CN111603514A - 一种兽用抗支原体感染的中药复方制剂及其制备方法和用途 - Google Patents

一种兽用抗支原体感染的中药复方制剂及其制备方法和用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种抗支原体感染的中药复方兽药制剂及其制备方法和用途，属于中药技术领域。其由黄芩20‑80份与黄柏10‑50份、桔梗20‑60份、桑白皮10‑50份至少一种成分复配制备而成。经功效试验、毒理试验及稳定性试验表明，具有功能显著、安全无毒、稳定性好、制备工艺完备成熟、生物利用度高等特点。用于治疗禽滑液囊支原体感染疗效确切，显效率达80%以上，副作用小，可制成多种剂型，如散剂、预混剂、可溶性粉剂、颗粒剂、口服液、注射液、粉针剂、片剂等。

Description

一种兽用抗支原体感染的中药复方制剂及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及一种抗滑液囊支原体感染的中药复方兽药制剂及其制备方法和用途，具体涉及桔梗提取物、黄柏提取物、黄芩提取物、桑白皮提取物组成的复方，属于中药技术领域。
背景技术
支原体是临床上常见的病原微生物，介于病毒和细菌之间，是引起羊、牛、猪、鸡畜禽的主要病原体之一，也是呼吸道感染常见的病原体。支原体肺炎约占肺炎发病率的30％，居非典型肺炎首位，且近年来发病率呈逐年递增的趋势。畜禽感染临床表现多种多样，可引起呼吸系统轻症感染，亦可引起严重的爆发性肺炎导致死亡。此外，感染尚可引起多系统、多器官的并发症等。对于群养家畜，容易在种群内、外迅速传播、爆发，导致家畜大量死亡，造成严重的经济损失。
鸡滑液囊支原体病是由鸡滑液囊支原体感染引起幼龄鸡和火鸡得病的一种传染病，又称鸡传染性滑膜炎，其特征是关节肿大、滑液囊及肌腱发炎和实质器官的肿大。由于本病发展缓慢，病程长，一旦在鸡群中感染，根除很困难，因此在鸡群中长期蔓延，导致饲料利用率低、生长发育迟缓、淘汰率增高、产蛋量下降等。鸡群如存在该病原时，易发生混合感染，加剧病情，死亡率增高，造成严重的经济损失。2018年以来，成为影响蛋鸡行业生产性能的主要疾病。目前没有很好的疫苗应用，迫切需要找到治疗滑液囊支原体疾病的药物，特别是中药单方或复方。
目前临床对其感染的治疗主要以抗生素为主。支原体由于没有细胞壁结构，一旦感染，治疗非常困难。其对内酰胺类抗菌素天然耐药，对四环素类、氨基糖苷类、大环内酯类、截短侧耳素类、林可酰胺类比较敏感，但是容易产生耐药，容易导致抗生素残留和耐药。由于易引起反复感染及抗生素的不规范使用，对畜禽的养殖非常不利，近年来耐药菌株感染率逐年增加。而耐药菌株的不断增加又导致临床抗感染治疗不彻底，一但机体免疫力低下又引起复发，形成恶性循环。特别是在畜禽感染治疗上，由于疗程较长，更容易在动物体内大量积蓄，导致动物肌肉、脂肪、内脏等组织及副产品奶、蛋等中抗菌素含量超标，影响人们的身体健康。因此，有必要从中药着手探索具有抗支原体感染药物，避免抗生素引起的不良反应及耐药性和残留，促进畜禽健康。
