CN105349403A - 一种带电荷纳米结构细胞芯片的制备及应用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种带电荷纳米结构细胞芯片的制备及应用方法，用于细胞高效检测，属于功能材料、生物医学材料及检测分析技术领域。本发明是将洁净的透明基片置于火焰上,在基片的表面进行物理沉积，得到由纳米烟灰颗粒组成的烟灰层,对烟灰基底进行水蒸气沉积，以此为模板，采用含硅化合物进行化学气相沉积,在烟灰颗粒的表面沉积一层二氧化硅外壳层；然后通过高温煅烧,将纳米烟灰颗粒除去,得到具有纳米结构的二氧化硅层；最后，将带有氨基或羧基的化学试剂修饰在所述的二氧化硅层的表面，得到用于细胞检测的带电荷的纳米结构细胞芯片。本发明的带电荷的细胞芯片制备方法简单，具有良好的光学性能，高效的捕获率和粘附率。

Description

一种带电荷纳米结构细胞芯片的制备及应用方法
技术领域
本发明属于纳米材料制备，功能材料，生物医学材料以及检测分析技术领域，特别涉及到具有三维拓扑结构带电荷的二氧化硅纳米结构细胞芯片的制备方法。
背景技术
随着科技的发展，尤其是工业化进程的推进，人们的物质水平得到了很大的改善，然而任何事情均具有两面性，是一把双刃剑。与此同时，环境问题也逐渐成为大家街头巷议的焦点，环境的污染程度令每个人都不寒而栗，雾霾等环境问题成了大家在健康领域的极大阻力。生活其中，很多疾病应运而生，尤其是各式各样的癌症，夺去了很多人的生命。然而很多疾病发现之时，却已是中后期，或者晚期。因此，如何及早发现，及早治疗，防患于未然，或者是防微杜渐，成为了医学界的热门话题。一般认为，一些肿瘤细胞的检测分析可以有效地应用于早期的诊断治疗，以及药物的疗效评估，包括像临床筛药，检测药物耐药性等，或者检测肿瘤是否复发，以及研发一些新的治疗药物等等，随着现代检测技术的应用，科学家和医学家们也研发了许许多多用于细胞富集以及检测的方法和技术，例如，基于尺寸大小的膜过滤法，免疫磁珠的分离方法等等，然而还有很多问题具有很大挑战和机遇。因为人体血液中的癌细胞数量非常的少，处于痕量的级别，大约每几亿的正常细胞中才发现一个癌变的肿瘤细胞，对其检测的方法和技术要求非常高，并且仪器也要具备很好的灵敏性才可以高效的检测分析到目标。并且，检测到的癌细胞还要具有生物活性，以便进行后续的分析研究。因此，寻找用于检测癌细胞的既简洁又灵敏的方法，成了众多医学家追逐的目标和亟待解决的问题。
众所周知，细胞表面成有一定的电负性，究其原因，不同生物学家和医学家从不同的角度都给予的充分的解释，大家都能接受并且最为直观的解释，就是从组成结构分析，因为细胞膜是由磷脂双分子层的结构作为支架而构成，亲水的磷酸集团在外面，疏水的脂肪酸在里面，磷酸基团带负电。除了磷脂，糖醛酸也是产生负电荷的重要原因，还有聚阴离子寡糖在细胞膜上也有分布。因此，当用于检测的基底表面由带有氨基官能团的化学物质修饰后得到带正电荷的细胞芯片，其对细胞的粘附效率就会有所增加；而当用于检测细胞的基底由羧基进行化学修饰后得到带负电荷的细胞芯片，其对细胞的粘附效率自然会有所下降。因此，寻找研发具有氨基修饰的生物材料，在癌细胞高效灵敏地检测分析领域，对科学家和医学家而言，都具有非常广阔的发展前景。
