定了适用于任何抗体的可变域序列的编号系统。本领域的普通技术人员可以明确地为任何可变域序列指定这种“Kabat编号”系统，而不依赖于序列本身以外的任何实验数据。如本文所用的“Kabat编号”指的是由Kabat等人(1983)美国卫生与公众服务部(U.S.Dept.ofHealthandHumanServices),“免疫相关的蛋白质的序列(SequencesofProteinsofImmunologicalInterest)”所阐述的编号系统。除非另外说明，否则在提到本发明的抗CXCL13抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物中特定氨基酸残基位置的编号时，是根据Kabat编号系统。

可用于本发明所公开的方法中的抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物包括但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、多特异性抗体、人类抗体、人源化抗体、灵长类源化抗体、或嵌合抗体、单链抗体、表位结合片段，例如Fab、Fab'和F(ab')₂、Fd、Fv、单链Fv(scFv)、二硫键连接的Fv(sdFv)、包含VL域或VH域的片段、由Fab表达文库产生的片段以及抗独特型(抗Id)抗体(包括例如抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体的抗Id抗体)。ScFv分子是本领域已知的并且描述于例如美国专利号5,892,019中。用于本发明所公开的方法中的免疫球蛋白或抗体分子可以是任何类型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA以及IgY)、类别(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1以及IgA2等)、或亚类的免疫球蛋白分子。

如本文所用的术语“重链部分”包括源自于免疫球蛋白重链的氨基酸序列。包含重链部分的多肽包含以下各项中的至少一个：CH1域、铰链域(例如上部、中部、和/或下部铰链区)、CH2域、CH3域、或其变体或片段。举例来说，用于本发明所公开的方法中的结合多肽可以包含：包含CH1域的多肽链；包含CH1域、铰链域的至少一部分以及CH2域的多肽链；包含CH1域和CH3域的多肽链；包含CH1域、铰链域的至少一部分以及CH3域的多肽链；或包含CH1域、铰链域的至少一部分、CH2域以及CH3域的多肽链。在另一个实施方案中，可用于本发明所公开的方法中的多肽包含含有CH3域的多肽链。此外，用于本发明所公开的方法中的结合多肽可以缺少CH2域的至少一部分(例如CH2域的全部或一部分)。如上文所阐述，本领域的普通技术人员将理解的是，这些结构域(例如重链部分)可以被修饰以使得它们在氨基酸序列上不同于天然存在的免疫球蛋白分子。

在本文公开的某些抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体、或其抗原结合片段、变体或衍生物中，多聚体的一条多肽链的重链部分与所述多聚体的第二条多肽链上的重链部分相同。或者，可用于本发明所公开的方法中的含有重链部分的单体不相同。举例来说，每一个单体可以包含不同的靶标结合位点，从而形成例如双特异性抗体。

用于本文所公开的方法中的结合分子的重链部分可以源自于不同的免疫球蛋白分子。举例来说，多肽的重链部分可以包含源自于IgG1分子的C_H1域和源自于IgG3分子的铰链区。在另一个实例中，重链部分可以包含部分地源自于IgG1分子并且部分地源自于IgG3分子的铰链区。在另一个实例中，重链部分可以包含部分地源自于IgG1分子并且部分地源自于IgG4分子的嵌合铰链。

如本文所用的术语“轻链部分”包括源自于免疫球蛋白轻链，例如κ轻链或λ轻链的氨基酸序列。优选地，所述轻链部分包含VL域或CL域中的至少一个。

可用于本发明所公开的方法中的抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体、或其抗原结合片段、变体或衍生物可以根据它们所识别或特异性结合的抗原，例如本文所公开的靶多肽(例如CXCL13或CXCR5)的一个或多个表位或一个或多个部分来描述或说明。靶多肽中与抗体的抗原结合域特异性相互作用的部分是“表位”或“抗原决定簇”。靶多肽可以包含单个表位，但通常包含至少两个表位，并且可以包括许多表位，这取决于抗原的尺寸、构象以及类型。此外，应当指出的是，靶多肽上的“表位”可以是或可以包括非多肽元件，例如表位可以包括碳水化合物侧链。

认为抗体的肽表位或多肽表位的最小尺寸是约四个至五个氨基酸。肽表位或多肽表位优选地含有至少七个，更优选地至少九个并且最优选地至少约15个至约30个氨基酸。由于CDR可以识别呈三级形式的抗原肽或多肽，因此构成表位的氨基酸不需要是连续的，并且在一些情况下，甚至可以不在同一肽链上。由可用于本发明所公开的方法中的抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体识别的肽表位或多肽表位可以含有具有CXCL13或CXCR5的至少4个、至少5个、至少6个、至少7个，更优选地至少8个、至少9个、至少10个、至少15个、至少20个、至少25个、或约15个至约30个连续或非连续氨基酸的序列。

“特异性结合”一般意指抗体经由它的抗原结合域结合表位，并且所述结合需要抗原结合域与表位之间有一定的互补性。根据这种定义，当与和随机的无关表位结合相比，抗体更容易经由它的抗原结合域与表位结合时，所述抗体被说成与该表位“特异性结合”。术语“特异性”在本文中用以对某种抗体与某个表位结合的相对亲和力加以定性。举例来说，抗体“A”可以被认为比抗体“B”对给定的表位有更高的特异性，或抗体“A”可以被说成以比它对相关表位“D”更高的特异性结合表位“C”。

“优先结合”意指与和相关的、相似的、同源的或类似的表位结合相比，抗体更容易特异性地与表位结合。因此，与和相关表位的结合相比，“优先结合”给定表位的抗体将更可能结合该表位，尽管这种抗体可能与所述相关表位交叉反应。

通过非限制性实例的方式，如果抗体以小于所述抗体对第二表位的解离常数(K_D)的K_D结合第一表位，那么所述抗体可以被认为优先地结合所述第一表位。在另一个非限制性实例中，如果抗体以比所述抗体对第二表位的K_D小了至少一个数量级的K_D结合第一表位，那么所述抗体可以被认为优先地结合所述第一抗原。在另一个非限制性实例中，如果抗体以比所述抗体对第二表位的K_D小了至少两个数量级的K_D结合第一表位，那么所述抗体可以被认为优先地结合所述第一表位。

在另一个非限制性实例中，如果抗体以比所述抗体对第二表位的解离速率(k(解离))小的k(解离)结合第一表位，那么所述抗体可以被认为优先地结合所述第一表位。在另一个非限制性实例中，如果抗体以比所述抗体对第二表位的k(解离)小了至少一个数量级的k(解离)结合第一表位，那么所述抗体可以被认为优先地结合所述第一表位。在另一个非限制性实例中，如果抗体以比所述抗体对第二表位的k(解离)小了至少两个数量级的k(解离)结合第一表位，那么所述抗体可以被认为优先地结合所述第一表位。可用于本文所公开的方法中的抗体或抗原结合片段、变体、或衍生物可以被说成以小于或等于5×10^-2sec^-1、10^-2sec^-1或5×l0^-3sec^-1的解离速率(k(解离))结合本文所公开的靶多肽(例如CXCL13或CXCR5，例如人类、鼠类、或人类和鼠类这两者的CXCL13或CXCR5)或其片段或变体。在某些实施方案中，k(解离)小于或等于约3×10^-2，例如其中所述抗体是3D2并且CXCL13是人类或小鼠CXCL13。在另一个实施方案中，k(解离)小于或等于约3×10^-3，例如其中所述抗体是MAb5261并且CXCL13是人类或小鼠CXCL13。在另一个实施方案中，k(解离)小于或等于约4×10^-3，例如其中所述抗体是MAb5378并且CXCL13是人类或小鼠CXCL13。在一个实施方案中，可用于本发明所公开的方法中的抗体可以被说成以小于或等于5×10^-4sec^-1、10^-4sec^-1、5×10^-5sec^-1、或10^-5sec^-1、5×10^-6sec^-1、10^-6sec^-1、5×10^-7sec^-1或10^-7sec^-1的解离速率(k(解离))结合本文所公开的靶多肽(例如CXCL13，例如人类、鼠类或人类和鼠类这两者的CXCL13)或其片段或变体。

可用于本文所公开的方法中的抗体或抗原结合片段、变体或衍生物可以被说成以大于或等于10³M^-1sec^-1、5×10³M^-1sec^-1、10⁴M^-1sec^-1、5×10⁴M^-1sec^-1、10⁵M^-1sec^-1、5×10⁵M^-1sec^-1、10⁶M^-1sec^-1或5×10⁶M^-1sec^-1的缔合速率(k(缔合))结合本文所公开的靶多肽(例如CXCL13或CXCR5，例如人类、鼠类、或人类和鼠类这两者的CXCL13或CXCR5)或其片段或变体。在某些实施方案中，k(缔合)大于或等于约5×10⁵，例如其中所述抗体是3D2并且CXCL13是人类CXCL13；或k(缔合)大于或等于约1×10⁵，例如其中所述抗体是3D2并且CXCL13是小鼠CXCL13。在另一个实施方案中，k(缔合)大于或等于约1×10⁶，例如其中所述抗体是MAb5261并且CXCL13是人类或小鼠CXCL13。在另一个实施方案中，k(缔合)大于或等于约1×10⁶，例如其中所述抗体是MAb5378并且CXCL13是人类或小鼠CXCL13。在一个实施方案中，可用于本发明所公开的方法中的抗体可以被说成以大于或等于10⁵M^-1sec^-1、5×10⁵M^-1sec^-1、10⁶M^-1sec^-1或5×10⁶M^-1sec^-1或10⁷M^-1sec^-1的缔合速率(k(缔合))结合本文所公开的靶多肽(例如CXCL13，例如人类、鼠类或人类和鼠类这两者的CXCL13)或其片段或变体。

如果抗体优先地结合给定表位达到它在某种程度上阻断了参考抗体与所述表位的结合的程度，那么所述抗体被说成竞争性抑制所述参考抗体，例如抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体与该表位的结合。竞争性抑制可以通过本领域已知的任何方法，例如竞争ELISA测定法来测定。抗体可以被说成将参考抗体与给定表位的结合竞争性地抑制了至少90％、至少80％、至少70％、至少60％或至少50％。

如本文所用的术语“亲和力”指的是单个表位与免疫球蛋白分子的CDR的结合强度的量度。参见例如Harlow等人(1988),《抗体：实验室手册》(Antibodies:ALaboratoryManual),(ColdSpringHarborLaboratoryPress,第2版)的第27-28页。如本文所用的术语“亲合力”指的是一群免疫球蛋白与抗原之间的复合体的总体稳定性，即免疫球蛋白混合物与抗原的功能性结合强度。参见例如Harlow的第29-34页。亲合力与该群体中的单个免疫球蛋白分子与特异性表位的亲和力以及免疫球蛋白和抗原的效价这两者有关。举例来说，二价单克隆抗体与具有高度重复表位结构，如多聚体的抗原之间的相互作用将是具有高亲合力的相互作用。

