CN105330708A - 延胡索乙素衍生物及其制备方法、用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种化合物及其制备方法和用途，该化合物为式I所示的化合物或式I所示化合物的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，该化合物为延胡索乙素衍生物。本发明所提出的化合物具有在制备药物中的用途，该药物可显著抑制真核生物肿瘤细胞的增殖和/或治疗或预防肿瘤。

Description

延胡索乙素衍生物及其制备方法、用途

技术领域

本发明涉及化学医药领域，具体的，本发明涉及一种化合物及其制备方法和用途，更具体的，本发明涉及一种延胡索乙素衍生物及其制备方法和其在制备药物中的用途，该药物用于抑制肿瘤细胞的增殖和/或治疗或预防肿瘤。

背景技术

随着吸烟和各种环境因素的影响，世界各国特别是工业发达国家，肺癌的发病率和病死率均迅速上升。肺癌已成为全球发病率和死亡率最高的肿瘤。非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)约占肺癌发病率的80％～85％。因NSCLC患者早期症状不明显，约2/3的NSCLC患者在确诊时已不具备手术条件，药物治疗仍是NSCLC的主要临床治疗方法。鉴于目前临床使用的抗NSCLC药物大都均有较强的毒副作用以及化疗耐药性，所以NSCLC的临床治疗效果一直没有取得满意的效果。因此，研究开发出更为安全有效的抗NSCLC新药成为亟待解决的问题。

中药是中华民族几千年来与疾病作斗争的经验总结。中药有效成分众多，很多成分都具有很好的生物活性，并已广泛用于临床。延胡索为罂粟科紫堇植物延胡索的干燥块茎，具有活血、利气、止痛的功效。延胡索乙素是延胡索主要的活性成分。延胡索乙素具有镇痛、镇静、助眠及安定作用，尤其对胃肠系统引起的钝痛有效。目前延胡索乙素作为镇痛助眠类非处方药品已广泛应用于临床。

然而，延胡索乙素衍生物及其用途仍有待进一步开发。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。

为此，本发明提出了一种具有显著抑制人肺癌细胞增殖功效的新型延胡索乙素衍生物。

在本发明的第一方面，本发明提出了一种化合物。根据本发明的实施例，所述化合物为式I所示化合物或式I所示化合物的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，

其中，R1、R2、R3和R4分别独立地选自卤素、烷基、羟基、胺基、糖基，前提是R1、R2、R3和R4至少之一为糖基。根据本发明的实施例，本发明所提出的化合物具有较强的抗肿瘤活性，且毒副作用低，尤其可显著抑制肺癌细胞的增殖，对肺癌的治疗或预防有显著功效。

需要说明的是，除非其他方面表明，本发明的化合物的所有互变异构形式都包含在本发明的范围之内。另外，除非其他方面表明，本发明所描述的化合物的结构式包括一个或多个不同的原子的富集同位素。

本文中所使用的术语“水合物”是指本发明所提供的化合物或其盐，其还包括化学量或非化学当量通过非共价分子间力结合的水，也可说是溶剂分子是水所形成的缔合物。

术语“溶剂化物”是指一个或多个溶剂分子与本发明的化合物所形成的缔合物。形成溶剂化物的溶剂包括，但并不限于，水，异丙醇，乙醇，甲醇，二甲亚砜，乙酸乙酯，乙酸，氨基乙醇。

术语“氮氧化物”是指当化合物含几个胺官能团时，可将1个或大于1个的氮原子氧化形成N-氧化物。N-氧化物的特殊实例是叔胺的N-氧化物或含氮杂环氮原子的N-氧化物。可用氧化剂例如过氧化氢或过酸(例如过氧羧酸)处理相应的胺形成N-氧化物(参见AdvancedOrganicChemistry,WileyInterscience,第4版,JerryMarch,pages)。尤其是，N-氧化物可用L.W.Deady的方法制备(Syn.Comm.1977,7,509-514)，其中例如在惰性溶剂，例如二氯甲烷中，使胺化合物与间氯过氧苯甲酸(MCPBA)反应。

本发明所使用的术语“前药”，代表一个化合物在体内转化为式(I)-(IIc)所示的化合物。这样的转化受前体药物在血液中水解或在血液或组织中经酶转化为母体结构的影响。本发明前体药物类化合物可以是酯，在现有的发明中酯可以作为前体药物的有苯酯类，脂肪族(C_1-24)酯类，酰氧基甲基酯类，碳酸酯，氨基甲酸酯类和氨基酸酯类。例如本发明里的一个化合物包含羟基，即可以将其酰化得到前体药物形式的化合物。其他的前体药物形式包括磷酸酯，如这些磷酸酯类化合物是经母体上的羟基磷酸化得到的。关于前体药物完整的讨论可以参考以下文献：T.HiguchiandV.Stella,Pro-drugsasNovelDeliverySystems,Vol.14oftheA.C.S.SymposiumSeries,EdwardB.Roche,ed.,BioreversibleCarriersinDrugDesign,AmericanPharmaceuticalAssociationandPergamonPress,1987,J.Rautioetal,Prodrugs:DesignandClinicalApplications,NatureReviewDrugDiscovery,2008,7,255-270,andS.J.Heckeretal,ProdrugsofPhosphatesandPhosphonates,JournalofMedicinalChemistry,2008,51，2328-2345。

术语“代谢产物”是指具体的化合物或其盐在体内通过代谢作用所得到的产物。一个化合物的代谢产物可以通过所属领域公知的技术来进行鉴定，其活性可以通过如本发明所描述的那样采用试验的方法进行表征。这样的产物可以是通过给药化合物经过氧化，还原，水解，酰氨化，脱酰氨作用，酯化，脱脂作用，酶裂解等等方法得到。相应地，本发明包括化合物的代谢产物，包括将本发明的化合物与哺乳动物充分接触一段时间所产生的代谢产物。

