CN105316332A - 一种高盐和/或干旱诱导的启动子及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种高盐和/或干旱诱导的启动子。本发明所提供的启动子，是下述a)或b)或c)的DNA片段：a)核苷酸序列为序列表中SEQ？ID？No.1的第10位-2216位的DNA片段；b)与a)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且具有启动子功能的DNA片段；c)在严格条件下与a)或b)限定的核苷酸序列杂交，且具有启动子功能的DNA片段。实验结果表明，GmWRKY27P为高盐、干旱诱导型启动子。

Description

一种高盐和/或干旱诱导的启动子及其应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域中一种高盐和/或干旱诱导的启动子及其应用。

背景技术

DNA分子上，位于结构基因上游与RNA多聚酶结合，起始mRNA合成从而启动结构基因转录的一段序列，缺少这个部分，基因就不具备转录的功能，此序列即为启动子。真核生物的启动子一般在-25--35区有TATA盒，负责基因转录的起始位点，在-70--80含有CAAT序列，主要调控转录起始的频率。在启动子区还包括一些序列通过与反式作用因子相互作用控制基因的时空特异性表达。启动子是指导、调控基因表达的不可缺少的核苷酸序列，启动子是保证外源基因在转基因生物体内有效表达的首要因素，它将指导外源基因在宿主细胞内在适当的时间和特定的组织中进行表达，因此启动子是基因工程中一个重要的研究对象。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何使外源目的基因在高盐胁迫和/或干旱胁迫诱导下特异表达。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了一种高盐和/或干旱诱导的启动子。

本发明所提供的高盐和/或干旱诱导的启动子，名称为GmWRKY27P，是下述a)或b)或c)的DNA分子：

a)核苷酸序列为序列表中SEQIDNo.1的第10位-2216位的DNA分子；

b)与a)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且具有启动子功能的DNA分子；

c)在严格条件下与a)或b)限定的核苷酸序列杂交，且具有启动子功能的DNA分子。

其中，SEQIDNo.1由2224个核苷酸组成，第4位-9位为HindⅢ的识别位点，第2217位-2222位为BamHI的识别位点。

上述高盐和/或干旱诱导的启动子中，所述严格条件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次5min；又于0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次15min。

本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化和点突变的方法，对本发明的启动子核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有与本发明分离得到的启动子核苷酸序列75％或者更高同一性的核苷酸，只要保持了表达靶基因的启动子活性，均是衍生于本发明的核苷酸序列并且等同于本发明的序列。

这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本发明的启动子核苷酸序列具有75％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。

上述高盐和/或干旱诱导的启动子中，所述启动子GmWRKY27P可通过载体介导的转化方法(如农杆菌介导和病毒介导法)、基因直接导入法(基因枪转化法、电激转化法、超声波法、显微注射法、激光微束法、PEG介导转化方法和脂质体法等)、种质系统法(花粉管通道法、生殖细胞浸染法、胚囊和子房注射法等)等常规生物学方法转化植物植株或器官或组织或细胞，得到转基因植物细胞或组织或器官或植株。

为解决上述技术问题，本发明还提供了与GmWRKY27P相关的遗传材料。

本发明所提供的与GmWRKY27P相关的遗传材料，为下述B1)至B19)中的任一种：

B1)含有GmWRKY27P的表达盒；

B2)含有GmWRKY27P的重组载体；

B3)含有B1)所述表达盒的重组载体；

B4)含有GmWRKY27P的重组微生物；

B5)含有B1)所述表达盒的重组微生物；

B6)含有B2)所述重组载体的重组微生物；

B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物；

B8)含有GmWRKY27P的转基因植物细胞系；

B9)含有B1)所述表达盒的转基因植物细胞系；

B10)含有B2)所述重组载体的转基因植物细胞系；

B11)含有B3)所述重组载体的转基因植物细胞系；

B12)含有GmWRKY27P的转基因植物组织；

B13)含有B1)所述表达盒的转基因植物组织；

B14)含有B2)所述重组载体的转基因植物组织；

B15)含有B3)所述重组载体的转基因植物组织；

B16)含有GmWRKY27P的转基因植物器官；

B17)含有B1)所述表达盒的转基因植物器官；

B18)含有B2)所述重组载体的转基因植物器官；

B19)含有B3)所述重组载体的转基因植物器官。

上述遗传材料中，在所述表达盒中，所述启动子GmWRKY27P的下游连接结构基因、或调节基因、或结构基因或调节基因的反义基因、或者能够干扰内源基因表达的小RNA的编码DNA，用于驱动结构基因、或调节基因、或结构基因或调节基因的反义基因、或者天然小RNA或人工合成的小RNA的表达。

