CN105395579A - 一种神秘果树根提取物及其在制备治疗糖尿病或高血脂症的药物或保健品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及中药及天然药物技术领域,具体公开了一种神秘果树根提取物及其在制备治疗糖尿病或高血脂症的药物或保健品中的应用。所述的神秘果树根提取物包含有效成分β-香树脂醇乙酸酯和/或羽扇豆醇乙酸酯。所述的提取物具有很好的降血糖以及提升血液中胰岛素含量的作用,可以作为治疗糖尿病的药物或保健品使用;且所述的提取物有效成分明确,有利于控制药物质量以及用药安全。
Description
技术领域
本发明涉及中药及天然药物技术领域,具体涉及一种神秘果树根提取物及其在制备治疗糖尿病或高血脂症的药物或保健品中的应用。
背景技术
糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损,或两者兼有引起。糖尿病时长期存在的高血糖,会导致各
种组织,特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍。因此,开发一种糖尿病治疗药物具有十分重要的意义。
神秘果,其拉丁学名为SynsepalumdulcificumDaniell,是典型热带常绿木,
原产地在西非、加纳、刚果一带。20世纪60年代,周恩来总理到西非访问时,
加纳共和国把神秘果作为国礼送给周总理。此后,神秘果开始在我国栽培。
目前尚无报道称神秘果树根具有降血糖作用,更没有利用中药现代化技术制备神秘果树根降血糖有效部位并明确主要有效成的的报道。因此,利用神秘果树
根开发一种治疗糖尿病的药物,具有十分重要的意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是,为了克服现有技术中治疗糖尿病的药物种类的不足,提供一种神秘果树根提取物。
本发明所要解决的上述技术问题,通过以下技术方案予以实现:
一种神秘果树根提取物,包含有效成分β-香树脂醇乙酸酯和/或羽扇豆醇乙酸酯。
本发明发明人为了开发一种治疗糖尿病的药物,通过大量的实验研究,尝试过许多种中药材,经历了许多次失败,终于成功开发出上述提取物。经实验证明,上述神秘果树根提取物具有非常好的治疗糖尿病作用,且其中的有效成分明确,有利于控制药物质量以及用药安全。
所述的β-香树脂醇乙酸酯(英文名为β-amyinacetate)和羽扇豆醇乙酸酯(英文名为lupeolacetate)结构式如下:
优选地,所述的β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯的重量之和占提取物总重量的20%~99%。经实施例实验证明,β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯单体具有降血糖作用,因此提取物中只要含有β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯即具有降血糖作用,且其含量越高,效果越好。如二者含量可以选自20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%。
优选地,提取物中所述的β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯的重量比为1~10:1~10。由于β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯单体具有降血糖作用,因此,提取物中β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯的在上述的重量比下均能实现本发明。
本发明提供一种所述的神秘果树根提取物的制备方法,包含如下步骤:
S1.首先将神秘果树根用有机溶剂提取,得有机溶剂提取物;
S2.将有机溶剂提取物经石油醚、二氯甲烷、氯仿和环己烷中的任意一种溶剂或任意二种以上的混合溶剂萃取得萃取物;
S3.将萃取物经硅胶柱层析富集有效成分即得;所述的硅胶柱层析的条件为:首先用体积分数为98:2~80:20的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系进行洗脱除杂;然后再用体积分数为70:30~60:40的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系进行洗脱并收集洗脱部位,浓缩干燥即得所述的神秘果树根提取物;所述的溶剂A选自石油醚、二氯甲烷、氯仿或环己烷,所述的溶剂B选自乙酸乙酯、丙酮或甲醇。