本发明化合物的各种药学上可接受的盐形式都是有用的。术语“药学上可接受的盐”是指那些盐形式对于制药化学家而言是显而易见的，即它们基本上无毒并能提供所需的药代动力学性质、适口性、吸收、分布、代谢或排泄。

本发明所使用的术语“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物的有机盐和无机盐。药学上可接受的盐在所属领域是为我们所熟知的，如文献：S.M.Bergeetal.,describepharmaceuticallyacceptablesaltsindetailinJ.PharmaceuticalSciences,66:1-19,1977.所记载的。药学上可接受的无毒的酸形成的盐包括，但并不限于，与氨基基团反应形成的无机酸盐有盐酸盐，氢溴酸盐，磷酸盐，硫酸盐，高氯酸盐，和有机酸盐如乙酸盐，草酸盐，马来酸盐，酒石酸盐，柠檬酸盐，琥珀酸盐，丙二酸盐，或通过书籍文献上所记载的其他方法如离子交换法来得到这些盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐，苹果酸盐，2-羟基丙酸盐，藻酸盐，抗坏血酸盐，天冬氨酸盐，苯磺酸盐，苯甲酸盐，重硫酸盐，硼酸盐，丁酸盐，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，环戊基丙酸盐，二葡萄糖酸盐，十二烷基硫酸盐，乙磺酸盐，甲酸盐，反丁烯二酸盐，葡庚糖酸盐，甘油磷酸盐，葡萄糖酸盐，半硫酸盐，庚酸盐，己酸盐，氢碘酸盐，2-羟基-乙磺酸盐，乳糖醛酸盐，乳酸盐，月桂酸盐，月桂基硫酸盐，苹果酸盐，丙二酸盐，甲磺酸盐，2-萘磺酸盐，烟酸盐，硝酸盐，油酸盐，棕榈酸盐，扑酸盐，果胶酸盐，过硫酸盐，3-苯基丙酸盐，苦味酸盐，特戊酸盐，丙酸盐，硬脂酸盐，硫氰酸盐，对甲苯磺酸盐，十一酸盐，戊酸盐，等等。通过适当的碱得到的盐包括碱金属，碱土金属，铵和N⁺(C_1-4烷基)₄的盐。本发明也拟构思了任何所包含N的基团的化合物所形成的季铵盐。水溶性或油溶性或分散产物可以通过季铵化作用得到。碱金属或碱土金属盐包括钠盐，锂盐，钾盐，钙盐，镁盐，等等。药学上可接受的盐进一步包括适当的、无毒的铵，季铵盐和抗平衡离子形成的胺阳离子，如卤化物，氢氧化物，羧化物，硫酸化物，磷酸化物，硝酸化物，C_1-8磺酸化物和芳香磺酸化物。胺盐，例如但不限于N,N’-二苄基乙二胺盐，氯普鲁卡因盐，胆碱盐，氨盐，异丙胺盐，苄星青霉素(benzathine)盐，胆碱(cholinate)盐，赖氨酸盐，葡甲胺(meglumine)盐，哌嗪盐，氨丁三醇盐，二乙醇胺盐和其它羟烷基胺盐，乙二胺盐，N-甲基还原葡糖胺盐，普鲁卡因盐，N-苄基苯乙胺盐，1-对-氯苄基-2-吡咯烷-1’-基甲基-苯并咪唑盐和其它烷基胺盐，哌嗪盐和三(羟甲基)氨基甲烷盐；碱土金属盐，例如但不限于钡盐，钙盐和镁盐；过渡金属盐，例如但不限于锌盐。

本发明的药学上可接受的盐可以用常规化学方法由母体化合物、碱性或酸性部分来合成。一般而言，该类盐可以通过使这些化合物的游离酸形式与化学计量量的适宜碱(如Na、Ca、Mg或K的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应，或者通过使这些化合物的游离碱形式与化学计量量的适宜酸反应来进行制备。该类反应通常在水或有机溶剂或二者的混合物中进行。一般地，在适当的情况中，需要使用非水性介质如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。在例如“Remington′sPharmaceuticalSciences”，第20版，MackPublishingCompany，Easton，Pa.，(1985)；和“药用盐手册：性质、选择和应用(HandbookofPharmaceuticalSalts：Properties，Selection，andUse)”，StahlandWermuth(Wiley-VCH，Weinheim，Germany，2002)中可找到另外一些适宜盐的列表。

另外，本发明公开的化合物、包括它们的盐，也可以以它们的水合物形式或包含其溶剂(例如乙醇、DMSO，等等)的形式得到，用于它们的结晶。本发明公开化合物可以与药学上可接受的溶剂(包括水)固有地或通过设计形成溶剂化物；因此，本发明旨在包括溶剂化的和未溶剂化的形式。

根据本发明的实施例，上述化合物还可以进一步包括下列附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，所述卤素为选自Cl、Br和F的至少之一。所述烷基为C_1～3烷基，优选CH₃。根据本发明的实施例，本发明所述提出的化合物为延胡索乙素衍生物，延胡索乙素具有式V所示的结构，

其中Cl、Br、F、羟基(OH)、胺基(NH₂)为CH₃的电子等排体，其具有相似的物理及化学性质，会产生大致相似、或相关的生物活性,因此卤素选自Cl、Br和F的至少之一，烷基为C_1～3烷基，优选CH₃,使得本发明所提出的化合物在保留延胡索乙素高生物活性和低毒副作用的条件下，具有了较强的抗肿瘤活性，尤其可显著抑制肺癌细胞的增殖，对肺癌的治疗或预防有显著功效。