所述表达盒可由所述启动子GmWRKY27P、所述启动子GmWRKY27P启动表达的目的基因以及转录终止序列组成；所述启动子以功能性方式与所述目的基因连接，且所述目的基因与所述转录终止序列连接。在本发明的一个实施例中，所述目的基因具体为β-葡萄糖苷酶(β-glucuronidase，GUS)基因。

所述重组载体可为含有上述表达盒的重组载体，例如但不限于质粒和病毒。所述重组载体也可为重组植物表达载体。所述重组植物表达载体含有上述表达盒并且能够将所述的表达盒转送进入植物宿主细胞、组织或器官及其后代并且能够或者至少方便所述的表达盒整合到宿主的基因组中，它包括但不限于双元载体、共合载体。所述宿主细胞、组织或器官及其后代是指所有植物细胞或植物组织或植物器官或由这些细胞、组织或器官通过组织分化或无性胚再生并且发育成熟的整体植株(包括种子)。在本发明的一个实施例中，所述重组载体具体为将pBI121(GenBank:AF485783)的35S启动子替换为所述启动子得到的重组载体。所述目的基因具体为β-葡萄糖苷酶基因(β-glucuronidase，GUS)。

所述重组表达载体可通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导或基因枪等常规生物学方法转化植物器官或组织或细胞，得到转基因植物细胞或组织或器官及由此分化、再生的完整植株及其无性系或其后代。在本发明的实施例中，具体使用的是农杆菌介导法。

上述遗传材料中，所述转基因植物细胞系、所述转基因植物组织和所述转基因植物器官均无繁殖能力。

上述GmWRKY27P作为启动子的应用，也属于本发明的保护范围。

上述GmWRKY27P作为启动子的应用中，所述植物可为陆生植物；所述陆生植物具体可为双子叶植物或单子叶植物；所述双子叶植物具体可为十字花科植物或豆科植物；所述十字花科植物具体可为拟南芥；所述豆科植物具体可为大豆。

上述GmWRKY27P在植物中启动目的基因表达中的应用，也属于本发明的保护范围。

上述GmWRKY27P在植物中启动目的基因表达中的应用具体可为GmWRKY27P在盐胁迫和/或干旱胁迫诱导下启动目的基因在植物中特异表达中的应用。

上述GmWRKY27P在植物中启动目的基因表达中的应用中，所述植物可为陆生植物；所述陆生植物具体可为双子叶植物或单子叶植物；所述双子叶植物具体可为十字花科植物或豆科植物；所述十字花科植物具体可为拟南芥；所述豆科植物具体可为大豆。

GmWRKY27P或与GmWRKY27P相关的遗传材料在培育转基因植物中的应用，也属于本发明的保护范围。

上述GmWRKY27P或与GmWRKY27P相关的遗传材料在培育转基因植物中的应用中，所述植物可为陆生植物；所述陆生植物具体可为双子叶植物或单子叶植物；所述双子叶植物具体可为十字花科植物或豆科植物；所述十字花科植物具体可为拟南芥；所述豆科植物具体可为大豆。

扩增GmWRKY27P的全长或其片段的引物对，也属于本发明的保护范围。

在本发明的一个实施例中，扩增GmWRKY27P的引物对的两条序列分别为序列表中SEQIDNo.2和SEQIDNo.3。

其中，SEQIDNo.2的第4-9位为HindIII的识别位点，SEQIDNo.3的第2217-2222位为BamHI的识别位点。

实验证明，本申请的高盐和/或干旱诱导的启动子GmWRKY27P在150mMNaCl盐胁迫环境下启动的目的基因的表达量约为正常情况下的2.2倍，GmWRKY27P在300mM甘露醇模拟的干旱胁迫下启动的目的基因的表达量约为正常情况下的2.8倍。说明GmWRKY27P为高盐、干旱诱导型启动子。本发明的GmWRKY27P可作为构建植物表达载体的元件，将其连接在目的基因之前，使目的基因的表达受高盐和/或干旱胁迫诱导。因此本发明的GmWRKY27P对研究目的基因与植物耐盐和/或耐旱的相关性及通过目的基因在盐和/或旱胁迫下的高表达，达到提高转基因植物耐盐/旱能力的目的有重要意义。