发明内容
为了解决以往对癌细胞粘附检测分析效率比较低的现状，本发明的应用材料在于克服已有技术的不足，提出了在三维拓扑纳米结构表面修饰氨基官能团的带正电荷的细胞芯片，继而能够较好的粘附、检测、分析癌细胞的生物医学材料。从而使癌细胞能够高效灵敏地被医学家和科学家检测分析，最终应用于医生对患者的诊断治疗，造福千千万万的癌症患者，甚至于其他病患身上，为大家的健康保驾护航。
一种带电荷纳米结构细胞芯片的制备方法，其特征在于：
(1).细胞芯片的基底为三维二氧化硅纳米结构；
(2).细胞芯片基底表面通过不同厚度的烟灰层来制备；
(3).细胞芯片基底表面用带有氨基的功能化试剂修饰，得到带正电荷细胞芯片；
(4).细胞芯片基底表面由带有羧基的功能化试剂来修饰，得到带负电荷细胞芯片；
(5).由氨基官能团修饰的细胞芯片，细胞粘附数量较多；由羧基修饰的细胞芯片，细胞粘附数量较少。
本发明具体制备步骤如下：
(1)在细胞芯片的玻璃基底表面制备烟灰层：
将玻璃基底表面依次用丙酮、乙醇、去离子水等进行超声清洗，待清洗干净之后再用氮气吹干。然后将干净的细胞芯片基底置于平稳燃烧的火焰上方，均匀的左右移动，控制不同的时间，可以得到不同厚度的烟灰层。
(2)高温煅烧细胞芯片基底，生成二氧化硅纳米结构：
将表面生成二氧化硅纳米结构的细胞芯片基底，置于潮湿的密闭空间中，在水蒸气作用下进行气相沉积，使水分子附着在烟灰表面。然后再将其置于密闭的充满含硅化合物的容器中进行气相沉积。当反应完成之后，将其置于马弗炉中，进行高温煅烧。首先经过4-5个小时，进行升温至600度，然后保持这个温度两个小时，之后让其自然冷却至室温，以备后续实验所用。
(3)将具有二氧化硅纳米结构的细胞芯片基底分别修饰氨基官能团、羧基官能团：
将含有二氧化硅纳米结构的细胞芯片基底经过氧等离子体plasma处理，然后浸没于体积浓度4％的(3-巯基丙基)三甲氧基硅烷的乙醇溶液当中，过夜修饰12个小时，然后乙醇清洗，二甲基亚砜(DMSO)清洗，然后浸没于浓度为2mM的N-(2-氨乙基)马来酰亚胺盐酸的二甲基亚砜溶液，或者浓度为2mM的3-马来酰亚胺基丙酸的二甲基亚砜溶液当中，常温下放置6h,之后取出用磷酸缓冲液进行清洗2-3遍，继而得到用于细胞检测的细胞芯片。
所述细胞芯片的载体包括有玻璃、石英、硅片等。
细胞芯片的二氧化硅纳米结构可以具有不同厚度的烟灰层，主要是将基片在火焰上方，控制不同的时间，5-15秒。细胞芯片在火焰上的时间越短，烟灰层就越薄；时间越长，烟灰层就越厚。
烟灰所用的火焰来自于植物油脂，动物油脂，酒精灯，或者蜡烛。
本发明在细胞芯片的表面进行细胞粘附检测，以及荧光拍摄的具体步骤是将基底置于浓度105/ml的3T3细胞悬浮液当中，然后放在培养箱中15～120分钟；将已经粘附癌细胞的基底用多聚甲醛进行固定，磷酸缓冲液PBS清洗，TritonX-100穿膜，PBS清洗，4,6-diamidino-2-phenylindoledihydrochloride(DAPI)，染色PBS清洗；之后用Nikon荧光显微镜进行拍摄。
本发明的带电荷的细胞芯片制备方法简单，具有良好的光学性能，高效的捕获率和粘附率。
附图说明：
图1是本发明用于细胞检测的纳米二氧化硅基底的正面的扫描电子显微镜图。