根据本发明的实施例，所述糖基为六元糖基，优选为根据本发明的实施例，六元糖基的引入使得本发明所提出的化合物(延胡索乙素衍生物)的溶解度显著提高，生物利用度显著提高，抗肿瘤活性进一步增强，尤其可更加显著抑制肺癌细胞的增殖，对肺癌的治疗或预防有更加显著的功效。

根据本发明的实施例，所述化合物为下列化合物的至少之一，或者下列化合物的至少之一的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，

根据本发明的实施例，本发明所提出的化合物为上述化合物的至少之一或上述化合物至少之一的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，其抗肿瘤活性进一步增强，且毒副作用更低，尤其可更加显著抑制肺癌细胞的增殖，对肺癌的治疗或预防有更加显著的功效。

根据本发明的实施例，所述式I所示化合物为左旋体。根据本发明的实施例，本发明所提出的化合物为左旋体形式，其抗肿瘤活性进一步增强，且毒副作用更低，尤其可更加显著抑制肺癌细胞的增殖，对肺癌的治疗或预防有更加显著的功效。

在本发明的第二方面，本发明提出了一种制备前面所述化合物的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：(1)使式V所示化合物发生去甲基反应；(2)使步骤(1)中所得到的去甲基反应产物发生连糖环反应；以及(3)使步骤(2)中所得到的连糖环反应产物发生脱乙酰基反应，以便获得前面所述化合物，

其中，式V所示化合物为延胡索乙素的结构式。根据本发明的实施例，通过本发明提出的方法可高效地制备本发明所提出的化合物(延胡索乙素衍生物)，步骤少、成本低，且制备的化合物具有较强的抗肿瘤活性，且毒副作用低，尤其可显著抑制肺癌细胞的增殖，对肺癌的治疗或预防有显著的功效。

根据本发明的实施例，上述制备前面所述化合物的方法还可以进一步包括下列附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，所述去甲基反应是通过使式V所示化合物与三溴化硼进行接触而进行的，优选地，所述接触是在二氯甲烷中进行的。根据本发明的实施例，式V所示化合物(延胡索乙素)与三溴化硼在二氯甲烷进行接触，可使延胡索乙素的四个甲基的至少之一发生去甲基，而生成去甲基反应产物(脱甲基的延胡索乙素中间产物)，进而有利于进行进一步的连糖环反应。

根据本发明的实施例，所述连糖环反应是通过使所述去甲基反应产物与四丁基溴化铵、四乙酰葡萄糖溴接触而进行的，优选地，所述接触是在二氯甲烷中进行的。根据本发明的实施例，脱甲基的延胡索乙素中间产物与四丁基溴化铵、四乙酰葡萄糖溴在二氯甲烷中进行在接触，可使四乙酰六元糖环连入中间产物的脱甲基部位，而生成连糖环反应产物(连有四乙酰六元糖环的延胡索乙素中间产物)，进而有利于进行进一步的脱乙酰基反应。

根据本发明的实施例，所述脱乙酰基反应是通过使所述连糖环反应产物与甲醇钠进行接触而进行的，优选地，所述接触是在甲醇中进行的。根据本发明的实施例，连有四乙酰六元糖环的延胡索乙素中间产物与甲醇钠在甲醇中进行接触，可使六元糖环上的四个乙酰基发生高效的脱离，从而高效地生成本发明所提出的化合物。

根据本发明的实施例，所述方法包括：(1)使所述式V所示化合物与所述三溴化硼进行接触，以便获得式VI所示化合物，所述接触是在二氯甲烷中进行的，所述式V所示化合物与所述三溴化硼的摩尔比为1：5；所述接触是在-78℃下进行25min；(2)使步骤(1)中所得式VI所示化合物与所述四丁基溴化铵、所述四乙酰葡萄糖溴进行接触，以便获得式VII所示化合物，所述接触是在二氯甲烷中进行的，所述式VI所示化合物与所述四丁基溴化铵、所述四乙酰葡萄糖溴的摩尔比是1：1.4：1.4，所述接触是先在0℃下进行、后在40℃下进行4h；以及(3)使步骤(2)所得式VII所示化合物与所述甲醇钠进行接触，以便获得式II所示化合物，所述接触是在甲醇中进行的，所述式VII所示化合物与所述甲醇钠的质量比是1：1，所述接触是在0℃、pH≥10的条件下进行5h，

根据本发明的实施例，所述“接触是先在0℃进行、后在40℃下进行4h”是指向式VI所示化合物依次滴加四丁基溴化铵、四乙酰葡萄糖溴时，需要控制温度在0℃，滴加完成后，继续在40℃接触反应4小时。根据本发明的实施例，通过上述方法可以更加高效地制备式II所示化合物，所得式II所示化合物有很强的抗肿瘤活性，且毒副作用低，尤其可显著抑制肺癌细胞的增殖，对肺癌的治疗或预防有显著的功效。

根据本发明的实施例，所述方法包括：(1)使所述式V所示化合物与所述三溴化硼进行接触，以便获得式VIII所示化合物，所述接触是在二氯甲烷中进行的，所述式V所示化合物与所述三溴化硼的摩尔比为1：5，所述接触是在温度为-78℃下进行35min；(2)使步骤(1)中所得式VIII所示化合物与所述四丁基溴化铵、所述四乙酰葡萄糖溴进行接触，以便获得式VIIII所示化合物，所述接触是在二氯甲烷中进行的，所述式VIII所示化合物与所述四丁基溴化铵、所述四乙酰葡萄糖溴的摩尔配比是1：3：3，所述接触是先在0℃进行、后在40℃下进行4.2h；以及(3)步骤(2)所得式VIIII所示化合物与所述甲醇钠进行接触，以便获得式IV所示化合物，所述接触是在甲醇中进行的，所述式VIIII所示化合物与所述甲醇钠的质量比是1：1.4，所述接触是在0℃、PH≥10下进行5h，