附图说明

图1为重组植物表达载体GmWRKY27P-GUS示意图。

图2为在甘露醇模拟的干旱环境和NaCl模拟的高盐环境中转GmWRKY27P-GUS基因的拟南芥中GUS的表达。其中，图A为GmWRKY27P-GUS分别在正常培养3小时、300mM甘露醇处理3小时和150mMNaCl处理3小时时的转基因拟南芥中GUS的染色情况；图B为GmWRKY27P-GUS分别在正常培养3小时、300mM甘露醇处理3小时和150mMNaCl处理3小时时的转基因拟南芥中GUS活性的定量统计分析。

具体实施方式

本发明中所述的启动子核苷酸序列可以是其中一个或多个核苷酸发生取代、缺失、插入或倒位的核苷酸序列，即所分离的核苷酸序列的人工突变体或“天然”突变体，它保留其启动子功能；还可以是所述的核苷酸序列与其它启动子序列或启动子区保守调控序列(“motif”或“box”)的融合序列。本发明中所述的“启动子”为具有TATA盒(TATAbox)的启动子；TATA盒或类似区域，定位于转录起始位点(TSS，在核苷酸计数上为“+1”)上游并且具有指导RNA聚合酶在正确位置上启动转录的功能，但不限于该区域附近的部分；此外，它还可含有与除RNA聚合酶以外的蛋白质相关联的用于调节表达的另一个必须区域。本发明中所述的“启动子区域”定义为含有上文中定义的启动子的区域和转录起始位点下游至少10个核苷酸的区域。本发明中所述的“启动子活性”是指当以某种基因的可表达方式将其连接到启动子的下游，并导入到宿主中，该宿主显示具有在宿主内或宿主外生产该基因产物的能力和功能时，该启动子具有启动活性。通常，是将编码容易定性或定量检测的蛋白质的基因(例如，报告基因)连接到该启动子的下游，将该基因导入宿主内，并检测所表达的蛋白质，可确定特定启动子的活性或是否存在该启动子或者该启动子的效力。本发明中所述的结构基因是指能够编码某种蛋白质或其它活性物质功能的一段核苷酸序列，包括RNA或DNA序列。所述的调节基因是指其编码的某种RNA或蛋白质或其它活性物质能够对其它结构基因的表达进行调节或调控的一段核苷酸序列，包括RNA或DNA序列。

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中的哥伦比亚生态型拟南芥(Columbia，Col/Col-0)种子为ArabidopsisBiologicalResourceCenter(ABRC)产品。

下述实施例中的大豆科丰1号(GlycinemaxL.Merr.Kefeng1)(W.K.Zhang,Y.J.Wang,G.Z.Luo,J.S.Zhang,C.Y.He,X.L.Wu,J.Y.Gai,S.Y.Chen,QTLmappingoftenagronomictraitsonthesoybean(GlycinemaxL.Merr.)geneticmapandtheirassociationwithESTmarkers,Theor.Appl.Genet,2004,108:1131-1139.)，公众可以从中国科学院遗传与发育生物学研究所获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。

下述实施例中的植物表达载体pBI121(GenBank:AF485783)(ChenPY,WangCK,SoongSCandToKY(2003).CompletesequenceofthebinaryvectorpBI121anditsapplicationincloningT-DNAinsertionfromtransgenicplants.Mol.Breed.11:287-293.)，公众可以从中国科学院遗传与发育生物学研究所获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。

下述实施例中的根癌农杆菌AGL1(HeY,JonesHD,ChenS,ChenXM,WangDW,LiKX,WangDS,XiaLQ，Agrobacterium-mediatedtransformationofdurumwheat(TriticumturgidumL.var.durumcvStewart)withimprovedefficiency，JExpBot.2010，61(6):1567-81.)，公众可以从中国科学院遗传与发育生物学研究所获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。

