CN105308030A - 烷基、氟烷基-1,4-苯并二氮杂*酮化合物 - Google Patents

烷基、氟烷基-1,4-苯并二氮杂*酮化合物 Download PDF

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Abstract

本发明披露了式(I)化合物和/或其盐；其中：R1为-CH2CH2CF3；R2为-CH2(环丙基)、-CH(CH3)(环丙基)或-CH2CH2CH3；R3为H、-CH3或Rx；R4为H或Ry；且Rx、Ry、Ra、Rb、Rc、y和z如本申请所定义。本申请还披露了使用这类化合物抑制Notch受体的方法，和包含这类化合物的药物组合物。这些化合物适用于治疗、预防或减缓多种治疗领域中的疾病或障碍(诸如癌症)的进展。式(I)化合物也包括Notch抑制剂化合物的前体。

Description

烷基、氟烷基-1,4-苯并二氮杂*酮化合物
技术领域
本发明大体涉及适用作Notch抑制剂的苯并二氮杂酮化合物。本发明进一步涉及药物组合物，其包含至少一种本发明化合物，适用于治疗与Notch路径有关的病症，诸如癌症和其它增殖性疾病。
背景技术
Notch信号传导牵涉在多个细胞过程中，诸如细胞命运特异化(cellfatespecification)、分化、增殖、细胞凋亡和血管生成。(Bray,NatureReviewsMolecularCellBiology,7:678-689(2006)；Fortini,DevelopmentalCell16:633-647(2009))。Notch蛋白为单次杂二聚跨膜分子。Notch家族包括4种受体，即Notch1至4，其在结合至DSL家族(Delta-样1、3、4和Jagged1和2)的配体后活化。
Notch的活化和成熟需要一系列加工步骤，包括由γ分泌酶介导的蛋白水解裂解步骤，γ分泌酶为含有早老素1(Presenilin1)或早老素2(Presenilin2)、呆蛋白(nicastrin)、APH1和PEN2的多蛋白复合物。在Notch裂解后，Notch细胞内结构域(NICD)自膜释放。释放的NICD移位至核中，在核中其与CSL家族成员(RBPSUH、“无毛抑制子(suppressorofhairless)”和LAG1)协力充当转录活化因子。Notch靶标基因包括HES家族成员，诸如HES-1。HES-1充当诸如HERP1(也称为HEY2)、HERP2(也称为HEY1)和HATH1(也称为ATOH1)的基因的转录抑制因子。
Notch路径异常活化会导致肿瘤形成。Notch信号传导活化牵涉在各种实体肿瘤(包括卵巢癌、胰腺癌以及乳腺癌)和血液肿瘤(诸如白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤)的发病机理中。Notch抑制的作用和其在治疗各种实体和血液肿瘤中的效用描述于Miele,L.等人，CurrentCancerDrugTargets,6:313-323(2006)；Bolos,V.等人，EndocrineReviews,28:339-363(2007)；Shih,I.-M.等人，CancerResearch,67:1879-1882(2007)；Yamaguchi,N.等人，CancerResearch,68:1881-1888(2008)；Miele,L.,ExpertReviewAnti-cancerTherapy,8:1197-1201(2008)；Purow,B.,CurrentPharmaceuticalBiotechnology,10:154-160(2009)；Nefedova,Y.等人，DrugResistanceUpdates,11:210-218(2008)；Dufraine,J.等人，Oncogene,27:5132-5137(2008)；和Jun,H.T.等人，DrugDevelopmentResearch,69:319-328(2008)中。
仍需要适用作Notch抑制剂且具有足够代谢稳定性以提供有效水平的药物暴露的化合物。此外，仍需要适用作Notch抑制剂且可口服或静脉内给予患者的化合物。
美国专利7,053,084B1披露适用于治疗神经障碍(诸如阿尔茨海默病(Alzheimer'sDisease))的丁二酰氨基苯并二氮杂化合物。所述参考文献披露，这些丁二酰氨基苯并二氮杂化合物抑制γ分泌酶活性和与类淀粉蛋白的神经沉积物形成有关的类淀粉前体蛋白的加工。
本发明申请人已发现具有作为Notch抑制剂的活性且在静脉内给药或口服给药后具有足够代谢稳定性以提供有效量的药物暴露的有效化合物。提供这些化合物以适用作具有对可用药性而言重要的合乎需要的稳定性、生物可用率、治疗指数和毒性值的药物。
发明内容
本发明通过提供适用作Notch信号传导路径的选择性抑制剂的1,4-苯并二氮杂酮化合物(包括其前药)来满足上述需要。
本发明也提供药物组合物，其包含药学上可接受的载体；和至少一种式(I)化合物。
本发明也提供治疗与Notch受体的活性有关的疾病或障碍的方法，所述方法包含给予哺乳动物患者至少一种式(I)化合物。
本发明也提供制备式(I)化合物的方法和中间体。
本发明也提供用于疗法中的式(I)化合物。
本发明也提供式(I)化合物用于制造用于治疗癌症的药物的用途。
式(I)化合物和包含这种化合物的组合物可用于治疗、预防或治愈各种Notch受体相关病症。包含这些化合物的药物组合物适用于治疗、预防或减缓多种治疗领域中的疾病或障碍(诸如癌症)的进展。
本发明的这些和其它特征将随着披露内容继续而以展开形式阐述。
附图说明
通过参考下文所述的附图来说明本发明。
图1展示实施例1化合物的M3-1形式的实验(在约25℃)和模拟(在约25℃)PXRD图
图2展示实施例1化合物的CA-2形式的实验(在约25℃)和模拟(在约25℃)PXRD图
图3展示实施例1化合物的SA-3形式的实验(在约25℃)和模拟(在约25℃)PXRD图
图4展示实施例1化合物的E2.5-4形式的实验(在约25℃)和模拟(在约25℃)PXRD图
图5展示实施例1化合物的IPA2-5形式的实验(在约25℃)和模拟(在约25℃)PXRD图
图6展示实施例1化合物的P-1形式的实验(在约25℃)PXRD图
图7展示实施例1化合物的P-4形式的实验(在约25℃)PXRD图
图8展示实施例1化合物的P-5形式的实验(在约25℃)PXRD图
图9展示实施例1化合物的P-6形式的实验(在约25℃)PXRD图
图10展示实施例1化合物的P-7形式的实验(在约25℃)PXRD图
图11展示实施例1化合物的P-9形式的实验(在约25℃)PXRD图
图12展示实施例1在T细胞急性淋巴母细胞性白血病细胞系TALL1中的体内活性。口服给药；PO，QD×10。各符号表示一组8只小鼠的中值肿瘤负荷。(●)对照组；(◇)实施例1，10mg/kg；(□)实施例1，20mg/kg；(■)实施例1，40mg/kg。
图13展示实施例1在人T细胞急性淋巴母细胞性白血病细胞系TALL1中的体内活性。口服给药；PO，QD×10。各符号表示一组8只小鼠的中值肿瘤负荷。(●)对照组；(△)实施例1，1mg/kg；(◆)实施例1，2mg/kg；(□)实施例1，10mg/kg。
图14展示实施例1在人三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-157中的体内活性。口服给药；PO，QD×15(给药10天-停药2天-给药5天)。各符号表示一组8只小鼠的中值肿瘤负荷。(●)对照组；(*)实施例1，1mg/kg；()实施例1，2mg/kg；(◇)实施例1，5mg/kg；(■)实施例1，10mg/kg。
图15展示实施例1在人三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-468中的体内活性。口服给药；PO，QD×15(给药10天-停药2天-给药5天)。各符号表示一组8只小鼠的中值肿瘤负荷。(●)对照组；(*)实施例1，2mg/kg；()实施例1，5mg/kg；(◇)实施例1，10mg/kg；(■)实施例1，20mg/kg。
图16展示实施例1在人PAT70胰腺癌细胞系中的体内活性。口服给药；PO，QD×15(给药10天-停药2天-给药5天)。各符号表示一组8只小鼠的中值肿瘤负荷。(●)对照组；(□)实施例1，10mg/kg；()实施例1，20mg/kg。
具体实施方式
本发明的第一方面提供至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐，所述式(I)为：
其中：
R1为-CH2CH2CF3；
R2为-CH2(环丙基)、-CH(CH3)(环丙基)或-CH2CH2CH3；
R3为H、-CH3或Rx；
R4为H或Ry；
Rx为：-CH2OP(O)(OH)2、-CH2OC(O)CH(CH(CH3)2)NH2、
Ry为-SCH2CH2NH2、-SCH2CH(NH2)C(O)OH、-SCH2CH(NH2)C(O)OCH3或
Ra为F、Cl、Br、-CN、-OH、-CH3、-CH2OH、环丙基、-CF3、-OCH3或-O(环丙基)；
各Rb独立地为F、Cl、-CH3、-OCH3和/或-CF3；
Rc为Cl、Br、-CH3、-OCH3或-O(环丙基)；
y为0或1；且
z为0、1或2；
前提是如果R3为Rx，则R4为H；且如果R4为Ry，则R3为H或-CH3。
一个实施方案提供了至少一种式(I)化合物或至少一种其盐，其中R3为H或-CH3；且R1、R2、R4、Ra、Rb、Rc、y和z如第一方面所定义。在本实施方案中包括其中R4为H的化合物。
一个实施方案提供了至少一种式(I)化合物，其中R3为H或-CH3；R4为H；且R1、R2、Ra、Rb、Rc、y和z如第一方面所定义。本实施方案包括其中R3为H且R4为H的式(II)化合物：
和其中R3为-CH3且R4为H的式(III)化合物：
式(II)和式(III)的化合物可用作Notch信号通路的选择性抑制剂。
一个实施方案提供了至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐，其中(i)R3为Rx且R4为H；或(ii)R4为Ry且R3为H或-CH3；且R1、R2、Ra、Rb、Rc、Rx、Ry、y和z如第一方面所定义。本实施方案包括其中R3为Rx且R4为H的式(IV)化合物：
和其中R4为Ry且R3为H或-CH3的式(V)化合物：
本实施方案的化合物可用作式(II)和式(III)化合物的前药。
一个实施方案提供了至少一种式(IV)化合物或至少一种其盐，其中R3为Rx且R4为H；R1、R2、Rx、Ra、Rb、Rc、y和z如第一方面所定义。在本实施方案中包括其中y为0的化合物。本实施方案的化合物可用作式(II)和式(III)化合物的前药。
一个实施方案提供了至少一种式(V)化合物或至少一种其盐，其中R4为Ry且R3为H或-CH3；且R1、R2、Ry、Ra、Rb、Rc、y和z如第一方面所定义。在本实施方案中包括其中R3为H且y为0的化合物。在本实施方案中还包括其中R3为-CH3且y为0的化合物。本实施方案的化合物可用作式(II)和式(III)化合物的前药。
一个实施方案提供了至少一种式(I)化合物或至少一种其盐，其中z为0或1；且R1、R2、R3、R4、Rx、Ry、Ra、Rb、Rc和y如第一方面所定义。在本实施方案中包括其中R3为H或-CH3；且R4为H的化合物。在本实施方案中还包括其中R3为H或-CH3的化合物。
一个实施方案提供了至少一种式(I)化合物或至少一种其盐，其中R1为-CH2CH2CF3且R1、R3、R4、Rx、Ry、Ra、Rb、Rc、y和z如第一方面所定义。在本实施方案中包括其中y为0的化合物。在本实施方案中还包括其中R3为H或-CH3的化合物。
一个实施方案提供了至少一种式(I)化合物或至少一种其盐，其中R1为-CH2CH2CF3且R2为-CH2(环丙基)或-CH(CH3)(环丙基)；R3、R4、A、Rx、Ry、Ra、Rb、Rc、y和z如第一方面所定义。在本实施方案中包括其中y为0的化合物。在本实施方案中还包括其中R3为H或-CH3的化合物。
一个实施方案提供了至少一种式(I)化合物或至少一种其盐，其中R1为-CH2CH2CF3且R2为-CH2(环丙基)；且R3、R4、Rx、Ry、Ra、Rb、Rc、y和z如第一方面所定义。在本实施方案中包括其中y为0的化合物。在本实施方案中还包括其中R3为H或-CH3的化合物。
一个实施方案提供了至少一种式(I)化合物或至少一种其盐，其中R1为-CH2CH2CF3且R2为-CH(CH3)(环丙基)；且R3、R4、Rx、Ry、Ra、Rb、Rc、y和z如第一方面所定义。在本实施方案中包括其中y为0的化合物。在本实施方案中还包括其中R3为H或-CH3的化合物。
一个实施方案提供了至少一种式(I)化合物或至少一种其盐，其中R1为-CH2CH2CF3且R2为-CH2CH2CH3；且R3、R4、Rx、Ry、Ra、Rb、Rc、y和z如第一方面所定义。在本实施方案中包括其中y为0的化合物。在本实施方案中还包括其中R3为H或-CH3的化合物。
一个实施方案提供了至少一种式(I)化合物或至少一种其盐，其中y为0，z为0，且R1、R2、R3、R4、Rx和Ry如第一方面所定义。在本实施方案中包括其中R3为H或-CH3的化合物。
一个实施方案提供了至少一种式(I)化合物或至少一种其盐，其中y为1，z为1；且R1、R2、R3、R4、Rx、Ry、Ra、Rb和Rc如第一方面所定义。在本实施方案中包括其中R3为H或-CH3的化合物。
一个实施方案提供了至少一种式(I)化合物或至少一种其盐，其具有以下结构：
其中R3和R4如第一方面所定义。在本实施方案中包括其中R4为H；R3为Rx；且Rx为：-CH2OP(O)(OH)2、-CH2OC(O)CH(CH(CH3)2)NH2、
在本实施方案中还包括其中R3为H；R4为Ry且Ry为-SCH2CH2NH2、-SCH2CH(NH2)C(O)OH、-SCH2CH(NH2)C(O)OCH3或的化合物。
一个实施方案提供了至少一种式(I)化合物或至少一种其盐，其具有以下结构：
其中R3为H或Rx；且R4为H或Ry；前提是如果R3为Rx，则R4为H；且如果R4为Ry，则R3为H。在本实施方案中包括其中R4为H；R3为Rx；且Rx为:-CH2OP(O)(OH)2、-CH2OC(O)CH(CH(CH3)2)NH2、 的化合物。
在本实施方案中还包括其中R3为H；R4为Ry且Ry为-SCH2CH2NH2、-SCH2CH(NH2)C(O)OH、-SCH2CH(NH2)C(O)OCH3或的化合物。
一个实施方案提供了组合物，其包含：(i)至少一种具有以下结构的式(I)化合物：
和/或其盐；(ii)具有以下结构的式(I)化合物：
或者(i)和(ii)的混合物；其中R3为H或Rx；R4为H或Ry；前提是如果R3为Rx，则R4为H；和前提是如果R4为Ry，则R3为H；且其中Rx和Ry如第一方面所定义。
一个实施方案提供了式(I)化合物，其中R1为-CH2CH2CF3；R2为-CH2(环丙基)；R3为H或Rx；R4为H或Ry；Ra为F、-CH3或-CH2OH；Rb为F；y为0；且z为0或1；且Rx和Ry如第一方面所定义。在本实施方案中包括其中R3为H且R4为H的化合物。
一个实施方案提供了至少一种式(I)化合物，其中R3为H；且R1、R2、R4、Ra、Rb、Rc、y和z如第一方面所定义。在本实施方案中包括其中R3为氘(D)或氚(T)的化合物。在本实施方案中还包括其中R2为-CH2CH2CF3的化合物。
一个实施方案提供了至少一种式(I)化合物，其中R3为-CH3；且R1、R2、R4、Ra、Rb、Rc、y和z如第一方面所定义。R3包括其中一个或多个氢原子被氘(D)和/氚(T)同位素取代的甲基。在本实施方案的一个实例中，R3为-CD3。在本实施方案中还包括其中R2为-CH2CH2CF3的化合物。
一个实施方案提供了选自以下的式(I)化合物：
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(1)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-甲氧基-2-氧代-5-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(2)；(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-5-(3-氟-5-甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(3)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-5-(3-氟苯基)-9-甲氧基-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(4)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-(环丙基氧基)-5-(3-氟苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(5)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-(环丙基氧基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(6)；(2R,3S)-N-((3S)-5-(4-氯苯基)-9-环丙基-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(7)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-羟基-5-(3-甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(8)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-甲基-2-氧代-5-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(9)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-5-(3-氟苯基)-9-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(10)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(11)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-5-(4-氟苯基)-9-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(12)；(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-5-(2-甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(13)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-(9-环丙基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(14)；(2R,3S)-N-((3S)-9-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(15)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-5-(4-甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(16)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-7-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(17)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-8-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(18)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-5-(3-甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(19)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(20)；(2R,3S)-N-((3S)-5-(4-氯苯基)-9-甲氧基-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(21)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-5-(3-甲氧基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(22)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-5-(3-氟苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(23)；(2R,3S)-N-((3S)-5-(3-氯苯基)-9-氟-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(24)；(2R,3S)-N-((3S)-5-(4-氯苯基)-9-甲氧基-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(25)；(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-5-(3-氯苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(26)；(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-5-(4-氯苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(27)；(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-5-(4-氯苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(28)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-8-甲氧基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(29)；(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-5-(3-甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(30)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-甲氧基-5-(3-甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3，3，3-三氟丙基)琥珀酰胺(31)；(2R，3S)-N-((3S)-9-氰基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(32)；(2R,3S)-N-((3S)-9-甲氧基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-((1-甲基环丙基)甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(33)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-8,9-二氯-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(34)；(2R,3S)-N-((3S)-