根据本发明的实施例，所述“接触是先在0℃进行、后在40℃下进行4.2h”是指向式VIII所示化合物依次滴加四丁基溴化铵、四乙酰葡萄糖溴时，需要控制温度在0℃，滴加完成后，继续在40℃接触反应4.2小时。根据本发明的实施例，通过上述方法可以更加高效地制备式IV所示化合物，所得式IV所示化合物有很强的抗肿瘤活性，且毒副作用低，尤其可显著抑制肺癌细胞的增殖，对肺癌的治疗或预防有显著的功效。

在本发明的第三方面，本发明提出了本发明提出的化合物在制备药物中的用途。根据本发明的实施例，所述药物用于：抑制真核生物肿瘤细胞的增殖；和/或治疗或预防肿瘤。根据本发明的实施例，本发明所提出的化合物，有很强的抗真核生物肿瘤的活性，且毒副作用低，因此以本发明所提出的化合物制备药物，此药物可显著抑制真核生物肿瘤细胞的增殖和/或治疗或预防肿瘤。

根据本发明的实施例，上述用途还可以进一步包括下列附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，所述肿瘤细胞为选自乳腺癌细胞、肝癌细胞、胰腺癌细胞、肺癌细胞、脑癌细胞、卵巢癌细胞、子宫癌细胞、睾丸癌细胞、皮肤癌细胞、胃癌细胞、鼻咽癌细胞、结肠癌细胞、膀胱癌细胞、肛门癌细胞或直肠癌细胞的至少之一，优选地，所述肿瘤细胞为肺癌细胞。根据本发明的实施例，以本发明所提出的化合物制备药物，此药物可显著抑制上述癌细胞的增殖，尤其可显著抑制肺癌细胞的增殖。

根据本发明的实施例，所述肿瘤为选自乳腺癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、脑癌、卵巢癌、子宫癌、睾丸癌、皮肤癌、胃癌、鼻咽癌、结肠癌、膀胱癌、肛门癌或直肠癌的至少之一，优选地，所述肿瘤为肺癌，优选地，所述肺癌为非小细胞肺癌。根据本发明的实施例，以本发明所提出的化合物制备药物，此药物可显著抑制上述癌的癌细胞的增殖，尤其可显著抑制肺癌细胞的增殖，优选地，可更加显著抑制非小细胞肺癌的癌细胞增殖，从而，以本发明所提出的化合物制备药物，此药物可显著预防或治疗上述肿瘤，尤其对肺癌，优选非小细胞肺癌的治疗或预防效果尤为显著。

根据本发明的实施例，所述真核生物为哺乳动物。根据本发明的实施例，本发明所提出的化合物制备药物，该药物对哺乳动物的肿瘤细胞的增殖有更加显著的抑制效果，可以更加有效预防或治疗哺乳动物肿瘤。

在本发明的第四方面，本发明提出了一种药物组合物。根据本发明的实施例，所述药物组合物以本发明所提出的化合物作为活性成分。根据本发明的实施例，本发明所提出的化合物具有很强的抗肿瘤活性，溶解度高、生物利用度高、且毒副作用低，因此，以本发明所提出的化合物作为活性成分的药物组合物有强的抗肿瘤活性。

根据本发明的实施例，上述药物组合物还可以进一步包括下列附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，所述药物组合物用于治疗或预防肿瘤。根据本发明的实施例，本发明所提出的化合物具有很强的抗肿瘤活性，以本发明所提出的化合物作为活性成分的药物组合物可有效用于治疗或预防肿瘤。

根据本发明的实施例，所述药物组合物进一步包括药学上可接受的载体。药学上可接受的载体可提高所述药物组合物的稳定性和有效成分的可利用度，从而进一步提高了所述药物组合物对肿瘤的治疗或者预防。

根据本发明的实施例，所述药物组合物进一步包括第二药剂，所述第二药剂不同于本发明所提出的化合物并且用于治疗或者预防肿瘤。根据本发明的实施例，所述第二药剂与本发明所提出的化合物具有对同一肿瘤的治疗或预防功效，所述第二药剂与本发明所提出的化合物联用进一步提高了所述药物组合物对肿瘤的治疗或者预防。

根据本发明的实施例，所述肿瘤为选自乳腺癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、脑癌、卵巢癌、子宫癌、睾丸癌、皮肤癌、胃癌、鼻咽癌、结肠癌、膀胱癌、肛门癌、直肠癌的至少之一，优选地，所述肿瘤为肺癌，优选地，所述肺癌为非小细胞肺癌。根据本发明的实施例，所述药物组合对上述肿瘤具有更加显著的治疗或预防功效，尤其对肺癌，特别是对非小细胞肺癌的疗效更加显著。

根据本发明的实施例，所述药物组合物呈注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、膏剂、霜剂、酏剂、混悬液、糖浆或药丸。各种剂型的药物组合物可以以预期的给药方式给药，抑制肿瘤细胞的增殖，从而进一步有效治疗或者预防肿瘤。