实施例1、GmWRKY27P的克隆

本申请的发明人在之前的研究中，将大豆科丰1号基因组进行了10×测序和拼接，构建了大豆科丰1号基因组的物理图谱。本申请的发明人根据大豆科丰1号基因组的物理图谱获得了GmWRKY27P序列，其序列为序列表中SEQIDNo.1的第10位-2216位。克隆GmWRKY27P全长序列的引物为：正向(序列表中SEQIDNo.2)：5’-CCCAAGCTTCCTATCAGTTCAATAAAAAAAGTGC-3’；反向(序列表中SEQIDNo.3)：5’-CGGGATCCGATGAATAATCCATGACTGCCAA-3’；下划线分别为HindIII和BamHΙ的识别位点。

提取大豆科丰1号基因组DNA，用上述引物以上述大豆科丰1号基因组DNA为模板，进行PCR扩增，得到PCR产物。经测序，该PCR产物的核苷酸序列如序列表中SEQIDNo.1所示，SEQIDNo.1的第10位-2216位为GmWRKY27P的全长序列，SEQIDNo.1的第4位-9位为HindⅢ的识别位点，SEQIDNo.1的第2217位-2222位为BamHⅠ的识别位点。

实施例2、GmWRKY27P在高盐和干旱胁迫下启动目的基因特异表达

1、转基因植株的构建

1.1重组表达载体的构建

用序列表中SEQIDNo.1的HindⅢ和BamHⅠ识别位点间的DNA片段(即序列表中SEQIDNo.1的第10位-2216位核苷酸所示的GmWRKY27P)替换pBI121(GenBank:AF485783，载体图谱如图1)中的HindⅢ和BamHⅠ识别位点间的DNA片段，其它序列不变，得到含有GmWRKY27P的重组植物表达载体，将该重组植物表达载体命名为pBI121-GmWRKY27P-GUS。重组植物表达载体pBI121-GmWRKY27P-GUS中，35S启动子被BamHI和HindIII双酶切切除，代之于GmWRKY27P，GmWRKY27P能启动作为报告基因的β-葡萄糖苷酶(β-glucuronidase，GUS)基因表达。

将重组植物表达载体pBI121-GmWRKY27P-GUS用电转化的方法转入根癌农杆菌AGL1菌株中，挑取阳性克隆用PCR方法鉴定，引物为上述克隆GmWRKY27P全长序列的引物(即序列表中SEQIDNo.2和SEQIDNo.3)，获得含有重组植物表达载体pBI121-GmWRKY27P-GUS的重组农杆菌，将该重组农杆菌命名为AGL1/pBI121-GmWRKY27P-GUS。

1.2转基因植株的构建

将上述重组农杆菌AGL1/pBI121-GmWRKY27P-GUS通过下述文献中描述的方法转化拟南芥：Clough-SJ,Bent-AF.Floraldip:asimplifiedmethodforAgrobacterium-mediatedtransformationofArabidopsisthaliana.Plant-Journal.1998,16:6,735-743.，具体方法如下：

将哥伦比亚生态型拟南芥(Col-0)种子在4℃下春化72小时，得到春化拟南芥种子。用1/3×B₅营养液浸泡装有蛭石(vermiculite)的种植盆，得到浸湿的种植盆。将上述春化拟南芥种子播种在上述浸湿的种植盆中，于23℃培养至拟南芥植株开花。待拟南芥植株开花后，剪去拟南芥的主枝顶端，以促进侧枝的生长。在剪枝后4-6天内进行农杆菌转化。