2-氧代-5-苯基-9-(三氟甲基)-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(35)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-2-氧代-5-苯基-9-(三氟甲基)-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(36)；(2R,3S)-N-((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(37)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-甲氧基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(38)；(2R,3S)-N-((3S)-8-溴-9-甲氧基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(39)；(2R,3S)-N-((3S)-9-甲氧基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(40)；(2R,3S)-N-((3S)-9-羟基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(41)；(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(42)；(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(43)；(4-(膦酰基氧基)苯基)乙酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(44)；二氢磷酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(45)；3-((膦酰基氧基)甲基)苯甲酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-1-氨基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(46)；5-((膦酰基氧基)甲基)-吡啶-2-甲酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(47)；3-(2,4-二甲基-6-(膦酰基氧基)苯基)-3-甲基丁酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(48)；S-(((2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨甲酰基)己酰基)氨基)-L-半胱氨酸·TFA(49)；(2S,3R)-N1-((2-氨基乙基)硫烷基)-2-(环丙基甲基)-N4-((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺·TFA(50)；S-(((2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨甲酰基)己酰基)氨基)-L-半胱氨酸甲基酯·TFA(51)；L-缬氨酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(52)；1-氨基环丙烷甲酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(53)；(2S,3R)-2-(环丙基甲基)-N4-((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-N1-(1-吡咯烷基甲基)-3-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(54)；4-((膦酰基氧基)甲基)苯甲酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(55)；和其盐。
一个实施方案提供了选自以下的式(I)化合物：
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(1)；(4-(膦酰基氧基)苯基)乙酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(44)；二氢磷酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(45)；3-((膦酰基氧基)甲基)苯甲酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-1-氨基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(46)；5-((膦酰基氧基)甲基)-吡啶-2-甲酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(47)；3-(2,4-二甲基-6-(膦酰基氧基)苯基)-3-甲基丁酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(48)；S-(((2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨甲酰基)己酰基)氨基)-L-半胱氨酸·TFA(49)；(2S,3R)-N1-((2-氨基乙基)硫烷基)-2-(环丙基甲基)-N4-((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺·TFA(50)；S-(((2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨甲酰基)己酰基)氨基)-L-半胱氨酸甲基酯·TFA(51)；L-缬氨酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(52)；1-氨基环丙烷甲酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(53)；(2S,3R)-2-(环丙基甲基)-N4-((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-N1-(1-吡咯烷基甲基)-3-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(54)；和4-((膦酰基氧基)甲基)苯甲酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(55)；和其盐。
一个实施方案提供了至少一种式(I)化合物，其中R3为H或-CH3；且R4为H；其中式(I)化合物的代谢半衰期至少为45分钟，如本申请所述的人代谢稳定性半衰期分析中所测量。
一个实施方案提供了至少一种式(I)化合物，其中R3为H或-CH3；且R4为H；其中式(I)化合物的代谢半衰期至少为60分钟，如本申请所述的人代谢稳定性半衰期分析中所测量。
本发明可在不背离本发明的精神或基本特性下以其它特定形式体现。本发明涵盖本申请所述的本发明的方面和/或实施方案的所有组合。应了解，本发明的任何和所有实施方案可连同任何其它实施方案一起来描述其它实施方案。也应了解，实施方案的各个别要素意欲与任何实施方案的任何和所有其它要素组合以描述其它实施方案。
定义
本发明的特征和优势可由本领域技术人员在阅读以下详细描述后更容易地了解。应了解，出于清楚原因上文和下文在各个实施方案的情况下描述的本发明的某些特征也可组合形成单一实施方案。反之，出于简洁原因在单一实施方案的情况下描述的本发明的各种特征也可组合形成其子组合。本申请确定为示例性或优选的实施方案意欲具说明性而非具限制性。
除非本申请另外特定说明，否则以单数形式提及也可包括复数。举例而言，“一(a)”和“一(an)”可指一个或一种一或多个或种。
除非另外指示，否则任何具有不饱和价数的杂原子被认为具有足以满足这种价数的氢原子。
本申请所阐述的定义优先于以引用方式并入本申请中的任何专利、专利申请和/或专利申请公开中所阐述的定义。
用于描述本发明的各种术语的定义列于下文中。当术语在整篇说明书(除非其在特定情况下另外限制)中个别地或作为较大团体的一部分使用时，这些定义均适用于这种术语。
在整篇说明书中，基团和其取代基可由本领域技术人员选择以提供稳定的部分和化合物。
本申请所用的术语“卤代”和“卤素”指F、Cl、Br或I。
本申请所用的术语“烷基”指含有例如1至12个碳原子、1至6个碳原子和1至4个碳原子的支链的与直链的饱和脂族烃基。烷基的实施例包括(但不限于)甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(例如正丙基和异丙基)、丁基(例如正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基)和戊基(例如正戊基、异戊基、新戊基)、正己基、2-甲基戊基、2-乙基丁基、3-甲基戊基和4-甲基戊基。当数字在符号“C”后以下标形式出现时，所述下标更特定地定义特定基团可含有的碳原子数目。举例而言，“C1-6烷基”表示具有一至六个碳原子的直链的和支链的烷基。
词组“药学上可接受”在本申请中用于指在正确医学判断范畴内适用于与人类和动物组织接触而无过度毒性、刺激性、过敏反应或其它问题或并发症且与合理效益/风险比率相称的那些化合物、物质、组合物和/或剂型。
式(I)化合物可形成盐，该盐也在本发明范围内。除非另有指示，否则，提及本发明的化合物应当理解为包括一种或多种其盐。术语“盐”表示与无机酸和碱和/或有机酸和碱形成的酸和/或碱盐。此外，术语“盐”可包括两性离子(内盐)，例如，当式(I)化合物含有碱性部分，如胺或吡啶或咪唑环，和酸性部分，如羧酸时。优选药学上可接受的(即，无毒性的、生理学上可接受的)盐，例如，可接受的金属盐和胺盐，其中阳离子不会对该盐的毒性或生物活性造成显著贡献。然而，其它盐也可用于例如制备过程中所采用的分离或纯化步骤中，因此，其它盐也涵盖在本发明范围内。式(I)化合物的盐可通过，例如，将式(I)的化合物与一定量(如一当量)的酸或碱在如该盐在其中沉淀的介质或在水性介质中反应，然后冻干形成。
示例性酸加成盐包括乙酸盐(如与乙酸或三卤乙酸(例如三氟乙酸)形成的那些盐)、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐(Glucoheptanoates)、甘油磷酸盐、半硫酸盐(Hemisulfate)、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐(与盐酸形成的)、氢溴酸盐(与溴化氢形成的)、氢碘酸盐、马来酸盐(与马来酸形成的)、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐(与甲磺酸形成的)、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、果胶酯酸盐(Pectinates)、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐(如与硫酸形成的那些盐)、磺酸盐(如本申请提及的那些盐)、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐如对甲苯磺酸盐，以及十一碳酸盐等。
示例性碱盐包括铵盐、碱金属盐如钠、锂和钾盐；碱土金属盐如钙和镁盐；钡、锌和铝盐；与有机碱(例如有机胺)如三烷基胺(如三乙胺、普鲁卡因、二苄基胺、N-苄基-β-苯乙基胺、1-二苯羟甲胺、N,N′-二苄基乙二胺、去氢枞胺、N-乙基哌啶、苄基胺、二环己基胺或类似的药学上可接受的胺)形成的盐，以及与氨基酸如精氨酸、赖氨酸等形成的盐。碱性含氮基团可被试剂如低级烷基卤化物(例如，甲基、乙基、丙基和叔丁基氯化物、溴化物和碘化物)、二烷基硫酸酯(例如，二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸酯)、长链卤化物(例如，癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤化物(例如，苄基和苯乙基溴化物)以及其它卤化物季铵化。优选的盐包括一盐酸盐、硫酸氢盐、甲磺酸盐、磷酸盐或硝酸盐。
式(I)化合物可以无定形固体或结晶固体形式提供。可使用冻干来提供呈固体状的式(I)化合物。
还应当理解式(I)化合物的溶剂化物(例如，水合物)也在本发明的范围内。术语“溶剂化物”意指式(I)化合物与一个或多个溶剂分子(无论是有机的还是无机的)的物理缔合。该物理缔合包括氢键。在一些情况中，该溶剂化物能够分离，例如当一个或多个溶剂分子掺入至结晶固体的晶格中时。“溶剂化物”涵盖溶液相溶剂化物和可分离的溶剂化物。示例性溶剂化物包括水合物、乙醇合物、甲醇合物、异丙醇合物、乙腈溶剂化物和乙酸乙酯溶剂化物。溶剂化的方法是本领域已知的。
式(I)化合物和/或其盐意欲包括式(I)化合物的溶剂化物和式(I)化合物的盐的溶剂化物。
在本发明的范畴和精神内，任何可体内转化以提供生物活性剂(也即式(I)化合物)的化合物为前药。其中R3为Rx或R4为Ry的式(I)化合物可用作式(I)化合物的前药，其中R3为H或-CH3且R4为H。
各种前药形式在此项技术中为熟知的且描述于以下文献中：
a)Wermuth,C.G.等人，ThePracticeofMedicinalChemistry，第31章，AcademicPress(1996)；
b)Bundgaard,H.编，DesignofProdrugs,Elsevier(1985)；
c)Bundgaard,H.，第5章，“DesignandApplicationofProdrugs”,Krosgaard-Larsen,P.等人编，ATextbookofDrugDesignandDevelopment，第113-191页,HarwoodAcademicPublishers(1991)；和
d)Testa,B.等人，HydrolysisinDrugandProdrugMetabolism,Wiley-VCH(2003)。
另外，式(I)化合物在制备之后可被分离和纯化，以获得含有等于或大于99重量％的量的式(I)化合物(“实质上纯”)的组合物，接着如本申请所述使用或配制。这种“实质上纯”的式(I)化合物在本申请中也涵盖作为本发明的一部分。
“稳定化合物”和“稳定结构”意欲指示足够稳固而能够自反应混合物中分离出达适用纯度且能够配制成有效治疗剂的化合物。本发明意欲包含稳定化合物。
“治疗有效量”意欲包括有效充当Notch受体抑制剂或有效治疗或预防增殖性疾病(诸如癌症)的单独本发明化合物的量，或所主张的化合物组合的量，或与其它活性成分组合的本发明化合物的量。
本申请所用的“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”涵盖治疗哺乳动物(尤其人类)的疾病状态，且包括：(a)预防哺乳动物出现疾病状态，尤其在所述哺乳动物易患所述疾病状态但尚未诊断为患有所述疾病状态时；(b)抑制疾病状态，也即阻止其发展；和/或(c)减轻疾病状态，也即使疾病状态消退。
本发明化合物意欲包括本发明化合物中存在的原子的所有同位素。同位素包括原子序数相同但质量数不同的那些原子。作为一般实例且非限制性地，氢的同位素包括氘(D)和氚(T)。碳的同位素包括13C和14C。通常，同位素标记的本发明化合物可通过本领域技术人员已知的常规技术或通过类似于本申请所述的方法的方法，使用适当的同位素标记试剂替代否则使用的未经标记的试剂来制备。
实施例1化合物的晶体形式
在一个实施方案中，实施例1的化合物
是以包含一种或多种结晶形式的结晶物质形式提供。实施例1化合物的适合结晶形式的实例包括形式M3-1、CA-2、SA-3、E2.5-4和IPA2-5。
在一个实施方案中，实施例1化合物是以包含实施例1的第一结晶形式的结晶物质形式提供。实施例1化合物的第一结晶形式包含本申请称作“形式M3-1”或“M3-1形式”的结晶形式。该M3-1形式对于每一实施例1分子而言包含约3个甲醇分子。
在一个实施方案中，实施例1化合物的N-1形式的特征在于约等于以下的单位晶胞参数：
晶胞尺寸：
α＝90.0°
β＝90.0°
γ＝90.0°
空间群：P2(1)2(1)2(1)
实施例1的分子/不对称单位：1
密度(计算值)＝1.289mg/m3，
其中形式M3-1的单位晶胞参数是在约-70℃的温度测量。
在另一实施方案中，实施例1化合物的M3-1形式的特征在于实质上与图6中所示的图一致的模拟粉末x射线衍射(PXRD)图和/或实质上与图6中所示的图一致的观测PXRD图。
在另一实施方案中，实施例1化合物的M3-1形式的特征在于PXRD图(在约25℃温度，)包含四个或四个以上，优选五个或五个以上选自以下的2θ值：8.2±0.2；9.6±0.2；12.2±0.2；14.4±0.2；16.6±0.2；19.1±0.2；19.5±0.2,20.2±0.2；20.6±0.2；21.4±0.2；23.0±0.2；和24.8±0.2，其中形式M3-1的PXRD图是在约25℃的温度测量。
在另一实施方案中，实施例1的M3-1形式的特征在于实质上如表1中所列的原子分数坐标。
表1
实施例1的形式M3-1在约25℃温度的原子分数坐标计算值；原子坐标(×104)和等效各向同性位移参数
x y z U(eq)*
C(1) 4090(3) 11755(2) 10464(2) 45(1)
C(2) 4576(4) 11895(2) 9843(2) 50(1)
C(3) 4846(4) 12655(2) 9650(2) 65(1)
C(4) 4629(5) 13238(2) 10056(3) 81(2)
C(5) 4109(5) 13117(2) 10668(3) 80(2)
C(6) 3861(4) 12376(2) 10851(2) 58(1)
C(7) 4758(3) 11267(2) 9386(2) 42(1)
C(8) 4143(4) 11357(2) 8731(2) 53(1)
C(9) 4706(5) 10896(3) 8248(2) 71(1)
C(10) 4079(7) 10926(3) 7658(2) 94(2)
C(11) 2845(7) 11410(3) 7532(2) 94(2)
C(12) 2295(6) 11876(3) 7984(2) 81(1)
C(13) 2902(4) 11850(2) 8600(2) 62(1)
C(14) 4650(3) 10396(2) 10602(1) 34(1)
C(15) 6040(4) 10520(2) 10150(1) 36(1)
C(16) 8211(3) 9745(2) 10527(1) 34(1)
C(17) 9055(3) 8985(2) 10489(1) 32(1)
C(18) 8786(4) 8576(2) 11119(1) 40(1)
C(19) 7077(4) 8350(2) 11215(2) 47(1)
C(20) 6760(5) 8039(3) 11853(2) 75(1)
C(21) 10825(3) 9091(2) 10359(1) 34(1)
C(22) 11197(4) 9600(2) 9784(2) 47(1)
C(23) 10606(6) 9326(3) 9180(2) 85(2)
C(26) 11589(4) 8316(2) 10262(1) 38(1)
F(1) 3365(3) 12236(1) 11445(1) 76(1)
F(2) 5283(3) 7760(2) 11895(2) 104(1)
x y z U(eq)*
F(3) 6905(4) 8556(2) 12304(1) 118(1)
F(4) 7725(4) 7471(2) 12003(2) 130(2)
N(1) 5401(3) 10625(1) 9517(1) 40(1)
N(2) 3752(3) 11021(1) 10698(1) 41(1)
N(3) 7037(3) 9855(1) 10131(1) 34(1)
N(4) 13115(3) 8289(2) 10387(2) 52(1)
O(1) 4344(2) 9778(1) 10831(1) 41(1)
O(3) 10849(2) 7755(1) 10073(1) 44(1)
O(2) 8593(3) 10228(1) 10927(1) 50(1)
C(1S) 10744(12) 6386(4) 11270(3) 162(4)
C(2S) 733(7) 1177(3) 2070(2) 94(2)
C(3S) 5998(10) 915(5) 2115(3) 137(3)
O(1S) 11267(4) 6386(1) 10659(1) 65(1)
O(2S) 1159(3) 839(2) 1494(1) 77(1)
O(3S) 6691(6) 1278(2) 1564(2) 117(1)
C(24) 10987(6) 9728(3) 8580(2) 87(1)
C(25) 11505(17) 8922(4) 8692(4) 128(5)
C(25A) 9304(6) 9559(8) 8765(4) 95(4)
*U(eq)是定义为正交Uij张量的迹线的三分之一。
在另一实施方案中，实施例1化合物的M3-1形式为实质上纯的。
在另一实施方案中，实施例1化合物的M3-1形式含有以重量计至少约90wt.％，优选至少约95wt.％，且更优选至少约99wt.％的实施例1化合物的形式M3-1。
在另一实施方案中，实质上纯的实施例1化合物的形式M3-1具有实质上纯的相均质性，其中以实验方式测量的PXRD图的总峰面积的约10％以下，优选约5％以下，且更优选约2％以下由模拟PXRD图中不存在的峰产生。最优选地，实质上纯的结晶形式M3-1具有实质上纯的相均质性，其中以实验方式测量的PXRD图的总峰面积的约1％以下由模拟PXRD图中不存在的峰产生。
在另一实施方案中，实施例1化合物的结晶形式基本上由形式M3-1组成。此实施方案的结晶形式可包含以结晶形式的重量计至少约90wt.％，优选至少约95wt.％，且更优选至少约99wt.％的实施例1化合物的形式M3-1。
在另一实施方案中，提供药物组合物，其包含实施例1化合物的形式M3-1；和至少一种药学上可接受的载体和/或稀释剂。
在另一实施方案中，药物组合物包含实质上纯的实施例1化合物的形式M3-1；和至少一种药学上可接受的载体和/或稀释剂。
在另一实施方案中，治疗有效量的实施例1化合物的形式M3-1与至少一种药学上可接受的载体和/或稀释剂组合以提供至少一种药物组合物。
在一个实施方案中，实施例1化合物是以实施例1的第二结晶形式提供。第二结晶形式为水合物结晶形式，在本申请中称作“形式CA-2”或“CA-2形式”。CA-2形式为具有溶剂化通道的水合物。
在一个实施方案中，CA-2形式的特征在于约等于以下的单位晶胞参数：
晶胞尺寸：
α＝90.0°
β＝90.0°
γ＝90.0°
空间群：P2(1)2(1)2
实施例1的分子/不对称单位：1
密度(计算值)＝1.352mg/m3，
其中形式CA-2的单位晶胞参数是在约-70℃的温度测量。
在另一实施方案中，CA-2形式的特征在于与图7中所示的图一致的模拟粉末x射线衍射(PXRD)图和/或与图7中所示的图一致的观测PXRD图。
在另一实施方案中，实施例1化合物的CA-2形式的特征在于PXRD图(在约25℃温度，)包含四个或四个以上，优选五个或五个以上选自以下的2θ值：6.1±0.2；9.5±0.2；12.3±0.2；13.5±0.2；14.0±0.2；15.4±0.2；18.1±0.2,19.6±0.2；22.1±0.2；23.7±0.2；24.8±0.2和25.9±0.2，其中形式CA-2的PXRD图是在约25℃的温度测量。
在另一实施方案中，实施例1的CA-2形式的特征在于实质上如表2中所列的原子分数坐标。
表2
约25℃温度的实施例1的形式CA-2的原子分数坐标计算值；原子坐标(×104)和等效各向同性位移参数
x y z U(eq)*
O(2S) 5000 0 2550(140) 145(19)
F(1) 8966(3) -413(1) 3824(9) 48(1)
F(2) 13136(4) 710(2) 1909(13) 75(2)