根据本发明的一些实施例，以本发明所提出的化合物为活性成分的药物组合物可以包括药物上可接受的载体，且药物组合物的剂型和给药方式不受特别限制。对于口服给药，该药物上可接受的载体可以包括粘合剂，润滑剂，崩解剂，赋形剂，增溶剂，分散剂，稳定剂，悬浮剂，着色剂和芳香剂。对于注射制剂，药物上可接受的载体可以包括缓冲剂，防腐剂，止痛剂，增溶剂，等渗压剂(isotonicagent)和稳定剂。对于局部给药的制剂，药物上可接受的载体可以包括碱，赋形剂，润滑剂和防腐剂。本发明的药物组合物可以与上述的药物上可接受的载体结合被制备成各种剂型。例如，对于口服给药，药物组合物可以被制备成小片，片剂，胶囊，酏剂，混悬液或糖浆。对于注射制剂，药物组合物可以被制备成例如一次剂量的剂型的安瓿或例如多剂量容器的单元型剂型。药物组合物还可以被制备成溶液，悬浮液，药片，药丸，胶囊、长效制剂、缓释制剂、控释制剂或纳米制剂。

其中，根据本发明的一些具体示例，适合药物配方的载体中赋形剂和稀释液的可以包括：乳糖，葡萄糖，蔗糖，山梨糖醇，甘露醇，木糖醇，赤藻糖醇，麦芽糖醇，淀粉，阿拉伯橡胶，藻酸盐，凝胶，磷酸钙，硅酸钙，纤维素，甲基纤维素，微晶纤维素，聚乙烯吡咯烷酮，水，羟基苯甲酸甲酯，羟苯丙酯，滑石，硬脂酸镁和矿物油。

根据本发明的另一些实施例，本发明的药物组合物中还可以包括填充剂，抗凝血剂，润滑剂，保湿剂，芳香剂和防腐剂。

根据本发明的实施例，本发明的以本发明所提出的化合物为活性成分的药物组合物在无细胞毒性的浓度下，能显著地抑制肿瘤细胞的增殖，特别是肺癌细胞的增殖，从而可以在治疗或预防肿瘤，特别是治疗或预防肺癌时被给药。

在本文中所使用的术语“给药”指将预定量的物质通过某种适合的方式引入病人。本发明的药物或药物组合物可以通过任何常见的途径被给药，只要它可以到达预期的组织。给药的各种方式是可以预期的，包括腹膜，静脉，肌肉，皮下，皮层，口服，局部，鼻腔，肺部和直肠，但是本发明不限于这些已举例的给药方式。然而，由于口服给药时，口服给药的组合物的活性成分应该被包被或被配制以防止其在胃部被降解。优选地，本发明的组合物可以注射制剂被给药。此外，本发明的药物组合物可以使用将活性成分传送到靶细胞的特定器械来给药。

本发明药物组合物的给药频率和剂量可以通过多个相关因素被确定，该因素包括要被治疗的疾病类型，给药途径，病人年龄，性别，体重和疾病的严重程度以及作为活性成分的药物类型。根据本发明的一些实施例，日剂量可分为适宜形式的1剂、2剂或多剂，以在整个时间段内以1次、2次或多次给药，只要达到治疗有效量即可。

术语“治疗有效量”是指化合物足以显著改善某些与疾病或病症相关的症状的量，也即为给定病症和给药方案提供治疗效果的量。例如，在肿瘤，特别是肺癌的治疗中，减少、预防、延缓、抑制或阻滞疾病或病症的任何症状的药物或化合物应当是治疗有效的。治疗有效量的药物组合物或化合物不需要治愈疾病或病症，但将为疾病或病症提供治疗，使得个体的疾病或病症的发作被延缓、阻止或预防，或者疾病或病症的症状得以缓解，或者疾病或病症的期限被改变，或者例如疾病或病症变得不严重，或者加速康复。

术语“治疗”用于指获得期望的药理学和/或生理学效果。所述效果就完全或部分预防疾病或其症状而言可以是预防性的，和/或就部分或完全治愈疾病和/或疾病导致的不良作用而言可以是治疗性的。本文使用的“治疗”涵盖哺乳动物、特别是人的疾病(主要指肿瘤)的治疗，包括：(a)在容易患病但是尚未确诊得病的个体中预防疾病(例如预防肿瘤)或病症发生；(b)抑制疾病，例如阻滞疾病发展；或(c)缓解疾病，例如减轻与疾病相关的症状。本文使用的“治疗”涵盖将药物或化合物给予个体以治疗、治愈、缓解、改善、减轻或抑制个体的疾病的任何用药，包括但不限于将含本文所述以本发明所提出的化合物为活性成分的药物组合物给予有需要的个体。

根据本发明的实施例，本发明的所提出的药物或药物组合物可与常规治疗方法和/或疗法相结合使用，或者可与常规治疗方法和/或疗法分开使用。当本发明所提出的药物或药物组合物在采用与其它药物的联合疗法中给药时，它们可序贯地或同时地给予个体。或者，本发明的药物组合物可包含本发明所提出的化合物、药学上可接受的载体或药学上可接受的赋形剂以及本领域已知的其它治疗药或预防药的组合。

附图说明

图1是根据本发明实施例3的给药结束后剥离露出的肿瘤大小的图片；

图2是根据本发明实施例3的给药结束后裸鼠状态的图片；以及

图3是根据本发明实施例3的给药过程中裸鼠的体重变化的统计图。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1制备左旋延胡索乙素衍生物(式II、式III所示化合物)化合物

