CN105395585A - 一种地胆草属植物提取物在制备兽药或饲料添加剂中的应用 - Google Patents

一种地胆草属植物提取物在制备兽药或饲料添加剂中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于兽药或饲料添加剂技术领域，具体涉及一种地胆草属植物提取物在制备兽药或饲料添加剂中的应用。所述的地胆草属植物为白花地胆草(Elephantopus？mollis)和地胆草(Elephan？topus？scaber)。所述的地胆草属植物提取物具有广谱抗菌作用，对革兰氏阴性菌及阳性菌均有很好的抗菌效果，可以作为兽药或饲料添加剂来预防或治疗禽类细菌感染的疾病。

Description

一种地胆草属植物提取物在制备兽药或饲料添加剂中的应用
技术领域
本发明属于兽药或饲料添加剂技术领域，具体涉及一种地胆草属植物提取物在制备兽药或饲料添加剂中的应用。
背景技术
随着社会经济的快速发展和人民生活水平的不断提高，我国人民膳食结构发生了明显的变化，绿色畜禽产品深受市场青睐。人们对于吃不再是一种必需品，而是作为一种市场健康产物来使用。现代畜牧业为人类提供了极其丰富的肉、禽、蛋、奶等畜产品，但畜产品的安全问题也日益被人们所关注。科学家已证实：人类常见的癌症、畸形、抗药性、青少年早熟、中老年心血管疾病等问题均与畜禽产品中的抗生素、激素及药物的残留有关。
中药既可预防和治疗疾病、促进动物生长，又不会产生危害人体健康的药物残留，我国传统的中医中药已逐步受到广大兽药生产企业和畜禽养殖者的重视。因此，以中药为原料，开发含天然成分的兽药取代传统的化学兽药，对于减少畜牧产品中的药物残留、发展绿色畜牧业具有重要的作用。
发明内容
为了克服现有技术的不足和缺点，本发明的目的在于提供一种地胆草属植物提取物在制备兽药或饲料添加剂中的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种地胆草属植物提取物在制备兽药或饲料添加剂中的应用；
所述的兽药或饲料添加剂为预防或治疗动物细菌性疾病的兽药或饲料添加剂；
所述的兽药或饲料添加剂优选为预防或治疗动物因细菌感染所致的呼吸道疾病或肠道疾病的兽药或饲料添加剂。
所述的兽药或饲料添加剂进一步优选为预防或治疗动物因大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、放线杆菌、葡萄球菌、败血霉形体所致的呼吸道疾病或肠道疾病的兽药或饲料添加剂；
所述的呼吸道疾病或肠道疾病为伤寒和副伤寒、霍乱、禽霉形体病、喉气管炎、支气管炎、咽喉炎、肺炎、肠炎、痢疾或败血症；
所述的动物为家禽或家畜；
所述的家禽或家畜优选为鸡、鸭、鹅、鸽、猪、牛、羊或马；
所述的地胆草属植物优选为白花地胆草(Elephantopusmollis)和地胆草(Elephantopusscaber)；
所述的地胆草属植物提取物的提取方法，包含如下步骤：
将地胆草属植物的全草或一部分，用有机溶剂、水或有机溶剂的水溶液提取，得到地胆草属植物提取物；
其中，所述的有机溶剂为乙醇、甲醇、异丙醇、正丁醇、乙酸乙酯和丙酮中的至少一种；
所述的的地胆草属植物提取物的提取方法，优选包含如下步骤：
将地胆草属植物的全草或一部分，用体积分数为0～100％的乙醇水溶液加热回流提取1～3次，每次提取1～3h，得到地胆草属植物粗提取物；
所述的的地胆草属植物提取物的提取方法，还包含如下步骤：
将上述地胆草属植物粗提取物进一步用正丁醇萃取或经大孔吸附树脂柱纯化；
所述的大孔吸附树脂柱纯化的方法为：将上述地胆草属植物粗提取物上大孔吸附树脂柱，先用水或体积分数为1～10％的乙醇水溶液洗脱除去杂质，再用体积分数为40～80％的乙醇水溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，得到地胆草属植物提取物；
所述的大孔吸附树脂柱纯化的方法优选为：将上述地胆草属植物粗提取物上大孔吸附树脂柱，先用水或体积分数为5％的乙醇水溶液洗脱除去杂质，再用体积分数为80％的乙醇水溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，得到地胆草属植物提取物；
所述的地胆草属植物提取物为地胆草提取物时：
所述的地胆草提取物含有3-O-咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸；
所述的地胆草提取物优选含有3-O-咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、去氧地胆草内酯和异去氧地胆草内酯；所述的3-O-咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、去氧地胆草内酯和异去氧地胆草内酯的含量占提取物总量的50％～99％；
所述的地胆草属植物提取物为白花地胆草提取物时：