文献(黑龙江畜牧兽医，2014，(6)，150-152，中药单体体外抗畜禽支原体作用的研究)首次筛选出了氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红碱、白屈菜红碱和血根碱，报道了其对抗牛支原体感染、鸡毒支原体感染及羊肺炎支原体感染均具有较强的体外抑制作用，但仅仅是单体的体外抗支原体感染作用，由于单体含量有限，对于畜禽群发性的支原体病防治有很大的困难。中国专利201110225782.5报道了桔梗总皂苷作为治疗和预防肺炎支原体感染性疾病药物中的活性成分，但是单方应用治愈率较低，而且单纯分离皂苷作为药物有非常强的溶血性。中国专利201510672067.4报道了一种用于治疗禽呼吸道感染的中药组合物及其制备方法和应用，其以灯笼草提取物，虎杖提取物，大青叶提取物，贯叶连翘提取物，丹参醇提取物为主要成分，但其针对性不强，效果欠佳。另外，中国专利201310391172.1报道了一种用于治疗鸡支原体呼吸道感染的组合物及其制备方法，按重量百分比，组成为硫氰酸红霉素1～10％，氯化铵40～90％，余量为无水葡萄糖，其为非中药成分，容易产生耐药性。中国专利201910595408.0报道了一种治疗蛋鸡滑液囊支原体病的中药组合物，按照重量比份麻黄5-10重量份，苦杏仁5-10重量份，石膏10-20重量份，黄连5-10重量份，蛤蟆皮3-5重量份，冰片3-5重量份，生甘草3-6重量份。该药宣肺平喘功效较好，但是组方复杂，没有经过提取，有效成分吸收慢，影响治疗蛋鸡滑液囊支原体病疗效，且组方中有麻黄对于药物的产业化有一定的影响。
发明内容
针对畜禽支原体感染，本发明的目的在于提供一种疗效好的抗滑液囊支原体感染复方兽药制剂。
为实现本发明目的，本发明选取黄芩、黄柏、黄芩、桑白皮中药为原料，以无公害、天然成分的中药制剂替代抗生素，采用独特提取工艺制备得到抗滑液囊支原体感染的纯中药复方兽药制剂。
黄芩为清热燥湿药，主要含有黄酮及其苷类、萜类化合物及挥发油等成分，主治温热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽等症。本发明首次将黄芩应用于滑液囊支原体的治疗，发现单一方剂疗效并不显著，必须借助于其他中药组成复方，才能达到显著的疗效。
黄柏其性苦，清热燥湿，主要含有黄酮类和生物碱类化学成分，具有清热、消肿、止痛等作用。由于滑液囊支原体感染后最大的问题是关节肿大、滑液囊及肌腱发炎和实质器官肿大，黄柏能够脱水消肿，与黄芩配伍，提高疗效。
桔梗，苦辛性平，专入肺经，故被古代医学家称为“舟楫之剂”，能“载诸药上浮”，其主要有效成分为齐墩果酸型五环三萜皂苷。具有宣肺化痰，利咽，排脓的功效。另外，桔梗中的皂苷成分有助于将其他药用成分输送到药用部位，达到靶向的作用，而且本身也有抗支原体感染的作用，在本发明中能够促进其他药物在体内的吸收，起到增效作用，也能有助于脱水消肿。
桑白皮主要有镇咳平喘、其性味甘寒，归肺脾经。含有黄酮类化合物、香豆素类、苯骈呋喃衍生物、多糖类、甾体和萜类、挥发油等多种成分。在本发明中能够与黄芩协同发挥抗支原体作用，也能有利于抗水肿、消炎。
以上为依据，本发明具体技术方案如下：所述抗滑液囊支原体感染的中药复方兽药制剂由黄芩20-80份与黄柏10-50份、桔梗20-60份、桑白皮10-50份至少一种成分复配制备而成。各组份以重量份计。
优选如下几组配方：
1.黄芩20-80份、黄柏10-50份、桔梗20-60份、桑白皮10-50份
2.黄芩20-80份、黄柏10-50份、桔梗20-60份
3.黄芩20-80份、黄柏10-50份
4.黄芩20-80份、桔梗20-60份