优选地,步骤S1中所述的有机溶剂为甲醇或乙醇。
更优选地,所述的有机溶剂为体积分数为70%~100%的甲醇或乙醇。
优选地,步骤S3中所述的硅胶柱层析的条件为:首先体积分数为90:10~80:20的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系进行洗脱除杂;然后再用体积分数为70:30~60:40的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系进行洗脱并收集洗脱部位,浓缩干燥即得所述的神秘果树根提取物。
更优选地,所述的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系为环己烷:乙酸乙酯。
最优选地,步骤S3中所述的硅胶柱层析的条件为:首先体积比为80:20的环己烷:乙酸乙酯组成的混合溶剂体系进行洗脱除杂;然后再用体积比为65:35的环己烷:乙酸乙酯组成的混合溶剂体系进行洗脱并收集洗脱部位,浓缩干燥即得所述的神秘果树根提取物。
本发明还提供一种上述的神秘果树根提取物在制备治疗糖尿病或高血脂症的药物或保健品中的应用。
在测试了该提取物降血糖活性后,发明人同时还测试了该提取物的降血脂活性,结果发现,该提取物同时也具有很好的降血脂以及降胆固醇作用,可以作为治疗高血脂症的药物或保健品使用。
有益效果:(1)本发明提供了一种全新的具有治疗糖尿病作用的神秘果树根提取物,所述的提取物具有很好的降血糖以及提升血液中胰岛素含量的作用,可以作为治疗糖尿病的药物或保健品使用;(2)此外,通过实验还证明本发明所述的提取物还具有很好的降血脂以及降胆固醇作用,可以作为治疗高血脂症的药物使用;(3)所述的提取物明确了其中的有效成分,有利于控制药物质量以及用药安全。
具体实施方式
以下结合具体实施方式来进一步解释本发明,但实施例对本发明不做任何形式的限定。
实施例1β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯的制备
S1.称取1Kg干燥的神秘果树根粉碎,过60目筛,然后用5L体积分数为70%的乙醇水溶液加热回流提取,提取次数为2次,每次1h,浓缩提取液得神秘果树根乙醇提取物;
S2.向神秘果树根乙醇提取物中加2L的水混合均匀,再加入石油醚萃取,萃取3次,每次石油醚的用量为2L,减压浓缩除去石油醚,得石油醚萃取物;
S3.取石油醚萃取物40g,用乙酸乙酯溶解,然后用40g硅胶(100)拌样,另取800g硅胶(300目)干法装柱,将样品装入硅胶柱上,先用体积比为80:20的环己烷:乙酸乙酯混合溶剂洗脱除杂;再用体积比为65:35的环己烷:乙酸乙酯混合溶剂洗脱,收集洗脱液浓缩通过TLC板检验发现洗脱部位含2个主要化合物;
S4.将经步骤S3得到的含有2个主要化合物的洗脱部位进一步分离,分离方法为利用硅胶柱在环己烷:乙酸乙酯混合溶剂体系中进行反复柱层析分离得到得2个主要单体化合物;经进一步波谱鉴定,得到两个化合物分别为β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯;
β-香树脂醇乙酸酯的波谱数据如下:HRESIMSm/z469.4053[M+H]+(calcdforC32H53O2,469.4040).1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.86(3H,s,H-29),1.13(3H,s,H-28),0.86(3H,s,H-27),0.83(3H,s,H-26),0.97(3H,s,H-25),0.96(3H,s,H-24),0.87(3H,s,H-23),2.05(3H,s,COCH3),4.50(1H,m,H-3),5.18(1H,t,J=7.6,H-12).13CNMR(100MHz,CDCl3)δ38.4(C-1),23.8(C-2),81.1(C-3),37.8(C-4),55.4(C-5),18.4(C-6),32.7(C-7),39.9(C-8),47.7(C-9),37.0(C-10),23.6(C-11),121.7(C-12),145.3(C-13),41.8(C-14),28.5(C-15),26.2(C-16),32.6(C-17),47.3(C-18),46.9(C-19),31.2(C-20),34.8(C-21),37.3(C-22),28.1(C-23),16.8(C-24),15.7(C-25),16.9(C-26),26.1(C-27),27.0(C-28),33.4(C-29),23.7(C-30),171.1(C-1`),21.4(C-2`).