F(3) 13573(4) 1291(2) 1689(16) 90(2)
F(4) 13094(4) 1059(2) 5456(14) 84(2)
O(1) 10069(4) 561(2) -1313(13) 44(2)
O(2) 10210(4) 1484(2) 5676(13) 46(2)
O(3) 11706(4) 2444(2) -731(12) 46(2)
N(1) 8557(5) 1083(2) 1788(13) 34(2)
N(2) 9103(4) 268(2) 1341(13) 34(2)
N(3) 10020(4) 1239(2) 1468(13) 30(2)
N(4) 12041(5) 2634(2) 3511(15) 46(2)
C(1) 8539(6) 240(2) 3557(17) 32(2)
C(2) 8000(5) 533(2) 4412(18) 32(2)
C(3) 7449(6) 455(2) 6581(17) 37(2)
C(4) 7411(6) 101(3) 7806(19) 49(3)
C(5) 7925(6) -204(3) 6942(19) 44(2)
C(6) 8469(6) -120(3) 4830(20) 39(3)
C(7) 7939(6) 906(2) 2862(16) 31(2)
C(8) 7077(5) 1076(2) 2469(17) 34(2)
C(9) 6990(6) 1482(3) 2340(20) 52(3)
C(10) 6198(6) 1639(3) 1800(20) 66(3)
C(11) 5510(7) 1403(3) 1410(30) 81(4)
C(12) 5583(6) 1004(3) 1560(30) 71(4)
C(13) 6361(6) 841(3) 2120(20) 52(3)
C(14) 9558(6) 584(3) 561(18) 32(2)
C(15) 9416(5) 946(2) 2279(17) 27(2)
C(16) 10382(5) 1488(2) 3184(19) 29(2)
C(17) 11048(5) 1752(2) 2053(17) 31(2)
C(18) 11918(5) 1616(2) 3019(18) 39(2)
C(19) 12118(5) 1201(2) 2060(20) 50(3)
C(20) 12972(7) 1074(3) 2760(20) 57(3)
C(21) 10022(5) 2319(2) 1745(18) 42(2)
C(22) 9756(6) 2701(3) 2789(19) 55(3)
C(23) 8842(6) 2822(3) 2549(18) 56(3)
C(24) 9215(7) 2737(3) 5330(20) 61(3)
C(25) 10879(5) 2172(2) 2896(17) 33(2)
C(26) 11582(5) 2429(2) 1730(20) 40(2)
O(1S) 8456(4) 1747(2) 7615(13) 63(2)
O(3S) 5000 0 150(120) 136(18)
O(4S) 4800(30) 181(13) 5550(110) 151(18)
*U(eq)是定义为正交Uij张量的迹线的三分之一。
在另一实施方案中，实施例1化合物的CA-2形式为实质上纯的。
在另一实施方案中，实施例1化合物的CA-2形式含有以第二结晶形式的重量计至少约90wt.％，优选至少约95wt.％，且更优选至少约99wt.％的形式CA-2。
在另一实施方案中，实质上纯的第二结晶形式具有实质上纯的相均质性，其中以实验方式测量的PXRD图的总峰面积的约10％以下，优选约5％以下，且更优选约2％以下由模拟PXRD图中不存在的峰产生。最优选地，实质上纯的第二结晶形式具有实质上纯的相均质性，其中以实验方式测量的PXRD图的总峰面积的约1％以下由模拟PXRD图中不存在的峰产生。
在另一实施方案中，实施例1化合物的第二结晶形式基本上由形式CA-2组成。此实施方案的第二结晶形式可包含以第二结晶形式的重量计至少约90wt.％，优选至少约95wt.％，且更优选至少约99wt.％的形式CA-2。
在一个实施方案中，实施例1化合物是以实施例1的第三结晶形式提供。第三结晶形式为二甲醇一水合物结晶形式，在本申请中称作“形式SA-3”或“SA-3形式”。SA-3形式每一实施例1分子包含约两个甲醇分子和一个水分子。
在一个实施方案中，SA-3形式的特征在于约等于以下的单位晶胞参数：
晶胞尺寸：
α＝90.0°
β＝90.0°
γ＝90.0°
空间群：P2(1)2(1)2(1)
实施例1的分子/不对称单位：1
密度(计算值)＝1.289mg/m3，
其中形式SA-3的单位晶胞参数是在约-70℃的温度测量。
在另一实施方案中，实施例1化合物的SA-3形式的特征在于与图8中所示的图一致的模拟粉末x射线衍射(PXRD)图和/或与图8中所示的图一致的观测PXRD图。
在另一实施方案中，实施例1化合物的SA-3形式的特征在于PXRD图(在约25℃温度，)包含四个或四个以上，优选五个或五个以上选自以下的2θ值：8.2±0.2；9.6±0.2；12.2±0.2；14.4±0.2；16.6±0.2；19.1±0.2；19.5±0.2,20.2±0.2；20.6±0.2；21.4±0.2；23.0±0.2；和24.8±0.2，其中形式N-1的PXRD图是在约25℃的温度测量。
在另一实施方案中，实施例1的SA-3形式的特征在于实质上如表3中所列的原子分数坐标。
表3
在约25℃的温度计算的实施例1的形式SA-3的原子分数坐标；原子坐标(×104)和等效各向同性位移参数
x y z U(eq)*
C(1) 4090(3) 11755(2) 10464(2) 45(1)
C(2) 4576(4) 11895(2) 9843(2) 50(1)
C(3) 4846(4) 12655(2) 9650(2) 65(1)
C(4) 4629(5) 13238(2) 10056(3) 81(2)
C(5) 4109(5) 13117(2) 10668(3) 80(2)
C(6) 3861(4) 12376(2) 10851(2) 58(1)
C(7) 4758(3) 11267(2) 9386(2) 42(1)
C(8) 4143(4) 11357(2) 8731(2) 53(1)
C(9) 4706(5) 10896(3) 8248(2) 71(1)
C(10) 4079(7) 10926(3) 7658(2) 94(2)
C(11) 2845(7) 11410(3) 7532(2) 94(2)
C(12) 2295(6) 11876(3) 7984(2) 81(1)
C(13) 2902(4) 11850(2) 8600(2) 62(1)
C(14) 4650(3) 10396(2) 10602(1) 34(1)
C(15) 6040(4) 10520(2) 10150(1) 36(1)
C(16) 8211(3) 9745(2) 10527(1) 34(1)
C(17) 9055(3) 8985(2) 10489(1) 32(1)
C(18) 8786(4) 8576(2) 11119(1) 40(1)
C(19) 7077(4) 8350(2) 11215(2) 47(1)
C(20) 6760(5) 8039(3) 11853(2) 75(1)
C(21) 10825(3) 9091(2) 10359(1) 34(1)
C(22) 11197(4) 9600(2) 9784(2) 47(1)
C(23) 10606(6) 9326(3) 9180(2) 85(2)
C(26) 11589(4) 8316(2) 10262(1) 38(1)
F(1) 3365(3) 12236(1) 11445(1) 76(1)
x y z U(eq)*
F(2) 5283(3) 7760(2) 11895(2) 104(1)
F(3) 6905(4) 8556(2) 12304(1) 118(1)
F(4) 7725(4) 7471(2) 12003(2) 130(2)
N(1) 5401(3) 10625(1) 9517(1) 40(1)
N(2) 3752(3) 11021(1) 10698(1) 41(1)
N(3) 7037(3) 9855(1) 10131(1) 34(1)
N(4) 13115(3) 8289(2) 10387(2) 52(1)
O(1) 4344(2) 9778(1) 10831(1) 41(1)
O(3) 10849(2) 7755(1) 10073(1) 44(1)
O(2) 8593(3) 10228(1) 10927(1) 50(1)
C(1S) 10744(12) 6386(4) 11270(3) 162(4)
C(2S) 733(7) 1177(3) 2070(2) 94(2)
C(3S) 5998(10) 915(5) 2115(3) 137(3)
O(1S) 11267(4) 6386(1) 10659(1) 65(1)
O(2S) 1159(3) 839(2) 1494(1) 77(1)
O(3S) 6691(6) 1278(2) 1564(2) 117(1)
C(24) 10987(6) 9728(3) 8580(2) 87(1)
C(25) 11505(17) 8922(4) 8692(4) 128(5)
C(25A) 9304(6) 9559(8) 8765(4) 95(4)
*U(eq)是定义为正交Uij张量的迹线的三分之一。
在另一实施方案中，实施例1化合物的SA-3形式为实质上纯的。
在另一实施方案中，实施例1化合物的SA-3形式含有以第三结晶形式的重量计至少约90wt.％，优选至少约95wt.％，且更优选至少约99wt.％的形式SA-3。
在另一实施方案中，实质上纯的形式SA-3具有实质上纯的相均质性，其中以实验方式测量的PXRD图的总峰面积的约10％以下，优选约5％以下，且更优选约2％以下由模拟PXRD图中不存在的峰产生。最优选地，实质上结晶形式SA-3具有实质上纯的相均质性，其中以实验方式测量的PXRD图的总峰面积的约1％以下由模拟PXRD图中不存在的峰产生。
在另一实施方案中，实施例1化合物的第三结晶形式基本上由形式SA-3组成。此实施方案的第三结晶形式可包含以第三结晶形式的重量计至少约90wt.％，优选至少约95wt.％，且更优选至少约99wt.％的形式SA-3。
在一个实施方案中，实施例1化合物是以包含实施例的第四结晶形式的结晶物质提供。实施例1化合物的第四结晶形式为包含在本申请中称作“形式E2.5-4”或“E2.5-4形式”的结晶形式。E2.5-4形式每一实施例1分子包含约2.5个乙醇分子。
在一个实施方案中，E2.5-4形式的特征在于约等于以下的单位晶胞参数：
晶胞尺寸：
α＝85.9°
β＝89.1°
γ＝78.2°
空间群：P1
实施例1的分子/不对称单位：2
密度(计算值)＝1.260mg/m3，
其中形式E2.5-4的单位晶胞参数是在约-70℃的温度测量。
在另一实施方案中，实施例1化合物的E2.5-4形式的特征在于实质上与图9中所示的图一致的模拟粉末x射线衍射(PXRD)图和/或实质上与图9中所示的图一致的观测PXRD图。
在另一实施方案中，实施例1化合物的E2.5-4形式的特征在于PXRD图(在约25℃温度，)包含四个或四个以上、优选五个或五个以上选自以下的2θ值：5.0±0.2；7.8±0.2；9.0±0.2；14.5±0.2；16.8±0.2；20.7±0.2和21.4±0.2，其中形式E2.5-4的PXRD图是在约25℃的温度测量。
在另一实施方案中，实施例1的E2.5-4形式的特征在于实质上如表4中所列的原子分数坐标。
表4
约25℃温度的实施例1的形式E2.5-4的原子分数坐标计算值；原子坐标(×104)和等效各向同性位移参数
x y z U(eq)*
C(1) -3063(8) 1770(7) 2975(3) 44(2)
C(2) -2268(7) 572(7) 2927(4) 42(2)
C(3) -1890(8) 138(7) 2190(4) 56(2)
C(4) -2321(9) 889(10) 1517(4) 67(3)
x y z U(eq)*
C(5) -3135(9) 2061(9) 1553(4) 62(2)
C(6) -3485(8) 2452(8) 2286(4) 55(2)
C(7) -1828(7) -224(6) 3631(4) 42(2)
C(8) -2025(7) -1506(6) 3650(4) 42(2)
C(9) -1107(9) -2384(8) 4123(4) 60(2)
C(10) -1338(11) -3525(8) 4191(5) 69(2)
C(11) -2525(12) -3834(9) 3800(6) 79(3)
C(12) -3459(11) -2983(9) 3301(6) 74(2)
C(13) -3225(8) -1820(8) 3212(4) 60(2)
C(14) -2620(7) 2155(6) 4330(4) 43(2)
C(15) -1023(7) 1320(6) 4268(3) 38(2)
C(16) 1572(7) 2206(6) 5794(3) 39(2)
C(17) 938(7) 3424(6) 6129(4) 45(2)
C(18) -823(8) 3583(7) 6305(4) 56(2)
C(19) -1508(10) 4747(9) 6636(6) 71(2)
C(20) 3399(8) 1985(7) 5694(4) 50(2)
C(21) 4100(9) 944(6) 5193(4) 54(2)
C(22) 3757(9) -206(7) 5491(4) 58(2)
C(23) 4847(11) -1351(8) 5196(5) 80(3)
C(24) 4939(12) -1000(9) 6014(6) 87(3)
C(25) 4204(8) 1791(6) 6492(4) 45(2)
C(26) 2230(7) -256(6) 1683(4) 38(2)
C(27) 2532(7) 810(5) 1949(3) 35(2)
C(28) 2777(8) 885(6) 2740(4) 43(2)
C(52) 765(8) 2200(7) 5001(4) 45(2)
C(29) 2696(8) -54(7) 3270(4) 51(2)
C(30) 2361(8) -1119(7) 3033(4) 51(2)
C(31) 2136(8) -1169(6) 2253(4) 44(2)
C(32) 2531(7) 1863(5) 1389(4) 33(1)
C(33) 1706(7) 3052(6) 1648(4) 40(2)
C(34) 2252(8) 4087(6) 1376(4) 50(2)
C(35) 1451(10) 5210(7) 1579(5) 64(2)
C(36) 145(10) 5300(7) 2057(5) 66(2)
C(37) -400(9) 4292(7) 2317(5) 64(2)
C(38) 390(8) 3169(6) 2116(4) 49(2)
C(39) 2724(7) -64(6) 294(4) 38(2)
C(40) 3988(7) 665(5) 485(3) 34(2)
C(41) 6235(7) 98(6) -379(4) 39(2)
C(42) 6982(7) 293(6) -1161(3) 38(2)
C(43) 7179(7) -898(6) -1572(4) 45(2)
C(44) 5565(9) -1233(7) -1731(4) 56(2)
x y z U(eq)*
C(45) 5720(11) -2470(8) -1951(5) 68(2)
C(46) 8528(8) 715(7) -1072(4) 51(2)
C(47) 8149(13) 1984(11) -705(5) 108(4)
C(48) 9339(13) 2399(10) -347(6) 97(3)
C(49) 9025(15) 3716(9) -205(7) 104(4)
C(50) 9333(8) 867(6) -1848(4) 41(2)
C(51) 10292(19) 3183(12) -764(9) 143(5)
F(1) -4260(5) 3611(4) 2334(2) 68(1)
F(2) -1420(8) 5690(5) 6174(4) 120(2)
F(3) -3047(6) 4833(5) 6823(4) 110(2)
F(4) -780(8) 4921(6) 7279(4) 122(2)
F(5) 1772(5) -2200(4) 2004(2) 64(1)
F(6) 6344(8) -3300(5) -1380(3) 114(2)
F(7) 4345(7) -2740(5) -2135(3) 107(2)
F(8) 6688(7) -2712(4) -2554(3) 91(2)
N(1) -1262(6) 84(5) 4251(3) 46(1)
N(2) -3557(6) 2291(5) 3688(3) 42(1)
N(3) -64(6) 1362(5) 4942(3) 38(1)
N(4) 5662(6) 1985(5) 6498(3) 52(2)
N(5) 3162(6) 1832(4) 716(3) 36(1)
N(6) 1939(6) -434(5) 907(3) 38(1)
N(7) 4914(6) 860(5) -207(3) 38(1)
N(8) 10901(7) 639(5) -1848(3) 53(2)
O(1) -3101(5) 2649(4) 4919(3) 51(1)
O(2) 886(5) 2956(4) 4462(3) 56(1)
O(3) 3536(5) 1473(4) 7092(2) 47(1)
O(4) 2506(5) -294(4) -371(3) 51(1)
O(5) 6856(5) -759(4) 85(3) 46(1)
O(6) 8557(5) 1202(4) -2450(2) 45(1)
O(1S) 1(7) 8052(5) 10391(4) 76(2)
C(1S) 845(15) 7396(9) 9716(9) 136(5)
C(2S) 30(20) 6394(10) 9572(5) 196(8)
O(2S) -355(7) 9858(5) 6302(3) 77(2)
C(3S) -456(9) 8668(9) 6328(5) 103(3)
C(4S) 928(15) 7890(10) 6746(16) 316(19)
O(3S) 3877(6) 2552(5) 8472(3) 68(1)
C(5S) 3755(16) 3824(10) 8298(7) 108(3)
C(6S) 3987(18) 4373(13) 9018(10) 148(5)
O(4S) 3396(6) 3697(5) 3736(3) 63(1)
C(7S) 3168(10) 4985(7) 3678(4) 66(2)
C(8S) 3421(11) 5437(7) 4451(3) 92(3)
x y z U(eq)*
O(5S) 5633(10) 7871(6) 1299(3) 82(3)
C(9S) 5980(30) 6598(7) 1235(11) 157(9)
C(10S) 5290(30) 6190(20) 540(10) 188(11)
*U(eq)是定义为正交Uij张量的迹线的三分之一。
在另一实施方案中，实施例1化合物的E2.5-4形式为实质上纯的。
在另一实施方案中，实施例1化合物的E2.5-4形式含有以第四结晶形式的重量计至少约90wt.％，优选至少约95wt.％，且更优选至少约99wt.％的形式E2.5-4。
在另一实施方案中，实质上纯的形式E2.5-4具有实质上纯的相均质性，其中以实验方式测量的PXRD图的总峰面积的约10％以下，优选约5％以下，且更优选约2％以下由模拟PXRD图中不存在的峰产生。最优选地，实质上结晶形式E2.5-4具有实质上纯的相均质性，其中以实验方式测量的PXRD图的总峰面积的约1％以下由模拟PXRD图中不存在的峰产生。
在另一实施方案中，实施例1化合物的第四结晶形式基本上由形式E2.5-4组成。此实施方案的第四结晶形式可包含以第四结晶形式的重量计至少约90wt.％，优选至少约95wt.％，且更优选至少约99wt.％的形式E2.5-4。
在一个实施方案中，实施例1化合物是以包含实施例1化合物的第五结晶形式的结晶物质提供。实施例1化合物的第五结晶形式为包含在本申请中称作“形式IPA2-5”或“IPA2-5形式”的结晶形式。IPA2-5形式每一实施例1分子包含约2.5个乙醇分子。
在一个实施方案中，实施例1化合物的E2.5-4形式的特征在于约等于以下的单位晶胞参数：
晶胞尺寸：
α＝90.0°
β＝106.1°
γ＝90.0°
空间群：P2(1)
实施例1的分子/不对称单位：1
密度(计算值)＝1.260mg/m3，
其中形式IPA2-5的单位晶胞参数是在约-70℃的温度测量。
在另一实施方案中，实施例1化合物的IPA2-5形式的特征在于实质上与图10中所示的图一致的模拟粉末x射线衍射(PXRD)图和/或实质上与图10中所示的图一致的观测PXRD图。
在另一实施方案中，实施例1化合物的IPA2-5形式的特征在于PXRD图(在约25℃温度，)包含四个或四个以上，优选五个或五个以上选自以下的2θ值：7.7±0.2；13.0±0.2；14.7±0.2；15.2±0.2；18.1±0.2；19.2±0.2；21.5±0.2,22.1±0.2；23.2±0.2；和25.6±0.2，其中形式IPA2-5的PXRD图是在约25℃的温度测量。
在另一实施方案中，实施例1的IPA2-5形式的特征在于实质上如表5中所列的原子分数坐标。
表5
约25℃温度的实施例1的IPA2-5形式的原子分数坐标计算值；原子坐标(×104)和等效各向同性位移参数
x y z U(eq) *
C(1) 9227(5) 7107(7) 4208(3) 36(1)
C(2) 10306(5) 6550(7) 4690(3) 38(1)
C(3) 10424(5) 6205(7) 5497(3) 43(2)
C(4) 9487(6) 6434(7) 5815(3) 48(2)
C(5) 8423(6) 6991(8) 5357(3) 52(2)
C(6) 8318(5) 7322(7) 4570(3) 42(2)
C(7) 9417(5) 6721(7) 2846(3) 38(1)
C(8) 10120(4) 5233(7) 3171(3) 32(1)
C(9) 11329(4) 6328(7) 4365(3) 36(1)
C(10) 12527(5) 6800(8) 4870(3) 43(2)
C(11) 13525(5) 6015(9) 4816(4) 58(2)
C(12) 14632(5) 6482(10) 5283(4) 66(2)
C(13) 14745(6) 7749(10) 5789(4) 66(2)
C(14) 13757(6) 8555(9) 5838(4) 62(2)
C(15) 12650(5) 8074(8) 5382(3) 51(2)
C(16) 9476(5) 3227(7) 2178(3) 35(1)
C(17) 9527(4) 2579(6) 1369(3) 33(1)
C(18) 8267(4) 2651(7) 793(3) 35(1)
C(19) 7769(5) 4300(8) 740(3) 48(2)
x y z U(eq) *
C(20) 6630(6) 4483(9) 114(4) 57(2)
C(21) 10057(5) 930(7) 1496(3) 36(1)
C(22) 11411(4) 1058(7) 1884(3) 42(2)
C(23) 12042(5) -447(8) 2142(3) 53(2)
C(24) 13213(5) -453(9) 2754(4) 70(2)
C(25) 12173(6) -1028(10) 2954(4) 80(2)
C(26) 9873(5) 49(8) 715(3) 37(1)
F(1) 7273(3) 7894(5) 4103(2) 61(1)
F(2) 6154(4) 5892(6) 99(2) 89(1)
F(3) 5816(4) 3486(7) 188(3) 101(2)