5.黄芩20-80份、桑白皮10-50份
更优选：1.黄芩40-80份、黄柏20-40份、桔梗20-60份、桑白皮10-40份
2.黄芩40-80份、黄柏20-50份、桔梗30-60份
3.黄芩40-80份、黄柏20-50份
4.黄芩40-80份、桔梗30-60份
5.黄芩40-80份、桑白皮30-50份
所述黄芩、黄柏、桔梗、桑白皮的形式都没有严格的限定，例如可为中药药店出售的本身形式，例如为小块、粉末等形式，或者使用进行粉碎后得到的微粉形式。
为更好达到使用效果，本发明采用水提仿生方法，充分提取有效成分，经改进，采用PH＝2-3，PH＝7.0-7.5，PH＝8.0-8.5条件下三次提取，具体采用如下方法：
将黄芩粗粉和其它组份粗粉分别置于带有搅拌的提取罐中，加水，调pH值至2.0-3.0，加热回流，然后降温至40℃-60℃，按照每100公斤水加0.5g-1g复合酶A，搅拌浸泡，加热搅拌蒸煮，然后调pH值至7.0-8.0，滤过，得第一次煎煮液；将过滤后的药材渣加水、调pH值至7.0-7.5，按照每100公斤水加0.5g-1g复合酶B，40℃-60℃搅拌浸泡，加热搅拌蒸煮，滤过，得第二次煎煮液，合并煎煮液；将二次过滤后的药材渣加水、调pH值至8.0-8.5，按照每100公斤水加0.5g-1g复合酶B，40-60℃充分搅拌浸泡，加热搅拌蒸煮，滤过，得第三次煎煮液，合并煎煮液；减压浓缩合并的煎煮液至密度为1.0-1.05，置于喷雾干燥塔，喷雾干燥得黄芩提取物A和其它组分提取物B；将A、B两组份提取物混合均匀。
所述复合酶A由酸性纤维素酶、中性纤维素酶和酸性蛋白酶组成，各组份以重量份计，酸性纤维素酶：中性纤维素酶：酸性蛋白酶＝2-3：1-0.5：1-0.5；复合酶B由中性纤维素酶、α-半乳糖苷酶和中性蛋白酶组成，各组份以重量份计，中性纤维素酶：α-半乳糖苷酶：中性蛋白酶＝2-3：1-0.5：1-0.5。
本发明所述中药复方提取物具有良好的抗支原体感染性能，从而可以用来治疗和/或预防因滑液囊支原体感染导致的各种疾病，根据实际需求和服用方便等考虑，可将所述中药复方提取物进一步制备成不同的剂型，例如散剂、粉剂、预混剂、可溶性粉剂、颗粒剂、注射剂、粉针剂、片剂、胶囊剂。为了得到这些剂型，本领域技术人员可将所述中药复方提取物与药学领域中的可药用辅料进行常规加工，所述可药用辅料例如可为赋形剂、甜味剂等。经功效试验、毒理试验及稳定性试验表明，本发明所得兽药制剂协同作用好，功能显著、安全无毒、稳定性好、制备工艺完备成熟、生物利用度高。经养鸡场使用，显效率达到80％以上，也可以应用于猪肺炎支原体感染、牛支原体感染、羊支原体感染等疾病，具有研究价值和应用前景。
本发明优点和创新点：利用仿生学的特点，分段进行单提取或混合提取，pH值分别模仿胃部pH＝2-3，小肠pH＝7.5，血液pH＝8.3的阶段调节。且本工艺采用了三种酶复合进行共同提取，通过有效降解纤维细胞壁的纤维素，有助于细胞壁剥离，能有效破坏纤维初生壁和次生壁，使中药的有效小分子快速释放，达到有效成分的充分提取。
通过对该中药复方提取，抗支原体感染有效成分多糖、生物碱、黄酮、皂苷等比普通工艺高出很多，使得最终的复方提取物具有安全无毒、优异的抗支原体感染性能，应用在抗畜禽肺支原体感染的预防和/或治疗中，具有良好的潜力和前景。
附图说明
图1为鸡关节处有粘液发病症状图片：
图2为鸡腱鞘有炎症，肿大发病症状图片：