图2是本发明用于细胞检测的纳米二氧化硅基底的侧面的扫描电子显微镜图。
图3是本发明带正电荷的细胞芯片粘附细胞的环境扫描电子显微镜图。
图4是实施案例1由氨基修饰的带正电荷的细胞芯片和实施案例2由羧基修饰的带负电荷的细胞芯片分别检测细胞数目的对比图。
具体实施方式
实施例对本发明的技术方案进一步说明
实施例1：取实验室所用的普通载玻片，切成1cm×1cm的正方形，将玻璃片浸泡在“食人鱼”溶液(98％H2SO4和30％H2O2，比例为3:1)中，放置在200℃的加热板上,加热1小时左右，取出后分别用丙酮超声15min、乙醇超声15min、去离子超声10min，然后用氮气吹干。将清洗好的载玻片放置在平稳的蜡烛火焰上方，左右均匀移动15s，即可以得到具有多孔网状结构的较厚烟灰层。将得到的样品置于六孔板的五个孔中，其中一个孔加入3mL的去离子水，将六孔板进行密封，室温放置一个小时。待烟灰层吸附水蒸气完毕之后，打开六孔板，取出玻璃片，放置于培养皿中，(玻璃片的下面垫一层载玻片)，在培养皿旁边加入100微升四氯化硅溶液(SiCl4)，密封保存，室温下放置一个小时，使水蒸气和四氯化硅发生水解作用，生成的SiO2包覆在烟灰颗粒外，形成SiO2外壳。把得到的样品放在马弗炉中，调整程序设置，使其经过5个小时升至600℃，然后保持加热2小时，最后自然冷却，如此便可得到具有多孔网状结构的SiO2纳米结膜层。
将制备好的具有二氧化硅纳米结构的玻璃片基底进行氧等离子体设备处理(即打plasma)，等离子体处理的功率参数设置为200W，时间设置为300秒，使其表面羟基化，然后置于玻璃仪器中，使(3-巯基丙基)三甲氧基硅烷的乙醇溶液浸没基底，室温放置过夜(12小时)，然后用乙醇清洗，DMSO润洗。然后浸没于浓度为2mM的N-(2-氨乙基)马来酰亚胺盐酸的二甲基亚砜溶液当中，室温放置6个小时，使其表面氨基化，之后再用磷酸缓冲液清洗三遍，继而得到带有正电荷的细胞芯片。
将3T3细胞进行酶解，离心，计数，制备成浓度为105/mL的细胞悬浮液。将细胞芯片放入杀菌消毒的六孔板中当中，每个孔内加入3mL之前配置好的细胞悬浮液，然后将六孔板放在37度，5％CO2的细胞培养箱中分别放置15分钟，30分钟，45分钟，60分钟，90分钟，120分钟。
取出细胞芯片，用磷酸缓冲液PBS清洗三遍，浸没于4％的多聚甲醛溶液20分钟，进行细胞固定，然后用PBS清洗；紧接着每个细胞芯片用20微升0.2％TritonX-100溶液当中10分钟进行穿膜处理，PBS清洗；最后每片用20微升DAPI进行染色。
用Nikon荧光显微镜10倍条件下进行拍摄，细胞芯片倒置，每次相同条件下用3个细胞芯片，每个细胞芯片上在不同位置取15个点，进行拍照，然后计算每片粘附3T3细胞的数量，统计平均值，画图。