F(4) 6746(3) 4254(6) -621(2) 85(1)
N(1) 11283(4) 5716(6) 3673(3) 41(2)
N(2) 9033(4) 7533(5) 3398(2) 37(1)
N(3) 10270(4) 4352(6) 2502(2) 37(1)
N(4) 9587(4) -1424(6) 723(3) 46(1)
O(1) 9200(3) 7129(5) 2148(2) 49(1)
O(2) 8732(3) 2782(5) 2505(2) 42(1)
O(3) 10019(3) 700(4) 105(2) 42(1)
C(1S) 2899(5) 5429(8) 1490(3) 53(2)
C(2S) 3576(6) 4954(11) 2340(4) 77(2)
C(3S) 3261(6) 4485(10) 870(4) 76(2)
O(1S) 1680(3) 5244(6) 1427(2) 52(1)
O(2S) 7632(3) 10054(5) 2719(3) 62(1)
C(4S) 6465(7) 9852(11) 2207(8) 142(5)
C(5S) 5773(6) 11252(10) 2053(5) 82(2)
C(6S) 6096(7) 8316(11) 2042(5) 100(3)
U(eq)*是定义为正交Uij张量的迹线的三分之一。
在另一实施方案中，实施例1化合物的IPA2-5形式为实质上纯的。
在另一实施方案中，实施例1化合物的IPA2-5形式含有以第五结晶形式的重量计至少约90wt.％，优选至少约95wt.％，且更优选至少约99wt.％的形式IPA2-5。
在另一实施方案中，实质上纯的形式IPA2-5的结晶形式具有实质上纯的相均质性，其中以实验方式测量的PXRD图的总峰面积的约10％以下，优选约5％以下，且更优选约2％以下由模拟PXRD图中不存在的峰产生。最优选地，实质上IPA2-5的结晶形式具有实质上纯的相均质性，其中以实验方式测量的PXRD图的总峰面积的约1％以下由模拟PXRD图中不存在的峰产生。
在另一实施方案中，实施例1化合物的第五结晶形式基本上由IPA2-5形式组成。此实施方案的第五结晶形式可包含以结晶形式的重量计至少约90wt.％，优选至少约95wt.％，且更优选至少约99wt.％的IPA2-5形式。
在一个实施方案中，实施例1化合物是以第六结晶形式提供。第六结晶形式在本申请中称作“形式P-1”或“P-1形式”。
在另一实施方案中，实施例1化合物的P-1形式的特征在于与图11中所示的图一致的观测PXRD图。
在另一实施方案中，实施例1化合物的P-1形式的特征在于PXRD图(在约25℃温度，)包含四个或四个以上，优选五个或五个以上选自以下的2θ值：7.0±0.2；8.8±0.2；10.3±0.2；11.6±0.2；12.9±0.2；15.4±0.2；15.9±0.2；17.9±0.2和21.5±0.2，其中形式P-1的PXRD图是在约25℃的温度测量。
在一个实施方案中，实施例1化合物是以第七结晶形式提供。第六结晶形式在本申请中称作“形式P-4”或“P-4形式”。
在另一实施方案中，实施例1化合物的P-4形式的特征在于与图12中所示的图一致的观测PXRD图。
在另一实施方案中，实施例1化合物的P-4形式的特征在于PXRD图(在约25℃温度，)包含四个或四个以上，优选五个或五个以上选自以下的2θ值：3.8±0.2；5.4±0.2；6.4±0.2；7.7±0.2；13.4±0.2；18.1±0.2；19.3±0.2；19.9±0.2和22.1±0.2，其中形式P-4的PXRD图是在约25℃的温度测量。
在一个实施方案中，实施例1化合物是以第八结晶形式提供。第六结晶形式在本申请中称作“形式P-5”或“P-5形式”。
在另一实施方案中，实施例1化合物的P-5形式的特征在于与图13中所示的图一致的观测PXRD图。
在另一实施方案中，实施例1化合物的P-5形式的特征在于PXRD图(在约25℃温度，)包含四个或四个以上，优选五个或五个以上选自以下的2θ值：4.4±0.2；5.5±0.2；7.0±0.2；10.9±0.2；13.2±0.2；18.2±0.2；18.7±0.2和22.7±0.2，其中形式P-5的PXRD图是在约25℃的温度测量。
在一个实施方案中，实施例1化合物是以第九结晶形式提供。第六结晶形式在本申请中称作“形式P-6”或“P-6形式”。
在另一实施方案中，实施例1化合物的P-6形式的特征在于与图14中所示的图一致的观测PXRD图。
在另一实施方案中，实施例1化合物的P-6形式的特征在于PXRD图(在约25℃温度，)包含四个或四个以上，优选五个或五个以上选自以下的2θ值：4.0±0.2；6.0±0.2；6.8±0.2；7.7±0.2；8.1±0.2；16.0±0.2；16.8±0.2；19.3±0.2；20.7±0.2和21.9±0.2，其中形式P-6的PXRD图是在约25℃的温度测量。
在一个实施方案中，实施例1化合物是以第十结晶形式提供。第六结晶形式在本申请中称作“形式P-7”或“P-7形式”。
在另一实施方案中，实施例1化合物的P-7形式的特征在于与图15中所示的图一致的观测PXRD图。
在另一实施方案中，实施例1化合物的P-7形式的特征在于PXRD图(在约25℃温度，)包含四个或四个以上，优选五个或五个以上选自以下的2θ值：5.1±0.2；6.1±0.2；11.5±0.2；13.5±0.2；18.2±0.2；19.6±0.2；20.4±0.2；21.0±0.2；21.6±0.2和22.1±0.2，其中形式P-7的PXRD图是在约25℃的温度测量。
在一个实施方案中，实施例1化合物是以第十一结晶形式提供。第六结晶形式在本申请中称作“形式P-9”或“P-9形式”。
在另一实施方案中，实施例1化合物的P-9形式的特征在于与图16中所示的图一致的观测PXRD图。
在另一实施方案中，实施例1化合物的P-9形式的特征在于PXRD图(在约25℃温度，)包含四个或四个以上，优选五个或五个以上选自以下的2θ值：4.5±0.2；7.9±0.2；9.1±0.2；12.9±0.2；13.7±0.2；18.7±0.2和19.2±0.2，其中形式P-9的PXRD图是在约25℃的温度测量。
式(I)化合物和/或其盐可通过任何适用于欲治疗的病症的方式给予，这可视对部位特异性治疗的需要或欲递送的式(I)化合物的量而定。
本发明也涵盖一类药物组合物，其包含式(I)化合物和/或其盐；和一种或多种无毒的药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或辅料(本申请统称作“载体”物质)和必要时选用的其它活性成分。式(I)化合物可通过任何适合途径，优选以适于所述途径的药物组合物形式且以有效用于预期治疗的剂量给予。本发明的化合物和组合物可以含有常规药学上可接受的载体、辅料和媒介物的剂量单位制剂形式，例如口服、经粘膜或肠胃外(包括血管内、静脉内、腹膜内、皮下、肌内和胸骨内)给予。举例而言，药物载体可含有甘露糖醇或乳糖和微晶纤维素的混合物。混合物可含有其它组分，诸如润滑剂，例如硬脂酸镁；和崩解剂，诸如交聚维酮(crospovidone)。载体混合物可填充至明胶胶囊中或压制成片剂。药物组合物可以例如口服剂型或输注剂形式给予。
对于口服给药，药物组合物可呈例如片剂、胶囊剂、液体胶囊剂、混悬剂或液体形式。药物组合物优选以含有特定量的活性成分的剂量单位形式制成。举例而言，药物组合物可以包含约1mg至2000mg，优选约1mg至500mg，且更优选约5mg至150mg范围内的量的活性成分的片剂或胶囊剂形式提供。虽然适用于人类或其它哺乳动物的日剂量可视患者的病症和其它因素而广泛变化，但可使用常规方法确定。
本申请涵盖的任何药物组合物可例如经由任何可接受且适合的口服制剂来口服递送。示例性口服制剂包括(但不限于)例如片剂、糖衣锭(troches)、口含锭(lozenges)、水性和油性混悬剂、可分散性散剂或颗粒剂、乳剂、硬胶囊剂和软胶囊剂、糖浆剂和酏剂。意欲口服给予的药物组合物可根据此项技术中已知用于制造意欲口服给予的药物组合物的任何方法来制备。为提供药学上可口的制剂，本发明药物组合物可含有至少一种选自甜味剂、矫味剂、着色剂、缓和剂、抗氧化剂和防腐剂的试剂。
片剂可例如通过混合至少一种式(I)化合物与至少一种适用于制造片剂的无毒的药学上可接受的赋形剂来制备。示例性赋形剂包括(但不限于)例如惰性稀释剂，诸如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙和磷酸钠；粒化剂和崩解剂，诸如微晶纤维素、交联羧甲纤维素钠、玉米淀粉和海藻酸；粘合剂，诸如淀粉、明胶、聚乙烯-吡咯烷酮和阿拉伯胶(acacia)；和润滑剂，诸如硬脂酸镁、硬脂酸和滑石。另外，片剂可无包衣，或通过已知技术包覆包衣以掩蔽味道令人不悦的药物的不良味道，或延迟活性成分在胃肠道中的崩解和吸收，从而使活性成分的作用持续较长时段。示例性水溶性味觉掩蔽物质包括(但不限于)羟基丙基甲基纤维素和羟基丙基纤维素。示例性时间延迟物质包括(但不限于)乙基纤维素和乙酸丁酸纤维素。
硬明胶胶囊剂可例如通过混合至少一种式(I)化合物与至少一种惰性固体稀释剂(诸如碳酸钙；磷酸钙；和高岭土(kaolin))来制备。
软明胶胶囊剂可例如通过混合至少一种式(I)化合物与至少一种水溶性载体(诸如聚乙二醇)；和至少一种油介质(诸如花生油、液体石蜡和橄榄油)来制备。
水性混悬剂可例如通过混合至少一种式(I)化合物与至少一种适用于制造水性混悬剂的赋形剂来制备。适用于制造水性混悬剂的示例性赋形剂包括(但不限于)例如助悬剂，诸如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、海藻酸钠、海藻酸、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶；分散剂或湿润剂，诸如天然存在的磷脂，例如卵磷脂；环氧烷与脂肪酸的缩合产物，诸如聚氧乙烯硬脂酸酯；环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物，诸如十七亚乙基-氧基十六醇；环氧乙烷与源自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物，诸如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯；和环氧乙烷与源自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物，诸如聚乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。水性混悬剂也可含有至少一种防腐剂，诸如对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸正丙酯；至少一种着色剂；至少一种矫味剂；和/或至少一种甜味剂，包括(但不限于)例如蔗糖、糖精和阿斯巴甜(aspartame)。
油性混悬剂可例如通过将至少一种式(I)化合物悬浮于植物油(诸如花生油；橄榄油；芝麻油；和椰子油)；或矿物油(诸如液体石蜡)中来制备。油性混悬剂也可含有至少一种增稠剂，诸如蜂蜡；硬石蜡；和十六醇。为提供可口的油性混悬剂，可将至少一种上文已描述的甜味剂和/或至少一种矫味剂添加至油性混悬剂中。油性混悬剂可进一步含有至少一种防腐剂，包括(但不限于)例如抗氧化剂，诸如丁基化羟基苯甲醚和α-生育酚。
可分散性散剂和颗粒剂可例如通过混合至少一种式(I)化合物与至少一种分散剂和/或湿润剂；至少一种助悬剂；和/或至少一种防腐剂来制备。适合的分散剂、湿润剂和助悬剂如上文已描述。示例性防腐剂包括(但不限于)例如抗氧化剂，例如抗坏血酸。另外，可分散性散剂和颗粒剂也可含有至少一种赋形剂，包括(但不限于)例如甜味剂；矫味剂；和着色剂。
至少一种式(I)化合物的乳剂可例如制备成水包油乳剂。包含式(I)化合物的乳剂的油相可由已知成分以已知方式构成。油相可由(但不限于)例如植物油(诸如橄榄油和花生油)；矿物油(诸如液体石蜡)；和其混合物提供。虽然所述相可仅包含乳化剂，但其可包含至少一种乳化剂与脂肪或油或与脂肪和油两者的混合物。适合的乳化剂包括(但不限于)例如天然存在的磷脂，例如大豆卵磷脂；源自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，诸如脱水山梨糖醇单油酸酯；和偏酯与环氧乙烷的缩合产物，诸如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。优选地，亲水性乳化剂连同用作稳定剂的亲脂性乳化剂一起包括在内。也优选包括油和脂肪两者。具有或不具有稳定剂的乳化剂一起组成所谓乳化蜡，且所述蜡与油和脂肪一起组成所谓乳化软膏基质，所述乳化软膏基质形成乳膏剂制剂的油性分散相。乳剂也可含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和/或抗氧化剂。适用于本发明制剂中的乳化剂和乳剂稳定剂包括吐温(Tween)60、斯潘(Span)80、十六醇十八醇混合物(cetostearylalcohol)、十四烷醇、单硬脂酸甘油酯、十二烷基硫酸钠、单独或与蜡一起的二硬脂酸甘油酯，或此项技术中熟知的其它物质。
式(I)化合物也可例如经由任何药学上可接受且适合的可注射形式静脉内、皮下和/或肌内递送。示例性可注射形式包括(但不限于)例如包含可接受的媒介物和溶剂(诸如水、林格溶液(Ringer'ssolution)和等张氯化钠溶液)的无菌水溶液；无菌水包油微乳剂；和水性或油性混悬剂。
用于肠胃外给予的制剂可为水性或非水性等张无菌注射溶液剂或混悬剂的形式。这种溶液剂和混悬剂可使用所提及的用于口服给予的制剂的一种或多种载体或稀释剂或通过使用其它适合的分散剂或湿润剂和助悬剂由无菌粉末或颗粒制备。这种化合物可溶解于水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、苯甲醇、氯化钠、黄蓍胶和/或各种缓冲液中。其它辅料和给药方式在医药技术中为广泛熟知的。活性成分也可以作为含适合载体(包括盐水、右旋糖或水)或含环糊精(也即)、共溶剂溶解(也即丙二醇)或胶束溶解(也即吐温80)的组合物形式通过注射给予。
无菌可注射制剂也可为于无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液剂或混悬剂，例如于1,3-丁二醇中的溶液剂。可使用的可接受的媒介物和溶剂为水、林格溶液和等张氯化钠溶液。另外，无菌不挥发性油惯常用作溶剂或悬浮介质。出于此目的，可使用任何温和的不挥发性油，包括合成单酸甘油酯或二酸甘油酯。另外，在可注射剂制备中可使用脂肪酸，诸如油酸。
无菌可注射水包油微乳剂可例如通过以下来制备：1)将至少一种式(I)化合物溶解于油相(诸如大豆油与卵磷脂的混合物)中；2)组合含有式(I)的油相与水和甘油混合物；和3)加工所述组合，形成微乳剂。
无菌水性或油性混悬剂可根据此项技术早已已知的方法来制备。举例而言，无菌水溶液剂或混悬剂可用无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂来制备，诸如1,3-丁二醇；且无菌油性混悬剂可用无菌无毒可接受的溶剂或悬浮介质来制备，诸如无菌不挥发性油，例如合成单酸甘油酯或二酸甘油酯；和脂肪酸，诸如油酸。
可用于本发明药物组合物中的药学上可接受的载体、辅料和媒介物包括(但不限于)离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂；自乳化药物递送系统(SEDDS)，诸如d-α-生育酚聚乙二醇1000丁二酸酯；用于药物剂型中的表面活性剂，诸如吐温、聚乙氧基蓖麻油，诸如表面活性剂(BASF)，或其它类似聚合递送基质；血清蛋白，诸如人血清白蛋白；缓冲物质，诸如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质，诸如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶态二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。环糊精(诸如α-环糊精、β-环糊精和γ-环糊精)或经化学修饰的衍生物(诸如羟基烷基环糊精，包括2-羟基丙基-环糊精和3-羟基丙基-环糊精)或其它溶解的衍生物也宜用于增强本申请所述式的化合物的递送。
本发明的药物活性化合物可根据常规药学方法加工以产生用于向患者(包括人类和其它哺乳动物)给予的医药药剂。药物组合物可经受常规医药操作(诸如杀菌)和/或可含有常规辅料，诸如防腐剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、缓冲剂等。片剂和丸剂可另外用肠溶包衣制备。这些组合物也可包含辅料，诸如湿润剂、甜味剂、矫味剂和香化剂。
所给予的化合物的量和以本发明的化合物和/或组合物治疗疾病病症的给药方案视多种因素而定，包括个体的年龄、体重、性别、医学病症、疾病类型、疾病严重度、给药途径和频率和所采用的特定化合物。因此，给药方案可广泛不同，但可常规地使用标准方法来确定。每公斤体重约0.001mg至100mg，优选每公斤体重约0.005mg至约50mg和最优选每公斤体重约0.01mg至10mg的日剂量可为适当的。日剂量可以每天一至四次给药给予。
为达治疗目的，通常将本发明的活性化合物与适用于所示给药途径的一种或多种辅料组合。若口服给予，则可将化合物与乳糖、蔗糖、淀粉粉末、烷酸的纤维素酯、纤维素烷基酯、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠盐和钙盐、明胶、阿拉伯胶、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙烯醇混合，接着制成片剂或胶囊剂以方便给予。这些胶囊剂或片剂可含有控制释放制剂，如可以活性化合物于羟基丙基甲基纤维素中的分散液的形式提供。
本发明的药物组合物包含式(I)化合物和视情况选用的其它选自任何药学上可接受的载体、辅料和媒介物的试剂。本发明的替代组合物包含本申请所述的式(I)化合物和药学上可接受的载体、辅料或媒介物。
效用
式(I)化合物适用于治疗癌症，例如依赖于Notch活化的癌症。Notch活化牵涉在各种实体肿瘤(包括卵巢癌、胰腺癌以及乳腺癌)和血液肿瘤(诸如白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤)的发病机理中。
在一个实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包括为有需要的哺乳动物给予式(I)化合物和/或其盐。此实施方案的方法可用于治疗多种癌症，包括(但不限于)膀胱癌、乳腺癌、结肠直肠癌、胃癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌(包括非小细胞肺癌(NSCLC))、卵巢癌、胰腺癌、胆囊癌、前列腺癌、甲状腺癌、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤(MFH)、纤维肉瘤、胶质母细胞瘤/星形细胞瘤、神经母细胞瘤、黑色素瘤、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)和间皮瘤。举例而言，此实施方案的方法用于治疗乳腺癌、结肠癌或胰腺癌。优选地，哺乳动物为人类。举例而言，可在本实施方案的方法中给予治疗癌症的治疗有效量。
本实施方案中的给药途径包括肠胃外给予和口服给予。
在一个实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包括为有需要的哺乳动物给予至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐，其中所述癌症为结肠直肠癌。优选地，哺乳动物为人类。举例而言，可在本实施方案的方法中给予治疗癌症的治疗有效量。本实施方案中的给药途径包括肠胃外给予和口服给予。
在一个实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包括为有需要的哺乳动物给予至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐，其中所述癌症为三阴性乳腺癌。优选地，哺乳动物为人类。举例而言，可在本实施方案的方法中给予治疗癌症的治疗有效量。本实施方案中的给药途径包括肠胃外给予和口服给予。
在一个实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包括为有需要的哺乳动物给予至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐，其中所述癌症为非小细胞肺癌。优选地，哺乳动物为人类。举例而言，可在本实施方案的方法中给予治疗癌症的治疗有效量。本实施方案中的给药途径包括肠胃外给予和口服给予。
在一个实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包括为有需要的哺乳动物给予至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐，其中所述癌症为胰腺癌。优选地，哺乳动物为人类。举例而言，可在本实施方案的方法中给予治疗癌症的治疗有效量。本实施方案中的给药途径包括肠胃外给予和口服给予。
在一个实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包括为有需要的哺乳动物给予至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐，其中所述癌症为卵巢癌。优选地，哺乳动物为人类。举例而言，可在本实施方案的方法中给予治疗癌症的治疗有效量。本实施方案中的给药途径包括肠胃外给予和口服给予。
在一个实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包括为有需要的哺乳动物给予至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐，其中所述癌症为黑色素瘤。优选地，哺乳动物为人类。举例而言，可在本实施方案的方法中给予治疗癌症的治疗有效量。本实施方案中的给药途径包括肠胃外给予和口服给予。
在一个实施方案中，提供式至少一种(I)化合物和/或至少一种其盐的用途，其用于制造用于治疗癌症的药物。优选地，在本实施方案中，进行治疗的癌症包括膀胱癌、乳腺癌、结肠直肠癌、胃癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌(包括非小细胞肺癌(NSCLC))、卵巢癌、胰腺癌、胆囊癌、前列腺癌、甲状腺癌、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤(MFH)、纤维肉瘤、胶质母细胞瘤/星形细胞瘤、神经母细胞瘤、黑色素瘤、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)和间皮瘤中的一种或多种。本实施方案的适合的药物包括用于肠胃外给予的药物，诸如溶液剂和混悬剂；和用于口服给予的药物，诸如片剂、胶囊剂、溶液剂和混悬剂。
一个实施方案提供用于治疗癌症的疗法中的至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐。在本实施方案中，进行治疗的癌症包括膀胱癌、乳腺癌、结肠直肠癌、胃癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌(包括非小细胞肺癌(NSCLC))、卵巢癌、胰腺癌、胆囊癌、前列腺癌、甲状腺癌、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤(MFH)、纤维肉瘤、胶质母细胞瘤/星形细胞瘤、神经母细胞瘤、黑色素瘤、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)和间皮瘤中的一种或多种。