图3为鸡用药前的发病关节肿大图片；
图4为病鸡经本申请治愈后，恢复正常图片。
具体实施方式
以下通过实施例，对本发明技术方案作进一步说明。
实施例1
黄芩40份、黄柏20份、桔梗20份、桑白皮20份，
将黄芩粗粉和其它组份粗粉分别置于带有搅拌的提取罐中，加水，调pH值至3.0，加热回流，然后降温至40℃，每100公斤水加1g复合酶A，充分搅拌浸泡2小时，加热搅拌蒸煮，然后调pH值至7.0，滤过，得第一次煎煮液；将过滤后的药材渣加水、调PH值至7.0，每100公斤水加1g复合酶B，40℃充分搅拌浸泡2小时，加热搅拌蒸煮，滤过，得第二次煎煮液，合并煎煮液；将二次过滤后的药材渣加水、调pH值至8.3，每100公斤水加0.5g复合酶B，40℃充分搅拌浸泡1小时，加热搅拌蒸煮，滤过，得第三次煎煮液，合并煎煮液；90℃减压浓缩合并的煎煮液至密度为1.05，置于喷雾干燥塔，喷雾干燥得黄芩提取物A和其它组分提取物B；将A、B两组份提取物混合均匀。
所述复合酶A由酸性纤维素酶、中性纤维素酶和酸性蛋白酶组成，各组份以重量份计：酸性纤维素酶：中性纤维素酶：酸性蛋白酶＝3：0.5：1；复合酶B由中性纤维素酶、α-半乳糖苷酶和中性蛋白酶组成，各组份以重量份计：中性纤维素酶：α-半乳糖苷酶：中性蛋白酶＝2：1：1。
三批中试结果如表1。
表1三批样品中试试验技术数据表
Figure BDA0002572302430000061
同样配方条件下，采用普通工艺制备提取物，提取物中有效成分提取对比见表2。
表2本工艺和普通工艺对比有效成分含量数据表
Figure BDA0002572302430000062
将提取得到的中药提取物加无水葡萄糖制备成粉散剂。每1g相当于原生药材1g。
实施例2
黄芩40份、黄柏30份、桔梗30份
将黄芩粗粉和其它组份粗粉分别置于带有搅拌的提取罐中，加水，调pH值至3.0，加热回流，然后降温至40℃，每100公斤水加1g复合酶A，充分搅拌浸泡2小时，加热搅拌蒸煮，然后调pH值至7.0，滤过，得第一次煎煮液；将过滤后的药材渣加水、调pH值至7.0，每100公斤水加1g复合酶B，40℃充分搅拌浸泡2小时，加热搅拌蒸煮，滤过，得第二次煎煮液，合并煎煮液；将二次过滤后的药材渣加水、调pH值至8.3，每100公斤水加0.5g复合酶B，40℃充分搅拌浸泡1小时，加热搅拌蒸煮，滤过，得第三次煎煮液，合并煎煮液；90℃减压浓缩合并的煎煮液至密度为1.05，置于喷雾干燥塔，喷雾干燥得黄芩提取物A和其它组分提取物B；将A、B两组份提取物混合均匀。
所述复合酶A由酸性纤维素酶、中性纤维素酶和酸性蛋白酶组成，各组份以重量份计：酸性纤维素酶：中性纤维素酶：酸性蛋白酶＝2：0.5：1；复合酶B由中性纤维素酶、α-半乳糖苷酶和中性蛋白酶组成，各组份以重量份计：中性纤维素酶：α-半乳糖苷酶：中性蛋白酶＝2：1：1。
三批中试结果如表3。
表3三批样品中试试验技术数据表
Figure BDA0002572302430000071
同样配方条件下，采用普通工艺制备提取物，提取物中有效成分提取对比见表4。
表4本工艺和普通工艺对比有效成分含量数据表
Figure BDA0002572302430000081
将提取得到的中药提取物制备成注射剂。每1ml相当于原生药材1g。
实施例3
黄芩60份，黄柏40份。