所述的白花地胆草提取物含有3-O-咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸；
所述的白花地胆草提取物优选含有3-O-咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、2β-methoxy-2-deethoxyphantomolin和β-methoxy-2-deethoxy-8-O-deacylphantomolin-8-O-tiglinate；所述的3-O-咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、2β-methoxy-2-deethoxyphantomolin和β-methoxy-2-deethoxy-8-O-deacylphantomolin-8-O-tiglinate的含量占提取物总量的50％～99％；
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发开发了地胆草属植物的新用途，提供了一种新的天然兽药。
(2)本发明所述的地胆草属植物提取物具有广谱抗菌作用，对革兰氏阴性菌及阳性菌均有很好的抗菌效果，实验证明其可以作为兽药或饲料添加剂来预防或治疗禽类细菌感染的疾病，如禽类因细菌感染的呼吸道疾病或肠道疾病。
(3)本发明所述的地胆草属植物资源广泛、价廉，所述的提取物制备工艺简单、易于大规模生产。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
以下实施例中总咖啡酰奎宁酸采用高效液相色谱法(HPLC-DAD)进行检测，色谱条件为：色谱柱为AgilentZorbaxSB-C18柱(4.6x250mm，5μm)，流动相为A(乙腈)，流动相为B(体积分数为0.2％的乙酸水溶液)，流速为1.0mL/min，检测波长为235nm，柱温25℃，进样量10μL。洗脱方法为：0～15min，5％→20％A；15～25min，20％A；25～65min，20％→60％A。其中，3-O-咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸的保留时间分别为12.4min、25.0min和28.1min；去氧地胆草内酯、异去氧地胆草内酯的保留时间分别为52.0min和53.2min；2β-methoxy-2-deethoxyphantomolin和β-methoxy-2-deethoxy-8-O-deacylphantomolin-8-O-tiglinate的保留时间分别为52.3min和55.6min；所述各成分含量是根据各成分的峰面积占总峰面积的百分比计算而得。
实施例1
干燥的地胆草全草1000g，用5000mL的体积分数为70％的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收得到154g干浸膏；
称取大孔吸附树脂(D101)2000g，加蒸馏水4000mL，搅拌均匀，用水浮选法除去树脂单体或碎片，然后在室温下放置24h；待树脂充分溶胀后，将树脂抽干，再用体积分数为95％的乙醇湿法装柱；接着用体积分数为95％的乙醇清洗柱子至流出液与水(1∶5)混合不呈浑浊，然后用蒸馏水充分淋洗柱子至流出液无乙醇的味道；用质量百分比为2％NaOH的通过树脂柱，浸泡2～4h，再用蒸馏水洗至中性，备用；
将地胆草干浸膏加水3000mL溶解，将样品加入上述D101大孔吸附树脂柱中，先用约20000mL的水洗脱柱子，再用20000mL体积分数为40％的乙醇水溶液洗脱柱子，收集体积分数为40％的乙醇水溶液洗脱所得的洗脱液，减压浓缩，干燥，得到地胆草提取物；
经检测，所述地胆草提取物主要含有3-O-咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸，这三种成分的含量占提取物总重量的83％。
实施例2
干燥的白花地胆草全草1000g，用5000mL的体积分数为70％的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收得到137g干浸膏；
称取大孔吸附树脂(D101)2000g，加蒸馏水4000mL，搅拌均匀，用水浮选法除去树脂单体或碎片，然后在室温下放置24h；待树脂充分溶胀后，将树脂抽干，再用体积分数为95％的乙醇湿法装柱；接着用体积分数为95％的乙醇清洗柱子至流出液与水(1∶5)混合不呈浑浊，然后用蒸馏水充分淋洗柱子至流出液无乙醇的味道；用质量百分比为2％的NaOH通过树脂柱，浸泡2～4h，再用蒸馏水洗至中性，备用；
将白花地胆草干浸膏加水3000mL溶解，将样品加入上述D101大孔吸附树脂柱中，先用约20000mL的水洗脱柱子，再用20000mL体积分数为40％的乙醇水溶液洗脱柱子，收集体积分数为40％的乙醇水溶液洗脱所得的洗脱液，减压浓缩，干燥，得到白花地胆草提取物；