可用于本发明所公开的方法中的抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物还可以根据它们的交叉反应性来描述或说明。如本文所用的术语“交叉反应性”指的是对一种抗原具有特异性的抗体与第二抗原反应的能力；两种不同的抗原物质之间相关性的量度。因此，如果抗体与除诱导所述抗体形成的表位以外的表位结合，那么所述抗体具有交叉反应性。交叉反应性表位一般与诱导表位含有许多相同的互补结构特征，并且在一些情况下，实际上可以比原始表位更契合。

举例来说，某些抗体具有一定程度的交叉反应性，这是因为它们结合相关的，但是不相同的表位，例如与参考表位具有至少95％、至少90％、至少85％、至少80％、至少75％、至少70％、至少65％、至少60％、至少55％以及至少50％同一性(如使用本领域已知的以及本文描述的方法所计算)的表位。如果抗体不结合与参考表位具有小于95％、小于90％、小于85％、小于80％、小于75％、小于70％、小于65％、小于60％、小于55％以及小于50％同一性(如使用本领域已知的以及本文描述的方法所计算)的表位，那么所述抗体可以被说成具有很小或没有交叉反应性。如果抗体不结合某个表位的任何其它类似物、直系同源物或同源物，那么所述抗体可以被认为对所述表位“高度特异”。

可用于本发明所公开的方法中的抗CXCL13或抗CXCR5结合分子，例如抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物还可以根据它们对多肽，例如CXCL13或CXCR5，例如人类、鼠类或人类和鼠类这两者的CXCL13或CXCR5的结合亲和力来描述或说明。在某些实施方案中，可用于本发明所公开的方法中的抗体或其抗原结合片段的结合亲和力包括具有以下解离常数或Kd的那些：小于或不大于5×10^-2M、10^-2M、5×10^-3M、10^-3M、5×10^-4M、10^-4M、5×10^-5M、10^-5M、5×10^-6M、10^-6M、5×10^-7M、10^-7M、5×10^-8M、10^-8M、5×10^-9M、10^-9M、5×10^-10M、10^-10M、5×10^-11M、10^-11M、5×10^-12M、10^-12M、5×10^-13M、10^-13M、5×10^-14M、10^-14M、5×10^-15M、或10^-15M。在一个实施方案中，可用于本发明所公开的方法中的抗CXCL13或抗CXCR5结合分子，例如抗体或其抗原结合片段以小于约5×10^-9M至约5×10^-10M的Kd结合人类CXCL13或CXCR5，例如其中该抗体是MAb5261并且Kd小于或等于约5×10^-9M。在另一个实施方案中，抗CXCL13或抗CXCR5结合分子，例如抗体或其抗原结合片段以小于约5×10^-7M至约9×10^-9M的Kd结合鼠类CXCL13或CXCR5，例如其中该抗体是MAb5261并且Kd小于或等于约8×10^-9M。

可用于本发明所公开的方法中的抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物可以具有“多特异性”，例如双特异性、三特异性、或更大的多特异性，意指它同时识别并且结合一种或多种不同的抗原(例如蛋白质)上存在的两个或更多个不同的表位。因此，无论抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体具有“单特异性”还是“多特异性”，例如“双特异性”，指的是与结合多肽反应的不同表位的数目。多特异性抗体可以对本文所述的靶多肽的不同表位具有特异性或可以对靶多肽以及异源表位，如异源多肽或固体载体材料具有特异性。

如本文所用的术语“效价”指的是结合多肽或CXCL13或CXCR5结合分子，例如抗体或其抗原结合片段中存在的潜在结合域，例如抗原结合域的数目。每一个结合域特异性结合一个表位。当结合多肽或CXCL13或CXCR5结合分子包含超过一个结合域时，每一个结合域可以特异性结合相同的表位，对于具有两个结合域的抗体，被称作“二价单特异性”；或结合不同的表位，对于具有两个结合域的抗体，被称作“二价双特异性”。抗体或其抗原结合片段还可以具有双特异性并且对于每一种特异性均是二价的(被称作“双特异性四价抗体”)。在另一个实施方案中，可以产生四价微型抗体或结构域缺失抗体。

双特异性二价抗体和产生它们的方法描述于例如美国专利号5,731,168；5,807,706；5,821,333；以及美国专利申请公开号2003/020734和2002/0155537中，所有这些的公开内容以引用的方式并入本文。双特异性四价抗体和产生它们的方法描述于例如WO02/096948和WO00/44788中，这两者的公开内容以引用的方式并入本文。一般参见PCT公开WO93/17715；WO92/08802；WO91/00360；WO92/05793；Tutt等人,J.Immunol.147:60-69(1991)；美国专利号4,474,893；4,714,681；4,925,648；5,573,920；5,601,819；Kostelny等人,J.Immunol.148:1547-1553(1992)。

如先前所示，各种免疫球蛋白类别的恒定区的亚基结构和三维构型是公知的。如本文所用的术语“VH域”包括免疫球蛋白重链的氨基末端可变域并且术语“CH1域”包括免疫球蛋白重链的第一(最靠氨基末端)恒定区结构域。CH1域靠近VH域并且是免疫球蛋白重链分子的铰链区的氨基末端。

如本文所用的术语“CH2域”包括重链分子中例如使用常规的编号方案从抗体的大约残基244延伸到残基360的部分(残基244至360，Kabat编号系统；以及残基231-340，EU编号系统；参见KabatEA等人)。CH2域是独特的，这是因为它不与另一个结构域紧密配对。相反，两个N连接的分支碳水化合物链插入完整原生IgG分子的两个CH2域之间。还完全证实的是，CH3域从IgG分子的CH2域延伸到C末端并且包含约108个残基。

如本文所用的术语“铰链区”包括重链分子中使CH1域与CH2域连接的部分。这一铰链区包含约25个残基并且是柔性的，从而允许两个N末端抗原结合区独立地移动。铰链区可以被细分成三个不同的结构域：上部铰链域、中部铰链域以及下部铰链域(Roux等人,J.Immunol.161:4083(1998))。

如本文所用的术语“二硫键”包括两个硫原子之间形成的共价键。氨基酸半胱氨酸包含可以与第二硫醇基形成二硫键或二硫桥的硫醇基。在大部分的天然存在的IgG分子中，CH1区和CL区由二硫键连接并且两条重链由使用Kabat编号系统对应于239和242的位置(位置226或229，EU编号系统)处的两个二硫键连接。

如本文所用的术语“嵌合抗体”将用来意指如下的任何抗体，在所述抗体中，免疫反应性区域或位点获自或源自于第一物种并且恒定区(根据本发明，它可以是完整的、部分的或修饰的)获自第二物种。在某些实施方案中，靶标结合区域或位点将来自于非人类来源(例如小鼠或灵长类动物)并且恒定区是人类恒定区(例如单克隆抗体(MAb)1476)。

如本文所用的术语“工程抗体”指的是如下的抗体，在所述抗体中，重链或轻链或这两者中的可变域通过来自具有已知特异性的抗体的一个或多个CDR的至少部分置换以及如果有必要，通过部分框架区置换以及序列改变而发生变化。尽管CDR可以源自于与产生框架区的抗体相同的类别或甚至亚类的抗体，但是设想的是，CDR将源自于不同类别的抗体并且优选地源自于来自不同物种的抗体。其中来自具有已知特异性的非人类抗体的一个或多个“供体”CDR被移植到人类重链或轻链框架区中的工程抗体在本文被称为“人源化抗体”。可能不需要将所有的CDR均置换为来自供体可变域的完整CDR以将一个可变域的抗原结合能力转移到另一个可变域上。相反，可能仅需要转移为维持靶标结合位点的活性所必需的那些残基。在某些实施方案中，人源化抗体包含来自供体重链可变域的1个、2个或3个CDR。在另一个实施方案中，人源化抗体包含来自供体轻链可变域的1个、2个或3个CDR。

还认识到的是，人源化抗体的重链或轻链或这两者中的可变域内的框架区可以仅包含人类来源的残基，在这种情况下，人源化抗体的这些框架区被称为“完全人类框架区”。或者，如果有必要，供体可变域的一个或多个框架区的一个或多个残基可以在人源化抗体的重链或轻链或这两者中的可变域的一个或多个人类框架区的相应位置内被工程化以维持适当的结合或提高与CXCL13抗原或CXCR5抗原的结合。已经以这种方式工程化的人类框架区因此将包含人类框架残基和供体框架残基的混合物，并且在本文被称为“部分人类框架区”。

举例来说，抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体的人源化可以基本上遵循Winter和同事的方法(Jones等人,Nature321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature332:323-327(1988)；Verhoeyen等人,Science239:1534-1536(1988)，这些文献中的每一篇以引用的方式整体并入本文)，通过用啮齿动物或突变型啮齿动物CDR或CDR序列取代人类抗CXCL13抗体的相应序列来进行。还参见美国专利号5,225,539；5,585,089；5,693,761；5,693,762；以及5,859,205；以引用的方式并入本文。所得的人源化抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体将在该人源化抗体的重链和/或轻链的可变域的完全人类框架区内包含至少一个啮齿动物或突变型啮齿动物CDR。在一些情况下，人源化抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体的一个或多个可变域的框架区内的残基被相应的非人类(例如啮齿动物)残基置换(参见例如美国专利号5,585,089；5,693,761；5,693,762；以及6,180,370，这些专利中的每一件以引用的方式整体并入本文)，在这种情况下，所得的人源化抗CXCL13抗体将在重链和/或轻链的可变域内包含部分人类框架区。

此外，人源化抗体可以包含接受体抗体或供体抗体中不存在的残基。进行这些修饰以进一步改进抗体性能(例如以获得所需的亲和力)。一般来说，人源化抗体将包含基本上所有的至少一个，并且通常两个可变域，其中所有的或基本上所有的CDR对应于非人类免疫球蛋白的CDR并且所有的或基本上所有的框架区是人类免疫球蛋白序列的框架区。人源化抗体任选地还将包含免疫球蛋白恒定区，通常是人类免疫球蛋白恒定区的至少一部分(Fc)。关于另外的细节，参见Jones等人,Nature331:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature332:323-329(1988)；以及Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)；以引用的方式并入本文。因此，这些“人源化”抗体可以包括其中显著小于完整人类可变域已经被来自非人类物种的相应序列取代的抗体。实际上，人源化抗体通常是其中一些或所有的CDR残基以及可能一些框架残基被来自啮齿动物抗体中类似位点的残基所取代的人类抗体。参见例如美国专利号5,225,539；5,585,089；5,693,761；5,693,762；以及5,859,205。还参见美国专利号6,180,370，以及国际公开号WO01/27160，其中公开了人源化抗体以及用于产生对预定抗原具有提高的亲和力的人源化抗体的技术。