式II所示化合物的合成路径如下所示：

合成路径如下所述：

称取左旋延胡索乙素(527mg,1.5mmol)放入三口瓶中，加入干燥的二氯甲烷(CH₂Cl₂)(30mL)溶解，待体系降温至-78℃后，缓慢滴加三溴化硼(BBr₃)溶液(1mol/L的CH₂Cl₂溶液，7.4mL)搅拌反应25min，结束反应，加入CH₂Cl₂(180mL)升温至室温，加入饱和NaHCO₃和半饱和食盐水洗涤，旋蒸烘干。柱层析纯化，获得式VI所示化合物。

将上述所得式VI所示化合物(70.4mg,0.2062mmol,M＝341.4)溶于CH₂Cl₂溶液(3mL)中，缓慢搅拌加入四丁基溴化铵(93.1mg,0.2887mmol,M＝322.37,1.4eq)，并在0℃下缓慢滴加四乙酰葡萄糖溴(118.7mg,0.2887mmol,M＝411.2,1.4eq)的CH₂Cl₂溶液(3mL)，搅拌均匀后于0℃下缓慢滴加NaOH溶液(2.5％，0.7mL)，升温至40℃下搅拌4h。上述溶液于0℃下用0.1MHCl调PH至中性，CH₂Cl₂萃取2次，再用饱和食盐水洗涤有机相，旋蒸烘干。获得式VII所示化合物。

将式VII所示化合物(47.1mg)溶于10mL甲醇中，于0℃下逐滴加入0.5mol/L(2.7g/100mL)甲醇钠的甲醇溶液(1.6mL)保证pH大于或等于10，于0℃下反应5h后，旋蒸除去甲醇。于0℃下用0.1MHCl调PH至中性，加入二氯甲烷萃取，用水、饱和食盐水洗涤有机相。利用柱层析分离，获得左旋延胡索乙素衍生物(式II所示化合物)21.3mg。

¹HNMR(CDCl₃,300MHz):δ6.69(1H,d,J＝7.6Hz),6.54(1H,d,J＝7.8Hz),6.48(2H,s),5.93(1H,d,J＝8.1Hz),5.23(4H,br),4.07(1H,d),3.88(3H,s),3.87(3H,s),3.81(3H,s),3.77-3.06(9H,m),2.66-2.85(5H,m).MS(ESI)；m/z:504(M⁺)。

式III所示化合物的制备过程同式II所示化合物，式III所示化合物是式II所示化合物制备过程的一种附属产物，最终通过色谱柱纯化可得。

实施例2制备左旋延胡索乙素衍生物(式IV所示化合物)化合物

合成路径如下所示：

合成路径如下所述：

称取左旋延胡索乙素(527mg,1.5mmol)放入三口瓶中，加入干燥的CH₂Cl₂(30mL)溶解，待体系降温至-78℃后，缓慢滴加BBr₃溶液(1mol/L的CH₂Cl₂溶液，7.4mL)搅拌反应35min后结束反应，加入CH₂Cl₂(180mL)升温至室温，加入饱和NaHCO₃和半饱和食盐水洗涤，旋蒸烘干。柱层析纯化，获得式VIII所示化合物。

将上述所得式VIII所示化合物(60.4mg,0.1847mmol,M＝327)溶于CH₂Cl₂溶液(3mL)中，缓慢搅拌加入四丁基溴化铵(178.6mg,0.5541mmol,M＝322.37,3eq)，并在0℃下缓慢滴加四乙酰葡萄糖溴(254.4mg,0.6186mmol,M＝411.2,3eq)的CH₂Cl₂溶液(7mL)，搅拌均匀后于0℃下缓慢滴加NaOH溶液(2.5％，1.2mL)，升温至40℃下搅拌4h10min。上述溶液于0℃下用0.1MHCl调PH至中性，CH₂Cl₂萃取2次，再用饱和食盐水洗涤有机相，旋蒸烘干。获得式VIIII所示化合物。

将式VIIII所示化合物(52.1mg)溶于15mL甲醇中，于0℃下逐滴加入0.5mol/L(2.7g/100mL)甲醇钠的甲醇溶液(4mL)保证pH大于或等于10，于0℃下反应5h后，旋蒸除去甲醇。于0℃下用0.1MHCl调PH至中性，加入二氯甲烷萃取，用水、饱和食盐水洗涤有机相。利用柱层析分离，获得左旋延胡索乙素衍生物(式IV所示化合物)23.3mg。

¹HNMR(CDCl₃)：δ6.82(1H,d,J＝7.5Hz),6.65(1H,d,J＝7.7Hz),6.58(2H,s),5.97(1H,d,J＝8.6Hz),5.88(1H,d,J＝8.9Hz),5.64(8H,br),4.35(1H,d),3.85(3H,s),3.81(3H,s),3.79(3H,s),3.74-3.09(15H,m),2.66-2.85(5H,m).MS(ESI):m/z:652(M⁺)。

继而，发明人进行了左旋延胡索乙素衍生物对人肺癌细胞增殖能力的影响实验和小鼠急性毒性实验，实验结果显示左旋延胡索乙素衍生物可有效抑制肿瘤的生长，并且同时地也极大地避免了裸鼠体重下降等毒副作用，同时未见明显的临床毒性反应。下面实施例中，以式II所示化合物为例，详细描述了左旋延胡索乙素衍生物对人肺癌细胞增殖能力的影响实验和小鼠急性毒性实验的实验过程和结果。