经检测，所述白花地胆草提取物主要含有3-O-咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸，这三种成分的含量占提取物总重量的88％。
实施例3
干燥的地胆草全草1000g，用5000mL的体积分数为70％的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收得到166g干浸膏；
称取大孔吸附树脂(D101)2000g，加蒸馏水4000mL，搅拌均匀，用水浮选法除去树脂单体或碎片，然后在室温下放置24h；待树脂充分溶胀后，将树脂抽干，再用体积分数为95％的乙醇湿法装柱；接着用体积分数为95％的乙醇清洗柱子至流出液与水(1∶5)混合不呈浑浊，然后用蒸馏水充分淋洗柱子至流出液无乙醇的味道；用质量百分比为2％的NaOH通过树脂柱，浸泡2～4h，再用蒸馏水洗至中性，备用；
将地胆草干浸膏加水3000mL溶解，将样品加入上述D101大孔吸附树脂柱中，先用约20000mL的水洗脱柱子，再用20000mL体积分数为80％的乙醇水溶液洗脱柱子，收集体积分数为80％的乙醇水溶液洗脱所得的洗脱液，减压浓缩，干燥，得到地胆草提取物；
经检测，所述地胆草提取物主要含有3-O-咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、去氧地胆草内酯、异去氧地胆草内酯五种成分；所述五种成分的含量占提取物总重量的82％。
实施例4
干燥的白花地胆草全草1000g，用5000mL的体积分数为70％的乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收得到127g干浸膏；
称取大孔吸附树脂(D101)2000g，加蒸馏水4000mL，搅拌均匀，用水浮选法除去树脂单体或碎片，然后在室温下放置24h；待树脂充分溶胀后，将树脂抽干，再用体积分数为95％的乙醇湿法装柱；接着用体积分数为95％的乙醇清洗柱子至流出液与水(1∶5)混合不呈浑浊，然后用蒸馏水充分淋洗柱子至流出液无乙醇的味道；用质量百分比为2％的NaOH通过树脂柱，浸泡2～4h，再用蒸馏水洗至中性，备用；
将地胆草干浸膏加水3000mL溶解，将样品加入上述D101大孔吸附树脂柱中，先用约20000mL的水洗脱柱子，再用20000mL体积分数为80％的乙醇水溶液洗脱柱子，收集体积分数为80％的乙醇水溶液洗脱所得的洗脱液，减压浓缩，干燥，得到地胆草提取物；
经检测，所述地胆草提取物主要含有3-O-咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、2β-methoxy-2-deethoxyphantomolin和β-methoxy-2-deethoxy-8-O-deacylphantomolin-8-O-tiglinate五种成分；所述五种成分的含量占提取物总重量的85％。
实施例5实施例1～4制得的地胆草属植物提取物抑菌实验
在无菌条件下在培养基中加入0.2mL浓度为1×107个/mL的菌液，用灭菌的L型涂抹棒涂抹均匀，在室温下干燥5min，用无菌镊子将牛津杯放入培养皿中，然后在牛津杯中加入200μL浓度为1g/mL的药液(分别为实施例1～4任一个制备得到的提取物及对照组药物乳酸诺氟沙星)，将培养皿放入培养箱中，在37℃中培养24h，测量抑菌圈圈直径，另外还设空白对照。测试效果见表1所示。
表1实施例1～4制得的地胆草属植物提取物抑菌实验结果(单位mm)
从表1数据体外抗菌数据可以看出，本发明所述的地胆草属植物提取物具有广谱抗菌作用，对革兰氏阴性菌及阳性菌均有很好的抗菌效果，可以用于治疗动物因细菌感染而导致的疾病。
上述数据也表明，本发明所述的地胆草属植物提取物具有很好的抗致呼吸道疾病和肠道疾病的细菌作用，如可用于治疗多杀巴氏杆菌和猪胸膜肺炎放线杆菌引起的猪呼吸道感染，沙门氏菌引起的伤寒和副伤寒，败血霉形体引起的禽霉形体病，鸡霍乱、鸡白痢、大肠杆菌病等。
此外，实施例1和2所述的地胆草属植物提取物具有的抗菌作用与抗菌药乳酸诺氟沙星相当，所述的提取物经实施例3和4进一步将有效成分富集后，抗菌效果要远远优于抗菌药乳酸诺氟沙星。
实施例6实施例1～4制得的地胆草属植物提取物治疗患痢疾仔猪试验
分别选择10～28日龄，4.0±1.0kg体重，人工感染细菌患痢疾的哺乳仔猪300头(选自广东某猪场)，分实验组(分别给予实施例1～4制备得到的提取物)、阴性对照组(不治疗)、药物对照组(四黄止痢颗粒)，每组50头；另选取健康哺乳仔猪50头作为空白组。每天给药一次，给药方式为口服给药，给药剂量为：每次给予1g实施例1～4制备得到的提取物和四黄止痢颗粒。自由饮水，连用5天，给药结束后继续观察至第19日，每天观察仔猪症状，实验结束后，以死亡率、治愈率、有效率、相对增重率判定指标对结果进行统计并评价。实验结果见表2。
表2实施例1～4制得的地胆草属植物提取物治疗患痢疾仔猪试验结果
疗效判定标准：