将黄芩粗粉、黄柏粗粉分别置于带有搅拌的提取罐中，加水，调pH值至2.0，加热回流，然后降温至50℃，每100公斤水加1g复合酶A，充分搅拌浸泡2小时，加热搅拌蒸煮，然后调pH值至7.0，滤过，得第一次煎煮液；将上述药材渣加水、调pH值至7.5，每100公斤水加1g复合酶B，50℃充分搅拌浸泡2小时，加热搅拌蒸煮，滤过，得第二次煎煮液，合并煎煮液；将上述药材渣加水、调pH值至8.5，每100公斤水加0.5g复合酶B，50℃充分搅拌浸泡1小时，加热搅拌蒸煮，滤过，得第三次煎煮液，合并煎煮液；90℃减压浓缩合并的煎煮液至密度为1.0，置于喷雾干燥塔，喷雾干燥得黄芩提取物A和黄柏提取物B；将A、B两组份提取物混合均匀。
所述复合酶A由酸性纤维素酶、中性纤维素酶和酸性蛋白酶组成，各组份以重量份计：酸性纤维素酶：中性纤维素酶：酸性蛋白酶＝3：1：1；复合酶B由中性纤维素酶、α-半乳糖苷酶和中性蛋白酶组成，各组份以重量份计：中性纤维素酶：α-半乳糖苷酶：中性蛋白酶＝2：0.5：1。三批中试结果如表5。
表5三批样品中试试验技术数据表
Figure BDA0002572302430000091
同样配方条件下，采用普通工艺制备提取物，提取物中有效成分提取对比见表6。
表6本工艺和普通工艺对比有效成分含量数据表
Figure BDA0002572302430000092
将提取得到的中药提取物加糊精、蔗糖制备成颗粒剂。每1g相当于原生药材1g。
实施例4
黄芩60份、黄柏30份、桔梗30份、桑白皮10份。
制备方法同实施例1。
实施例5
黄芩60份、黄柏30份、桔梗50份。
制备方法同实施例1。
实施例6
黄芩50份、桔梗30份。
制备方法同实施例3。
实施例7
黄芩80份、桑白皮50份。
制备方法同实施例3。
应用例1
选取兽医临床判定为滑液囊支原体(鸡行动不便，吃食不便，饲料消耗量减少，消瘦；母鸡的就巢性增强，产蛋量下降，腿关节肿胀，脚掌肿大)的病鸡，发病解剖图见图1、图2、图3。将本发明所生产的粉散剂按剂量为1000g/500kg/天(病鸡体重按1.5kg/只计)添加至饲料或饮水中，供病鸡自由采食，连续给药3～4天。
鸡滑液囊支原体感染的疗效判定标准：
痊愈：治疗后采食量恢复正常，症状全部消失。
显效：治疗后采食量正常，大部分症状消失。
有效：治疗后体温较以前降低，主要症状部分消失。
无效：治疗后体温未见降或升高，主要症状无改善。
总有效率＝(痊愈数+显效数+有效数)/总病例数×100％
结果见表7。从表7可以看出，本发明兽药制剂对鸡支原体感染有良好的治疗效果，3天总治愈率至少在90％以上，治疗效果显著，痊愈后的关节处见图4。使用后迅速控制病情。说明本发明药物相互联用有增效作用。
表7鸡滑液囊支原体感染疗效表
Figure BDA0002572302430000111
应用例2
针对某养猪场筛选出病猪,这些猪表现为混合感染引起的咳嗽,呼吸不畅,白细胞低下,通过血清学检测、直接镜检、细菌分离、单抗酶联免疫试验PCR等实验室方法判断，一批呼吸道症状比较严重的病猪。结果显示分离及检测到支原体。用本发明实施例制得的粉散剂拌料给病猪使用，1000克本发明的粉散剂拌500公斤饲料进行饲喂。在此期间自由饮水。依据精神状态、发热、饮食欲、咳嗽、气喘、便秘、死亡淘汰情况等作为症状，经过4天用本发明制剂与单独的黄芩提取物、桔梗提取物、桑白皮、黄柏提取物、柴胡提取物作对照，拌料治疗。
猪支原体感染的临床疗效判定标准：