实施例3左旋延胡索乙素衍生物对人肺癌细胞增殖能力的影响

肿瘤细胞株：人肺癌细胞株A549(中国科学院上海细胞生物学研究所)；

试验动物：周龄为4-6周的雄性BALB/c裸小鼠(SPF级，中国医学科学院实验动物研究所)，24只；

给药开始时动物体重范围：16-18g，动物的初始体重不超过或低于平均体重的20％；

阳性对照品：顺铂注射液(FH科鼎医疗有限公司，批号：M071881)；

阴性对照品：0.9％氯化钠注射液(生理盐水)；

测试样品：左旋延胡索乙素衍生物(式II所示化合物)；

具体操作步骤如下：

(1)肿瘤细胞的培养

将人肺癌细胞株A549悬浮培养于含10％小牛血清和的RPMI1640培养基(含青霉素100U/mL、链霉素100U/mL)，置于37℃、5％CO₂的细胞孵箱中培养。

每3天传代一次。在传代培养24小时后细胞进入对数生长期即可进行下一步试验。

(2)裸鼠移植瘤模型的建立

将对数生长期A549细胞收集离心，用质量百分含量为0.4％台盼兰溶液染色后计数。

用上述RPMI1640培养基调整细胞浓度为1×10⁷个/ml，以0.2ml/只接种于裸鼠右侧腋窝皮下，制备荷瘤种鼠。

待肿瘤生长至1g左右，接种小鼠，制备F1代荷瘤种鼠，制备过程如下所述：选择肿瘤生长旺盛且无溃破，健康情况良好的荷瘤动物，无菌条件下取瘤，制备成3mm³，接种于各动物右侧腋窝皮下。

裸鼠接种后观察肿瘤生长情况，待肿瘤体积为100-300mm³时，按瘤体积大小及体重进行筛选，瘤体积过大及未成瘤者不予入选。

将荷瘤鼠随机分组：阴性对照组、阳性对照组和左旋延胡索乙素衍生物组，每组8只，然后分组给予不同药物。

(3)供试品的配制

阴性对照组：给予生理盐水；

左旋延胡索乙素衍生物：左旋延胡索乙素衍生物(式II所示化合物)，灌胃剂量为100mg/kg体重；

阳性对照组：给予0.5mg/ml的顺铂溶液，腹腔给药剂量为：0.1ml/10g体重。

(4)给药方法

给药途径及频率：左旋延胡索乙素衍生物(式II所示化合物)和阴性对照品灌胃给药，每天1次，阳性对照品腹腔给药，1次/周。给药期限：4周

(5)实验结果：

在实验过程中，从分组、给药开始，每周2次用游标卡尺测量并记录肿瘤长径、短径以及体重，包括首次给药和末次给药当天，计算肿瘤体积并比较各组间肿瘤生长曲线的差异，给药后第28天各组裸鼠体内肿瘤大小如图1所示。

按照以下公式计算肿瘤体积：

V＝1/2×长径×短径²

根据肿瘤体积进行疗效评价

按照以下公式计算相对肿瘤体积(RTV)和相对肿瘤增殖率T/C％：

RTV＝Vt/V₀

Vt：每天测量肿瘤得到的瘤体积

V₀：初始瘤体积(给药前)

T/C％＝给药组的RTV平均值/对照组的RTV平均值×100％

利用生物统计学中的T检验方法，将各组裸鼠实验结果进行统计整理，结果见表1和表2所示。

左旋延胡索乙素衍生物(式II所示化合物)的体内抗肺癌药效实验结果表明，其对肺癌细胞的抑制作用与阳性对照药物相当。在给药10天后，左旋延胡索乙素衍生物(式Ⅲ)组的相对肿瘤增殖率(T/C)低于40％(如表1所示)，且其相对肿瘤体积(RTV)(如表2所示)显著低于阴性对照组。

表1：左旋延胡索乙素衍生物组对人肺癌相对肿瘤增殖率(T/C％)

表2：左旋延胡索乙素衍生物组对人肺癌相对肿瘤体积(RTV)及各组内显著性差异(P)结果

P值为与阴性对照组相比的显著性差异。

给药结束后剥离肿瘤，如图1所示，其瘤重抑制率可达80.53％，结果如如表3所示。

表3：左旋延胡索乙素衍生物组对A549裸鼠移植瘤模型的瘤重抑制率(X±SD)

*表示与阴性对照组比较P＜0.05

给药结束后，各组的裸鼠状态以及给药过程中裸鼠的体重变化情况，如图2和图3所示。从图2和图3可以看出，左旋延胡索乙素衍生物(式II所示化合物)组动物精神状态良好，体重缓慢增长，与同期阴性对照组动物体重无明显差异。

综合以上数据可以看出，左旋延胡索乙素衍生物给药组可有效抑制肿瘤的生长，并且同时也极大地避免了阳性对照组所引起的裸鼠体重下降等毒副作用。

实施例4左旋延胡索乙素衍生物小鼠急性毒性实验

动物种系：昆明(KM)小鼠；

实验动物等级：SPF级；

性别和数量：100只，雌雄各半；

动物周龄及动物体重范围：4-5周龄。18～22g，每个性别的动物体重不超过或低于该性别动物平均体重的20％；

实验动物来源：中国药品生物制品检定所；

给药途径：灌胃口服(0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液)；

所用毒性研究指导原则：国家食品药品监督管理局《化学药物急性毒性试验技术指导原则》；

试验采用5周龄昆明小鼠，随机分为2组，分别为阴性对照组和供试品组，分别单次灌胃给予灭菌注射用水和左旋延胡索乙素衍生物(式II所示化合物)(剂量为5000mg/kg)。给药后观察4小时，以后每天上午和下午各观察一次，连续观察14天。每周称量动物体重和食量，实验开始后第15天将动物安乐死，进行大体解剖，对所见异常的组织器官进行病理组织学检查。

实验期间，所有动物均按计划安乐死，临床观察均未见明显毒性反应。给药后，两组动物的体重均呈增长趋势，供试品组雌性动物给药后第8天，体重略重于阴性对照组动物。两组相同性别动物的摄食量相近。大体解剖结果显示，两组动物的组织脏器均未见明显异常改变。

