CN105316254A - 一种利用固液结合发酵工艺生产双歧杆菌的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种利用固液结合发酵工艺生产双歧杆菌的方法，其具体流程为：原种液体培养、一级菌种培养、二级菌种培养、三级菌种培养、固体培养。本发明将液态培养和固态培养相结合，将最后的液态培养改成液固结合，使菌种培养效果更好。最后一步培养为关键的培养步骤，现今的培养都是用液体培养，当培养发生问题时，需要对整体进行处理，造成原料浪费，导致培养成本过高，本发明经最后一步改为固体培养，当出现问题时，可以直接对问题部分进行剔除，避免其他培养基和菌种的浪费，降低的培养成本，提高了培养成功率。

Description

一种利用固液结合发酵工艺生产双歧杆菌的方法

技术领域

本发明涉及双歧杆菌培养领域，尤其涉及一种利用固液结合发酵工艺生产双歧杆菌的方法。

背景技术

双歧杆菌是1899年由法国学者Tissier从母乳营养儿的粪便中分离出的一种厌氧的革兰氏阳性杆菌，末端常常分叉，故名双歧杆菌。双歧杆菌分布在胃肠的数量随年龄阶段的增长而减少，分布最多的是母乳营养儿。双歧杆菌是个有益菌，它具有调整肠道功能紊乱作用，可以预防腹泻，减少便秘，即双向调节的作用，特别是能够为婴幼儿的肠道健康提供独特的保护作用，有效地减少婴幼儿肠道感染的发病率。

为了充分利用双歧杆菌的效果，人们开始自行培养双歧杆菌，但是现在的双歧杆菌培养都是利用液体进行培养，当培养发生问题时，需要对整体进行处理，造成原料浪费，导致培养成本过高。现阶段的培养方法比较简单，培养出来成功率低，浪费培养原料。

发明内容

根据以上技术问题，本发明提供一种利用固液结合发酵工艺生产双歧杆菌的方法，其具体流程为：

(1)原种液体培养

将双歧杆菌菌种放入培养基中，所述培养基由植物蛋白胨0.55%-0.78%、胰胨0.25%-0.48%、酵母浸膏0.15%-0.28%、葡萄糖0.35%-0.58%、盐溶液0.15%-0.28%、蒸馏水95%-98%组成，然后将放入菌种的培养基放在通风处进行培养；

(2)一级菌种培养

将土豆、麸皮放入蒸馏水中进行蒸煮，然后提取溶液，将溶液中加入植物蛋白质胨、牛肉膏、蔗糖、盐溶液，再将菌种放入培养液中，将溶液放置到通风处进行发酵培养；

(3)二级菌种培养

制取一级培养液，但培养皿换为无色透明试剂瓶，将试剂瓶继续拧灭菌，灭菌后放入培养液，然后接种一级菌种10%后，每隔5小时晃动1分钟，培养24-96小时，当细胞达到1.0亿CFU\g时终止培养，室温下保存备用；

(4)三级菌种培养

取植物蛋白胨、海参蒸煮液、玉米浆、酵母膏、肉牛浸膏、番茄培养基放入蒸馏水中进行溶解，以此作为培养基，然后进行二级菌种接种，接种20%后静置，当细胞达到1.8亿CFU\g时终止培养，室温下保存备用；

(4)固体培养

利用玉米粉、大米粉、大豆粉、全脂乳粉、海参蒸煮液、玉米浆、酵母膏、肉牛浸膏进行固体培养基制作，然后对培养基进行冷却灭菌，然后将三级液态菌种浸入到固体培养内，然后将浸入菌种的固体培养基放入培养房内进行静置发酵培养，当细胞达到5亿CFU\g时终止培养。

所述一级菌种培养中各原料质量比为：土豆、麸皮溶液30%-70%，植物蛋白质胨15-20%，牛肉膏15-28%，蔗糖5-10%，盐溶液10-15%。

所述三级菌种培养中各原料质量比为：植物蛋白胨1-10%、海参蒸煮液7-10%、玉米浆2-8%、酵母膏8-13%、肉牛浸膏1-10%、番茄培养基2-8%、蒸馏水60-90%。

所述固体培养中，各原料质量比为玉米粉10-19%、大米粉14-10%、大豆粉4-10%、全脂乳粉5-20%、海参蒸煮液10-20%、玉米浆20-26%、酵母膏14-19%、肉牛浸膏10-20%。

本发明的有益效果为：本发明将液态培养和固态培养相结合，将最后的液态培养改成液固结合，使菌种培养效果更好。最后一步培养为关键的培养步骤，现今的培养都是用液体培养，当培养发生问题时，需要对整体进行处理，造成原料浪费，导致培养成本过高，本发明经最后一步改为固体培养，当出现问题时，可以直接对问题部分进行剔除，避免其他培养基和菌种的浪费，降低的培养成本，提高了培养成功率。本发明最后一步为固体培养，便于工作人员进行观察控制，当出现问题时可以及时进行解决，避免了损坏菌种对其他菌种产生污染，降低了失败率，提高了成功率。本发明的三级菌种培养液中利用植物蛋白胨、海参蒸煮液、玉米浆、酵母膏、肉牛浸膏、番茄培养基进行培养，促进了菌种的成长，提高了菌种几率。本发明的固体培养中利用玉米粉、大米粉、大豆粉、全脂乳粉、海参蒸煮液、玉米浆、酵母膏、肉牛浸膏，该培养基中生长良好，在最佳发酵状态下，最大生长量均可达到8.75×109cfu/mL以上，优于经典的双歧杆菌选择性培养基TPY培养基的液体深层培养效果。