实施例2：取实验室所用的普通载玻片，切成1cm×1cm的正方形，将玻璃片浸泡在“食人鱼”溶液(98％H2SO4和30％H2O2，比例为3:1)中，放置在200℃的加热板上,加热1小时左右，取出后分别用丙酮超声15min、乙醇超声15min、去离子超声10min，然后用氮气吹干。将清洗好的载玻片放置在平稳的蜡烛火焰上方，左右均匀移动15s，即可以得到具有多孔网状结构的较厚烟灰层。将得到的样品置于六孔板的五个孔中，其中一个孔加入3mL的去离子水，将六孔板进行密封，室温放置一个小时。待烟灰层吸附水蒸气完毕之后，打开六孔板，取出玻璃片，放置于培养皿中，(玻璃片的下面垫一层载玻片)，在培养皿旁边加入100微升四氯化硅溶液(SiCl4)，密封保存，室温下放置一个小时，使水蒸气和四氯化硅发生水解作用，生成的SiO2包覆在烟灰颗粒外，形成SiO2外壳。把得到的样品放在马弗炉中，调整程序设置，使其经过5个小时升至600℃，然后保持加热2小时，最后自然冷却，如此便可得到具有多孔网状结构的SiO2纳米结膜层。
将制备好的具有二氧化硅纳米结构的玻璃片基底进行氧等离子体设备处理(即打plasma)，等离子体处理的功率参数设置为200W，时间设置为300秒，使其表面羟基化，然后置于玻璃仪器中，使(3-巯基丙基)三甲氧基硅烷的乙醇溶液浸没基底，室温放置过夜(12小时)，然后用乙醇清洗，DMSO润洗。然后浸没于浓度为2mM的3-马来酰亚胺基丙酸的二甲基亚砜溶液当中，室温放置6个小时，使其表面羧基化，之后再用磷酸缓冲液清洗三遍，继而得到带有负电荷的细胞芯片。
将3T3细胞进行酶解，离心，计数，制备成浓度为105/mL的细胞悬浮液。将细胞芯片放入杀菌消毒的六孔板中当中，每个孔内加入3mL之前配置好的细胞悬浮液，然后将六孔板放在37度，5％CO2的细胞培养箱中分别放置15分钟，30分钟，45分钟，60分钟，90分钟，120分钟。
取出已被细胞粘附的细胞芯片，用磷酸缓冲液PBS清洗三遍，浸没于4％的多聚甲醛溶液20分钟，进行细胞固定，然后用PBS清洗；紧接着每片用20微升0.2％TritonX-100溶液当中10分钟进行穿膜处理，PBS清洗；最后每片用20微升DAPI进行染色。
用Nikon荧光显微镜10倍条件下进行拍摄，细胞芯片倒置，每次相同条件下做3片，每个细胞芯片在不同位置取15个点，进行拍照，然后计算每片粘附3T3细胞的数量，统计平均值，画图。
实施例3：取实验室所用的普通载玻片，切成1cm×1cm的正方形，将玻璃片浸泡在“食人鱼”溶液(98％H2SO4和30％H2O2，比例为3:1)中，放置在200℃的加热板上,加热1小时左右，取出后分别用丙酮超声15min、乙醇超声15min、去离子超声10min，然后用氮气吹干。
将清洗好的玻璃片基底进行氧等离子体设备处理(即打plasma)，等离子体处理的功率参数设置为200W，时间设置为300秒，使其表面羟基化，然后置于玻璃仪器中，使(3-巯基丙基)三甲氧基硅烷的乙醇溶液浸没基底，室温放置过夜(12小时)，然后用乙醇清洗，DMSO润洗。然后浸没于浓度为2mM的N-(2-氨乙基)马来酰亚胺盐酸的二甲基亚砜溶液当中，室温放置6个小时，使其表面氨基化，之后再用磷酸缓冲液清洗三遍，继而制得带有正电荷的细胞芯片。
将3T3细胞进行酶解，离心，计数，制备成浓度为105/mL的细胞悬浮液。将细胞芯片放入杀菌消毒的六孔板中当中，每个孔内加入3mL之前配置好的细胞悬浮液，然后将六孔板放在37度，5％CO2的细胞培养箱中分别放置15分钟，30分钟，45分钟，60分钟，90分钟，120分钟。