市售的结合CXCL13的抗体已经在本领域中公开，例如大鼠抗小鼠MAb470(R&DSystems公司)和小鼠抗人类MAb801(R&DSystems公司)。此外，鼠类抗CXCL13抗体公开在美国专利申请公开号20080227704A1中，该专利申请公开以引用的方式整体并入本文。单克隆抗CXCL13抗体MAb5261、MAb5378、MAb5080、MAb1476以及3D2公开在国际申请公开号WO2012/031099中，该国际申请公开以引用的方式整体并入本文。

单克隆抗体5261包含具有SEQIDNO:14中所示的序列的重链可变(VH)域和具有SEQIDNO:19中所示的序列的轻链可变(VL)域。MAb5261在它的重链内包含人类Igγ1-F同种异型恒定区并且在它的轻链内包含人类κ恒定区。单克隆抗体5378包含具有SEQIDNO:14中所示的序列的重链可变(VH)域和具有SEQIDNO:19中所示的序列的轻链可变(VL)域。MAb5378在它的重链内包含鼠类IgG2a恒定区并且在它的轻链内包含鼠类κ恒定区。MAb5080包含具有SEQIDNO:14中所示的序列的VH域和具有SEQIDNO:21中所示的序列的VL域。MAb5080在它的重链内包含人类IgG1恒定区并且在它的轻链内包含人类κ恒定区。单克隆抗体1476包含具有SEQIDNO:10中所示的序列的VH域和具有SEQIDNO:15中所示的序列的VL域。MAb1476在它的重链内包含人类IgG1恒定区并且在它的轻链内包含人类κ恒定区。单克隆抗体3D2包含具有SEQIDNO:10中所示的序列的VH域和具有SEQIDNO:15中所示的序列的VL域。MAb3D2在它的重链内包含鼠类IgG1恒定区并且在它的轻链内包含鼠类κ恒定区。

在一些实施方案中，本发明所公开的方法利用了MAb5261、MAb5378、MAb5080、MAb1476、或3D2抗CXCL13单克隆抗体。

在一些实施方案中，用于本发明所公开的方法中的抗体包含结合CXCL13的抗CXCL13抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物。在某些实施方案中，抗CXCL13抗体结合人类、灵长类动物、鼠类、或人类和鼠类这两者的CXCL13。在某些实施方案中，可用于本发明所公开的方法中的抗CXCL13抗体被人源化。在其它实施方案中，抗CXCL13抗体阻断CXCL13结合它的受体，例如CXCR5。在某些实施方案中，可用于本发明所公开的方法中的抗CXCL13抗体是MAb5261、MAb5378、MAb5080、MAb1476、或3D2、或其抗原结合片段、变体或衍生物。在一个实施方案中，本发明所公开的方法利用了与参考抗体，例如MAb5261、MAb5378、MAb5080、MAb1476或3D2特异性结合相同的CXCL13或CXCR5表位的分离的结合分子，例如抗体或其抗原结合片段、变体以及衍生物。在另一个实施方案中，本发明所公开的方法涉及特异性结合CXCL13并且竞争性地抑制参考抗体，例如MAb5261、MAb5378、MAb5080、MAb1476或3D2特异性结合CXCL13，例如人类、灵长类动物、鼠类或人类和鼠类这两者的CXCL13的分离的结合分子，例如抗体或其抗原结合片段。

在某些实施方案中，可用于本发明所公开的方法中的结合分子具有与参考抗CXCL13抗体分子的氨基酸序列具有至少约80％、约85％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、或约95％序列同一性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，结合分子与参考抗体共有至少约96％、约97％、约98％、约99％或100％的序列同一性。在某些实施方案中，所述参考抗体是MAb5261、MAb5378、MAb5080、MAb1476或3D2。

在另一个实施方案中，本发明所公开的方法利用了包含免疫球蛋白重链可变域(VH域)、基本上由VH域组成或由VH域组成的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH域的CDR中的至少一个具有与SEQIDNO:10或14的CDR1、CDR2或CDR3至少约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％同一或同一的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，本发明所公开的方法利用了包含免疫球蛋白重链可变域(VH域)、基本上由VH域组成或由VH域组成的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH域的CDR中的至少一个具有与SEQIDNO:11、12或13至少约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％同一或同一的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，本发明所公开的方法利用了包含免疫球蛋白重链可变域(VH域)、基本上由VH域组成或由VH域组成的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH域具有与SEQIDNO:10或14至少约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％同一或同一的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，本发明所公开的方法利用了包含免疫球蛋白重链可变域(VH域)、基本上由VH域组成或由VH域组成的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH域的CDR中的至少一个具有除了1、2、3、4或5处保守氨基酸取代之外与SEQIDNO:10或14的CDR1、CDR2或CDR3同一的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，本发明所公开的方法利用了包含免疫球蛋白重链可变域(VH域)、基本上由VH域组成或由VH域组成的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH域的CDR中的至少一个具有除了1、2、3、4或5处保守氨基酸取代之外与SEQIDNO:11、12或13同一的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，本发明所公开的方法利用了包含免疫球蛋白轻链可变域(VL域)、基本上由VL域组成或由VL域组成的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL域的CDR中的至少一个具有与SEQIDNO:15、19或21的CDR1、CDR2或CDR3至少约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％同一或同一的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，本发明所公开的方法利用了包含免疫球蛋白轻链可变域(VL域)、基本上由VL域组成或由VL域组成的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL域的CDR中的至少一个具有与SEQIDNO:16、17、18或20至少约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％同一或同一的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，本发明所公开的方法利用了包含免疫球蛋白轻链可变域(VL域)、基本上由VL域组成或由VL域组成的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL域具有与SEQIDNO:15、19或21至少约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％同一或同一的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，本发明所公开的方法利用了包含免疫球蛋白轻链可变域(VL域)、基本上由VL域组成或由VL域组成的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL域的CDR中的至少一个具有除了1、2、3、4或5处保守氨基酸取代之外与SEQIDNO:15、19或21的CDR1、CDR2或CDR3同一的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，本发明所公开的方法利用了包含免疫球蛋白轻链可变域(VL域)、基本上由VL域组成或由VL域组成的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL域的CDR中的至少一个具有除了1、2、3、4或5处保守氨基酸取代之外与SEQIDNO:16、17、18或20同一的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，本发明所公开的方法利用了包含VL域、基本上由VL域组成或由VL域组成的抗体或其抗原结合片段，所述VL域具有与SEQIDNO:15、19或21至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％同一的氨基酸序列，其中包含所述编码的VL域的抗CXCL13抗体特异性或优先地结合CXCL13。

在某些实施方案中，本发明所公开的方法利用包含以下各项、基本上由以下各项组成或由以下各项组成的抗体或其抗原结合片段：具有SEQIDNO:14中所示的氨基酸序列的VH域以及具有SEQIDNO:19中所示的氨基酸序列的VL域。在这些实施方案中的一些中，所述抗体在它的重链内包含人类IgG1恒定区并且在它的轻链内包含人类κ恒定区。

在具体实施方案中，本发明所公开的方法利用包含以下各项、基本上由以下各项组成或由以下各项组成的抗体或其抗原结合片段：VH域，所述VH域包含具有SEQIDNO:11中所示的氨基酸序列的CDR1、具有SEQIDNO:12中所示的氨基酸序列的CDR2、以及具有SEQIDNO:13中所示的氨基酸序列的CDR3；以及VL域，所述VL域包含具有SEQIDNO:20中所示的氨基酸序列的CDR1、具有SEQIDNO:17中所示的氨基酸序列的CDR2、以及具有SEQIDNO:18中所示的氨基酸序列的CDR3。在这些实施方案中的一些中，所述抗体在它的重链内包含人类IgG1恒定区并且在它的轻链内包含人类κ恒定区。

参考抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体的合适的生物活性变体可以用于本发明所公开的方法中。这些变体将保留亲本抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体的所需的结合特性。用于产生抗体变体的方法一般可在本领域获得。

用于诱变和改变核苷酸序列的方法是本领域公知的。参见例如Walker和Gaastra编著,(1983)《分子生物学技术》(TechniquesinMolecularBiology)(MacMillanPublishingCompany,NewYork)；Kunkel,Proc.Natl.Acad.Sci.USA82:488-492(1985)；Kunkel等人,MethodsEnzymol.154:367-382(1987)；Sambrook等人(1989)《分子克隆：实验室手册》(MolecularCloning:ALaboratoryManual)(ColdSpringHarbor,N.Y.)；美国专利号4,873,192；以及其中所引用的参考文献；以引用的方式并入本文。有关不会影响所关注的多肽的生物活性的适当氨基酸取代的指导可以见于Dayhoff等人(1978),《蛋白质序列和结构图册》(AtlasofProteinSequenceandStructure)(华盛顿特区的国家生物医学研究基金会(Natl.Biomed.Res.Found.,Washington,D.C.)),第345-352页的模型中，该文献以引用的方式整体并入本文。Dayhoff等人的模型使用了可接受点突变(PointAcceptedMutation，PAM)氨基酸相似矩阵(PAM250矩阵)来确定合适的保守氨基酸取代。保守取代，如一个氨基酸与具有相似特性的另一个氨基酸交换可以是优选的。如通过Dayhoff等人模型的PAM250矩阵所教导的保守氨基酸取代的实例包括但不限于 以及

在构建抗CXCL13或抗CXCR5结合分子，例如抗体或其抗原结合片段或所关注的多肽的变体中，进行修饰以使得变体继续具有所需的特性，例如能够特异性结合CXCL13或CXCR5，例如人类、灵长类动物、鼠类或人类和鼠类这两者的CXCL13或CXCR5。显然，在编码变体多肽的DNA中产生的任何突变不得使所述序列处于阅读框外，并且优选地将不产生可能产生二级mRNA结构的互补区。参见例如欧洲专利号EP0075444B1。