羽扇豆醇乙酸酯的波谱数据如下:HRESIMSm/z469.4029[M+H]+(calcdforC32H53O2,469.4040).1HNMR(400MHz,CDCl3)δ1.66(3H,s,H-30),1.02(3H,s,H-28),0.78(3H,s,H-27),0.84(3H,s,H-26),1.00(3H,s,H-25),0.95(3H,s,H-24),0.84(3H,s,H-23),2.03(3H,s,COCH3),4.46(1H,m,H-3),4.68(1H,dd,J=2.4Hz,H-29a),4.56(1H,dd,J=2.4Hz,H-29b).13CNMR(100MHz,CDCl3)δ38.5(C-1),23.8(C-2),81.1(C-3),37.9(C-4),55.5(C-5),18.3(C-6),34.3(C-7),40.9(C-8),50.4(C-9),37.2(C-10),21.1(C-11),25.2(C-12),38.1(C-13),42.9(C-14),27.5(C-15),35.7(C-16),43.1(C-17),48.4(C-18),48.1(C-19),151.0(C-20),29.9(C-21),40.1(C-22),28.0(C-23),16.6(C-24),16.3(C-25),16.1(C-26),14.6(C-27),18.1(C-28),109.4(C-29),19.4(C-30),171.1(C-1`),21.4(C-2`).
实施例2神秘果树根提取物的制备
S1.称取1Kg干燥的神秘果树根粉碎,过60目筛,然后用5L体积分数为70%的乙醇水溶液加热回流提取,提取次数为2次,每次1h,浓缩提取液得神秘果树根乙醇提取物;
S2.向神秘果树根乙醇提取物中加2L的水混合均匀,再加入石油醚萃取,萃取3次,每次石油醚的用量为2L,减压浓缩除去石油醚,得石油醚萃取物;
S3.取石油醚萃取物40g,用乙酸乙酯溶解,然后用40g硅胶(100)拌样,另取800g硅胶(300目)干法装柱,将样品装入硅胶柱上,先用体积比为80:20的环己烷:乙酸乙酯混合溶剂洗脱除杂;再用体积比为65:35的环己烷:乙酸乙酯混合溶剂洗脱,收集洗脱部位,浓缩干燥得神秘果树根提取物。
经HPLC分析,该神秘果树根提取物中β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯的总含量为84%。其中β-香树脂醇乙酸酯的含量为51%、羽扇豆醇乙酸酯的含量为33%。
实施例3神秘果树根提取物的制备
S1.称取1Kg干燥的神秘果树根粉碎,过60目筛,然后用5L体积分数为95%的乙醇水溶液加热回流提取,提取次数为2次,每次1h,浓缩提取液得神秘果树根乙醇提取物;
S2.向神秘果树根乙醇提取物中加2L的水混合均匀,再加入石油醚萃取,萃取3次,每次石油醚的用量为2L,减压浓缩除去石油醚,得石油醚萃取物;
S3.取石油醚萃取物40,用乙酸乙酯溶解,然后用40g硅胶(100目)拌样,另取800g硅胶(300目)干法装柱,将样品装入硅胶柱上,先用体积比为90:10的环己烷:乙酸乙酯混合溶剂洗脱除杂;再用体积比为60:40的环己烷:乙酸乙酯混合溶剂洗脱,收集洗脱部位,浓缩干燥得神秘果树根提取物。
经HPLC分析,该神秘果树根提取物中β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯的总含量为69%。其中β-香树脂醇乙酸酯的含量为31%、羽扇豆醇乙酸酯的含量为38%。
实施例4神秘果树根提取物的制备
S1.称取1Kg干燥的神秘果树根粉碎,过60目筛,然后用5L体积分数为95%的乙醇水溶液加热回流提取,提取次数为2次,每次1h,浓缩提取液得神秘果树根乙醇提取物;
S2.向神秘果树根乙醇提取物中加2L的水混合均匀,再加入环己烷萃取,萃取3次,每次环己烷的用量为2L,减压浓缩除去环己烷,得环己烷萃取物;
S3.取环己烷萃取物40,用乙酸乙酯溶解,然后用40g硅胶(100目)拌样,另取800g硅胶(300目)干法装柱,将样品装入硅胶柱上,先用体积比为98:2的环己烷:乙酸乙酯混合溶剂洗脱除杂;再用体积比为60:40的环己烷:乙酸乙酯混合溶剂洗脱,收集洗脱部位,浓缩干燥得神秘果树根提取物。
经HPLC分析,该神秘果树根提取物中β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯的总含量为45%。其中β-香树脂醇乙酸酯的含量为22%、羽扇豆醇乙酸酯的含量为23%。