取出细胞芯片，用磷酸缓冲液PBS清洗三遍，浸没于4％的多聚甲醛溶液20分钟，进行细胞固定，然后用PBS清洗；紧接着每片用20微升0.2％TritonX-100溶液当中10分钟进行穿膜处理，PBS清洗；最后每片用20微升DAPI进行染色。
用Nikon荧光显微镜10倍条件下进行拍摄，细胞芯片倒置，每次相同条件下做3片，每个细胞芯片在不同位置取15个点，进行拍照，然后计算每片粘附3T3细胞的数量，统计平均值，画图。
实施例4：取实验室所用的普通载玻片，切成1cm×1cm的正方形，将玻璃片浸泡在“食人鱼”溶液(98％H2SO4和30％H2O2，比例为3:1)中，放置在200℃的加热板上,加热1小时左右，取出后分别用丙酮超声15min、乙醇超声15min、去离子超声10min，然后用氮气吹干。
将清洗好的玻璃片基底进行氧等离子体设备处理(即打plasma)，等离子体处理的功率参数设置为200W，时间设置为300秒，使其表面羟基化，然后置于玻璃仪器中，使(3-巯基丙基)三甲氧基硅烷的乙醇溶液浸没基底，室温放置过夜(12小时)，然后用乙醇清洗，DMSO润洗。然后浸没于浓度为2mM的3-马来酰亚胺基丙酸的二甲基亚砜溶液当中，室温放置6个小时，使其表面羧基化，之后再用磷酸缓冲液清洗三遍，继而制得表面带负电的细胞芯片。
将3T3细胞进行酶解，离心，计数，制备成浓度为105/mL的细胞悬浮液。将细胞芯片放入杀菌消毒的六孔板中当中，每个孔内加入3mL之前配置好的细胞悬浮液，然后将六孔板放在37度，5％CO2的细胞培养箱中分别放置15分钟，30分钟，45分钟，60分钟，90分钟，120分钟。
取出细胞芯片，用磷酸缓冲液PBS清洗三遍，浸没于4％的多聚甲醛溶液20分钟，进行细胞固定，然后用PBS清洗；紧接着每片用20微升0.2％TritonX-100溶液当中10分钟进行穿膜处理，PBS清洗；最后每片基底用20微升DAPI进行染色。
用Nikon荧光显微镜10倍条件下进行拍摄，细胞芯片倒置，每次相同条件下做3片，每个细胞芯片上在不同位置取15个点，进行拍照，然后计算每片粘附3T3细胞的数量，统计平均值，画图。
实施例5：取实验室所用的普通载玻片，切成1cm×1cm的正方形，将玻璃片浸泡在“食人鱼”溶液(98％H2SO4和30％H2O2，比例为3:1)中，放置在200℃的加热板上,加热1小时左右，取出后分别用丙酮超声15min、乙醇超声15min、去离子超声10min，然后用氮气吹干。将清洗好的载玻片放置在平稳的蜡烛火焰上方，左右均匀移动5s，即可以得到具有多孔网状结构的较薄烟灰层。然后用N-(2-氨乙基)马来酰亚胺盐酸进行修饰，使其表面氨基化，继而制得带正电荷的细胞芯片。细胞芯片在37度，5％CO2的细胞培养箱中的放置时间仅取30分钟。其它步骤同实施例1。
实施例6：取实验室所用的普通载玻片，切成1cm×1cm的正方形，将玻璃片浸泡在“食人鱼”溶液(98％H2SO4和30％H2O2，比例为3:1)中，放置在200℃的加热板上,加热1小时左右，取出后分别用丙酮超声15min、乙醇超声15min、去离子超声10min，然后用氮气吹干。将清洗好的载玻片放置在平稳的蜡烛火焰上方，左右均匀移动5s，即可以得到具有多孔网状结构的较薄烟灰层。然后用3-马来酰亚胺基丙酸进行修饰，使其表面羧基化，继而制得表面带负电的细胞芯片。细胞芯片在37度，5％CO2的细胞培养箱中的放置时间仅取30分钟。其它步骤同实施例2。