痊愈：治疗后采食量恢复正常，症状全部消失。
显效：治疗后采食量正常，大部分症状消失。
有效：治疗后体温较以前降低，主要症状部分消失。
无效：治疗后体温未见降或升高，主要症状无改善。
总有效率＝(痊愈数+显效数+有效数)/总病例数×100％
显效率＝(痊愈数+显效数)/总病例数×100％
疗效评估：应用于支原体感染病猪治疗1100例，结果表明：使用本发明中药制剂的猪体重增加明显,所有病态症状消失,本发明兽药制剂有效率不少于90％，显效率为80％以上。详见表8。从表8中可以看出本发明兽药制剂显有互相促进作用，有效率大大提高。
表8本发明中药制剂用于猪肺支原体感染治疗效果表
Figure BDA0002572302430000121

Claims (4)

1.一种抗畜禽滑液囊支原体感染的中药复方制剂，其特征在于，由黄芩20-80份与黄柏10-50份、桔梗20-60份、桑白皮10-50份至少一种成分复配，并通过如下方法制备而成，各组份以重量份计；
将黄芩粗粉和其它组份粗粉分别置于带有搅拌的提取罐中，加水，调pH值至2.0-3.0，加热回流，然后降温至40℃-60℃，按照每100公斤水加0.5g-1g复合酶A，搅拌浸泡，加热搅拌蒸煮，滤过，得第一次煎煮液；将过滤后的药材渣加水、调pH值至7.0-7.5，按照每100公斤水加0.5g-1g复合酶B，40℃-60℃搅拌浸泡，加热搅拌蒸煮，滤过，得第二次煎煮液，合并煎煮液；将二次过滤后的药材渣加水、调pH值至8.0-8.5，按照每100公斤水加0.5 g -1g复合酶B，40-60℃充分搅拌浸泡，加热搅拌蒸煮，滤过，得第三次煎煮液，合并煎煮液；减压浓缩合并的煎煮液至密度为1.0-1.05，置于喷雾干燥塔，喷雾干燥得黄芩提取物A和其它组分提取物B；将A、B两组份提取物混合均匀；
所述复合酶A由酸性纤维素酶、中性纤维素酶和酸性蛋白酶组成，各组份以重量份计，酸性纤维素酶：中性纤维素酶：酸性蛋白酶=2-3：1-0.5：1-0.5；复合酶B由中性纤维素酶、α-半乳糖苷酶和中性蛋白酶组成，各组份以重量份计，中性纤维素酶：α-半乳糖苷酶：中性蛋白酶=2-3：1-0.5：1-0.5。
2.如权利要求1所述的抗畜禽滑液囊支原体感染的中药复方制剂，其特征在于，选如下几组配方：
（1）黄芩20-80份、黄柏10-50份、桔梗20-60份和桑白皮10-50份；
（2）黄芩20-80份、黄柏10-50份和桔梗20-60份；
（3）黄芩20-80份和黄柏10-50份；
（4）黄芩20-80份和桔梗20-60份；
（5）黄芩20-80份和桑白皮10-50份。
3.如权利要求2所述的抗畜禽滑液囊支原体感染的中药复方制剂，其特征在于，选如下几组配方：
（1）黄芩40-80份、黄柏20-40份、桔梗20-60份和桑白皮10-40份；
（2）黄芩40-80份、黄柏20-50份和桔梗30-60份；
（3）黄芩40-80份和黄柏20-50份；
（4）黄芩40-80份和桔梗30-60份；
（5）黄芩40-80份和桑白皮30-50份。
4.如权利要求1-3其中之一所述的抗畜禽滑液囊支原体感染的中药复方制剂的应用，其特征在于，作为活性成分，与药用辅料混合，制成散剂、粉剂、预混剂、可溶性粉剂、颗粒剂、注射剂、粉针剂、片剂或胶囊剂。
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