实施例5神秘果树根提取物的制备
S1.称取1Kg干燥的神秘果树根粉碎,过60目筛,然后用5L体积分数为95%的乙醇水溶液加热回流提取,提取次数为2次,每次1h,浓缩提取液得神秘果树根乙醇提取物;
S2.向神秘果树根乙醇提取物中加2L的水混合均匀,再加入氯仿萃取,萃取3次,每次氯仿的用量为2L,减压浓缩除去氯仿,得氯仿萃取物;
S3.取氯仿萃取物40,用甲醇溶解,然后用40g硅胶(100目)拌样,另取800g硅胶(300目)干法装柱,将样品装入硅胶柱上,先用体积比为98:2的氯仿:甲醇混合溶剂洗脱除杂;再用体积比为60:40的氯仿:甲醇混合溶剂洗脱,收集洗脱部位,浓缩干燥得神秘果树根提取物。
经HPLC分析,该神秘果树根提取物中β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯的总含量为23%。其中β-香树脂醇乙酸酯的含量为15%、羽扇豆醇乙酸酯的含量为8%。
上述β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯的含量百分数为重量含量百分数,含量分析的方法为HPLC法,HPLC的分析条件为:流动相为90体积%甲醇-10体积%水,波长为254nm,色谱柱为cosmosil5C18-MS-IIcolumn,4.6x250nm,柱温为25摄氏度;分别以β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯为标准品绘制峰面积-浓度标准曲线,然后用分析提取物中的β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯的峰面积,并根据标准曲线计算各自的含量。
实施例6神秘果树根提取物降血糖实验
将96只雄性SD大鼠(4周龄清洁级,体重150~180g,由广东省医学实验动物中心提供)随机分为正常对照组12只和糖尿病模型组84只,正常组给予基础饲料,模型组给予高脂饲料(猪油18%,蔗糖20%,蛋黄3%,基础饲料59%)。喂养4周后,禁食12h后,0.1mmol/L枸橼酸钠缓冲液(pH=4.2)将STZ(链脲佐菌素)配成2重量%的溶液,按35mg/kg腹腔注射,一周后测大鼠2h葡萄糖耐受量(禁食12h,灌胃给予2g/kg的葡萄糖,测灌胃后2h的血糖),筛选血糖值大于11.1mmol/L的大鼠确定为DM大鼠。稳定一周后将成模的DM大鼠84随机分为7组(模型组和实验组)。实验组用药剂量为2mg/kg,每组各12只。各实验组的用药情况如下:实验组1(单独用β-香树脂醇乙酸酯)、实验组2(单独用羽扇豆醇乙酸酯)、实验组3(实施例2制备得到的神秘果树根提取物)、实验组4(实施例3制备得到的神秘果树根提取物)、实验组5(实施例4制备得到的神秘果树根提取物)、实验组6(实施例5制备得到的神秘果树根提取物)。每天灌胃给药1次,连续6周。每周末称量体重1次,根据体重调整给药剂量。于实验结束前1天,大鼠禁食12h,取血测空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FIN)。试验结果见表1:
从表1的结果可以看出,与正常对照组比较,模型组空腹血糖水平显著升高(p<0.01),空腹胰岛素显著降低(p<0.01),说明建模成功。
从实验组1和2中的空腹血糖及空腹胰岛素数据可以看出,从神秘果树根中分离得到的β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯均具有降血糖以及提升血液中胰岛素含量的作用,尤其是β-香树脂醇乙酸酯的具有很好的降血糖作用。
从实验组3~6可以看出,本发明制备得到的神秘果树根提取物都具有很好的降血糖以及提升血液中胰岛素含量的作用。这说明本发明所述的提取物可以作为治疗糖尿病的药物或保健品使用。从其降血糖数据可以看出,提取物中有效成分含量越高,降血糖的作用效果越好。
实施例7降血脂实验
取SD大鼠50只,雌雄各半,分为正常组(喂普通饲料)、高脂饲料组、实验组1(实施例2制备得到的提取物)、实验组2(实施例5制备得到的提取物)、阳性对照组(洛伐他汀)每组各为10只,高脂饲料组、实验组、以及阳性对照组喂养高脂饲料,实验组1、2同时每天按3mg/kg的量喂相应实施例制备得到的提取物,阳性对照组每天按3mg/kg的量喂洛伐他汀。