实施例7：取实验室所用的普通载玻片，切成1cm×1cm的正方形，将玻璃片浸泡在“食人鱼”溶液(98％H2SO4和30％H2O2，比例为3:1)中，放置在200℃的加热板上,加热1小时左右，取出后分别用丙酮超声15min、乙醇超声15min、去离子超声10min，然后用氮气吹干。将清洗好的载玻片放置在平稳的蜡烛火焰上方，左右均匀移动10s，即可以得到具有多孔网状结构的中等厚度烟灰层。然后用N-(2-氨乙基)马来酰亚胺盐酸进行修饰，使其表面氨基化，继而制得表面带正电荷的细胞芯片。细胞芯片在37度，5％CO2的细胞培养箱中的放置时间仅取30分钟。其它步骤同实施例1。
实施例8：取实验室所用的普通载玻片，切成1cm×1cm的正方形，将玻璃片浸泡在“食人鱼”溶液(98％H2SO4和30％H2O2，比例为3:1)中，放置在200℃的加热板上，加热1小时左右，取出后分别用丙酮超声15min、乙醇超声15min、去离子超声10min，然后用氮气吹干。将清洗好的载玻片放置在平稳的蜡烛火焰上方，左右均匀移动10s，即可以得到具有多孔网状结构的中等厚度烟灰层。然后用3-马来酰亚胺基丙酸进行修饰，使其表面羧基化，继而制得表面带负电荷的细胞芯片。细胞芯片在37度，5％CO2的细胞培养箱中的放置时间仅取30分钟。其它步骤同实施例2。
实施例9：取实验室所用的普通载玻片，切成1cm×1cm的正方形，将玻璃片浸泡在“食人鱼”溶液(98％H2SO4和30％H2O2，比例为3:1)中，放置在200℃的加热板上,加热1小时左右，取出后分别用丙酮超声15min、乙醇超声15min、去离子超声10min，然后用氮气吹干。将清洗好的载玻片放置在平稳的蜡烛火焰上方，左右均匀移动15秒钟，即可以得到具有多孔网状结构的较厚烟灰层。将得到的样品置于六孔板的五个孔中，其中一个孔加入3mL的去离子水，将六孔板进行密封，室温放置一个小时。待烟灰层吸附水蒸气完毕之后，打开六孔板，取出玻璃片，放置于培养皿中，(玻璃片的下面垫一层载玻片)，在培养皿旁边加入100微升四氯化硅溶液(SiCl4)，密封保存，室温下放置一个小时，使水蒸气和四氯化硅发生水解作用，生成的SiO2包覆在烟灰颗粒外，形成SiO2外壳。把得到的样品放在马弗炉中，调整程序设置，使其经过5个小时升至600℃，然后保持加热2小时，最后自然冷却，如此便可得到具有多孔网状结构的SiO2纳米结膜层。
将制备好的具有二氧化硅纳米结构的玻璃片基底进行氧等离子体设备处理(即打plasma)，等离子体处理的功率参数设置为200W，时间设置为300秒，使其表面羟基化，然后置于玻璃仪器中，使(3-巯基丙基)三甲氧基硅烷的乙醇溶液浸没基底，室温放置过夜(12小时)，然后用乙醇清洗，DMSO润洗。然后分别配置好浓度为2mM的N-(2-氨乙基)马来酰亚胺盐酸的二甲基亚砜溶液以及2mM的3-马来酰亚胺基丙酸的二甲基亚砜溶液，将两者溶液按照不同的体积比，即0:4，1:3，2:2,3:1，4:0等进行混合均匀，将平玻璃片及具有二氧化硅纳米结构的玻璃片基底分别置于不同比例浓度的溶液中，室温放置6个小时，之后用磷酸缓冲液清洗三遍，继而制得五种不同的细胞芯片。每种细胞芯片在37度，5％CO2的细胞培养箱中的放置时间仅取30分钟。其它步骤同实施例1。