将重组农杆菌AGL1/pBI121-GmWRKY27P-GUS接种于5mL含有50μg/mL利福平(rifampin)和50μg/mL卡那霉素的LB培养基中，培养12小时，得到5mLAGL1/pBI121-GmWRKY27P–GUS种子液。将5mLAGL1/pBI121-GmWRKY27P–GUS种子液全部接种至1升含有50μg/mL利福平(rifampin)和50μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中，于28℃下培养至OD₆₀₀为0.8左右，得到AGL1/pBI121-GmWRKY27P–GUS培养液。将AGL1/pBI121-GmWRKY27P–GUS培养液离心，收集菌体，LB培养基重悬菌体，得到AGL1/pBI121-GmWRKY27P–GUS转化液。取约300-400mLAGL1/pBI121-GmWRKY27P–GUS转化液至玻璃瓶中，将拟南芥倒置于含有该转化液的玻璃瓶中(使拟南芥的地上部分全部置于该转化液中)，得到装有处于转化中转化液的玻璃瓶，将装有处于转化中转化液的玻璃瓶抽真空，维持0.05Mpa的压强5-10min，取出种植盆，得到转化后的拟南芥植株。

将转化后的拟南芥植株于黑暗中放置约10h，然后将种植盆直立，培养植株至种子成熟，收获成熟拟南芥种子(即T1代转基因种子)。

将T1代转基因种子干燥一周，进行灭菌处理得到无菌T1代拟南芥种子。将无菌T1代拟南芥种子播种于含50μg/mL卡那霉素的0.5×MS固体选择培养基上，每皿500粒左右的种子，于23℃下培养，得到含有卡那霉素抗性基因的转基因拟南芥幼苗。将含有卡那霉素抗性基因的转基因拟南芥幼苗移至种植盆(种植盆中含有营养土与蛭石，营养土与蛭石的体积比为1:1)中，在23℃下进行培养至植株种子成熟，分单株收取含pBI121-GmWRKY27P-GUS的转基因拟南芥种子(即T2代转基因种子)。

按照上述方法，将T1代转基因种子替换为T2代转基因种子，其他方法不变，得到含pBI121-GmWRKY27P-GUS的拟南芥T3代转基因种子。

2、高盐和干旱胁迫诱导GmWRKY27P

将含pBI121-GmWRKY27P-GUS的拟南芥T3代转基因进行灭菌处理，得到无菌T3代拟南芥种子，将无菌T3代拟南芥种子播种在含50μg/mL卡那霉素的0.5×MS固体选择培养基上，并于23℃、平均光照强度为2500lux、光照周期为16h光照/8h黑暗的条件下培养一周，得到刚长出第一片真叶的转基因拟南芥。

将刚长出第一片真叶的转基因拟南芥22株移至含300mM甘露醇的MS平板(在MS固体培养基中加入甘露醇至其终浓度为300mM得到的固体培养基)上、将刚长出第一片真叶的转基因拟南芥22株移至含150mMNaCl的MS平板(在MS固体培养基中加入NaCl至其终浓度为150mM得到的固体培养基)上、将刚长出第一片真叶的转基因拟南芥22株移至MS平板上，并分别于23℃、平均光照强度为2500lux、光照周期为16h光照/8h黑暗的条件下培养3小时，分别得到300mM甘露醇处理的拟南芥(即干旱胁迫3小时拟南芥)、150mMNaCl处理的拟南芥(即盐胁迫3小时拟南芥)和正常培养3小时拟南芥(作为对照)。

将上述干旱胁迫3小时拟南芥、盐胁迫3小时拟南芥和正常培养3小时拟南芥分别放入2mL离心管中，每个离心管一株拟南芥。向这些离心管中的每管中分别加入GUS染液(GUS染液的配制方法为：向pH为7.0的100mM磷酸缓冲液中加入Na₂EDTA、K₃Fe(CN)₆、K₄Fe(CN)₆、TritonX-100、X-gluc，至其完全溶解，使Na₂EDTA的终浓度为10mM、K₃Fe(CN)₆的终浓度为0.5mM、K₄Fe(CN)₆的终浓度为0.5mM、TritonX-100的终浓度为0.1％、X-gluc的终浓度为0.05％)，使每管中的拟南芥均能全部没入GUS染液中，分别将离心管置于37℃下进行染色16小时，弃GUS染液，分别得到GUS染色后的干旱胁迫3小时拟南芥、GUS染色后的盐胁迫3小时拟南芥和GUS染色后的正常培养3小时拟南芥。将GUS染色后的干旱胁迫3小时拟南芥、GUS染色后的盐胁迫3小时拟南芥和GUS染色后的正常培养3小时拟南芥分别用无水乙醇进行脱色，分别得到脱色后的干旱胁迫3小时拟南芥、脱色后的盐胁迫3小时拟南芥和脱色后的正常培养3小时拟南芥。