具体实施方式

实施例所示，对本发明进行进一步说明：

一种利用固液结合发酵工艺生产双歧杆菌的方法，其具体流程为：

（1）原种液体培养

将双歧杆菌菌种放入培养基中，所述培养基由植物蛋白胨0.55%-0.78%、胰胨0.25%-0.48%、酵母浸膏0.15%-0.28%、葡萄糖0.35%-0.58%、盐溶液0.15%-0.28%、蒸馏水95%-98%组成，然后将放入菌种的培养基放在通风处进行培养；

（2）一级菌种培养

将土豆、麸皮放入蒸馏水中进行蒸煮，然后提取溶液，将溶液中加入植物蛋白质胨、牛肉膏、蔗糖、盐溶液，其中土豆、麸皮溶液40%，植物蛋白质胨18%，牛肉膏22%，蔗糖8%，盐溶液10%。再将菌种放入培养液中，将溶液放置到通风处进行发酵培养；

（3）二级菌种培养

制取一级培养液，但培养皿换为无色透明试剂瓶，将试剂瓶继续拧灭菌，灭菌后放入培养液，然后接种一级菌种10%后，每隔5小时晃动1分钟，培养24-96小时，当细胞达到1.0亿CFU\g时终止培养，室温下保存备用；

（4）三级菌种培养

取植物蛋白胨、海参蒸煮液、玉米浆、酵母膏、肉牛浸膏、番茄培养基放入蒸馏水中进行溶解，以此作为培养基，其中质量比为：植物蛋白胨2%、海参蒸煮液7%、玉米浆5%、酵母膏12%、肉牛浸膏4%、番茄培养基5%、蒸馏水65%，然后进行二级菌种接种，接种20%后静置，当细胞达到1.8亿CFU\g时终止培养，室温下保存备用；

（5）固体培养

利用玉米粉、大米粉、大豆粉、全脂乳粉、海参蒸煮液、玉米浆、酵母膏、肉牛浸膏进行固体培养基制作，其中质量比为：玉米粉12%、大米粉15%、大豆粉5%、全脂乳粉9%、海参蒸煮液12%、玉米浆20%、酵母膏16%、肉牛浸膏11%，然后对培养基进行冷却灭菌，然后将三级液态菌种浸入到固体培养内，然后将浸入菌种的固体培养基放入培养房内进行静置发酵培养，当细胞达到5亿CFU\g时终止培养。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。

Claims (4)

1.一种利用固液结合发酵工艺生产双歧杆菌的方法，其具体流程为：

原种液体培养

将双歧杆菌菌种放入培养基中，所述培养基由植物蛋白胨0.55%-0.78%、胰胨0.25%-0.48%、酵母浸膏0.15%-0.28%、葡萄糖0.35%-0.58%、盐溶液0.15%-0.28%、蒸馏水95%-98%组成，然后将放入菌种的培养基放在通风处进行培养；

一级菌种培养

将土豆、麸皮放入蒸馏水中进行蒸煮，然后提取溶液，将溶液中加入植物蛋白质胨、牛肉膏、蔗糖、盐溶液，再将菌种放入培养液中，将溶液放置到通风处进行发酵培养；

二级菌种培养

制取一级培养液，但培养皿换为无色透明试剂瓶，将试剂瓶继续拧灭菌，灭菌后放入培养液，然后接种一级菌种10%后，每隔5小时晃动1分钟，培养24-96小时，当细胞达到1.0亿CFU\g时终止培养，室温下保存备用；

三级菌种培养

取植物蛋白胨、海参蒸煮液、玉米浆、酵母膏、肉牛浸膏、番茄培养基放入蒸馏水中进行溶解，以此作为培养基，然后进行二级菌种接种，接种20%后静置，当细胞达到1.8亿CFU\g时终止培养，室温下保存备用；

(4)固体培养

利用玉米粉、大米粉、大豆粉、全脂乳粉、海参蒸煮液、玉米浆、酵母膏、肉牛浸膏进行固体培养基制作，然后对培养基进行冷却灭菌，然后将三级液态菌种浸入到固体培养内，然后将浸入菌种的固体培养基放入培养房内进行静置发酵培养，当细胞达到5亿CFU\g时终止培养。

2.按照权利要求1所述的一种利用固液结合发酵工艺生产双歧杆菌的方法，其特征在于所述一级菌种培养中各原料质量比为：土豆、麸皮溶液30%-70%，植物蛋白质胨15-20%，牛肉膏15-28%，蔗糖5-10%，盐溶液10-15%。

3.按照权利要求1所述的一种利用固液结合发酵工艺生产双歧杆菌的方法，其特征在于所述三级菌种培养中各原料质量比为：植物蛋白胨1-10%、海参蒸煮液7-10%、玉米浆2-8%、酵母膏8-13%、肉牛浸膏1-10%、番茄培养基2-8%、蒸馏水60-90%。

4.按照权利要求1所述的一种利用固液结合发酵工艺生产双歧杆菌的方法，其特征在于所述固体培养中，各原料质量比为玉米粉10-19%、大米粉14-10%、大豆粉4-10%、全脂乳粉5-20%、海参蒸煮液10-20%、玉米浆20-26%、酵母膏14-19%、肉牛浸膏10-20%。