按组别喂养各组大鼠,自由饮水,连续给药35天后,处死动物,腹腔静脉取血,测定血脂。用酶法、沉淀法在全自动生化分析仪上测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)的含量。实验结果如表2所示。
从表2中可以看出,高脂饲料组大鼠血清的TC和TG浓度均显著高于正常饲料组(P<0.01),说明建模成功。
实验组1、2大鼠的血清TC,TG浓度均低于高脂饲料组(P<0.05),说明本发明制备得到提取物具有降血脂作用和降胆固醇的作用,因此,本发明提取物可以作为治疗高血脂症的药物使用。从表2中还可以看出,实验组1对大鼠的血清TC,TG浓度降低得更为明显,且优于阳性对照药洛伐他汀,说明本发明提取物中的有效成分含量越高,其降血脂以及降胆固醇的作用越好。
Claims (10)
1.一种神秘果树根提取物,其特征在于,包含有效成分β-香树脂醇乙酸酯和/或羽扇豆醇乙酸酯。
2.根据权利要求1所述的神秘果树根提取物,其特征在于,所述的β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯的重量之和占提取物总重量的20%~99%。
3.根据权利要求2所述的神秘果树根提取物,其特征在于,提取物中所述的β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯的重量比为1~10:1~10。
4.权利要求1~3任一项所述的神秘果树根提取物的制备方法,其特征在于,包含如下步骤:
S1.首先将神秘果树根用有机溶剂提取,得有机溶剂提取物;
S2.将有机溶剂提取物经石油醚、二氯甲烷、氯仿和环己烷中的任意一种溶剂或任意二种以上的混合溶剂萃取得萃取物;
S3.将萃取物经硅胶柱层析富集有效成分即得;所述的硅胶柱层析的条件为:首先用体积比为98:2~80:20的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系进行洗脱除杂;然后再用体积比为70:30~60:40的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系进行洗脱并收集洗脱部位,浓缩干燥即得所述的神秘果树根提取物;所述的溶剂A选自石油醚、二氯甲烷、氯仿或环己烷,所述的溶剂B选自乙酸乙酯、丙酮或甲醇。
5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤S1中所述的有机溶剂为甲醇或乙醇。
6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述的有机溶剂为体积分数为70%~95%的甲醇或乙醇。
7.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤S3中所述的硅胶柱层析的条件为:首先体积比为90:10~80:20的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系进行洗脱除杂;然后再用体积比为70:30~60:40的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系进行洗脱并收集洗脱部位,浓缩干燥即得所述的神秘果树根提取物。
8.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系为环己烷:乙酸乙酯。
9.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤S3中所述的硅胶柱层析的条件为:首先体积比为80:20的环己烷:乙酸乙酯组成的混合溶剂体系进行洗脱除杂;然后再用体积比为65:35的环己烷:乙酸乙酯组成的混合溶剂体系进行洗脱并收集洗脱部位,浓缩干燥即得所述的神秘果树根提取物。
10.权利要求1~3任一项所述的神秘果树根提取物在制备治疗糖尿病或高血脂症的药物或保健品中的应用。
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Legal Events
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---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20160316 |