用体视镜(LEICAM165FC)分别观察脱色后的干旱胁迫3小时拟南芥、脱色后的盐胁迫3小时拟南芥和脱色后的正常培养3小时拟南芥并拍照，结果见图2中A。结果显示，正常培养3小时拟南芥经GUS染色后，叶片略呈现蓝色，而干旱胁迫3小时拟南芥或盐胁迫3小时拟南芥整株均呈现蓝色，幼嫩真叶和根尖中的颜色较深。GUS染色实验结果表明，相对正常培养拟南芥，干旱胁迫处理拟南芥或盐胁迫处理拟南芥中GUS表达量增加，在幼嫩真叶和根尖中GUS表达量的增加较高。

按照下述方法，将上述脱色后的干旱胁迫3小时拟南芥植株的地上部分、脱色后的盐胁迫3小时拟南芥植株的地上部分和脱色后的正常培养3小时拟南芥植株的地上部分)按照等方法(etal.,AnimprovedMUGfluorescentassayforthedeterminationoftheGUSactivitywithintransgenictissueofwoodyplants,PlantCellRep.,2003,21(6),619-624.)进行GUS活性的定量分析。结果显示，拟南芥在正常培养3小时时GUS活性约为79nMMU/mg蛋白，在干旱胁迫3小时时GUS活性约为221nMMU/mg蛋白，在盐胁迫3小时时GUS活性约为174nMMU/mg蛋白，干旱和盐胁迫下GUS活性分别约为正常情况下的2.8和2.2倍，呈极显著差异。GUS活性定量分析实验结果表明，GmWRKY27P可被干旱胁迫或盐胁迫诱导，GmWRKY27P为高盐和干旱诱导型启动子(干旱胁迫和盐胁迫诱导型启动子)。

Claims (9)

1.DNA分子，是下述a)或b)或c)的DNA分子：

a)核苷酸序列为序列表中SEQIDNo.1的第10位-2216位的DNA分子；

b)与a)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且具有启动子功能的DNA分子；

c)在严格条件下与a)或b)限定的核苷酸序列杂交，且具有启动子功能的DNA分子。

2.含有权利要求1所述DNA分子的遗传材料，为下述B1)至B19)中的任一种：

B1)含有权利要求1所述DNA分子的表达盒；

B2)含有权利要求1所述DNA分子的重组载体；

B3)含有B1)所述表达盒的重组载体；

B4)含有权利要求1所述DNA分子的重组微生物；

B5)含有B1)所述表达盒的重组微生物；

B6)含有B2)所述重组载体的重组微生物；

B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物；

B8)含有权利要求1所述DNA分子的转基因植物细胞系；

B9)含有B1)所述表达盒的转基因植物细胞系；

B10)含有B2)所述重组载体的转基因植物细胞系；

B11)含有B3)所述重组载体的转基因植物细胞系；

B12)含有权利要求1所述DNA分子的转基因植物组织；

B13)含有B1)所述表达盒的转基因植物组织；

B14)含有B2)所述重组载体的转基因植物组织；

B15)含有B3)所述重组载体的转基因植物组织；

B16)含有权利要求1所述DNA分子的转基因植物器官；

B17)含有B1)所述表达盒的转基因植物器官；

B18)含有B2)所述重组载体的转基因植物器官；

B19)含有B3)所述重组载体的转基因植物器官。

3.权利要求1所述DNA分子作为启动子的应用。

4.权利要求1所述DNA分子在植物中启动目的基因表达中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述应用为所述启动子在盐胁迫和/或干旱胁迫诱导下启动目的基因在植物中特异表达中的应用。

6.权利要求1所述DNA分子或权利要求2所述遗传材料在培育转基因植物中的应用。

7.根据权利要求3-6中任一所述的应用，其特征在于：所述植物为双子叶植物。

8.根据权利要求3-7中任一所述的应用，其特征在于：所述双子叶植物为十字花科植物。

9.扩增权利要求1所述DNA分子全长或其片段的引物对。