治愈：治疗后患猪粪便成型，干稀适度，颜色正常，仔猪活动、精神和食欲恢复正常，观察期内无复发；以治愈头数占整个试验组总数的比，计算治愈率。
有效：治疗后患猪粪便明显变稠，拉稀次数明显减少，仔猪食欲、活动和精神状态有明显改善；以有效头数(包括治愈头数)占整个试验组总数的比，计算有效率。
无效：治疗后患猪精神、食欲无明显改善，甚至加重，属无效。根据无效头数占整个试验组总数的比，计算无效率。
死亡：治疗后患猪精神、食欲、粪便无明显改善，甚至加重或死亡。以死亡数占整个试验组总数的比，计算死亡率。
相对增长率：各试验组与健康对照组的增重比，其中健康对照组设为100％。
由表2数据可以看出，本发明所述的地胆草属植物提取物具有治疗猪痢疾的作用，其中实施例1和2制备得到的提取物的效果与阳性对照药相当，实施例3和4制备得到的提取物效果更佳。
实施例7
广东某养殖场对确诊患大肠杆菌、沙门氏菌混合感染的病鸡，分别用实施例1、2、3和4制备得到的提取物喂养，每只鸡每次给药100mg，每天2次，对比组用氨苄青霉素，连用4天，以疾病症状消失，精神、进食等恢复正常为治愈，以疾病症状消失，精神、进食等好转为有效，以病情不见好转或死亡为无效。结果如表3所示：
表3实施例1～4制得的地胆草属植物提取物治疗鸡病效果实验
由表3数据可以看出，本发明所述的地胆草属植物提取物对大肠杆菌、沙门氏菌混合感染的病鸡具有很好的作用，其中实施例1和2的效果与阳性对照药相当，实施例3和4制备得到的提取物效果更佳。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种地胆草属植物提取物在制备兽药或饲料添加剂中的应用。
2.根据权利要求1所述的地胆草属植物提取物在制备兽药或饲料添加剂中的应用，其特征在于：
所述的兽药或饲料添加剂为预防或治疗动物细菌性疾病的兽药或饲料添加剂。
3.根据权利要求2所述的地胆草属植物提取物在制备兽药或饲料添加剂中的应用，其特征在于：
所述的兽药或饲料添加剂为预防或治疗动物因细菌感染所致的呼吸道疾病或肠道疾病的兽药或饲料添加剂。
4.根据权利要求3所述的地胆草属植物提取物在制备兽药或饲料添加剂中的应用，其特征在于：
所述的兽药或饲料添加剂为预防或治疗动物因大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、放线杆菌、葡萄球菌、败血霉形体所致的呼吸道疾病或肠道疾病的兽药或饲料添加剂。
5.根据权利要求3所述的地胆草属植物提取物在制备兽药或饲料添加剂中的应用，其特征在于：
所述的呼吸道疾病或肠道疾病为伤寒和副伤寒、霍乱、禽霉形体病、喉气管炎、支气管炎、咽喉炎、肺炎、肠炎、痢疾或败血症。
6.根据权利要求1所述的地胆草属植物提取物在制备兽药或饲料添加剂中的应用，其特征在于：
所述的地胆草属植物为白花地胆草(Elephantopusmollis)和地胆草(Elephantopusscaber)。
7.根据权利要求1所述的地胆草属植物提取物在制备兽药或饲料添加剂中的应用，其特征在于：
所述的地胆草属植物提取物的提取方法，包含如下步骤：
将地胆草属植物的全草或一部分，用有机溶剂、水或有机溶剂的水溶液提取，得到地胆草属植物提取物。
8.根据权利要求1所述的地胆草属植物提取物在制备兽药或饲料添加剂中的应用，其特征在于：
所述的的地胆草属植物提取物的提取方法，还包含如下步骤：
将权利要求7中所述的提取物进一步用正丁醇萃取或经大孔吸附树脂柱纯化；
所述的大孔吸附树脂柱纯化的方法为：将权利要求7中所述的提取物上大孔吸附树脂柱，先用水或体积分数为1～10％的乙醇水溶液洗脱除去杂质，再用体积分数为40～80％的乙醇水溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，得到地胆草属植物提取物。
9.根据权利要求1所述的地胆草属植物提取物在制备兽药或饲料添加剂中的应用，其特征在于：
所述的地胆草属植物含有3-O-咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸。
10.根据权利要求9所述的地胆草属植物提取物在制备兽药或饲料添加剂中的应用，其特征在于：
所述的地胆草属植物提取物为地胆草提取物时：
所述的地胆草提取物含有3-O-咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、去氧地胆草内酯和异去氧地胆草内酯；
所述的地胆草属植物提取物为白花地胆草提取物时：
所述的白花地胆草提取物含有3-O-咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、2β-methoxy-2-deethoxyphantomolin和β-methoxy-2-deethoxy-8-O-deacylphantomolin-8-O-tiglinate。
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