在一个实施方案中，提供治疗哺乳动物的癌症的方法，其中所述癌症依赖于Notch活化，所述方法包含给予所述患者至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐。此实施方案的方法可用于治疗多种癌症，包括(但不限于)膀胱癌、乳腺癌、结肠直肠癌、胃癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌(包括非小细胞肺癌(NSCLC))、卵巢癌、胰腺癌、胆囊癌、前列腺癌、甲状腺癌、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤(MFH)、纤维肉瘤、胶质母细胞瘤/星形细胞瘤、神经母细胞瘤、黑色素瘤、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)和间皮瘤。优选地，此实施方案的方法用于治疗乳腺癌、结肠癌或胰腺癌。优选地，哺乳动物为人类。举例而言，可在本实施方案的方法中给予治疗癌症的治疗有效量。适合的给药途径包括肠胃外给予和口服给予。
在治疗癌症中，化学治疗剂和/或其它治疗(例如放射疗法)的组合常有利。第二(或第三)药剂的作用机理可与第一治疗剂相同或不同。举例而言，可使用药物组合，其中所给予的两种或两种以上药物以不同方式或在细胞周期的不同阶段中起作用，和/或其中两种或两种以上药物具有不重叠的毒性或副作用，和/或其中所组合的药物各自在治疗由患者表现的特定疾病状态方面具有证实的功效。
在一个实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包括为有需要的哺乳动物给予至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐；和给予一种或多种其它抗癌剂。
词组“其它抗癌剂”指选自以下任意一种或多种的药物：烷基化剂(包括氮芥(nitrogenmustard)、烷基磺酸盐、亚硝基脲、亚乙基亚胺衍生物和三氮烯)；抗血管生成剂(包括基质金属蛋白酶抑制剂)；抗代谢物(包括腺苷脱胺酶抑制剂、叶酸拮抗剂、嘌呤类似物和嘧啶类似物)；抗生素或抗体(包括单株抗体、CTLA-4抗体、蒽环霉素(anthracycline))；芳香酶抑制剂；细胞周期反应调节剂；酶；法呢基蛋白质转移酶抑制剂(farnesyl-proteintransferaseinhibitor)；激素和抗激素剂和类固醇(包括合成类似物、糖皮质激素、雌激素/抗雌激素[例如SERM]、雄激素/抗雄激素、孕酮、孕酮受体激动剂和促黄体素释放[LHRH]激动剂和拮抗剂)；胰岛素样生长因子(IGF)/胰岛素样生长因子受体(IGFR)系统调节剂(包括IGFR1抑制剂)；整合素信号传导抑制剂；激酶抑制剂(包括多激酶抑制剂和/或Src激酶或Src/abl抑制剂、细胞周期素依赖性激酶[CDK]抑制剂、panHer、Her-1和Her-2抗体、VEGF抑制剂(包括抗VEGF抗体)、EGFR抑制剂、有丝分裂原活化蛋白[MAP]抑制剂、MET抑制剂、MEK抑制剂、极光激酶(Aurorakinase)抑制剂、PDGF抑制剂和其它酪氨酸激酶抑制剂或丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂；微管破裂剂，诸如海鞘素或其类似物和衍生物；微管稳定剂，诸如紫杉烷(taxane)和天然存在的埃坡霉素(epothilone)以及其合成和半合成类似物；微管结合、去稳定剂(包括长春花生物碱)；拓扑异构酶抑制剂；异戊二烯基-蛋白质转移酶抑制剂；铂配位络合物；信号转导抑制剂；和其它用作抗癌剂和细胞毒性剂的药剂，诸如生物反应调节物、生长因子和免疫调节剂。
因此，本发明化合物可与其它适用于治疗癌症或其它增殖性疾病的抗癌治疗组合给予。本发明在本申请中进一步包含式至少一种(I)化合物和/或至少一种其盐的用途，其用于制备用于治疗癌症的药物，和/或本发明包含本申请中的式(I)化合物连同关于所述化合物与其它抗癌剂或细胞毒性剂和用于治疗癌症的治疗组合使用的说明书一起的封装。本发明进一步包含至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐与一种或多种其它药剂的呈试剂盒形式的组合，例如其中将它们封装在一起或置放于各个封装中以便一起以试剂盒形式出售，或其中将它们封装以一起配制。
在一个实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包括为有需要的哺乳动物给予至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐；给予达沙替尼(dasatinib)；和视情况给予一种或多种其它抗癌剂。
在一个实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包括为有需要的哺乳动物给予至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐；给予紫杉醇(paclitaxel)；和视情况给予一种或多种其它抗癌剂。
在一个实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包括为有需要的哺乳动物给予至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐；给予他莫西芬(Tamoxifen)；和视情况给予一种或多种其它抗癌剂。
在一个实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包括为有需要的哺乳动物给予至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐；给予糖皮质激素；和视情况给予一种或多种其它抗癌剂。合适的糖皮质激素实例为地塞米松(dexamethasone)。
在一个实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包括为有需要的哺乳动物给予至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐；给予卡铂(carboplatin)；和视情况给予一种或多种其它抗癌剂。
本发明化合物可与针对与上述病症有关的副作用的特定适用性而选用的其它治疗剂一起配制或共给予。举例而言，本发明化合物可与防止恶心、过敏和胃刺激的药剂一起配制，诸如止吐药和H1和H2抗组织胺剂。
在一个实施方案中，提供药物组合物，其包含至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐；一种或多种选自以下的其它药剂：激酶抑制剂(小分子、多肽和抗体)、免疫抑制剂、抗癌剂、抗病毒剂、消炎剂、抗真菌剂、抗生素或抗血管过度增殖化合物；和任何药学上可接受的载体、辅料或媒介物。
上述其它治疗剂在与本发明化合物组合使用时，可例如依医师参考手册(Physicians'DeskReference，PDR)中所指示，或如由本领域技术人员以其它方式所确定的量使用。在本发明方法中，可在给予本发明化合物之前、同时或之后给予所述其它治疗剂。
然而，用于任何特定个体的特定剂量和给药频率可不同且一般视多种因素而定，包括(但不限于)例如所给予形式的特定式(I)化合物的生物可用率、特定式(I)化合物的代谢稳定性和作用时间、个体的物种、体重、一般健康、性别、饮食、给药方式和时间、排泄速率、药物组合和特定病症的严重度。举例而言，每公斤体重约0.001mg至100mg，优选每公斤体重约0.005mg至约50mg和最优选每公斤体重约0.01mg至10mg的日剂量可为适当的。日剂量可以每天一至四次给药给予。
给药可为连续的(也即每日给予)或间歇进行。本申请所用的术语“间歇的”或“间歇地”意思是以有规则时间间隔或无规则时间间隔停止和开始。举例而言，间歇给药包括每周给药1至6天；以循环形式给药(例如连续2至8周每日给药，然后是至多一周不给药的中止期)；或隔日给药。
在一个实施方案中，每天一次或多次连续地将至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐给予有需要的患者。举例而言，每天一次或多次给予有需要的患者治疗有效量的式(I)化合物并维持连续数天。
在一个实施方案中，每天一次或多次间歇地将至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐给予有需要的患者。举例而言，根据间歇方案每天一次或多次给予有需要的患者治疗有效量的式(I)化合物。
在一个实施方案中，每天一次或多次将至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐给予有需要的患者并维持连续数天，继而一天或多天不给药。优选地，给予治疗有效量的式(I)化合物。具有药物间歇期的连续给药的实例为以下循环：治疗7天，继而7天不治疗；治疗14天，继而7天不治疗；和治疗7天，继而14天不治疗。治疗/不治疗的循环可根据治疗患者的需要重复多次。
在一个实施方案中，根据间歇给药方案，给予有需要的患者至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐。间歇给药方案为重复方案，其包括给予患者式(I)化合物数天以及不给予患者式(I)化合物数天。间歇给药方案的实例为：每周给药四天并维持连续三周，继而一周不给药，且按四周时间间隔重复；每周给药五天并维持连续两周，继而一周不给药，且按三周时间间隔重复；和每周给药四天并维持一周，继而两周不给药，且按三周时间间隔重复。优选地，给予治疗有效量的式(I)化合物。
在一个实施方案中，在某一天给予至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐，继而中止6天，且按每周方案重复。
在一个实施方案中，在某一天给药至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐，继而中止6天，且按每周方案重复1至4周，然后继续一周或中止。例如，在某一天给药(I)化合物，继而中止6天，持续三周，然后中止一周。所述四周循环可重复一次或多次。
在一个实施方案中，连续两天给予至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐，继而中止5天，且按每周方案重复。
在一个实施方案中，连续三天给予至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐，继而中止四天，且按每周方案重复。
在一个实施方案中，在某一天给予至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐，继而中止10至13天。
在一个实施方案中，每天一次(QD)给药至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐。该实施方案包括一天一次口服给药。
在一个实施方案中，每天两次(BID)给药至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐。该实施方案包括每天两次口服给药。
在一个实施方案中，隔日给药至少一种式(I)化合物和/或至少一种其盐：给药一天然后中止一天。该两天循环可重复一次或多次。
制备方法
可以有机合成领域技术人员熟知的多种方式制备本发明化合物。本发明化合物可使用下文所述的方法，以及合成有机化学的技术中已知的合成方法，或如本领域技术人员所了解的其变体来合成。优选方法包括(但不限于)下文所述的方法。本申请引用的所有参考文献以全文引用的方式并入本申请中。
本发明的化合物可使用本章节所述的反应和技术来制备。反应是在适于所采用的试剂和物质的溶剂中进行且适于所达成的转化。同样，在下文所述的对合成方法的描述中，应了解所有建议的反应条件，包括溶剂的选择、反应氛围、反应温度、实验持续时间和处理操作是选择为所述反应的标准条件，其应由本领域技术人员轻易地识别。有机合成领域技术人员应了解，存在于分子的各种部分上的官能团应与所建议的试剂和反应相容。这种对与反应条件相容的取代基的限制对本领域技术人员而言应显而易见，且因而应使用替代方法。这有时需要判断修改合成步骤顺序或选择一个特定方法方案而非另一个以获得所需的本发明化合物。也应了解，此领域中设计任一合成途径的另一主要考虑事项为正确选择用于保护本发明中所述化合物中存在的反应性官能团的保护基。向经专门训练的专业人员描述许多替代方案的权威性说明为Greene等人(ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis，第3版，WileyandSons(1999))。
可通过参考以下方案中所说明的方法来制备式(I)化合物。如其中所示，最终产物为与式(I)具有相同结构式的化合物。应了解，任何式(I)化合物均可由这种方案通过适当选择具有适当取代的试剂来制备。溶剂、温度、压力和其它反应条件可由本领域技术人员轻易地选择。起始物质为市售的或由本领域技术人员轻易地制备。化合物的组分如此处或说明书中别处所定义。
可使用方案1至10中所概述的方法来合成式(I)化合物。氨基二苯甲酮中间体i的合成可通过方案1至6概述的本领域人员已知的方法来实现。
方案1
步骤1：方案1的第一步可通过将适当取代的邻氨基苯甲酸(xxxvii)(本领域技术人员可容易地获得)与适合的二甲基羟胺等价物在标准酰胺偶联条件下偶联实现。例如，中间体(xxxvii)可在EDC和HOBt以及碱如三乙胺的存在下在溶剂如DMF中经N,O-二甲基羟胺处理形成中间体(xxxviii)。
步骤2：中间体(xxxviii)可通过与适合的有机金属试剂(xxxix)反应转化成氨基二苯甲酮中间体i。例如，中间体(xxxviii)可在溶剂如THF中经预形成的有机锂试剂(xxxix)(X＝Li)处理形成氨基二苯甲酮(i)。或者，芳基卤化物(xxxix)(X＝Cl、Br或I)可经烷基锂试剂如丁基锂处理，从而所形成的芳基锂试剂可用于引起(xxxviii)向(i)的转化。
方案2
步骤1：方案2的第一步可通过向适当取代的靛红xxxx(本领域技术人员可容易地获得)中添加适当取代的有机金属试剂(xxxxi)来实现。例如，靛红(xxxx)可在溶剂如THF中在适合的温度如0℃经格氏试剂(xxxxi)(M＝MgCl或MgBr)处理，得到中间体(xxxxii)。
步骤2：方案2的第二步可通过将中间体(xxxxii)在碱如氢氧化钠和碳酸氢钠的存在下在适合的溶剂混合物如DMF和水中在适合的温度如110℃用试剂如铁氰化钾处理，得到氨基二苯甲酮中间体(i)。
方案3
方案3的步骤1可通过将适当官能化的邻氨基苯甲酸(xxvi)(本领域的技术人员可容易地获得)在适合的温度如180℃用乙酸酐处理，得到中间体(xxvii)。
步骤2：中间体(xxvii)可通过官能化的有机金属试剂(xxviii)处理转化成氨基二苯甲酮i。例如，中间体xxvii可在溶剂如乙醚中经格氏试剂(xxviii)(M＝MgBr或MgCl)处理，得到乙酰化的氨基二苯甲酮(i)(R3＝Ac)。然后乙酰基通过本领域技术人员已知的很多方法，如在溶剂如乙醇中在适合的温度如100℃经HCl处理，得到氨基二苯甲酮(i)。
方案4
方案4的步骤1可通过多种本领域技术人员已知的方法实现。例如，硝基苯甲酸(xxix)可通过多种手段转化成酰氯，如在适当的温度如80℃经亚硫酰氯处理，得到酰氯。该酰氯可在溶剂如THF中经适合的有机金属试剂(xxx)如格氏试剂(M＝MgBr或MgCl)处理，得到中间体(xxxi)。
步骤2：中间体(xxxi)转化成氨基二苯甲酮中间体(i)可通过多种本领域技术人员已知的方法实现。例如，将中间体(xxxi)在溶剂如乙醇和水的混合物中用锌和氯化铵处理可引起中间体(xxxi)转化成氨基二苯甲酮(i)。
方案5
方案5的步骤1可通过多种本领域技术人员已知的方法实现。例如，将适当保护的苯胺(xxxii)(其中PG表示适合的定向取代基，如酰胺基或碳酸酯基)在溶剂如乙醚中在适当的温度如-23℃用碱如BuLi或t-BuLi处理，得到中间体xxxii的二价阴离子，其可经适合的烷化剂(xxxiii)如酯(X＝OEt)处理，得到中间体(i)。
步骤2：中间体(xxxiv)的保护基PG的除去可通过多种本领域技术人员已知的方法实现。例如，对于PG＝Boc，将中间体a在溶剂如DCM中用酸如TFA处理引起中间体(xxxiv)转化成氨基二苯甲酮(i)。
方案6
方案6的步骤1可通过多种本领域技术人员已知的方法实现。例如，将适当官能化的苯胺(xxxv)(本领域技术人员可容易地获得)在适当的溶剂如甲苯在适当的温度如60℃用适合的路易斯酸如三氯化硼处理，然后用另一种路易斯酸如三氯化铝和适当官能化的腈(xxxvi)处理，得到亚胺中间体，其在适当的水解条件下如经盐酸处理形成氨基二苯甲酮(i)。
方案7
可以本领域技术人员所知的多种方法来制备苯并二氮杂酮(iv)。举例而言，如方案7所示，可根据文献中所概述的操作(例如Sherrill,R.G.等人，J.Org.Chem.,60:730(1995)；或本领域技术人员所知的其它途径)使经适当取代的2-氨基二苯酮(i)(例如来自Walsh,D.A.,Synthesis,677(1980)；和其中引用的参考文献，或本领域技术人员所知的其它方法)偶合至经保护的甘氨酸衍生物(ii)(PG＝保护基，例如PG＝CBz，参见Katritzky,A.R.etal,Org.Chem.,55:2206-2214(1990))，用诸如氨的试剂处理，且进行环化，得到苯并二氮杂酮(iii)。所得外消旋混合物可分离(使用本领域技术人员所知的操作)，得到单个对映异构体，或以外消旋物形式使用。并且，若R3＝H，则可例如用诸如MeI的试剂和诸如K2CO3的碱在诸如DMF的溶剂中处理(iii)以制备R3＝Me。
步骤2：可以本领域技术人员所知的若干方式来脱除(iii)的保护基。举例而言，在PG＝CBz的情况下，可用诸如HBr的试剂在诸如AcOH的溶剂中处理化合物(iii)。化合物(iv)可以外消旋物形式使用。或者，可使用标准方法(例如手性制备性色谱)对化合物(iv)进行对映异构拆分。
方案8
步骤1：通过使用本领域技术人员所知的多种方式中的一种，诸如在诸如醚合三氟化硼的试剂存在下，于适当温度，在诸如THF的溶剂中用经取代的亚氨代乙酸酯(诸如化合物(vi))处理，使化合物(v)转化成酯(vii)来完成方案8的第一步骤。
步骤2：可以本领域技术人员所知的多种方式使酸(viii)转化成化合物(ix)。举例而言，在诸如DCM的溶剂中用诸如乙二酰氯的试剂处理酸(viii)，得到酰氯(ix,X＝Cl)。可在标准条件下用噁唑烷酮(x)处理化合物(ix)，得到化合物(xi)(Evans,D.A.等人，J.Am.ChemSoc.,112:4011(1990))。
步骤3：可以多种方式使化合物(xi)转化成化合物(xii)(Baran,P.等人，J.Am.Chem.Soc.,130(34):11546(2008))。举例而言，在诸如甲苯的溶剂中，在诸如-78℃的低温，于诸如N2的惰性氛围下用诸如LDA的碱处理化合物(vii)。将所得混合物添加至在诸如N2的惰性氛围下于诸如甲苯的溶剂中用氯化锂和诸如LDA的碱处理的化合物(xi)的溶液中。在诸如-78℃的低温，于诸如N2的惰性氛围下向化合物(vii)和(xi)的烯醇化物的所得混合物中添加化合物二(2-乙基己酰氧基)铜，且升温至室温，得到化合物(xii)。
步骤4：可通过在适当温度，使用诸如THF/水的溶剂混合物，用过氧化氢和氢氧化锂处理化合物(xii)来使其转化成化合物(xiii)。必要时，在此时可经由硅胶色谱或制备性HPLC分离非对映异构体。或者，可使混合物经受差向异构化条件，例如通过用LDA和氯化二乙基铝处理，继而用甲醇或乙酸淬灭，以富集所要的非对映异构体。
步骤5：如果需要，可通过一系列步骤包括羧酸的保护、非对映异构体的分离和脱保护、本领域技术人员已知的常见步骤，获得纯形式的所需的(R,S)-非对映异构体。例如非对映异构体(xiii)的混合物可通过在碱如碳酸钾存在下在溶剂如DMF中经试剂如溴苄处理，以苄基酯形式保护。然后该非对映异构体混合物经受纯化操作例如制备型HPLC或硅胶色谱。然后所获得的非对映异构体纯的物质可经受脱保护条件(步骤5b)。例如，如果R＝Bn，可在氢化条件下使用催化剂钯/碳在溶剂如MeOH中在氢气氛下处理该物质。
步骤6：苯并二氮杂酮(iv)可在偶联试剂如TBTU和碱如TEA存在下在溶剂如DMF中偶联至纯的非对映异构体化合物(xvi)或非对映异构体混合物化合物(xiii)，得到化合物(xvii)，其根据需要为非对映异构体纯的化合物或为非对映异构体的混合物。该混合物可以原样用于后续步骤中，或者如果需要，可使用适当的分离技术如手性制备型色谱纯化，得到非对映异构体纯的化合物。
步骤7：将化合物(xvii)在适当的温度如0℃在溶剂如DCM中用酸如TFA处理，得到化合物(xviii)，为非对映异构体纯的化合物或为非对映异构体的混合物。该混合物可以原样用于后续步骤中，或者如果需要，可使用适当的分离技术如手性制备型色谱纯化，得到非对映异构体纯的化合物。
步骤8：化合物(xviii)转化为化合物(xix)可经由将化合物(xviii)在溶剂如DMF中与适当的胺源如氯化铵、碳二亚胺如EDC、HOBT和碱如TEA偶联实现。如果需要，该非对映异构体混合物可使用适当的分离技术如手性制备型色谱分离。
方案9
步骤1：方案9的第一步通过含有卤素原子如氯、溴或碘的中间体(xxii)(X＝Cl、Br或I，且其中R4为适合的基团如氨甲酸酯基或酰胺基)与适当的偶联配偶体如硼酸或有机锌化合物在本领域技术人员已知的条件下交叉偶联实现。例如，含卤素部分与有机锌在催化剂如四二(三叔丁基膦)钯(0)、锌粉和溶剂如DMF存在下在惰性气氛如N2下偶联得到中间体(xiii)，其可在方案7和8中根据需要使用。
方案10
方案8中的化合物(xiii)也可自化合物(xi)通过方案10所列的合成顺序制备。
步骤1：方案10的第一步可通过将化合物(xi)在溶剂如THF中在低温-78℃在惰性气氛下用碱如二(三甲基硅烷基)氨基钠处理实现。将所得的(xi)的烯醇化物用试剂如溴乙酸叔丁酯处理，得到化合物(xx)。
步骤2：化合物(xx)转化为(xxi)可通过将化合物(xx)在适当的温度使用溶剂的混合物如THF/水经过氧化氢和氢氧化锂处理来实现。
步骤3：化合物(xxi)可如下转化成化合物(xiii)：通过用碱如LDA在溶剂如THF中在低温如-78℃在惰性气氛下生成(xxi)的烯醇化物，并进一步用携带有适当离去基的试剂(R2-LG)(例如，LG＝三氟甲磺酸酯基)处理。然后可将化合物(xiii)在例如方案8的步骤6中使用。或者，该混合物经受差向异构化条件，例如通过用LDA和二乙基氯化铝处理，然后用甲醇和乙酸淬灭以富集所需的非对映异构体。而且，一项优选的实施方案使得形成部分称为必要，该部分其后可转化成另一取代基。例如，使用不同的反应物(R2-LG)如烯丙基溴形成适合的基团以用于将来修饰。如果需要，上文所述的差向异构化条件也可用于该化合物上。
步骤4：方案10的第四步类似于方案8的步骤5，且如果化合物(xiii)直接用于例如方案8的步骤6中，则该步骤可省略。然而，如果需要进一步处理例如化合物(xiii)的R2，化合物(xiii)的羧酸部分可用适合的取代基例如苄基保护。因此，化合物(xiii)可在碱如碳酸钾存在下在适合的溶剂如DMF中用反应物如溴苄处理。如果需要，所得的非对映异构体的混合物可使用适合的条件如制备型HPLC、制备型手性HPLC或硅胶色谱分离，且所得的纯的所需非对映异构体化合物(xv)用于后续步骤中。
步骤5：如果化合物(xv)中的R2基团是所需部分，则步骤5可被省略。然而，如果R2基团需要进一步修饰，则可在此时进行。例如，如果R2＝烯丙基，将化合物(xv)在环丙烷化条件下处理可得到优选实施方案的官能团。因此，其中R2＝烯丙基的化合物(xv)可在催化剂如乙酸钯存在下在适合的溶剂如乙醚中在适合的温度如0℃用试剂如重氮甲烷处理，得到化合物(xxii)。
步骤6：方案6的最后一步是脱保护步骤，类似于方案8的步骤5b，且可以以本领域技术人员已知的数种方法实现。例如，对于化合物(xxii)中Rw＝苄基，在氢化条件下使用催化剂如钯/碳在溶剂如MeOH中在氢气氛下处理可提供化合物(xvi)，其可后续用于例如方案8的步骤6中。
缩写
AcOH乙酸
Boc叔丁氧基羰基
Boc2O一缩二碳酸二叔丁基酯
DCM二氯甲烷
DMF二甲基甲酰胺
DMSO二甲亚砜
dppf1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁
EDC1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐
Et3N三乙胺
Et2O乙醚