用于测量抗CXCL13或抗CXCR5结合分子，例如抗体或其抗原结合片段的结合特异性的方法包括但不限于标准竞争性结合测定法、用于监测T细胞或B细胞的免疫球蛋白分泌的测定法、T细胞增殖测定法、细胞凋亡测定法、ELISA测定法等。参见例如以下文献中所公开的这些测定法：WO93/14125；Shi等人,Immunity13:633-642(2000)；Kumanogoh等人,JImmunol169:1175-1181(2002)；Watanabe等人,JImmunol167:4321-4328(2001)；Wang等人,Blood97:3498-3504(2001)；以及Giraudon等人,JImmunol172(2):1246-1255(2004)，所有这些文献以引用的方式并入本文。

经由在多种免疫细胞(例如B细胞、滤泡辅助性T细胞以及新激活的T细胞)上存在的CXCL13受体，即CXCR5，CXCL13诱导为维持免疫系统稳态、淋巴器官发生、白细胞运输和趋化性迁移以及次级淋巴组织(例如生发中心)的发育所需的细胞内变化。因此，“抗CXCL13活性”或“CXCL13阻断活性”可以包括调节以下与CXCL13相关的活性中的一种或多种的活性：阻断CXCL13与它的受体相互作用、抑制B细胞和滤泡B-辅助性T细胞迁移到发炎的组织中、抑制生发中心形成(例如在自身免疫性疾病的情况下)、抑制次级淋巴滤泡或异位淋巴滤泡；抑制肿瘤疾病中癌细胞增殖和扩散的能力；或与表达CXCL13的细胞相关的任何其它活性。抗CXCL13活性还可以归于与CXCL13表达相关的疾病的发病率或严重程度降低，所述疾病包括但不限于某些类型的自身免疫性疾病(例如多发性硬化、关节炎(例如类风湿性关节炎)、慢性胃炎、胃淋巴瘤、移植排斥反应、舍格伦综合征(SS)、全身性红斑狼疮(SLE)、丙型肝炎病毒感染中的活动性混合型冷球蛋白血症(MC)脉管炎、青少年皮肌炎以及重症肌无力)和某些癌症(例如伯基特氏淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkinlymphoma)、MALT淋巴瘤(例如胃MALT淋巴瘤)、癌瘤(例如结肠癌、前列腺癌、乳腺癌、胃癌、食道癌以及胰腺癌)以及慢性淋巴细胞性白血病(CLL))以及其它炎症性疾病，如螺杆菌感染诱发的炎症性疾病，例如胃炎、溃疡以及胃粘膜病变。

当在本文中论述包括参考多肽的恒定区、CDR、VH域或VL域在内的任何具体多肽是否与另一种多肽具有至少约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或是甚至约100％的同一性时，该同一性％可以使用本领域已知的方法和计算机程序/软件来确定，诸如但不限于BESTFIT程序(威斯康星序列分析包(WisconsinSequenceAnalysisPackage)，用于Unix系统的第8版，威斯康星州麦迪逊科学大道575号大学研究园的遗传学计算机小组(GeneticsComputerGroup,UniversityResearchPark,575ScienceDrive,Madison,Wis.)，邮编53711)。BESTFIT使用了Smith和Waterman(1981)Adv.Appl.Math.2:482-489的局部同源性算法以寻找两个序列之间具有同源性的最佳区段。当使用BESTFIT或任何其它序列比对程序来确定具体序列是否与根据本发明的参考序列具有例如95％同一性时，当然要对参数进行设定以使得在参考多肽序列的全长上计算同一性百分比，以及允许在参考序列中氨基酸总数的最多5％的同源性空位。

出于本发明的目的，可以使用史密斯-沃特曼同源性搜索算法(Smith-Watermanhomologysearchalgorithm)，使用仿射空位搜索，以12分的空位开放罚分和2分的空位延伸罚分、62分的BLOSUM矩阵来确定序列同一性百分比。史密斯-沃特曼同源性搜索算法在Smith和Waterman(1981)Adv.Appl.Math.2:482-489中有教导。变体可以例如与参考抗CXCL13抗体(例如MAb5261、MAb5378、MAb5080、MAb1476或3D2)或抗CXCR5抗体有少到1至15个氨基酸残基、少到1至10个氨基酸残基，如6-10个、少到5个、少至4个、3个、2个或甚至1个氨基酸残基不同。

能够特异性结合CXCL13或CXCR5并且保留所需的CXCL13阻断活性的多肽的精确的化学结构取决于多种因素。由于在分子中存在可离子化的氨基和羧基，因此特定的多肽可以酸盐或碱盐或中性形式获得。在被放置在合适的环境条件中时保留生物活性的所有这样的制剂均被包括在如本文所用的抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体的定义中。此外，多肽的一级氨基酸序列可以通过使用糖部分(糖基化)或通过其它补充性分子，如脂质、磷酸酯、乙酰基等衍生化来扩充。它还可以通过与糖类缀合来扩充。这种扩充的某些方面是经由产生宿主的翻译后加工系统来实现的；可以体外引入其它这类修饰。在任何情况下，这些修饰被包括在本文所使用的抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体的定义中，只要抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体的所需特性没有被破坏即可。预期的是，在各种测定中，这些修饰可以通过提高或降低多肽的活性而定量地或定性地影响活性。此外，链中的单个氨基酸残基可以通过氧化、还原或其它衍生化来修饰，并且多肽可以被切割以获得保留活性的片段。这些不破坏所需特性(例如对CXCL13或CXCR5的结合特异性、结合亲和力和/或CXCL13阻断活性)的变化并没有使多肽序列被排除在如本文所用的所关注的抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体的定义之外。

本领域提供了大量关于制备和使用多肽变体的指导。在制备抗CXCL13或抗CXCR5结合分子，例如抗体或其抗原结合片段、变体中，本领域技术人员可以容易地确定对原生蛋白质的核苷酸或氨基酸序列进行的哪些修饰将产生适于用作本发明的方法中所用的药物组合物的治疗活性组分的变体。

参考抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体的恒定区可以多种方式发生突变以改变效应功能。举例来说，参见美国专利号6,737,056B1和美国专利申请公开号2004/0132101A1，它们公开了优化了抗体与Fc受体的结合的Fc突变。

在某些抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体中，可以使用本领域已知的技术使Fc部分突变以减少效应功能。举例来说，恒定区结构域的缺失或失活(经由点突变或其它手段)可以减少循环修饰抗体的Fc受体结合，从而提高肿瘤定位。在其它情况下，与本发明相一致的恒定区修饰可以减少补体结合并且因此缩短缀合的细胞毒素的血清半衰期并减少它的非特异性缔合。可以使用恒定区的另外的其它修饰来修饰二硫键或低聚糖部分，从而允许由于抗原特异性或抗体灵活性增加而提高定位。修饰所产生的生理学特征、生物利用度以及其它生化作用，如肿瘤定位、生物分布以及血清半衰期可以容易地使用公知的免疫学技术来测量和定量而无需过多的实验。

一般来说，可用于本发明所公开的方法中的CXCR5结合分子不激活CXCR5受体(即不是该受体的激动剂)。

“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被具有带相似电荷的侧链的氨基酸残基所置换的氨基酸取代。具有带相似电荷的侧链的氨基酸残基的家族在本领域中已加以定义。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、具有β-分支侧链的氨基酸(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)以及具有芳族侧链的氨基酸(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。或者，可以沿着编码序列的全部或一部分，如通过饱和诱变随机地引入突变，并且可以针对生物活性对所得的突变体进行筛选以鉴定保留活性(例如对CXCL13或CXCR5的结合特异性、结合亲和力和/或CXCL13阻断活性)的突变体。

举例来说，有可能仅在抗体分子的框架区中或仅在抗体分子的CDR区中引入突变。所引入的突变可以是沉默或中性错义突变，即对抗体结合抗原的能力没有影响或影响很小。这些类型的突变可用于优化密码子使用，或提高杂交瘤的抗体产生。或者，非中性错义突变可以改变抗体结合抗原的能力。大部分沉默和中性错义突变的位置有可能位于框架区内，而大部分非中性错义突变的位置有可能在CDR内，但这不是绝对要求。本领域技术人员将能够设计和测试具有所需特性，如抗原结合活性没有改变或结合活性有改变(例如抗原结合活性提高或抗体特异性变化)的突变型分子。在诱变后，编码蛋白可以常规方式表达，并且编码蛋白的功能活性和/或生物活性(例如免疫特异性结合CXCL13多肽或CXCR5多肽的至少一个表位的能力)可以使用本文所述的技术或通过本领域已知的常规修饰技术来测定。

在某些实施方案中，可用于本发明所公开的方法中的抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体与参考抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体相比包含至少一个优化的互补决定区(CDR)。“优化的CDR”意指已经对CDR进行修饰并且基于向包含优化的CDR的抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体所赋予的维持的或提高的结合亲和力和/或抗CXCL13活性来选择优化序列。

如本文别处所更详细地论述，抗CXCL13或抗CXCR5结合分子或可溶性CXCR5可以进一步在N末端或C末端处与异源多肽以重组方式融合或与多肽或其它组合物化学缀合(包括共价缀合和非共价缀合)。举例来说，抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体或可溶性CXCR5可以与可用作检测测定中的标记的分子以及效应分子(如异源多肽、药物、放射性核素、或毒素)以重组方式融合或缀合。参见例如PCT公开WO92/08495；WO91/14438；WO89/12624；美国专利号5,314,995；以及EP396,387。

如本文所用的术语“连接”、“融合(fused)”或“融合(fusion)”可互换使用。这些术语指的是通过包括化学缀合或重组手段在内的任何手段将两个或更多个元件或组分连接在一起。“框内融合”指的是两个或更多个多核苷酸开放阅读框(ORF)以维持原始ORF的正确翻译阅读框的方式连接形成连续的更长的ORF。因此，重组融合蛋白是含有对应于由原始ORF所编码的多肽的两个或更多个区段(这些区段在自然界中通常不是这样连接的)的单个蛋白。尽管因此使得阅读框在整个融合区段中是连续的，但是这些区段可以由例如框内接头序列在物理或空间上隔开。举例来说，编码免疫球蛋白可变区CDR的多核苷酸可以在框内融合，但由编码至少一个免疫球蛋白框架区或另外的CDR区的多核苷酸隔开，只要“融合的”CDR被共同翻译成连续多肽的一部分即可。

可用于本发明所公开的方法中的抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体可以包括经过修饰的衍生物，即通过使任何类型的分子与抗体进行共价连接以使得该共价连接不会阻止抗体结合CXCL13或CXCR5来修饰。举例来说但不是以限制的方式，抗体衍生物包括已经例如通过糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、由已知的保护基/阻隔基衍生化、蛋白水解切割、与细胞配体或其它蛋白质连接等修饰的抗体。许多化学修饰中的任一种可以通过已知的技术来进行，包括但不限于特异性化学切割、乙酰化、甲酰化等。此外，所述衍生物可以含有一种或多种非经典氨基酸。