在本实验条件下，左旋延胡索乙素衍生物(式II所示化合物)单次灌胃给予小鼠，在5000mg/kg的剂量下未见明显毒性反应。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (10)

1.一种化合物，其特征在于，所述化合物为式I所示化合物或式I所示化合物的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，

其中，R1、R2、R3和R4分别独立地选自卤素、烷基、羟基、胺基、糖基，前提是R1、R2、R3和R4至少之一为糖基；

任选地，所述卤素为选自Cl、Br和F的至少之一；

任选地，所述烷基为C_1～3烷基，优选CH₃；

任选地，所述糖基为六元糖基，优选为

2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物为下列化合物的至少之一，或者下列化合物的至少之一的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，

3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述式I所示化合物为左旋体。

4.一种制备权利要求1～3任一项所述化合物的方法，其特征在于，包括：

(1)使式V所示化合物发生去甲基反应；

(2)使步骤(1)中所得到的去甲基反应产物发生连糖环反应；以及

(3)使步骤(2)中所得到的连糖环反应产物发生脱乙酰基反应，以便获得权利要求1～6任一项所述化合物，

任选地，所述去甲基反应是通过使式V所示化合物与三溴化硼进行接触而进行的，优选地，所述接触是在二氯甲烷中进行的；

任选地，所述连糖环反应是通过使所述去甲基反应产物与四丁基溴化铵、四乙酰葡萄糖溴接触而进行的，优选地，所述接触是在二氯甲烷中进行的；

任选地，所述脱乙酰基反应是通过使所述连糖环反应产物与甲醇钠进行接触而进行的，优选地，所述接触是在甲醇中进行的。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，包括：

(1)使所述式V所示化合物与所述三溴化硼进行接触，以便获得式VI所示化合物，所述接触是在二氯甲烷中进行的，所述式V所示化合物与所述三溴化硼的摩尔比为1：5；所述接触是在-78℃下进行25min；

(2)使步骤(1)中所得式VI所示化合物与所述四丁基溴化铵、所述四乙酰葡萄糖溴进行接触，以便获得式VII所示化合物，所述接触是在二氯甲烷中进行的，所述式VI所示化合物与所述四丁基溴化铵、所述四乙酰葡萄糖溴的摩尔比是1：1.4：1.4，所述接触是先在0℃下进行、后在40℃下进行4h；以及

(3)使步骤(2)所得式VII所示化合物与所述甲醇钠进行接触，以便获得式II所示化合物，所述接触是在甲醇中进行的，所述式VII所示化合物与所述甲醇钠的质量比是1：1，所述接触是在0℃、pH≥10的条件下进行5h，

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，包括：

(1)使所述式V所示化合物与所述三溴化硼进行接触，以便获得式VIII所示化合物，所述接触是在二氯甲烷中进行的，所述式V所示化合物与所述三溴化硼的摩尔比为1：5，所述接触是在温度为-78℃下进行35min；

(2)使步骤(1)中所得式VIII所示化合物与所述四丁基溴化铵、所述四乙酰葡萄糖溴进行接触，以便获得式VIIII所示化合物，所述接触是在二氯甲烷中进行的，所述式VIII所示化合物与所述四丁基溴化铵、所述四乙酰葡萄糖溴的摩尔配比是1：3：3，所述接触是先在0℃进行、后在40℃下进行4.2h；以及

(3)步骤(2)所得式VIIII所示化合物与所述甲醇钠进行接触，以便获得式IV所示化合物，所述接触是在甲醇中进行的，所述式VIIII所示化合物与所述甲醇钠的质量比是1：1.4，所述接触是在0℃、PH≥10下进行5h，

7.权利要求1～3任一项所述化合物在制备药物中的用途，其特征在于，所述药物用于：抑制真核生物肿瘤细胞的增殖；和/或治疗或预防肿瘤。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述肿瘤细胞为选自乳腺癌细胞、肝癌细胞、胰腺癌细胞、肺癌细胞、脑癌细胞、卵巢癌细胞、子宫癌细胞、睾丸癌细胞、皮肤癌细胞、胃癌细胞、鼻咽癌细胞、结肠癌细胞、膀胱癌细胞、肛门癌细胞或直肠癌细胞的至少之一，优选地，所述肿瘤细胞为肺癌细胞；

任选地，所述肿瘤为选自乳腺癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、脑癌、卵巢癌、子宫癌、睾丸癌、皮肤癌、胃癌、鼻咽癌、结肠癌、膀胱癌、肛门癌或直肠癌的至少之一，优选地，所述肿瘤为肺癌，优选地，所述肺癌为非小细胞肺癌；

任选的，所述真核生物为哺乳动物。

9.一种药物组合物，其特征在于，权利要求1～3任一项所述化合物作为活性成分。

10.根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物用于治疗或预防肿瘤，

任选地，所述药物组合物进一步包括第二药剂，所述第二药剂不同于权利要求1～3任一项所述化合物并且用于治疗或者预防肿瘤；

任选地，所述肿瘤为选自乳腺癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、脑癌、卵巢癌、子宫癌、睾丸癌、皮肤癌、胃癌、鼻咽癌、结肠癌、膀胱癌、肛门癌、直肠癌的至少之一，优选地，所述肿瘤为肺癌，优选地，所述肺癌为非小细胞肺癌；

任选地，所述药物组合物进一步包括药学上可接受的载体；

任选地，所述药物组合物呈注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、膏剂、霜剂、酏剂、混悬液、糖浆或药丸。