EtOH乙醇
EtOAc乙酸乙酯
equiv.当量
g克
h小时
HPLC高效液相色谱
HOBt1-羟基苯并三唑水合物
KOtBu叔丁醇钾
LCMS液相色谱-质谱
LDA二异丙基氨基锂
MeOH甲醇
min分钟
mL毫升
mmol毫摩尔
NaHMDS二(三甲基甲硅烷基)氨基钠
n-BuLi正丁基锂
NH4OAc乙酸铵
Pd(OAc)2乙酸钯
pyBOP苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷子基鏻六氟磷酸盐
RT保留时间
t-Bu叔丁基
tBuOH叔丁醇
tBuOMe叔丁基甲基醚
TBTU四氟硼酸O-(1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓
TEA三乙胺
TFA三氟乙酸
THF四氢呋喃
TMEDAN,N,N’,N’-四甲基乙二胺
实施例
在以下实施例中进一步定义本发明。应理解的是，实施例仅以示例方式给出。从上述讨论和实施例，本领域技术人员能够确定本发明的基本特征，且在不背离本发明精神和范畴的情况下，可作出各种变化和修饰以使本发明适用于各种用途和情况。因而，本发明不受以下阐述的示例性实施例的限制，而是由所附的权利要求所限定。
中间体S1：(R)-2-((S)-1-叔丁氧基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酸
中间体S1A：(4S)-4-(丙-2-基)-3-(5,5,5-三氟戊酰基)-1,3-噁唑烷-2-酮
历时5min向5,5,5-三氟戊酸(5.04g,32.3mmol)于DCM(50mL)和DMF(3滴)中的搅拌溶液中滴加草酰氯(3.4mL,38.8mmol)。搅拌溶液直至所有气泡消退。将反应混合物减压浓缩，得到淡黄色油状物。在-78℃历时5min经由注射器向填充有(4S)-4-(丙-2-基)-1,3-噁唑烷-2-酮(4.18g,32.4mmol)于THF(100mL)中的溶液的单独烧瓶中滴加n-BuLi(13.0mL,32.5mmol,2.5M于己烷中)。在搅拌10min后，历时15min经套管添加上述溶于THF(20mL)中的酰氯。将反应混合物温热至0℃，随浴器升温，温热至室温，并搅拌过夜。向反应混合物中添加饱和NH4Cl，然后用EtOAc(2x)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩。将粗物质通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)，得到中间体S1A(7.39g,86％)，为无色油状物：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.44(1H,dt,J＝8.31,3.53Hz),4.30(1H,t,J＝8.69Hz),4.23(1H,dd,J＝9.06,3.02Hz),2.98-3.08(2H,m),2.32-2.44(1H,m,J＝13.91,7.02,7.02,4.03Hz),2.13-2.25(2H,m),1.88-2.00(2H,m),0.93(3H,d,J＝7.05Hz),0.88(3H,d,J＝6.80Hz)。
中间体S1B:3-环丙基丙酸叔丁酯
在N2下历时5min向3-环丙基丙酸(5g,43.8mmol)于己烷(30.0mL)和THF(30mL)中的冷却的(0℃，预冷却至少15min)、搅拌的溶液中逐份添加2,2,2-三氯乙酰亚亚胺酸叔丁酯(15.7mL,88mmol)。将反应混合物搅拌15min。添加三氟化硼醚复合物(0.555mL,4.38mmol)并随浴器温热过夜将反应混合物温热至室温。向澄清的反应混合物中添加NaHCO3(5g)并搅拌60min。将悬浮液通过MgSO4过滤并用300mL己烷洗涤。将滤液静置，然后将所得固体通过相同的MgSO4过滤器过滤，用己烷(100mL)洗涤。在水浴未打开下对滤液进行真空浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)，得到中间体S1B(6.05g,81％)，为澄清油状物：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ2.29(2H,t,J＝7.48Hz),1.35-1.54(11H,m),0.60-0.75(1H,m),0.29-0.46(2H,m),-0.06-0.10(2H,m)。
中间体S1C:(2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-((S)-4-异丙基-2-氧代噁唑烷-3-羰基)己酸叔丁酯，和
中间体S1D:(2R,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-((S)-4-异丙基-2-氧代噁唑烷-3-羰基)己酸叔丁酯
将二异丙基胺(6.64ml,46.6mmol)溶解于71.7mLTHF中并冷却至-78℃，然后历时5min滴加n-BuLi(18.0mL,44.9mmol,2.5M于己烷中)。在5min后，将所得0.5MLDA溶液保持在0℃。
在单独的烧瓶中，将氯化锂(2.62g,61.7mmol)在高真空下在加热下干燥并在氮气下冷却。将经甲苯共沸一次的中间体S1A(3.0g,11.23mmol)用15.0mL甲苯转移至含有LiCl的烧瓶中，并冷却至-78℃。历时5min经注射器向该搅拌悬浮液中滴加LDA(25.83mL,12.91mmol,1.15当量,0.5MLDA)。将反应混合物在-78℃搅拌15min，然后在0℃搅拌10min并冷却至-78℃。
在另一烧瓶中，在N2下将中间体S1B(3.44g,20.21mmol)溶解于15.0mL甲苯并冷却至-78℃。向该溶液中滴加LDA(46.48mL,23.24mmol,1.15equiv.,0.5MLDA)并在-78℃搅拌30min，在此时在-78℃经由套管将该溶液(快速负压，所有物质在30s内添加)添加至LiCl/噁唑烷酮溶液。在转移1分钟后，在-78℃添加固体二(2-乙基己酰基氧基)铜(10.80g,30.9mmol)，将烧瓶转移至40℃水浴中并剧烈涡旋15min，经5％NH4OH溶液(20mL饱和NH4OH和100mL水)淬灭，并用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩并通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)，得到中间体S1C和中间体S1D的混合物(1.58g,32％收率)，为油状物。1HNMR显示该物质为1.5:1S1C:S1D的混合物，通过积分t-Bu峰：非对映异构体混合物的1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.53-4.41(m,2H),4.39-4.19(m,5H),4.10-4.01(m,1H),2.89-2.77(m,2H),2.47-2.26(m,2H),2.16-1.72(m,8H),1.47(s,9H,S1C的t-Bu,相对强度的积分为1.5),1.46(s,9H,S1D的t-Bu,相对强度的积分为1),0.98-0.86(m,16H),0.78-0.64(m,2H),0.56-0.37(m,4H),0.14-0.01(m,4H)。
中间体S1：(R)-2-((S)-1-叔丁氧基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酸，和
中间体S1E:(R)-2-((R)-1-叔丁氧基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酸
向中间体S1C:S1D的混合物(3.4g,7.81mmol)于THF(60mL)和水(20mL)中的冷却的(0℃)、搅拌的溶液中添加30％H2O2(4.82mL,79mmol)，然后添加LiOH(0.567g,23.66mmol)。将反应混合物逐渐温热至室温并在室温搅拌3h。向该反应混合物中添加饱和Na2SO3(20mL)和饱和NaHCO3(40mL)，然后搅拌5min。将反应混合物部分地浓缩并用DCM(80mL)萃取。将水相酸化至pH～2，用NaCl饱和，并用EtOAc(2x)萃取。将合并的萃取物干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到中间体S1和中间体S1E的混合物(2.01g,79％)。1HNMR显示该物质为1.4:1S1:S1E的混合物，通过t-Bu峰的积分：非对映异构体混合物的1HNMR(400MHz,CDCl3)δ2.82-2.59(m,4H),2.31-2.03(m,4H),1.95-1.52(m,7H),1.44(s,9H,S1的t-Bu,相对强度的积分为1.4),1.42(s,9H,S1E的t-Bu,相对强度的积分为1),0.93(d,J＝6.6Hz,1H),0.88(d,J＝6.8Hz,1H),0.74-0.57(m,2H),0.43(t,J＝6.8Hz,3H),0.11--0.04(m,3H)。
中间体S1：(R)-2-((S)-1-叔丁氧基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酸，和
中间体S1E:(R)-2-((R)-1-叔丁氧基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酸，富集的混合物
在N2下历时5min经由注射器向中间体S1和S1E的1.4:1混合物(2.00g,6.17mmol)于THF(30mL)中的冷的(-78℃)、搅拌溶液中添加LDA(7.54mL,13.57mmol,1.8M)，并搅拌15min，温热至室温(24℃水浴)，搅拌15min，冷却至-78℃持续15min。经由注射器向该反应混合物中添加二乙基氯化铝(12.95mL,12.95mmol,1M于己烷中)，搅拌10min，温热至室温(24℃浴)持续15min，然后返回至-78℃持续25min。快速添加MeOH(38.9mL,962mmol)，除去水浴，然后缓慢地添加冰和1NHCl(55.5mL,55.5mmol)。一旦气体析出平息，则将混合物用EtOAc(2x)萃取，将合并的有机物用氟化钾(3.26g,56.2mmol)于水(106mL,5895mmol)中的溶液和1NHCl(15.72mL,15.72mmol)、盐水洗涤，然后干燥(Na2SO4)。随后将混合物过滤并浓缩，得到～2:1(S1:S1E,通过1HNMR中的t-Bu峰的积分测定)中间体S1和中间体S1E(1.79g,90％)的富集混合物。非对映异构体混合物的1HNMR(400MHz,CDCl3)δ2.87-2.57(m,2H),2.36-2.06(m,2H),1.97-1.81(m,2H),1.81-1.70(m,1H),1.70-1.56(m,1H),1.47(s,9H,S1的t-Bu,相对强度的积分为2.0),1.45(s,9H,S1E的t-Bu,相对强度的积分为1),0.99-0.87(m,1H),0.77-0.61(m,1H),0.54-0.38(m,2H),0.16--0.01(m,2H)。
中间体S1F:(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酸1-苄基·4-叔丁基酯，和
中间体S1G:(2R,3R)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酸1-苄基·4-叔丁基酯
向中间体S1和S1E的2.15:1混合物(2.22g,6.84mmol)和溴苄(0.98ml,8.24mmol)于DMF(25ml)中的搅拌溶液中添加碳酸钾(1.41g,10.20mmol)。然后将反应混合物搅拌5.5h。将反应混合物用EtOAc(300mL)稀释，用10％LiCl(3x100mL)、饱和NaCl洗涤，然后干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化(己烷:甲苯)，得到中间体S1F(1.5g,53％)和中间体S1G(0.778g,27％)。中间体S1F:1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.43-7.31(m,29H),5.17(d,J＝11.9Hz,6H),5.13(d,J＝11.9Hz,6H),2.75-2.64(m,11H),2.19-1.94(m,12H),1.93-1.81(m,6H),1.79-1.69(m,6H),1.63-1.56(m,4H),1.46(s,47H),1.14(ddd,J＝13.8,7.2,3.5Hz,6H),0.68-0.55(m,6H),0.45-0.37(m,11H),-0.02--0.11(m,6H).中间体S1G:1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.40-7.32(m,5H),5.16(d,J＝12.3Hz,1H),5.13(d,J＝12.1Hz,1H),2.88-2.79(m,1H),2.74(ddd,J＝8.8,7.3,4.4Hz,1H),2.18-1.93(m,2H),1.90-1.79(m,2H),1.70-1.59(m,1H),1.44(s,9H),1.31(ddd,J＝14.1,7.3,4.5Hz,1H),0.73-0.61(m,1H),0.49-0.38(m,2H),0.10-0.03(m,1H),-0.01--0.07(m,1H)。
中间体S1
将中间体S1F(2.80g,6.76mmol)溶解于乙酸乙酯(26.0mL)和甲醇(26.0mL)中。添加钯/碳(10％润湿Degussa,0.539g,0.507mmol)，然后将气氛换成H2三次。将反应混合物搅拌约2h，然后在MeOH洗涤下过滤。将滤液浓缩，得到中间体S1(2.19g,100％收率)：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ2.79-2.67(m,2H),2.36-2.21(m,1H),2.18-2.03(m,1H),1.94(dtd,J＝14.6,9.8,4.8Hz,1H),1.78(ddd,J＝11.1,5.3,3.0Hz,1H),1.63(ddd,J＝13.9,9.2,7.0Hz,1H),1.49(s,9H),1.35(ddd,J＝13.8,7.0,3.9Hz,1H),0.77-0.63(m,1H),0.48(dq,J＝8.1,1.7Hz,2H),0.15-0.02(m,2H)。
制备中间体S1F的替代方法，因此中间体S1：
中间体S1H:(S)-4-苄基-3-(5,5,5-三氟戊酰基)噁唑烷-2-酮
向5,5,5-三氟戊酸(71.4g,457mmol)于DCM(315mL)和5滴DMF中的搅拌溶液中添加草酰氯(229mL,457mmol)。然后将反应混合物搅拌直至气体析出平息。将反应混合物浓缩，并将物质用于以下步骤。
将单独的烧瓶填充(S)-4-苄基噁唑烷-2-酮(60g,339mmol)和THF(315mL)，冷却至-78℃，然后滴加正丁基锂(183mL,2.5M,457mmol)。在添加过程中生成重质悬浮液，因此添加额外的THF(315mL)。一旦BuLi添加结束，则向该反应混合物中滴加上述于(150mL)中的酰氯，在-78℃搅拌10min，然后温热至室温。在0-5℃将反应混合物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将反应混合物用EtOAc萃取，用水、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)，得到中间体S1H(87g,81％)：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.32-7.39(2H,m),7.30(1H,d,J＝7.05Hz),7.18-7.25(2H,m),4.64-4.74(1H,m),4.17-4.27(2H,m),3.31(1H,dd,J＝13.35,3.27Hz),3.00-3.11(2H,m),2.79(1H,dd,J＝13.35,9.57Hz),2.16-2.28(2H,m),1.93-2.04(2H,m)。
中间体S1I:(3R)-3-(((4S)-4-苄基-2-氧代-1,3-噁唑烷-3-基)羰基)-6,6,6-三氟己酸叔丁酯
在氮气氛下向中间体S1H(43g,136mmol)于THF(150mL)中的冷的(-78℃)、搅拌的溶液中添加NaHMDS(150mL,1.0M于THF,150mmol)。在2小时后，在-78℃添加2-溴乙酸叔丁酯(53.2g,273mmol)于THF(100mL)中的溶液，并在相同的温度维持搅拌。在6小时后，将反应混合物温热至室温。将反应混合物在饱和NH4Cl和EtOAc之间分配。将有机相分离，并将水层用EtOAc(3x)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)，得到中间体S1I(37g,63％)：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.34(2H,d,J＝7.30Hz),7.24-7.32(3H,m),4.62-4.75(1H,m,J＝10.17,6.89,3.43,3.43Hz),4.15-4.25(3H,m),3.35(1H,dd,J＝13.60,3.27Hz),2.84(1H,dd,J＝16.62,9.57Hz),2.75(1H,dd,J＝13.35,10.07Hz),2.47(1H,dd,J＝16.62,4.78Hz),2.11-2.23(2H,m),1.90-2.02(1H,m),1.72-1.84(1H,m),1.44(9H,s)。
中间体S1J:(2R)-2-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酸
向中间体S1I(26g,60.5mmol)于THF(390mL)和水(104mL)中的冷却的(0℃)、搅拌的溶液中添加H2O2(24.1mL,236mmol)，随后添加LiOH(2.75g,115mmol)于水(28mL)中的溶液。将反应混合物逐渐温热至室温并在室温搅拌3h。将反应混合物冷却至0℃，然后添加饱和Na2SO3和饱和NaHCO3。将反应混合物搅拌5min，然后部分地浓缩并用DCM(20ml)萃取。将水相酸化至pH～3，用EtOAc萃取。将萃取物干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，得到中间体S1J(15g,92％)：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ2.83-2.95(1H,m),2.62-2.74(1H,m),2.45(1H,dd,J＝16.62,5.79Hz),2.15-2.27(2H,m),1.88-2.00(1H,m),1.75-1.88(1H,m),1.45(9H,s)。
中间体S1K:(2R,3S)-3-(叔丁氧基羰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己-5-烯酸，和
中间体S1L:(2R,3R)-3-(叔丁氧基羰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己-5-烯酸
将烧瓶填充THF(150ml)，然后冷却至-20℃，然后在搅拌下添加正丁基锂(53.9ml,2.5M于己烷中,135mmol)，然后历时55min添加二异丙基胺(19.4ml,137mmol)同时维持内部温度低于-8.5℃。在添加结束后，将溶液在0℃搅拌45min，然后冷却至-78℃。历时20min向其中添加中间体S1J(14.56g,53.9mmol)于THF(15.0ml)中的溶液，同时维持内部温度低于-72℃。在添加结束后，将混合物在-78℃搅拌100min。历时10min向其中添加3-溴丙-1-烯(6.38ml,75mmol)。将反应混合物搅拌，随水浴升温缓慢温热至室温，并搅拌过夜。向该溶液中添加冰和1NHCl(215mL)至pH约1，然后将溶液用NaCl饱和。分离各层。将水层用EtOAc(1x250mL,1x150mL)萃取。将合并的有机相用盐水(1x300mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并蒸发。将残余物用苯(50mL)处理并蒸发两次，在真空中干燥得到中间体S1K和中间体S1L的混合物(16.8g,100％)。1HNMR指示S1K:S1L比例为1:2。非对映异构体混合物的1HNMR(400MHz,CDCl3)δ5.81-5.66(m,1H),5.17-5.04(m,2H),2.81-2.62(m,2H),2.45-2.38(m,2H),2.33-2.03(m,3H),1.96-1.83(m,2H),1.45(s,9H,S1K的t-Bu,相对强度的积分为1),1.44(s,9H,S1L的t-Bu,相对强度的积分为2)。
中间体S1K:(2R,3S)-3-(叔丁氧基羰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己-5-烯酸，和
中间体S1L:(2R,3R)-3-(叔丁氧基羰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己-5-烯酸，一种富集的混合物
向中间体S1K和中间体S1L的混合物(10g,32.2mmol)于THF(150mL)中的冷的(-78℃)、搅拌的溶液中缓慢添加LDA(39.4mL,70.9mmol,1.8M于庚烷/THF/乙基苯)。在搅拌15min后，将反应混合物放置于室温水浴中。在15min后，将反应混合物放置回-78℃水浴中，搅拌15min，然后经由加液漏斗添加二乙基氯化铝(81mL,81mmol,1M于己烷中)。将反应混合物在-78℃搅拌。在10min后，将反应混合物放置于室温水浴中持续15min，然后冷却回至-78℃持续15min。同时，将单独的烧瓶填充MeOH(300mL)并冷却至-78℃。然后通过氮气压经由套管将反应混合物转移至冷的且快速搅拌的MeOH中。在转移结束后，将冰(86g)添加至反应混合物中，随后缓慢添加1NHCl(300mL)。将反应混合物搅拌直至所有气体析出平息。添加EtOAc(400mL)，分离各相，并将水相用EtOAc(300mL)萃取。将合并的EtOAc层用氟化钾(17g)于600mLH2O中的溶液和1NHCl(86mL)的混合物洗涤，然后用盐水洗涤。将有机相干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩，得到中间体S1K和中间体S1L7:1(S1K:S1L)富集的混合物(10.0g,100％):非对映异构体混合物的1HNMR(400MHz,CDCl3)δ5.81-5.66(m,7H),5.17-5.04(m,1H),2.81-2.62(m,2H),2.45-2.38(m,2H),2.33-2.03(m,3H),1.96-1.83(m,2H),1.45(s,9H,S1K的t-Bu,相对强度的积分为1),1.44(s,9H,S1L的t-Bu,相对强度的积分为2)。
中间体S1M:(2S,3R)-2-烯丙基-3-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酸4-苄基·1-叔丁基酯
向中间体S1K和中间体S1L7:1富集混合物(10g,32.2mmol)于DMF(100ml)中的搅拌溶液中添加溴苄(4.6ml,38.7mmol)和碳酸钾(6.68g,48.3mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时。向反应混合物中添加Et3N(9.0mL.64.5mmol)，然后搅拌60min。将反应混合物用Et2O稀释，用10％LiCl(3x100mL)、盐水(100mL)洗涤，然后干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化(己烷/甲苯)，得到中间体S1M(8.7g,67％)：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.40-7.31(m,5H),5.70(ddt,J＝16.9,10.2,7.1Hz,1H),5.19-5.11(m,2H),5.09-5.02(m,2H),2.83-2.68(m,2H),2.43-2.32(m,2H),2.19-1.94(m,2H),1.91-1.81(m,2H),1.42(s,9H)。