抗CXCL13或抗CXCR5结合分子，例如抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物可以由通过肽键或修饰的肽键(即肽电子等排体)而彼此连接的氨基酸构成，并且可以含有除20种基因编码氨基酸以外的氨基酸。举例来说，抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体可以通过自然过程，如翻译后加工，或通过本领域公知的化学修饰技术来修饰。这些修饰充分地描述于基础教科书和更详细的专题论文以及大量的研究文献中。修饰可以存在于抗CXCL13或抗CXCR5结合分子中的任何地方，包括肽骨架、氨基酸侧链以及氨基末端或羧基末端、或诸如碳水化合物之类的部分上。将了解的是，相同类型的修饰可以在相同或不同的程度上存在于给定抗CXCL13或抗CXCR5结合分子中的若干个位点上。并且，给定的抗CXCL13或抗CXCR5结合分子可以含有许多类型的修饰。抗CXCL13或抗CXCR5结合分子可以例如由于泛素化而是分支的，并且它们可以是环状的而存在或不存在分支。环状的、分支的以及分支环状的抗CXCL13或抗CXCR5结合分子可以由翻译后自然过程产生或可以通过合成方法来制备。修饰包括乙酰化、酰化、ADP-核糖基化、酰胺化、共价连接黄素、共价连接血红素部分、共价连接核苷酸或核苷酸衍生物、共价连接脂质或脂质衍生物、共价连接磷脂酰肌醇、交联、环化、二硫键形成、去甲基化、形成共价交联、形成半胱氨酸、形成焦谷氨酸、甲酰化、γ-羧化、糖基化、GPI锚形成、羟基化、碘化、甲基化、豆蔻酰化、氧化、聚乙二醇化、蛋白水解加工、磷酸化、异戊二烯化、外消旋化、硒化、硫酸化、转移RNA介导的氨基酸加入到蛋白质中(如精氨酰化)以及泛素化。(参见例如《蛋白质——结构和分子特性》(Proteins--StructureandMolecularProperties),T.E.Creighton,W.H.FreemanandCompany,NY；第2版(1993)；Johnson编著(1983)《蛋白质的翻译后共价修饰》(PosttranslationalCovalentModificationofProteins)(AcademicPress,NY),第1-12页；Seifter等人,Meth.Enzymol.182:626-646(1990)；Rattan等人,Ann.NYAcad.Sci.663:48-62(1992))。

本发明所公开的方法涵盖了使用融合蛋白，所述融合蛋白包含抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体、或其抗原结合片段、变体或衍生物以及异源多肽。与抗体融合的异源多肽可能可用于靶向表达抗CXCL13或抗CXCR5多肽的细胞的功能或可用于靶向表达抗CXCL13或抗CXCR5多肽的细胞。

在一个实施方案中，可用于本发明所公开的方法中的融合蛋白包含如下的多肽、基本上由如下的多肽组成或由如下的多肽组成，所述多肽具有抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体的VH域中的任何一个或多个的氨基酸序列或抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体或其片段或变体的VL域中的任何一个或多个的氨基酸序列以及异源多肽序列。

在另一个实施方案中，用于本文所公开的治疗方法中的融合蛋白包含如下的多肽、基本上由如下的多肽组成或由如下的多肽组成，所述多肽具有抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体或其片段、变体或衍生物的VH域的CDR中的任何一个、两个、三个的氨基酸序列和/或抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体、或其片段、变体或衍生物的VL域的CDR中的任何一个、两个、三个的氨基酸序列以及异源多肽序列。在一些实施方案中，融合蛋白的VH域和VL域对应于特异性结合CXCL13或CXCR5的至少一个表位的单一来源抗体(或scFv或Fab片段)。在一些实施方案中，VH域或VL域的两个、三个、四个、五个、六个或更多个CDR对应于单一来源抗体(或scFv或Fab片段)。

在文献中所报道的示例性融合蛋白包括以下各项的融合体：T细胞受体(Gascoigne等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA84:2936-2940(1987))；CD4(Capon等人,Nature337:525-531(1989)；Traunecker等人,Nature339:68-70(1989)；Zettmeissl等人,DNACellBiol.USA9:347-353(1990)；以及Byrn等人,Nature344:667-670(1990))；L-选择素(归巢受体)(Watson等人,J.Cel.Biol.110:2221-2229(1990)；以及Watson等人,Nature349:164-167(1991))；CD44(Aruffo等人,Cell61:1303-1313(1990))；CD28和B7(Linsley等人,J.Exp.Med.173:721-730(1991))；CTLA-4(Lisley等人,J.Exp.Med.174:561-569(1991))；CD22(Stamenkovic等人,Cell66:1133-1144(1991))；TNF受体(Ashkenazi等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:10535-10539(1991)；Lesslauer等人,Eur.J.Immunol.27:2883-2886(1991)；以及Peppel等人,J.Exp.Med.174:1483-1489(1991))；以及IgE受体α(Ridgway和Gorman,J.Cell.Biol.第115卷,摘要第1448号(1991))。

如本文别处所论述，抗CXCL13或抗CXCR5结合分子，例如抗体、或其抗原结合片段、变体或衍生物可以使用本领域已知的方法与异源多肽融合以延长所述多肽的体内半衰期或用于免疫测定法中。举例来说，在一个实施方案中，PEG可以与抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体缀合以延长它们的体内半衰期。参见Leong等人,Cytokine16:106(2001)；Adv.inDrugDeliv.Rev.54:531(2002)；或Weir等人,Biochem.Soc.Transactions30:512(2002)。

此外，抗CXCL13或抗CXCR5结合分子，例如抗体、或其抗原结合片段、变体或衍生物可以与标记序列，如肽融合以促进对它们的纯化或检测。在某些实施方案中，标记氨基酸序列是六组氨酸肽，如pQE载体(快而精公司(QIAGEN,Inc.)，加利福尼亚州查茨沃斯伊顿大街9259号(9259EtonAvenue,Chatsworth,Calif.)，邮编91311)中所提供的标签等等，其中有许多是可商购获得的。如Gentz等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:821-824(1989)中所述，例如，六组氨酸提供了对融合蛋白适当的纯化。可用于纯化的其它肽标签包括但不限于“HA”标签，它对应于源自于流感血凝素蛋白的表位(Wilson等人,Cell37:767(1984))；以及“flag”标签。

融合蛋白可以使用本领域公知的方法来制备(参见例如美国专利号5,116,964和5,225,538)。进行融合的精确位点可以凭经验来选择以优化融合蛋白的分泌或结合特征。然后将编码融合蛋白的DNA转染到宿主细胞中以进行表达。

抗CXCL13和抗CXCR5结合分子，例如抗体、或其抗原结合片段、变体或衍生物可以非缀合形式使用或可以与多种分子中的至少一种缀合，例如以改进分子的治疗特性、以促进靶标检测、或用于对患者进行成像或治疗。抗CXCL13或抗CXCR5结合分子，例如抗体、或其抗原结合片段、变体或衍生物可以在纯化之前或之后或者在进行纯化时被标记或缀合。

具体来说，抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体、或其抗原结合片段、变体或衍生物可以与治疗剂、前药、肽、蛋白质、酶、病毒、脂质、生物反应调节剂、药剂或PEG缀合。

本领域技术人员将了解的是，缀合物还可以使用多种技术来组装，这取决于待缀合的所选药剂。举例来说，例如通过使结合多肽与生物素的活化酯，如生物素N-羟基丁二酰亚胺酯反应来制备与生物素的缀合物。类似地，可以在偶合剂，例如本文所列的那些偶合剂存在下，或通过与异硫氰酸酯，优选地荧光素-异硫氰酸酯反应来制备与荧光标记物的缀合物。以类似的方式制备抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体、或其抗原结合片段、变体或衍生物的缀合物。

抗CXCL13或抗CXCR5结合分子，例如抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物可以与治疗性部分，如细胞毒素、治疗剂或放射性金属离子缀合。细胞毒素或细胞毒性剂包括对细胞有害的任何药剂。

用于使各种部分与抗体，例如抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物缀合的技术是公知的，参见例如Amon等人(1985)“癌症疗法中用于药物的免疫靶向的单克隆抗体(MonoclonalAntibodiesforImmunotargetingofDrugsinCancerTherapy)”,《单克隆抗体和癌症疗法》(MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy),Reisfeld等人编著(AlanR.Liss,Inc.),第243-56页；Hellstrom等人(1987)“用于药物递送的抗体(AntibodiesforDrugDelivery)”,《受控药物递送》(ControlledDrugDelivery),Robinson等人编著(第2版；MarcelDekker,Inc.),第623-53页；Thorpe(1985)“癌症疗法中细胞毒性剂的抗体载体：综述(AntibodyCarriersofCytotoxicAgentsinCancerTherapy:AReview)”,《单克隆抗体'84：生物学和临床应用》(MonoclonalAntibodies'84:BiologicalandClinicalApplications),Pinchera等人编著,第475-506页；“癌症疗法中放射性标记的抗体的治疗性使用的分析、结果以及未来前景(Analysis,Results,andFutureProspectiveoftheTherapeuticUseofRadiolabeledAntibodyinCancerTherapy)”,《用于癌症检测和治疗的单克隆抗体》(MonoclonalAntibodiesforCancerDetectionandTherapy),Baldwin等人编著,AcademicPress,第303-16页(1985)；以及Thorpe等人,Immunol.Rev.62:119-58(1982)。

制备和向有需要的受试者施用抑制CXCL13活性的药剂(例如抗CXCL13或抗CXCR5结合分子)的方法是本领域技术人员公知的或容易由本领域技术人员确定。抑制CXCL13活性的药剂(例如抗CXCL13或抗CXCR5结合分子)的施用途径可以是例如口服、肠胃外、通过吸入或局部施用。如本文所用的术语肠胃外包括例如静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、皮下、经直肠、或经阴道施用。虽然所有这些施用形式均明确地被考虑落入本发明的范围内，但是施用形式的实例将是用于注射，特别是用于静脉内或动脉内注射或滴注的溶液。通常，用于注射的合适的药物组合物可以包含缓冲剂(例如乙酸盐、磷酸盐或柠檬酸盐缓冲剂)、表面活性剂(例如聚山梨醇酯)、任选的稳定剂(例如人白蛋白)等。然而，在与本文的教导相容的其它方法中，抑制CXCL13活性的药剂(例如抗CXCL13或抗CXCR5结合分子)可以被直接递送到不良细胞群体的部位，从而提高病变组织对治疗剂的暴露。