Claims (6)

1.一种带电荷纳米结构细胞芯片的制备方法，其特征在于：
(1).细胞芯片的基底为三维二氧化硅纳米结构；
(2).细胞芯片基底表面通过不同厚度的烟灰层来制备；
(3).细胞芯片基底表面用带有氨基的功能化试剂修饰，得到带正电荷细胞芯片；
(4).细胞芯片基底表面由带有羧基的功能化试剂来修饰，得到带负电荷细胞芯片；
(5).由氨基官能团修饰的细胞芯片，细胞粘附数量较多；由羧基修饰的细胞芯片，细胞粘附数量较少。
2.根据权利要求1所述一种带电荷纳米结构细胞芯片的制备方法，其特征在于：具体制备步骤如下：
(1)细胞芯片表面制备烟灰层：
将玻璃片基底表面依次用丙酮、乙醇、去离子水进行超声清洗，待清洗干净之后再用氮气吹干，然后将干净的细胞芯片基底置于平稳燃烧的火焰上方，均匀的左右移动，控制不同的时间，得到不同厚度的烟灰层；
(2)高温煅烧玻璃基底，在细胞芯片表面生成二氧化硅纳米结构：
将表面生成二氧化硅纳米结构的细胞芯片，置于潮湿的密闭空间中，在水蒸气作用下进行气相沉积，使水分子附着在烟灰表面；然后再将其置于密闭的充满含硅化合物的容器中进行气相沉积；当反应完成之后，将其置于马弗炉中，进行高温煅烧；首先经过4-5个小时，进行升温至600度，然后保持这个温度两个小时，之后让其自然冷却至室温，以备后续实验所用；
(3)将二氧化硅纳米结构的细胞芯片分别修饰氨基官能团、羧基官能团：
将含有二氧化硅纳米结构的细胞芯片经过氧等离子体plasma处理，然后浸没于体积浓度4％的(3-巯基丙基)三甲氧基硅烷的乙醇溶液当中，过夜修饰12个小时，然后乙醇清洗，二甲基亚砜清洗，再浸没于浓度为2mM的N-(2-氨乙基)马来酰亚胺盐酸的二甲基亚砜溶液，或者浓度为2mM的3-马来酰亚胺基丙酸的二甲基亚砜溶液当中，常温下放置5-6h，之后取出用磷酸缓冲液进行清洗2-3遍，得到用于高效检测的细胞芯片。
3.根据权利要求1或2所述一种带电荷纳米结构细胞芯片的制备方法，其特征在于：所述细胞芯片的载体为玻璃、石英、硅片。
4.如权利要求1或2所述一种带电荷纳米结构细胞芯片的制备方法，其特征在于，细胞芯片的二氧化硅纳米结构具有不同厚度的烟灰层，主要是将基片在火焰上方，控制时间为5-15秒；玻璃片在火焰上的时间越短，烟灰层就越薄；时间越长，烟灰层就越厚。
5.如权利要求4所述一种带电荷纳米结构细胞芯片的制备方法，其特征在于，烟灰所用的火焰来自于植物油脂，动物油脂，酒精灯，或者蜡烛。
6.根据权利要求1或2所述方法制备的带电荷纳米结构细胞芯片的应用方法，其特征在于：在细胞芯片的表面进行细胞粘附检测，以及荧光拍摄，具体步骤是将基底置于浓度105/ml的3T3细胞悬浮液当中，然后放在培养箱中15～120分钟；将已经粘附癌细胞的基底用多聚甲醛进行固定，磷酸缓冲液PBS清洗，TritonX-100穿膜，PBS清洗，4,6-diamidino-2-phenylindoledihydrochloride(DAPI)，染色PBS清洗；之后用Nikon荧光显微镜进行拍摄。
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