中间体S1F:(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酸1-苄基·4-叔丁基酯
向冷却至0℃的40％KOH[KOH(6g,107mmol)于水(9mL)]和Et2O(60mL)中的混合物逐份添加1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(1.5g,10.20mmol)。将获得的溶液涡旋数次。在0℃将醚层(黄色溶液)用吸液管转移至中间体S1M(450mg,1.124mmol)和Pd(OAc)2(25mg,0.11mmol)于Et2O(18mL)的混合物中。将混合物在0℃搅拌3h，然后将反应混合物用数滴乙酸淬灭。将所得混合物用饱和NaHCO3和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。将上述油状物通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)，得到中间体S1F(377mg,81％)，为无色油状物:HPLC:RT＝3.790min(H2O/MeOH，含有TFA，SpeedROD,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝415[M+H+]；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.43-7.31(m,5H),5.21-5.07(m,2H),2.76-2.62(m,2H),2.18-1.66(m,4H),1.58-1.54(m,1H),1.46(s,9H),1.14(ddd,J＝13.8,7.1,3.5Hz,1H),0.71-0.53(m,1H),0.47-0.34(m,2H),0.05--0.10(m,2H)。
中间体S2:(2R,3S)-3-(叔丁氧基羰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸
将中间体S1M(0.8g,1.998mmol)溶解于MeOH(15.37ml)中。添加钯/碳(Degussa,10％)(0.053g,0.050mmol)，然后将气氛换成H2三次。将反应混合物搅拌约6小时，然后在EtOAc淋洗下过滤。将滤液浓缩，得到中间体S2(627mg,100％):1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ2.72-2.65(m,1H),2.64-2.56(m,1H),2.34-2.04(m,2H),1.98-1.86(m,1H),1.82-1.59(m,2H),1.47(s,9H),1.44-1.23(m,3H),0.99-0.86(m,3H)。
中间体S3:(R)-2-((S)-1-(叔丁氧基)-3-(1-甲基环丙基)-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酸
中间体S3A:(2R,3S)-3-(叔丁氧基羰基)-5-甲基-2-(3,3,3-三氟丙基)己-5-烯酸，和
中间体S3B:(2R,3R)-3-(叔丁氧基羰基)-5-甲基-2-(3,3,3-三氟丙基)己-5-烯酸
中间体S3A和中间体S3B自中间体S1J(3g,11.1mmol)和3-溴-2-甲基丙-1-烯(2.248g,16.65mmol)根据中间体S1K和S1L所示的一般操作制备。中间体S3A和中间体S3BA的1:2混合物(3.293g,91％)以2R,3R和2R,3S非对映异构体的2:1混合物获得，且未经纯化即用于下一步。MS(ES):m/z＝323[M-H-]。
中间体S3A:(2R,3S)-3-(叔丁氧基羰基)-5-甲基-2-(3,3,3-三氟丙基)己-5-烯酸，和
中间体S3B:(2R,3R)-3-(叔丁氧基羰基)-5-甲基-2-(3,3,3-三氟丙基)己-5-烯酸，一种富集混合物
中间体S3A和中间体S3B的富集混合物自中间体S3A和中间体S3B(2.214g,6.83mmol)的1:2混合物根据中间体S1K和中间体S1L所示的一般操作制备。获得中间体S3A和中间体S3B(1.165g,52.6％)的1.8:1混合物。MS(ES):m/z＝323[M-H]-。
中间体S3C:(2R,3S)-3-(2-甲基烯丙基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酸1-苄基·4-叔丁基酯
中间体S3C自中间体S1A和中间体S3B的混合物(1.16g,3.58mmol)根据中间体S1M所示的一般操作制备。获得中间体S3C(0.571g,38.5％)。HPLC:RT＝3.990min(H2O/MeOH，含有TFA，ODSS54.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm).1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ7.43-7.32(m,4H),7.22-7.12(m,1H),5.23-5.10(m,2H),4.81-4.68(m,2H),2.86(ddd,J＝10.0,9.0,5.3Hz,1H),2.66(td,J＝9.3,3.2Hz,1H),2.39-2.30(m,2H),2.10-1.84(m,3H),1.81-1.73(m,1H),1.69(s,3H),1.44-1.39(m,9H)。
中间体S3D:(1R,3S)-3-((1-甲基环丙基)甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酸1-苄基·4-叔丁基酯
将二乙基锌，1M于己烷中(18.63mL,18.63mmol)于DCM(28mL)中的溶液在冰/水浴中冷却。在10min后，历时8min滴加三氟乙酸(1.435mL,18.63mmol)于DCM(14mL)中的溶液，并且反应形成白色浆液，将其在冰/水浴中再搅拌20min。历时1min将二碘甲烷(1.503mL,18.63mmol)于DCM(7mL)中的溶液添加至白色浆液中；当结束时，所有固体溶解得到无色溶液。将反应混合物在冰/水浴中搅拌20min，然后添加中间体S3C于DCM(7mL)中的溶液，除去冰/水浴，并将反应混合物温热至室温。在室温搅拌2小时后，将反应混合物用1NHCl水溶液洗涤，并将水层用DCM反萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将有机层用活性炭处理，经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到中间体S3D(1.9g,95％)。HPLC:RT＝4.011min(H2O/MeOH，含有TFA，ODSS54.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ7.42-7.32(m,5H),5.23-5.09(m,2H),2.87-2.73(m,1H),2.63(td,J＝9.7,3.4Hz,1H),2.18-1.80(m,3H),1.78-1.66(m,1H),1.47(s,10H),1.39-1.31(m,1H),1.01(s,3H),0.35-0.28(m,1H),0.24-0.12(m,3H)。
中间体S3:(R)-2-((S)-1-(叔丁氧基)-3-(1-甲基环丙基)-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酸
中间体S3自中间体S3D(389mg,0.908mmol)根据中间体S1所示的一般操作制备。获得中间体S3(297mg,97％)。HPLC:RT＝3.469min(H2O/MeOH，含有TFA，ODSS5,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝323[M-H-]
中间体A-1:(2-氨基-3-环丙氧基苯基)(3-氟苯基)甲酮
中间体A1A:2-硝基-3-(乙烯基氧基)苯甲酸甲酯
将乙酸铜(II)(11.98g,65.9mmol)和二氯甲烷(80mL)的混合物在室温搅拌10min，然后添加2,4,6-三乙烯基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三硼杂环己烷与吡啶的复合物(1:1)(10.63g,44.2mmol,0.67当量)、3-羟基-2-硝基苯甲酸甲酯(美国公开号2012/0035194A1[0202])(13g,65.9mmol)、吡啶(26.7mL,330mmol)和分子筛(1g)。将所得的深蓝色混合物在室温搅拌5天，并且反应混合物与空气联通。将反应混合物通过垫过滤，用二氯甲烷洗涤。将滤液用3M乙酸铵水溶液(2x)、水和盐水洗涤，然后干燥并在真空中浓缩。将粗产物混合物经硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)，得到中间体A1A(7.42g,33.2mmol,50.4％收率)。HPLC:RT＝2.487min(H2O/MeOH，含有TFA，SunFireC183.5μm,2.1x30mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝246[M+Na]+；1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ7.77(dd,J＝7.8,1.2Hz,1H),7.55(t,J＝8.1Hz,1H),7.38(dd,J＝8.4,1.3Hz,1H),6.61(dd,J＝13.6,5.9Hz,1H),4.95(dd,J＝13.6,2.4Hz,1H),4.69(dd,J＝5.9,2.4Hz,1H),3.93(s,3H),1.56(s,1H),0.03(s,1H)。
中间体A-1B:3-环丙氧基-2-硝基苯甲酸甲酯
在3颈500mL烧瓶中，在氮气氛下经由加液漏斗将2,2,2-三氯乙酸(16.30g,100mmol)于二氯甲烷(100mL)中的溶液缓慢添加至-10℃二乙基锌溶液(1M己烷,100mL,100mmol)中。将反应混合物搅拌10min。接着，通过注射器滴加二碘甲烷(8mL,100mmol)并将反应溶液搅拌10min。经由加液漏斗缓慢添加中间体A1A(7.42g,33.2mmol)于二氯甲烷(20mL)中的溶液。将溶液温热至室温过夜。将反应混合物冷却至0℃并用1MHCl淬灭。将反应混合物转移至分液漏斗中，并将水层用二氯甲烷(3x)萃取。将合并的萃取物用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗产物混合物通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)，得到中间体A1B(4.7g,19.81mmol,60.0％收率)。HPLC:RT＝2.66min(H2O/MeOH，含有TFA，SunFireC183.5μm,2.1x30mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝260[M+Na]+；1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ7.68-7.57(m,2H),7.57-7.41(m,1H),4.03-3.82(m,4H),0.94-0.78(m,4H)。
中间体A1C:3-环丙氧基-2-硝基苯甲酸
将中间体A1B(4.7g,19.81mmol)于THF(30mL)和MeOH(30mL)中的溶液用氢氧化锂(2.88g,120mmol)于水(15mL,833mmol)中的溶液处理。将混合物在室温搅拌2小时。在减压下将有机溶剂除去。将所得的水性浆液用水稀释，用1MHCl酸化并用乙酸乙酯(3X)萃取。将萃取物合并并用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到中间体A1C(4.35g,19.8mmol,98％收率)，为微黄色固体。HPLC:RT＝2.186min(H2O/MeOH，含有TFA，SunFireC183.5μm,2.1x30mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝246[M+Na]+；1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ7.76(dd,J＝7.7,1.8Hz,1H),7.68-7.46(m,2H),4.02(tt,J＝6.0,2.9Hz,1H),1.00-0.52(m,4H)。
中间体A1D:2-氨基-3-环丙氧基苯甲酸
将50mL圆底烧瓶填充中间体A1C(205mg,0.919mmol)、10％Pd/C(25mg,0.919mmol)和甲醇(6mL)。将烧瓶用氮气(3x)真空冲洗，随后用氢气囊(3x)真空冲洗。将所得悬浮液在氢气囊下在室温搅拌过夜。将溶液通过过滤，用甲醇洗涤，并将滤液浓缩，得到微红色油状物。将粗物质与甲苯(2X)共沸并真空干燥得到粗中间体A1D(175mg,0.906mmol,99％收率)，为微红色固体。产物未经进一步纯化即用于下一反应。HPLC:RT＝2.31min(H2O/MeOH，含有TFA，SunFireC183.5μm,2.1x30mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝194.12[M+H]+。
中间体A1E:2-氨基-3-环丙氧基-N-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺
向中间体A1D(6.61g,34.2mmol)、N,O-二甲基羟胺盐酸盐(10.01g,103mmol)、N-乙基-N′-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(7.87g,41.1mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(6.29g,41.1mmol)于50mlDMF中的溶液中添加三乙胺(19.07mL,137mmol)。将反应溶液在60℃搅拌过夜，然后冷却至室温。将反应混合物在水和乙酸乙酯之间分配，并转移至分液漏斗，用10％LiCl、水和盐水洗涤。将有机相经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到深色油状物。将粗产物混合物经硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)，得到中间体A1E(5.2g,22.01mmol,64.3％收率)。HPLC:RT＝1.975min(H2O/MeOH，含有TFA，SunFireC183.5μm,2.1x30mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝237.12[M+H]+；1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ7.17(dd,J＝8.0,1.2Hz,1H),7.02(dd,J＝7.9,1.3Hz,1H),6.67(t,J＝7.9Hz,1H),4.78(br.s.,2H),3.88-3.73(m,1H),3.69-3.56(m,3H),3.36(s,3H),0.92-0.72(m,4H))。
中间体A1
在干冰/丙酮浴中在氮气下将1-氟-3-碘苯(1.009mL,8.59mmol)于四氢呋喃(100mL)中的溶液冷却至-78℃。然后历时15分钟经由注射器添加n-BuLi的溶液(1.8M于己烷中,5.37mL,8.59mmol)并搅拌60min得到深黄色悬浮液。然后经由注射器添加中间体A1E(0.58g,2.455mmol)于10mLTHF中的溶液，并将反应混合物在-78℃搅拌40min。在40min后，将混合物倾倒至冰和1NHCl的混合物中并萃取至乙酸乙酯中得到浅黄色溶液。将有机层用水和盐水洗涤，并浓缩，得到深黄色油状残余物。将粗产物混合物经由ISCO纯化(0％-100％EtOAC/庚烷，15min,40g柱)，得到纯产物中间体A1(0.46g,1.696mmol,69.1％收率)。HPLC:RT＝3.481min(H2O/MeOH，含有TFA，SunFireC183.5μm,2.1x30mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝272.16[M+H]+；1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ7.48-7.40(m,2H),7.36(ddd,J＝9.3,1.9,1.1Hz,1H),7.27-7.18(m,2H),7.08(dd,J＝8.3,1.2Hz,1H),6.58(t,J＝8.0Hz,1H),6.39(br.s.,2H),3.83(t,J＝4.5Hz,1H),0.86(d,J＝4.4Hz,4H)。
表6中的氨基二苯甲酮根据中间体A1所示的一般操作，自适当取代的苯甲酸起始制备。
表6
aH2O/MeOH，含有TFA，BEHC181.7μm,2.1x50mm,梯度＝2min,波长＝220nm。
bH2O/MeOH，含有TFA，SunFireC183.5μm,2.1x30mm,梯度＝4min,波长＝254nm。
cH2O/MeOH，含有TFA，ODSS5,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm。
dH2O/MeOH，含有TFA，2.5μm,2.0x30mm,梯度＝2min,波长＝220nm。
eH2O/MeOH，含有H3PO4，SunFireC185μm,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm。
fH2O/MeOH，含有H3PO4，YMCS5ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm。
中间体A11:(2-氨基-3-氟苯基)(苯基)甲酮
中间体A11A:7-氟-3-羟基-3-苯基吲哚啉-2-酮
在0℃向7-氟吲哚啉-2,3-二酮(12.22g,74mmol)于THF(40mL)中的搅拌溶液中滴加苯基溴化镁(148mL,148mmol)。在添加结束后，将反应混合物在室温搅拌。在15min后通过HPLC判断反应混合物反应完全。将反应混合物用饱和NH4Cl淬灭并用EtOAc萃取。将合并的有机物用盐水萃取，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化(EtOAc/己烷)，得到中间体A11A(18.84g,88％)，为黄色固体:HPLC:RT＝1.810min(H2O/MeOH，含有TFA，SpeedROD,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝226[M+H+-H2O]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.92(s,1H),7.37-7.25(m,5H),7.19(ddd,J＝10.4,8.1,1.3Hz,1H),7.04-6.92(m,2H)。
中间体A11
在110-120℃历时10min向亚铁氰化钾(20.87g,56.7mmol)、碳酸氢钠(4.94g,58.8mmol)和NaOH(0.959g,23.97mmol)于水(100mL)中的搅拌溶液中滴加中间体A11A(5.3g,21.79mmol)于DMF(12mL)中的溶液。在回流1.5h后，将反应混合物冷却至室温。将混合物用DCM萃取两次。将合并的萃取物用水和10％LiCl洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化(EtOAc/己烷)，得到中间体A11(2.97g,63％)，为黄色固体:HPLC:RT＝2.513min(H2O/MeOH，含有TFA，SpeedROD,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝216[M+H]+；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.63-7.71(2H,m),7.54-7.60(1H,m),7.45-7.53(2H,m),7.25-7.31(1H,m),7.17(1H,ddd,J＝11.11,7.81,1.32Hz),6.56(1H,td,J＝8.03,5.06Hz),6.12(2H,br.s.)。
表7中的氨基二苯甲酮根据中间体A11所示的一般操作，自本领域技术人员已知的适当取代的吲哚啉-2,3-二酮起始制备。
表7
aH2O/MeOH，含有TFA，ODSS5,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm。
bH2O/MeOH，含有TFA，SpeedROD,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm。
cH2O/MeOH，含有TFA，SunFireC182.5μm,2.1x30mm,梯度＝3min,波长＝220nm。
dH2O/MeCN，含有NH4OAc，StarC183μm,4x55mm,梯度＝4min,波长＝220nm。
eH2O/MeOH，含有H3PO4，SunFireC185μm,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm。
fH2O/MeCN，含有甲酸铵，AscentisExpressC182.7μm,2.1x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm。
中间体A18:(2-氨基-3-甲氧基苯基)(苯基)甲酮
中间体A18A:8-甲氧基-2-甲基-4H-苯并[d][1,3]噁嗪-4-酮
将2-氨基-3-甲氧基苯甲酸(10.1g,60.4mmol)悬浮于乙酸酐(50ml,530mmol)中。将混合物在搅拌下加热至140℃，持续180min。将反应混合物冷却至室温并浓缩，得到中间体A18A(11.51g,100％):HPLC:RT＝0.795min(H2O/MeOH，含有TFA，SunFireC182.5μM,2.1x30mm,梯度＝2min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝292[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.59(dd,J＝6.9,2.3Hz,1H),7.52-7.42(m,2H),3.89(s,3H),2.39(s,3H)。
中间体A18
将在乙醚(20mL)、甲苯(10mL)和THF(10mL)中含有中间体A18A(1g,5.23mmol)的100mL圆底烧瓶冷却至0℃。将苯基溴化镁(1.9mL,5.75mmol,3M于Et2O中)一次性添加。将反应混合物温热至室温并搅拌过夜。将反应混合物冷却至0℃并添加30g碎冰和25ml6NHCl。将反应混合物缓慢温热至室温。将反应混合物在乙酸乙酯(100mL)和盐水(50mL)之间分配。将水相分离并用乙酸乙酯(1x100mL)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化，得到882mg无色固体。将物质溶于AcOH(10mL)并用浓HCl(6mL,72.0mmol)处理，然后在搅拌下加热至100℃过夜。将反应混合物冷却至室温，浓缩并真空干燥。将残余物用乙酸乙酯(100mL)稀释，将pH用饱和NaHCO3调整至pH10，然后分离各相。将水相用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将合并的有机相干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化(EtOAc/己烷)，得到中间体A18(370mg,31％):HPLC:RT＝1.888min(H2O/MeOH，含有TFA，SunFireC182.5μM,2.1x30mm,梯度＝2min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝228[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.43(br.s.,2H),7.70-7.63(m,1H),7.33-7.22(m,5H),7.10-7.03(m,1H),6.91(dd,J＝6.7,2.1Hz,1H),3.87(s,3H)。