如本文所论述，抑制CXCL13活性的药剂(例如抗CXCL13或抗CXCR5结合分子)可以药学有效量施用以在体内治疗炎症性病症以及提高IgA的水平。在这方面，将了解的是，抑制CXCL13活性的药剂将被配制以有助于活性剂的施用以及促进它的稳定性。在某些实施方案中，根据本发明的药物组合物包含药学上可接受的无毒的无菌载体，如生理盐水、无毒缓冲剂、防腐剂等。出于本申请的目的，抑制CXCL13活性的药剂(例如抗CXCL13或抗CXCR5结合分子)的药学有效量应当用以意指足以实现与靶标的有效结合以及足以实现益处，例如改善疾病或病症的症状或检测物质或细胞的量。

用于本发明中的药物组合物包含药学上可接受的载体，包括例如离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白如人血清白蛋白、缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶态二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇以及羊毛脂。

用于肠胃外施用的制剂包括无菌水性或非水性溶液、悬浮液以及乳液。非水性溶剂的实例是丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油，以及可注射的有机酯如油酸乙酯。水性载体包括例如水、醇性/水性溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。在本发明中，药学上可接受的载体包括但不限于0.01M-0.1M，例如0.05M磷酸盐缓冲液或0.8％盐水。其它常见的肠胃外媒介物包括磷酸钠溶液、林格氏右旋糖(Ringer'sdextrose)、右旋糖以及氯化钠、乳酸林格氏液(lactatedRinger's)或不挥发性油。静脉内媒介物包括体液和营养补充剂、电解质补充剂(如基于林格氏右旋糖的那些)等。还可以存在防腐剂和其它添加剂，例如像抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂以及惰性气体等。

更具体地说，适合于注射使用的药物组合物包括无菌水溶液(在具有水溶性的情况下)或分散液以及用于临时制备无菌注射溶液或分散液的无菌粉末。在这些情况下，所述组合物必须是无菌的并且应当是流体以达到存在易注射性的程度。它在制造和储存的条件下应当是稳定的并且将优选地经过防腐处理以防止微生物(如细菌和真菌)的污染作用。载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇以及液体聚乙二醇等)以及其合适的混合物的溶剂或分散介质。可以例如通过使用如卵磷脂的包衣、在分散液的情况下通过维持所需的粒度以及通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。用于本文所公开的治疗方法中的合适的制剂描述于《雷明顿药物科学》(Remington'sPharmaceuticalSciences)，马克出版公司(MackPublishingCo.)，第16版(1980)中。

可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等来实现对微生物作用的预防。在某些情况下，将优选的是，在组合物中包括等渗剂，例如糖、多元醇，如甘露醇、山梨糖醇、或氯化钠。可以通过在组合物中包括延迟吸收剂(例如单硬脂酸铝和明胶)来使可注射组合物的吸收延长。

在任何情况下，可以通过将活性化合物(例如抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体、或其抗原结合片段、变体或衍生物单独或与其它活性剂的组合)以所需量连同本文所列的成分中的一种或组合一起并入适当的溶剂中，在必要时继而进行过滤灭菌来制备无菌可注射溶液。一般来说，通过将活性化合物并入到无菌媒介物中来制备分散液，所述无菌媒介物含有基本分散介质和上文所列的那些成分中的所需的其它成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，所述方法产生活性成分加上来自其先前无菌过滤的溶液的任何另外的所需成分的粉末。注射用制剂在无菌条件下根据本领域已知的方法被加工，填充到容器，如安瓿、袋、瓶、注射器或小瓶中，并且密封。此外，所述制剂可以试剂盒的形式被包装和出售，如美国专利申请序列号09/259,337中所述的那些。这些制品将优选地具有标签或药品说明书，表明相关的组合物可用于治疗患有或易患疾病或病症的受试者。

肠胃外制剂可以是单次推注剂量、输注或负荷推注剂量，继而是维持剂量。这些组合物可以特定的固定时间间隔或可变时间间隔施用，例如每天一次，或“按需”施用。

用于本发明中的某些药物组合物可以可接受的剂型口服施用，所述剂型包括例如胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。某些药物组合物还可以通过鼻气溶胶或吸入来施用。这些组合物可以在盐水中利用苯甲醇或其它合适的防腐剂、提高生物利用度的吸收促进剂和/或其它常规的增溶剂或分散剂而制备成溶液。

可以与载体材料组合以产生单一剂型的抑制CXCL13活性的药剂(例如抗CXCL13或抗CXCR5结合分子)的量将不同，这取决于所治疗的宿主以及具体的施用方式。所述组合物可以作为单次剂量、多次剂量或在确定时间段内通过输注施用。还可以调整给药方案以提供最佳的所需反应(例如治疗性或防治性反应)。

在符合本公开的范围的情况下，抑制CXCL13活性的药剂(例如抗CXCL13抗体、或其抗原结合片段、变体或衍生物)可以根据上述治疗方法以足以产生治疗作用的量向人类或其它动物施用。抑制CXCL13活性的药剂(例如抗CXCL13抗体或抗CXCR5抗体、或其抗原结合片段、变体或衍生物)可以常规的剂型向所述人类或其它动物施用，所述常规的剂型是通过根据已知的技术将活性剂与常规的药学上可接受的载体或稀释剂组合来制备的。本领域技术人员将认识到的是，药学上可接受的载体或稀释剂的形式和特征由待与它组合的活性成分的量、施用途径以及其它公知的变量决定。本领域技术人员将进一步了解的是，包含一种或多种抑制CXCL13活性的药剂(例如抗CXCL13或抗CXCR5结合分子)的混合液可以被证明是特别有效的。

“治疗有效剂量或治疗有效量”或“有效量”意指抑制CXCL13活性的药剂(例如抗CXCL13或抗CXCR5结合分子)在施用时产生积极的治疗反应以治疗患有待治疗的疾病的患者的量。

抑制CXCL13活性的药剂治疗炎症性病症以及提高IgA水平的治疗有效剂量取决于许多不同的因素而不同，包括施用手段、靶标部位、患者的生理状态、患者是人类还是动物、所施用的其它药物以及治疗是防治性的还是治疗性的。通常，患者是人类，但也可以治疗非人类哺乳动物，包括转基因哺乳动物。可以使用本领域技术人员已知的常规方法对治疗剂量进行滴定以优化安全性和功效。

鉴于本发明的公开内容，待施用的抑制CXCL13活性的至少一种药剂(例如抗CXCL13或抗CXCR5结合分子)的量容易由本领域的普通技术人员来确定而无需过多的实验。影响抑制CXCL13活性的至少一种药剂(例如抗CXCL13或抗CXCR5结合分子)的施用方式和对应的量的因素包括但不限于疾病的严重程度、疾病的病史以及接受治疗的个体的年龄、身高、体重、健康情况以及身体状况。类似地，待施用的抑制CXCL13活性的药剂(例如抗CXCL13或抗CXCR5结合分子)的量将取决于施用方式以及受试者将接受这种药剂的单次给药还是多次给药。

在一些实施方案中，所施用的抑制CXCL13活性的药剂(例如抗CXCL13或抗CXCR5结合分子)的剂量在约0.1mg/kg至约100mg/kg的范围内，包括但不限于约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1mg/kg、约1.5mg/kg、约2mg/kg、约2.5mg/kg、约3mg/kg、约3.5mg/kg、约4mg/kg、约4.5mg/kg、约5mg/kg、约5.5mg/kg、约6mg/kg、约6.5mg/kg、约7mg/kg、约7.5mg/kg、约8mg/kg、约8.5mg/kg、约9mg/kg、约9.5mg/kg以及约10mg/kg。在某些实施方案中，所施用的剂量在约1mg/kg至约10mg/kg的范围内。在具体实施方案中，向有需要的受试者施用约4mg/kg至约5mg/kg的抑制CXCL13活性的药剂(例如抗CXCL13或抗CXCR5结合分子)。在这些实施方案中的一些中，经由腹膜内注射施用所述药剂。

本发明还提供了抑制CXCL13活性的药剂(例如抗CXCL13或抗CXCR5结合分子)制造用于治疗炎症性病症以及用于提高IgA水平的药物的用途。

除非另外指示，否则本发明的实施将利用细胞生物学、细胞培养、分子生物学、转基因生物学、微生物学、重组DNA以及免疫学的常规技术，这些技术在本领域的技术范围内。这些技术充分阐述于文献中。参见例如Sambrook等人编著,(1989)《分子克隆：实验室手册》(MolecularCloningALaboratoryManual)(第2版；ColdSpringHarborLaboratoryPress)；Sambrook等人编著,(1992)《分子克隆：实验室手册》(MolecularCloning:ALaboratoryManual),(ColdSpringsHarborLaboratory,NY)；D.N.Glover编著,(1985)《DNA克隆》(DNACloning),第I和II卷；Gait编著,(1984)《寡核苷酸合成》(OligonucleotideSynthesis)；Mullis等人的美国专利号4,683,195；Hames和Higgins编著,(1984)《核酸杂交》(NucleicAcidHybridization)；Hames和Higgins编著,(1984)《转录与翻译》(TranscriptionAndTranslation)；Freshney(1987)《动物细胞培养》(CultureOfAnimalCells)(AlanR.Liss,Inc.)；《固定的细胞和酶》(ImmobilizedCellsAndEnzymes)(IRLPress)(1986)；Perbal(1984),《分子克隆实践指南》(APracticalGuideToMolecularCloning)；论文《酶学方法》(MethodsInEnzymology)(AcademicPress,Inc.,N.Y.)；Miller和Calos编著(1987)《用于哺乳动物细胞的基因转移载体》(GeneTransferVectorsForMammalianCells),(ColdSpringHarborLaboratory)；Wu等人编著,《酶学方法》(MethodsInEnzymology),第154和155卷；Mayer和Walker编著,(1987)《细胞和分子生物学的免疫化学方法》(ImmunochemicalMethodsInCellAndMolecularBiology)(AcademicPress,London)；Weir和Blackwell编著,(1986)《实验免疫学手册》(HandbookOfExperimentalImmunology),第I-IV卷；《小鼠胚胎操作》(ManipulatingtheMouseEmbryo),ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.,(1986)；以及Ausubel等人(1989)《最新分子生物学实验方法汇编》(CurrentProtocolsinMolecularBiology)(JohnWileyandSons,Baltimore,Md.)。

