CN105385641A - 一种金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法 - Google Patents

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张燕
何乔飞
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宋鑫金
李娟芳
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Abstract

本发明公开了一种金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法，将金枪鱼蛋白胨作为大肠杆菌的营养物质用于大肠杆菌的培养基中。本发明以金枪鱼蛋白胨为大肠肝菌的营养物质，弥补了传统动物蛋白的原料价格高，资源少，致病风险等问题及植物蛋白氨基酸储存缺陷和培养效果不好等问题。

Description

一种金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法
技术领域
本发明涉及一种大肠杆菌培养培养方法。
背景技术
随着生物发酵的要求日趋标准化、精细化，常规使用的植物及陆生动物蛋白胨逐渐显露弊端。因此，人们开始向生命的起源地——海洋寻求蛋白资源的突破利用。我国各种水产品年产量可达5906万t(2012)，占全球总量3.67％，居世界首位。鱼类副产物占鱼体总重的40％～60％，其特点之一是水分含量很高，极易腐败变质，需要及时利用，另一个特点是蛋白含量高，脂质含量少，以水产加工副产物蛋白作为蛋白质原料，生产试用于发酵工业生产、实验室微生物培养等的蛋白胨产品，具有供需连接、技术可行的有利条件，是一重要趋势。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供了一种稳定性好、氨基酸含量高的金枪鱼蛋白胨的制备方法。
本发明的目的通过以下技术方案来具体实现：
一种金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法，将金枪鱼蛋白胨作为大肠杆菌的营养物质用于大肠杆菌的培养基中。
制备液体培养基时，该方法包括以下步骤：
1)称取金枪鱼蛋白胨，按照1.5-4.5％浓度溶解于纯水中，制得液体培养基；
2)加入酸碱稳定剂；
3)高温灭菌；
4)密封冷却至50-60℃，配用后采用常规微生物培养操作，进行大肠杆菌培养。
制备固体培养基时，该方法包括以下步骤：
1)称取金枪鱼蛋白胨，按照1.5-4.5％浓度溶解于纯水中；
2)加入酸碱稳定剂；
3)加入琼脂糖，得固体培养基；
4)高温灭菌；
5)培养基冷却至50-60℃，加入抗生素后倒板，配用后采用常规微生物培养操作，进行大肠杆菌培养。
优选的，所述金枪鱼蛋白胨：琼脂糖的重量比为(1.5-4.5)：(1-2)。
优选的，所述酸碱稳定剂为0.1-0.5％质量浓度的磷酸二氢钾和/或磷酸氢二钾。
优选的，加入的酸碱稳定剂与金枪鱼蛋白胨的重量比为1：1。
优选的，所述高温灭菌，采用放入高压灭菌锅121℃灭菌20-30min。
优选的，所述高压灭菌锅的压力为0.1-0.15MPa。
本发明使用的金枪鱼蛋白胨以金枪鱼红肉为原料，通过双酶酶解及絮凝沉淀法制备而成，具体操作步骤如下：
1)剔除金枪鱼红肉中的鱼内脏、鱼骨等杂质，在室温下斩拌切碎，得到红肉肉糜；
2)在金枪鱼红肉肉糜中加入水，搅拌混匀后，升温至40～60℃，加氨水，调整pH值至6.0～8.5，加一号蛋白酶酶解0.5～2h，得到第一次水解液；
3)在第一次水解液中加磷酸5～20mL/kg，pH值调节至5.0～8.5，加入二号蛋白酶，继续搅拌酶解2.5～4.5h后，升温至70～100℃灭酶；
4)将灭活后的水解液用絮凝剂静置分层，取含有目标成分的上清液加入0.1‰-10‰絮凝剂，低速搅拌；
5)离心沉淀不溶性杂质成分，取清液进行固形物检测；
6)对清液进行真空浓缩，再进行喷雾干燥和干粉收集。
本发明以金枪鱼蛋白胨为大肠肝菌的营养物质，具有以下好：
1.弥补了传统动物蛋白的原料价格高，资源少，致病风险等问题及植物蛋白氨基酸储存缺陷，培养效果不好等问题；
2.从鱼类加工厂的下脚料中提取蛋白成分，是对废弃物的利用，也是对环境在一定程度上的保护；
3.原料来源丰富易得，舟山地处沿海城市且有中国最大的舟山渔场，其鱼类产量具有一定优势，金枪鱼加工厂也有十二家之多，可见其金枪鱼来源之丰富；
4.利润更加丰厚，市场上金枪鱼的红肉需3000元/吨，而蛋白胨的含量为15％，我们对于蛋白胨的利用率为60％-90％，所以总的利用率为9％-14％，而市场上每公斤蛋白胨产品为60元，也就是说每吨的利润为2400-5100元。