抗体工程化的一般原理阐述于Borrebaeck编著,(1995)《抗体工程化》(AntibodyEngineering)(第2版；OxfordUniv.Press)中。蛋白质工程化的一般原理阐述于Rickwood等人编著.(1995)《蛋白质工程化：实践方法》(ProteinEngineering,APracticalApproach)(英国牛津的牛津大学出版社的IRL出版公司(IRLPress,OxfordUniv.Press,Oxford,Eng.))中。抗体和抗体-半抗原结合的一般原理阐述于以下文献中：Nisonoff(1984)《分子免疫学》(MolecularImmunology)(第2版；SinauerAssociates,Sunderland,Mass.)；以及Steward(1984)《抗体、它们的结构和功能》(Antibodies,TheirStructureandFunction)(ChapmanandHall,NewYork,N.Y.)。此外，一般遵循本领域已知的并且没有具体描述的标准免疫学方法，如以下文献中所述：《最新免疫学实验方法汇编》(CurrentProtocolsinImmunology),JohnWiley&Sons,NewYork；Stites等人编著(1994)《基础和临床免疫学》(BasicandClinicalImmunology)(第8版；Appleton&Lange,Norwalk,Conn.)；以及Mishell和Shiigi(编著)(1980)《细胞免疫学精选方法》(MethodsinCellularImmunology)(W.H.FreemanandCo.,NY)。

阐述免疫学的一般原理的标准参考书包括《最新免疫学实验方法汇编》(CurrentProtocolsinImmunology),JohnWiley&Sons,NewYork；Klein(1982)J.,《免疫学：自身-非自身区分的科学》(Immunology:TheScienceofSelf-NonselfDiscrimination)(JohnWiley&Sons,NY)；Kennett等人编著,(1980)《单克隆抗体、杂交瘤：生物学分析的新领域》(MonoclonalAntibodies,Hybridoma:ANewDimensioninBiologicalAnalyses)(PlenumPress,NY)；Campbell(1984)“单克隆抗体技术(MonoclonalAntibodyTechnology)”,《生化和分子生物学实验室技术》(LaboratoryTechniquesinBiochemistryandMolecularBiology),Burden等人编著,(Elsevere,Amsterdam)；Goldsby等人编著,(2000)《库比免疫学》(KubyImmunnology)(第4版；H.Freemand&Co.)；Roitt等人(2001)《免疫学》(Immunology)(第6版；London:Mosby)；Abbas等人(2005)《细胞和分子免疫学》(CellularandMolecularImmunology)(第5版；ElsevierHealthSciencesDivision)；Kontermann和Dubel(2001)《抗体工程化》(AntibodyEngineering)(SpringerVerlan)；Sambrook和Russell(2001)《分子克隆：实验室手册》(MolecularCloning:ALaboratoryManual)(ColdSpringHarborPress)；Lewin(2003)《基因VIII》(GenesVIII)(PrenticeHall2003)；Harlow和Lane(1988)《抗体：实验室手册》(Antibodies:ALaboratoryManual)(ColdSpringHarborPress)；Dieffenbach和Dveksler(2003)《PCR入门》(PCRPrimer)(ColdSpringHarborPress)。

要指出的是，术语“一个(种)(a/an)”实体指的是一个(种)或多个(种)该实体；例如，“抗CXCL13抗体”被理解成表示一种或多种抗CXCL13抗体。因而，术语“一个(种)(a/an)”、“一个(种)或多个(种)”以及“至少一个(种)”在本文中可互换使用。

本文所使用的所有技术和科学术语具有相同的含义。已经努力确保所用数字(例如量、温度等)的准确度，但应当考虑到一些实验误差和偏差。

在整个本说明书和权利要求书中，除非上下文另有要求，否则词语“包含(comprise)”、“包含(comprises)”以及“包含(comprising)”在非排他性意义上使用。

如本文所用的术语“约”在提到值时意指涵盖相对于规定量在一些实施方案中有±50％、在一些实施方案中有±20％、在一些实施方案中有±10％、在一些实施方案中有±5％、在一些实施方案中有±1％、在一些实施方案中有±0.5％以及在一些实施方案中有±0.1％的变化，这是因为这样的变化对于执行所公开的方法或利用所公开的组合物来说是适当的。

在提供值的范围的情况下，应当了解的是，除非上下文另外明确规定，否则所述范围的上限和下限以及该所述范围中的任何其它所述值或中间值之间的直到下限单位的十分之一的每一个中间值均被涵盖在本发明内。可以独立地被包括在较小范围内的这些小范围的上限和下限也被涵盖在本发明内，受限于所述范围中任何具体排除的限值。在所述范围包括这些限值中的一个或两个的情况下，不包括那些所包括的限值中的任何一个或两个的范围也被包括在本发明中。

以说明的方式而不是以限制的方式提供以下实施例。

实验

实施例1：在螺杆菌感染小鼠模型中评价抗CXCL13抗体

螺杆菌感染鼠类模型：诸如海尔曼螺杆菌和幽门螺杆菌之类的螺杆菌属菌种诱发患者的胃MALT淋巴瘤。螺杆菌诱发的胃淋巴滤泡的小鼠模型描述在Nobutani等人(2010)FEMSImmunolMedMicrobiol60:156-164中，该文献以引用的方式整体并入本文。在本文使用Nobutani等人的小鼠模型以测试抗CXCL13抗体降低该组织中的感染负荷的作用，所述感染负荷意指细菌的滴度。使C57BL/6J小鼠(n＝5)经口感染猪螺杆菌。从感染后的一周开始，小鼠每周一次接受0.6mg(腹膜内)同种型抗体对照(MAb2510)或抗CXCL13抗体(MAb5378)，持续十二周。

在猪螺杆菌感染后的十二周时，将小鼠处死。通过PCR评价来自小鼠的胃样品中作为猪螺杆菌感染的相对水平的量度的猪螺杆菌特异性16srRNA基因的表达。猪螺杆菌特异性16srRNA基因PCR引物显示如下：

F：5'-TTGGGAGGCTTTGTCTTTCCA-3'(SEQIDNO:22)

R：5'-GATTAGCTCTGCCTCGCGGCT-3'(SEQIDNO:23)

PCR扩增反应涉及1×反应缓冲液[20mMTris/HCl(pH8.0)、100mMKCl、0.1mMEDTA、1mMDTT、0.5％Tween-20、0.5％诺乃(Nonidet)P40以及50％甘油]，所述缓冲液在50μl的最终体积中含有1单位的TaqDNA聚合酶(日本大阪的东洋纺株式会社(TOYOBO,Osaka,Japan))；10nmol的每一种三磷酸脱氧核苷酸；10pmol的每一种寡核苷酸引物；以及1μl的稀释了的DNA，所述稀释了的DNA是通过以约20-100ng/μl的DNA浓度1:10稀释原始样品而制得。16srRNA反应的循环条件涉及94℃持续30秒、56℃持续30秒以及72℃持续30秒的35个循环。

抗CXCL13抗体降低受螺杆菌感染的小鼠的滴度。通过实时定量PCR测定在接受抗CXCL13抗体或同种型对照抗体处理的受猪螺杆菌感染的小鼠的胃粘膜中猪螺杆菌的相对数目。图1中的这些结果显示在接受抗CXCL13抗体处理的受感染的小鼠的胃中猪螺杆菌的滴度降低。

抗CXCL13抗体诱导受猪螺杆菌感染的小鼠的胃淋巴滤泡中的TGF-β和IL-6。通过逆转录PCR测定受猪螺杆菌感染的小鼠在接受同种型对照或抗CXCL13抗体(mAb5378)处理之后胃粘膜中TGF-β和IL-6mRNA的mRNA表达水平。将胃的粘膜层和粘膜下层从肌层和浆膜层中取出，然后用1mlTRIZOL试剂(英杰公司(Invitrogen))匀浆。根据制造商的说明书从匀浆中提取RNA。使用高容量cDNA逆转录试剂盒(HighCapacitycDNAReverseTranscriptionKit)(加利福尼亚州福斯特城的应用生物系统公司(AppliedBiosystems,FosterCity,CA))，根据制造商的方案对RNA进行逆转录反应，并且使用PowerSYBR绿色PCR主混合物(PowerSYBRGreenPCRMasterMix)(应用生物系统公司)根据制造商的说明书进行定量PCR。为了允许对RNA表达水平进行相对比较，将来自定量PCR的数据针对作为内源性对照的β-肌动蛋白cDNA的量归一化。用于定量PCR的特异性引物对(日本札幌的北海道系统科学有限公司(HokkaidoSystemScienceCo.Ltd.,Sapporo,Japan))如下：

TGF-β正义引物：5'-TCTTGGTCCAGATCACAACTTCA-3'(SEQIDNO:24)

TGF-β反义引物：5'-CACTGATACGCCTGAGTGR-3'(SEQIDNO:25)

IL-6正义引物：5'-GTGAGCGCTGAATCGAAA-3'(SEQIDNO:26)

IL-6反义引物：5'-GAGGATACCACTCCCAACAGACC-3'(SEQIDNO:27)

β-肌动蛋白正义引物：5'-ATCACTGACGCTGATTGCAC-3'(SEQIDNO:28)

β-肌动蛋白反义引物：5'-AAGGCCAACCGTGAAAAGAT-3'(SEQIDNO:29)

定量实时PCR涉及将胃的粘膜层和粘膜下层用1ml的TRIZOL试剂(英杰公司)匀浆，并且根据制造商的说明书从匀浆中提取RNA。然后使用高容量cDNA逆转录试剂盒(加利福尼亚州福斯特城的应用生物科学公司)，根据制造商的说明书对RNA进行逆转录反应，并且使用PowerSYBR绿色PCR主混合物(加利福尼亚州福斯特城的应用生物科学公司)和ABIPrism7500实时PCR系统(加利福尼亚州福斯特城的应用生物科学公司)根据制造商的说明书进行定量实时PCR。为了允许对RNA表达水平进行相对比较，将来自实时PCR的数据针对作为内源性对照的β-肌动蛋白cDNA的量归一化。

图2A和2B分别示出了受猪螺杆菌感染的小鼠在接受同种型对照或抗CXCL13抗体(MAb5378)处理之后胃中TGF-β和IL-6mRNA的表达。这些结果显示与接受同种型对照处理的小鼠和未受感染的小鼠相比，接受抗CXCL13抗体处理的受猪螺杆菌感染的小鼠的TGF-β和IL-6这两者的mRNA的表达显著增加。有趣的是，未受感染的小鼠的胃中TGF-β和IL-6的表达水平也由抗CXCL13抗体(MAb5378)处理显著诱导(数据未示)。

由于TGF-β和IL-6可以提高IgA的表达，因此这些结果表明在受猪螺杆菌感染的小鼠的胃中，猪螺杆菌特异性IgA可以通过抗CXCL13抗体处理而上调。因此，使用抗CXCL13抗体对受猪螺杆菌感染的小鼠进行处理可能引起对猪螺杆菌定殖的抑制，所述抑制是通过激活TGF-β和IL-6依赖性途径来诱导猪螺杆菌特异性IgA来实现的。

抗CXCL13抗体处理提高受螺杆菌感染的小鼠的胃淋巴滤泡中IgA的分泌。在猪螺杆菌感染后三个月时切除小鼠的胃并且在胃大弯处打开。来自未受感染的野生型小鼠、接受同种型对照和接受抗CXCL13抗体(MAb5378)处理的小鼠的胃样品中IgA和肌动蛋白的免疫荧光染色(数据未示)显示与对照处理相比，接受抗CXCL13抗体处理的受猪螺杆菌感染的小鼠的胃淋巴滤泡中IgA分泌增加。

在猪螺杆菌感染后小鼠的血清和胃液中抗猪螺杆菌特异性IgG和IgA的水平。为了检测血清和胃液中的猪螺杆菌特异性IgG，将胃液在4℃以16,000×g离心5分钟，并且收集所得上清液。通过在4℃以15,000×g离心10分钟从血液中分离血清。将九十六孔培养板在4℃用含有100μg/ml幽门螺杆菌裂解物的100μl碳酸氢盐溶液(pH9.6)涂覆过夜，并且通过在37℃添加含1.5％(重量/体积)BSA的PBS，持续1小时来封闭。将分别1:200和1:15稀释的血清和胃液添加到培养板中，继而添加100μl在含有0.2％(重量/体积)BSA的PBST中1:5.000稀释的与HRP缀合的山羊抗小鼠IgG抗体(加利福尼亚州赫拉克勒斯的伯乐实验室公司(Bio-RadLaboratories,Hercules,CA))和抗小鼠IgA。通过添加邻苯二胺底物来检测结合的抗体，并且对在490nm处的吸光度进行测量。

测量了受猪螺杆菌感染的小鼠的血清和胃液中抗猪螺杆菌特异性IgG和IgA的水平。图3A和4A示出了虽然在血清和胃液中猪螺杆菌的感染诱导了抗猪螺杆菌特异性IgG，但是在接受抗CXCL13抗体(MAb5378)和接受同种型对照抗体处理的小鼠的血清或胃液中抗猪螺杆菌特异性IgG的水平不存在差异。图3B和4B示出了在血清和胃液中猪螺杆菌的感染诱导了抗猪螺杆菌特异性IgA。虽然在接受抗CXCL13抗体和接受同种型对照抗体处理的小鼠的血清中抗猪螺杆菌特异性IgA的水平不存在显著性差异，但是与接受同种型对照抗体处理的小鼠相比，在接受抗CXCL13抗体处理的小鼠的胃液中抗猪螺杆菌特异性IgA的水平显著更高。这些结果表明抑制由受感染的组织的炎症细胞产生的CXCL13会使得对感染因子具有特异性的IgA增加并且与对该细菌感染的清除率提高有关。

上述对具体实施方案的说明将如此充分地揭示了本发明的一般性质以使得他人可以在不需要过多的实验的情况下容易地通过应用本领域技术范围内的知识来针对各种应用修改和/或改动这些具体的实施方案而不脱离本发明的总体构思。因此，基于本文所呈现的教导和指导，这些改动和修改意图落入所公开的实施方案的等同物的含义和范围内。应当了解的是，本文中的措词或术语是为了说明的目的而不具有限制性，因此本说明书的术语或措词将由本领域技术人员根据所述教导和指导来解释。

本文所阐述的发明的许多修改方案和其它实施方案将由已经获益于上述说明和相关附图中所呈现的教导的这些发明所属领域的技术人员所想到。因此，应当了解的是，本发明不限于所公开的具体实施方案并且修改方案和其它实施方案意图被包括在所附权利要求书的范围内。尽管在本文使用了特定的术语，但它们仅在一般的和描述性的意义上使用并且不是为了限制的目的。

本说明书中所提及的所有出版物和专利申请表明了本发明所属领域的技术人员的水平。所有出版物和专利申请以引用的方式并入本文，其引用的程度就如同具体地和单独地表明每一篇单独的出版物或专利申请以引用方式并入本文一般。

Claims (47)

1.一种用于提高患有免疫球蛋白A(IgA)缺乏症的受试者的免疫球蛋白A水平的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的抑制CXCL13活性的药剂。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述IgA缺乏症继发于感染或对药物的暴露。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述感染是粘膜感染。

4.如权利要求2或3所述的方法，其中所述感染是细菌感染。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述细菌感染是螺杆菌(Heliobacter)感染。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述螺杆菌选自由以下各项组成的组：幽门螺杆菌(Heliobacterpylori)、海尔曼螺杆菌(Heliobacterheilmannii)、以及猪螺杆菌(Heliobactersuis)。

7.如权利要求6所述的方法，其中所述螺杆菌是猪螺杆菌。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述IgA缺乏症是原发性IgA缺乏症。

9.一种用于治疗患有免疫球蛋白A(IgA)缺乏症的受试者的炎症性病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的抑制CXCL13活性的药剂。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述炎症性病症是由粘膜感染所引起。

11.如权利要求9或10所述的方法，其中所述炎症性病症是由细菌感染所引起。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述方法降低了所述受试者的所述细菌感染的负荷。

13.如权利要求11或12所述的方法，其中所述细菌感染是螺杆菌感染。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述螺杆菌选自由以下各项组成的组：幽门螺杆菌、海尔曼螺杆菌以及猪螺杆菌。

15.如权利要求14所述的方法，其中所述螺杆菌是猪螺杆菌。

16.如权利要求10至15中任一项所述的方法，其中所述粘膜感染是胃粘膜感染。

17.如权利要求9至16中任一项所述的方法，其中所述炎症性病症是MALT淋巴瘤。

18.如权利要求17所述的方法，其中所述MALT淋巴瘤是胃MALT淋巴瘤。

19.如权利要求9至16中任一项所述的方法，其中所述炎症性病症是胃溃疡或十二指肠溃疡。

20.如权利要求9所述的方法，其中所述炎症性病症是自身免疫性病症。

21.如权利要求20所述的方法，其中所述自身免疫性病症选自由以下各项组成的组：类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、格雷夫斯氏病、1型糖尿病、重症肌无力以及乳糜泻。

22.如权利要求1至21中任一项所述的方法，其中在施用所述抑制CXCL13活性的药剂后所述受试者的分泌型IgA水平升高。

23.如权利要求22所述的方法，其中在施用所述抑制CXCL13活性的药剂后所述受试者的胃IgA水平升高。

24.如权利要求1至23中任一项所述的方法，其中所述方法增加了所述受试者的粘膜组织中的IgA抗体反应。

25.如权利要求1至24中任一项所述的方法，其中所述药剂是特异性结合CXCR5的结合分子。

26.如权利要求1至24中任一项所述的方法，其中所述药剂是特异性结合CXCL13的结合分子。

27.如权利要求1至26中任一项所述的方法，其中所述结合分子包括抗体或其抗原结合片段。

28.如权利要求27所述的方法，其中所述抗体是嵌合抗体、人类抗体、或人源化抗体。

29.如权利要求27或28所述的方法，其中所述抗体特异性结合CXCL13并且包含与SEQIDNO:10或14中所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变(VH)域。

30.如权利要求29所述的方法，其中所述特异性结合CXCL13的抗体包含具有SEQIDNO:14中所示的序列的VH域。

31.如权利要求27至30中任一项所述的方法，其中所述抗体特异性结合CXCL13并且包含与SEQIDNO:15、19或21中所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变(VL)域。

32.如权利要求31所述的方法，其中所述特异性结合CXCL13的抗体包含具有SEQIDNO:19中所示的序列的VL域。

33.如权利要求32所述的方法，其中所述特异性结合CXCL13的抗体包含具有SEQIDNO:14中所示的序列的VH域和具有SEQIDNO:19中所示的序列的VL域。

34.如权利要求27或28所述的方法，其中所述抗体特异性结合CXCL13并且包含具有以下互补决定区(CDR)中的至少一个的VH域：

a)与SEQIDNO:11具有至少90％序列同一性的CDR1；

b)与SEQIDNO:12具有至少90％序列同一性的CDR2；以及

c)与SEQIDNO:13具有至少90％序列同一性的CDR3。

35.如权利要求34所述的方法，其中所述特异性结合CXCL13的抗体包含VH域，所述VH域包含具有SEQIDNO:11中所示的序列的CDR1、具有SEQIDNO:12中所示的序列的CDR2、以及具有SEQIDNO:13中所示的序列的CDR3。

36.如权利要求27、28、34以及35中任一项所述的方法，其中所述抗体特异性结合CXCL13并且包含具有以下互补决定区(CDR)中的至少一个的VL域：

a)与SEQIDNO:20具有至少90％序列同一性的CDR1；

b)与SEQIDNO:17具有至少90％序列同一性的CDR2；以及

c)与SEQIDNO:18具有至少90％序列同一性的CDR3。

37.如权利要求36所述的方法，其中所述特异性结合CXCL13的抗体包含VL域，所述VL域包含具有SEQIDNO:20中所示的序列的CDR1、具有SEQIDNO:17中所示的序列的CDR2、以及具有SEQIDNO:18中所示的序列的CDR3。

38.如权利要求27或28所述的方法，其中所述抗体选自由以下各项组成的组：MAb5261、MAb5378、MAb5080、MAb1476以及MAb3D2。

39.如权利要求38所述的方法，其中所述抗体是mAb5378。

40.如权利要求1至24中任一项所述的方法，其中所述药剂是CXCR5的可溶形式。

41.如权利要求1至40中任一项所述的方法，其中所述药剂抑制CXCL13与CXCL13受体的相互作用。

42.如权利要求41所述的方法，其中所述CXCL13受体是CXCR5。

43.如权利要求1至42中任一项所述的方法，其中所述药剂抑制CXCR5受体内化。

44.如权利要求1至43中任一项所述的方法，其中将所述药剂与药学上可接受的载体一起施用。

45.如权利要求1至44中任一项所述的方法，其中所述受试者是动物。

46.如权利要求45所述的方法，其中所述动物是哺乳动物。

47.如权利要求46所述的方法，其中所述哺乳动物是人类。