附图说明
图1为金枪鱼蛋白胨固体培养基的DH5α大肠杆菌培养效果图。
具体实施方式
以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1：
1.制备金枪鱼蛋白胨：从鱼类加工厂废弃物中挑选金枪鱼红肉并斩拌，胰酶水解酶双酶解，骨胶絮凝，真空浓缩制粉；
2.使用喷雾干燥制备的蛋白胨粉按照2.5％浓度溶解于纯水中；
3.加入浓度为0.3％质量浓度的与蛋白胨等量磷酸二氢钾；
4.配合琼脂糖粉(蛋白胨粉：琼脂糖粉为2.5：1)混合制备固体培养基；
5.经高压灭菌锅121℃30分钟灭菌，高压灭菌锅的压力为0.1-0.15MPa；
6.培养基冷却至50-60℃，加入抗生素后倒板，进行大肠杆菌DH5α涂板培养实验。
如图1所示，即为金枪鱼蛋白胨固体培养基的DH5α大肠杆菌培养效果图。
实施例2：
1.制备金枪鱼蛋白胨：从鱼类加工厂废弃物中挑选金枪鱼红肉并斩拌，胰酶水解酶双酶解，骨胶絮凝，真空浓缩制粉；
2.使用喷雾干燥制备的蛋白胨粉按照4.5％浓度溶解于纯水中；
3.加入浓度为0.1％质量浓度的与蛋白胨等量磷酸氢二钾；
4.配合琼脂糖粉(蛋白胨粉：琼脂糖粉为4.5：1)混合制备固体培养基；
5.经高压灭菌锅121℃30分钟灭菌，高压灭菌锅的压力为0.1-0.15MPa；
6.培养基冷却至50-60℃，加入抗生素后倒板，进行大肠杆菌DH5α涂板培养实验。
实施例3：
1.制备金枪鱼蛋白胨：从鱼类加工厂废弃物中挑选金枪鱼红肉并斩拌，胰酶水解酶双酶解，骨胶絮凝，真空浓缩制粉；
2.使用喷雾干燥制备的蛋白胨粉按照4.5％浓度溶解于纯水中；
3.加入浓度为0.5％质量浓度的与蛋白胨等量磷酸二氢钾与磷酸氢二钾按1：1的混合物；
4.配合琼脂糖粉(蛋白胨粉：琼脂糖粉为4.5：1)混合制备固体培养基；
5.经高压灭菌锅121℃30分钟灭菌，高压灭菌锅的压力为0.1-0.15MPa；
6.培养基冷却至50-60℃，加入抗生素后倒板，进行大肠杆菌DH5α涂板培养实验。
实施例4：
1.制备金枪鱼蛋白胨：从鱼类加工厂废弃物中挑选金枪鱼红肉并斩拌，胰酶水解酶双酶解，骨胶絮凝，真空浓缩制粉；
2.使用喷雾干燥制备的蛋白胨粉按照2.5％浓度溶解于纯水中，形成液体的培养基；
3.加入浓度为0.3％质量浓度的与蛋白胨等量磷酸二氢钾；
4.经高压灭菌锅121℃30分钟灭菌，高压灭菌锅的压力为0.1-0.15MPa；
5.培养基冷却至50-60℃，4进行大肠杆菌DH5α涂板培养实验。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法，其特征在于：将金枪鱼蛋白胨作为大肠杆菌的营养物质用于大肠杆菌的培养基中。
2.根据权利要求1所述的金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
1)称取金枪鱼蛋白胨，按照1.5-4.5％浓度溶解于纯水中，制得液体培养基；
2)加入酸碱稳定剂；
3)高温灭菌；
4)密封冷却至50-60℃，配用后采用常规微生物培养操作，进行大肠杆菌培养。
3.根据权利要求1所述的金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
1)称取金枪鱼蛋白胨，按照1.5-4.5％浓度溶解于纯水中；
2)加入酸碱稳定剂；
3)加入琼脂糖，得固体培养基；
4)高温灭菌；
5)培养基冷却至50-60℃，加入抗生素后倒板，配用后采用常规微生物培养操作，进行大肠杆菌培养。
4.根据权利要求3所述的金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法，其特征在于：所述金枪鱼蛋白胨：琼脂糖的重量比为(1.5-4.5)：(1-2)。
5.根据权利要求2-4任一项所述的金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法，其特征在于：所述酸碱稳定剂为0.1-0.5％质量浓度的磷酸二氢钾和/或磷酸氢二钾。
6.根据权利要求2-4任一项所述的金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法，其特征在于：加入的酸碱稳定剂与金枪鱼蛋白胨的重量比为1：1。
7.根据权利要求2-4任一项所述的金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法，特征在于：所述高温灭菌，采用放入高压灭菌锅121℃灭菌20-30min。
8.根据权利要求7所述的金枪鱼蛋白胨在大肠杆菌培养中的应用方法，特征在于：所述高压灭菌锅的压力为0.1-0.15MPa。
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