表8中的氨基二苯甲酮根据中间体A18所示的一般操作，自本领域技术人员已知的适当取代的邻氨基苯甲酸起始制备。
表8
aH2O/MeCN，含有NH4OAc，StarC183μm,4x55mm,梯度＝4min,波长＝220nm。
bH2O/MeCN，含有NH4OAc，StarC183μm,4x55mm,梯度＝3min,波长＝220nm。
中间体A21:(2-氨基-3-氯苯基)(苯基)甲酮
中间体A21A:(3-氯-2-硝基苯基)(苯基)甲酮
在80℃将3-氯-2-硝基苯甲酸(10g,49.6mmol)与亚硫酰氯(30mL)加热2小时。将反应混合物浓缩至干，并将固体在高真空下干燥15分钟，溶解于THF(120mL)中并在甲醇/冰浴中冷却至-15℃。历时15分钟向该溶液中滴加苯基溴化镁(49.6mL,49.6mmol,1M于THF)。在添加结束后，将反应烧瓶从浴器移除，并在室温搅拌过夜。将反应混合物通过添加1NHCl(100mL)淬灭。将反应混合物用乙酸乙酯(3x100mL)萃取，干燥(Na2SO4)，浓缩并通过硅胶色谱纯化(EtOAc/己烷)，得到中间体A21A(4.03g,31％)，为琥珀色油状物：HPLC:RT＝1.96min(H2O/MeOH，含有TFA，LunaC185μM,4.6x30mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝262[M+H]+；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.77-7.87(2H,m),7.63-7.76(2H,m),7.44-7.62(4H,m)。
中间体A21
将中间体A21A(4.03g,15.40mmol)、锌(10.07g,154mmol)和氯化铵(8.24g,154mmol)于EtOH(30mL)和水(15mL)中的溶液加热至回流，然后冷却并再在室温搅拌1h。将混合物通过过滤并浓缩，然后将残余物在水/DCM之间分配，用DCM(3x30mL)萃取，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩以分离中间体A21(1.17g,33％)，为黄色油状物:HPLC:RT＝1.05min(H2O/MeOH，含有TFA，LunaC185μM,4.6x30mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝232[M+H]+；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.68-7.61(m,2H),7.59-7.52(m,1H),7.51-7.38(m,4H),6.67-6.51(m,3H)。
表9中的氨基二苯甲酮根据中间体A21所示的一般操作，自本领域技术人员已知的适当取代的苯甲酸起始制备。
表9
aH2O/MeOH，含有TFA，SBC185μm,4.6x55mm,梯度＝4min,波长＝220nm。
bH2O/MeOH，含有TFA，SunFireC182.5μm,2.1x30mm,梯度＝2min,波长＝220nm。
cH2O/MeOH，含有TFA，BEHC181.7μm,2.1x50mm,梯度＝2min,波长＝220nm。
dH2O/MeOH，含有TFA，LunaC185μm,4.6x30mm,梯度＝3min,波长＝254nm。
中间体A25:(2-氨基-3,4-二氯苯基)(苯基)甲酮
中间体A25A:N-(6-苯甲酰基-2,3-二氯苯基)棕榈酰胺
在N2下历时15min经由注射器向N-(2,3-二氯苯基)棕榈酰胺(Shimada,I.etal.,Bioorganic&MedicinalChemistry,16:1966-1982(2008)),化合物#12；2.10g,8.53mmol)和TMEDA(1.0ml,6.63mmol)于t-BuOMe(21ml)中的冷却的(-23℃)、搅拌的溶液中添加n-BuLi(7.9ml,19.75mmol,2.5M于戊烷中)。将反应混合物搅拌90min。历时30min经由套管向冷却的反应混合物中添加N-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(2.46g,14.89mmol)于t-BuOMe(11ml)中的溶液，然后随浴器升温将反应混合物温热至室温。向反应混合物中添加饱和的NH4Cl，然后通过过滤收集固体，用水洗涤，并空气干燥过夜得到中间体A25A(2.75g,88％)，为淡黄色固体:1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.04(1H,br.s.),7.76-7.83(2H,m),7.54-7.62(1H,m),7.43-7.49(2H,m),7.41(1H,d,J＝7.7Hz),7.35(1H,d,J＝7.7Hz),1.14(9H,s)。
中间体A25
向中间体A25A(2.75g,7.85mmol)于EtOH(25mL)中的搅拌溶液中添加5NHCl(75mL,375mmol)。将反应混合物加热至100℃持续5.5h。LCMS显示无转变。将反应混合物冷却至室温，添加(75mL)，并再次将混合物加热过夜。LCMS显示部分转变。添加MeOH(25mL)和浓HCl(25mL)，继续加热过夜。LCMS显示～30％完成。将反应混合物浓缩。将固体残余物溶解于MeOH(75mL)中，将浓HCl(40mL)在搅拌下添加至该溶液中，然后将溶液再次加热至100℃持续3h。添加额外的浓HCl(40mL)，并继续加热过夜。将反应混合物冷却至室温并浓缩。将残余物溶解于DCM中，用饱和NaHCO3洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。在残余物通过硅胶色谱纯化(EtOAc/己烷)后，回收中间体A25A(1.38g,50％)并获得中间体A25(596.6mg,29％)。HPLC:RT＝2.26min(H2O/MeOH，含有TFA，SunFireC182.5μm,2.1x30mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝266[M+H]+；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.60-7.65(2H,m),7.53-7.59(1H,m),7.45-7.52(2H,m),7.35(1H,d,J＝8.8Hz),6.84(2H,br.s.),6.73(1H,d,J＝8.8Hz)。
中间体A26:(2-氨基-3-氟-4-甲氧基苯基)(苯基)甲酮
在0℃向三氯化硼(11.69ml,11.69mmol,1.0M己烷)中滴加2-氟-3-甲氧基苯胺(1.50g,10.63mmol)于甲苯(5.31ml)中的溶液。添加后形成固体，然后部分地溶解。添加苯甲腈(2.170ml,21.26mmol)和氯化铝(1.559g,11.69mmol)，并将反应混合物在0℃搅拌30min。然后除去冰浴并将反应混合物加热至70℃持续16小时。将反应混合物冷却至室温，然后添加3NHCl(35.4ml,106mmol)。然后再次将反应混合物加热至70℃。在约2小时后，添加第二份3NHCl(35.4ml,106mmol)。当反应结束时，将反应混合物冷却至室温，然后通过添加1NNaOH碱化至pH约10。将反应混合物用DCM萃取4次，然后将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发。将残余物通过硅胶色谱纯化(EtOAc/己烷)，得到中间体A26(0.979g,38％):HPLC:RT＝1.827min(H2O/MeOH，含有TFA，SunFireC182.5μm,2.1x30mm,梯度＝2min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝246[M+H]+；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.65-7.59(m,2H),7.57-7.50(m,1H),7.49-7.42(m,2H),7.24(d,J＝2.0Hz,1H),6.27(dd,J＝9.0,7.7Hz,1H),3.94(s,3H)。
表10中的氨基二苯甲酮根据中间体A26所示的一般操作，自本领域技术人员已知的适当取代的苯胺和苯甲腈起始制备。
表10
aH2O/MeOH，含有TFA，BEHC181.7μm,2.1x50mm,梯度＝2min,波长＝220nm。
bH2O/MeCN，含有NH4OAc，StarC183μm,4x55mm,梯度＝4min,波长＝220nm。
cH2O/MeOH，含有TFA，SBC185μm,4.6x55mm,梯度＝4min,波长＝220nm。
dH2O/MeCN，含有NH4OAc，AscentisExpressC82.7μm,2.1x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm。
eH2O/MeCN，含有TFA，BEHC182.5μm,2.1x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm。
中间体A32:(2-氨基-3-氟苯基)(对甲苯基)甲酮
中间体A32自2-氟苯胺和4-甲基苯甲腈通过中间体A26所示的一般操作合成。中间体A32:NMR(400MHz,CDCl3)δ7.57(2H,d,J＝1.6Hz),7.27-7.25(3H,m),.57(2H,d,J＝7.04Hz),7.16-7.10(1H,m),6.00(2H,brs),2.43(3H,s)。
中间体B1:3-氨基-9-氟-5-苯基-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-2(3H)-酮
中间体B1A:9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基氨甲酸苄基酯
在0℃向2-(1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)-2-(苄基氧基羰基氨基)乙酸(6.06g,18.59mmol)于THF(40mL)中的冷却的溶液中添加草酰氯(1.627mL,18.59mmol)，然后添加DMF(0.05mL)。将混合物在0℃搅拌1.5h。缓慢添加中间体A11(2g,9.29mmol)和4-甲基吗啉(3.06mL,27.9mmol)于THF(15mL)中的溶液。在添加后，将反应混合物温热至室温并搅拌过夜。将反应混合物通过过滤并用40mlTHF洗涤。将滤液用7NNH3/MeOH(40mL)处理。将混合物在室温搅拌3h。将反应混合物浓缩，将残余物溶解于EtOAc(150mL)，用1NNaOH(150mL)洗涤，将水层用EtOAc(2x125mL)萃取。将合并的萃取物用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将残余物溶解于乙酸(13mL,227mmol)中并用乙酸铵(3.58g,46.5mmol)处理。在室温过夜搅拌该混合物。将反应混合物浓缩，并悬浮于饱和NaHCO3中，用DCM萃取三次。将合并的萃取物用盐水洗涤，干燥并浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)，得到中间体B1A(3.0g,79％)：HPLC:RT＝2.780min(H2O/MeOH，含有TFA，SpeedROD,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝404[M+H+]；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.92(1H,br.s.),7.57(2H,d,J＝7.04Hz),7.46-7.53(1H,m),7.30-7.46(8H,m),7.15-7.23(2H,m),6.61(1H,d,J＝8.14Hz),5.42(1H,d,J＝8.36Hz),5.20(2H,s)。
中间体B1
将中间体B1A(9g,22.31mmol)于33％HBr/HOAc(29.4ml,178mmol)中的混合物在室温搅拌1.5h。添加醚，然后通过过滤收集沉淀并用醚淋洗。将固体悬浮于水(150mL)中并添加饱和NaHCO3同时搅拌。通过过滤收集固体，用水淋洗，并真空干燥得到中间体B1(5.69g,95％):HPLC:RT＝1.227min(H2O/MeOH，含有TFA，SpeedROD,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝270[M+H+]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.57(br.s.,1H),7.61-7.36(m,6H),7.32-7.19(m,1H),7.11(d,J＝7.9Hz,1H),4.34(s,1H),2.76-2.55(m,2H)。
中间体B2:(S)-3-氨基-9-氯-5-(4-氯苯基)-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-2(3H)-酮
中间体B2A:9-氯-5-(4-氯苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基氨甲酸苄基酯
在0℃在氮气氛下向2-(1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)-2-(((苄基氧基)羰基)氨基)乙酸(1.226g,3.76mmol)于THF(30mL)中的冷却的溶液中滴加草酰氯(0.329ml,3.76mmol)，然后添加DMF(0.01mL,0.129mmol)。将反应混合物在0℃搅拌2小时。将中间体A22(500mg,1.879mmol)和4-甲基吗啉(0.620ml,5.64mmol)于THF(10mL)中的溶液中滴加至酰氯溶液中并在室温再搅拌2个小时。将反应混合物通过过滤，用THF(50mL)洗涤并在真空中浓缩，得到粗中间体(600mg)，其随后原样用于下一步:HPLC:RT＝1.05min(H2O/MeCN，含有TFA，BEHC181.7μm,2.1x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝455[M-Bt]+。
向粗中间体(600mg,1.05mmol)于THF(40mL)中的溶液中添加氨(30mL,2M于甲醇中,60.0mmol)并在室温搅拌1个小时。将反应混合物在真空中浓缩，用EtOAc(100mL)稀释并用1NNaOH水溶液(2x50mL)洗涤。将有机层分离并将水层用EtOAc(3x100mL)萃取。将合并的有机层干燥(无水Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩。将粗残余物(2g)溶于冰乙酸(25mL,437mmol)中并将反应混合物在室温搅拌1个小时并浓缩。将残余物用冰冷的饱和NaHCO3水溶液(200mL)缓慢碱化并使用1NNaOH水溶液(10mL)使之成为碱性(pH～10)。将水相用CH2Cl2(3x100mL)萃取，将有机层合并，干燥(无水Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩。在添加异丙醇(50mL)后，将反应混合物在室温搅拌10分钟。将形成的固体过滤并干燥得到中间体B2A(250mg,53％):HPLC:RT＝2.095min(H2O/MeCN，含有NH4OAc，StarRP-183μm,4x55mm,梯度＝4min,波长＝254nm)；MS(ES):m/z＝455[M-Bt]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(d,J＝8.00Hz,1H),7.82(d,J＝7.20Hz,1H),7.53(d,J＝8.40Hz,3H),7.40-7.25(m,7H),5.08-5.01(m,3H)。
中间体B2
向中间体B2A(200mg,0.440mmol)于DCM(15mL)中的0℃溶液中添加三氯化硼(1.761mL,1.761mmol,1M于DCM)。在15min后，将反应混合物在DCM(100mL)和饱和NaHCO3(50mL)之间分配，然后将水层用乙酸乙酯(2x75mL)反萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，得到中间体B2(130mg,92％):HPLC:RT＝1.46min(H2O/MeOH，含有TFA，WatersSunFireC18,2.1x30mm,梯度＝2min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝320[M+H+]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.79(dd,J＝5.9,3.3Hz,1H),7.59-7.48(m,4H),7.32-7.23(m,2H),5.76(s,1H)。
中间体B3:(9-环丙基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨甲酸苄基酯
中间体B3A:(9-溴-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨甲酸苄基酯
中间体B3A在中间体A16通过中间体B1所示的一般操作制备。中间体B3A:HPLC:RT＝2.048min(H2O/MeOH，含有TFA，AscentisExpressC182.7μm,2.1x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝464[M+H+]。
中间体B3
在氮气下向中间体B3A(2.00g,4.31mmol)、二氯化钯dppf(946mg,1.29mmol)、磷酸氢二钾(2.25g,12.9mmol)和环丙基硼酸甲基亚氨基二乙酸酯(1.70g,8.61mmol)于二噁烷(12mL)中的搅拌混合物中添加水(3mL)。
将反应混合物在85℃加热20h并冷却至室温。将混合物用EtOAc稀释并通过覆盖有的硅胶垫过滤。其进一步用EtOAc洗脱。将滤液减压浓缩并通过硅胶色谱纯化(DCM/丙酮)，得到中间体B3(1.20g,65％):HPLC:RT＝3.246min(H2O/MeOH，含有TFA，SpeedROD柱4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm).MS(ES):m/z＝426.1[M+H+]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.29(s,1H),8.38(d,J＝8.6Hz,1H),7.57-7.32(m,10H),7.30(d,J＝7.5Hz,1H),7.20(t,J＝7.6Hz,1H),7.11(d,J＝7.3Hz,1H),5.08(s,2H),5.04(d,J＝8.4Hz,1H),2.26-2.13(m,1H),1.09-0.95(m,2H),0.87-0.78(m,1H),0.61-0.52(m,1H)。
除非另有说明，否则表11中的取代的苯并[e][1,4]二氮杂-2(3H)-酮中间体根据中间体B1所示的一般方法通过对相应的Cbz-保护的前体进行HBr水解而制备。
表11
a该化合物被分离为其氢溴酸盐。
b该化合物通过手性SFC分离其氨甲酸苄基酯的对映异构体而制备，为单一对映异构体。
c该化合物被分离为其双氢溴酸盐。
d该化合物根据中间体B2所示的一般操作通过用BCl3除去Cbz基团制备。
eH2O/MeOH，含有TFA，SunFireC182.5μm,2.1x30mm,梯度＝3min,波长＝220nm。
fH2O/MeOH，含有H3PO4，YMCS5ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm。
gH2O/MeOH，含有TFA，SunFireC182.5μm,2.1x30mm,梯度＝4min,波长＝220nm。
hH2O/MeOH，含有TFA，BEHC181.7μm,2.1x50mm,梯度＝2min,波长＝220nm。
iH2O/MeOH，含有TFA，ODSS5,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm。
jH2O/MeOH，含有TFA，SpeedROD,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm。
kH2O/MeOH，含有TFA，SunFireC183.5μm,2.1x30mm,梯度＝2min,波长＝254nm。
lH2O/MeOH，含有TFA，C185μm,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220和254nm。
mH2O/MeCN，含有NH4OAc，StarC183μm,4x55mm,梯度＝4min,波长＝220nm。
nH2O/MeCN，含有NH4OAc，AscentisExpressC182.7μm,2.1x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm。
oH2O/MeOH，含有H3PO4，SunFireC185μm,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm。
pH2O/MeOH，含有TFA，SunFireC182.5μm,2.1x30mm,梯度＝2min,波长＝220nm。
qH2O/MeOH，含有H3PO4，YMCODSS5,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm。
r该化合物的(S)-对映异构体通过将其氨甲酸苄基酯进行制备型SFC色谱(Thar350,OJ-H25X5cmID,5μm,70/30CO2/MeOH,300mL/min)获得。
s该化合物的(S)-对映异构体通过制备型SFC色谱(Thar350SFC,AS-H25X5cmID,5μm,86/14CO2/MeOHw/0.1％TEA,290mL/min)获得。
t该化合物的(S)-对映异构体通过制备型SFC色谱(BergerSFCMG-II,AS25X3cmID,5μm,67/33CO2/MeOHw/0.1％二乙胺,85mL/min)获得。
u该化合物的(S)-对映异构体通过将其氨甲酸苄基酯进行制备型SFC色谱(Thar350SFC,AD-H25X5cmID,5μm,60/40CO2/MeOH,280mL/min)获得。
实施例1
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
制备例1A:(2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-(3S)-((9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨甲酰基)己酸叔丁酯，和
制备例1B:(2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-(3R)-((9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨甲酰基)己酸叔丁酯
向中间体B1(2.058g,7.64mmol)、中间体S1(2.43g,7.49mmol)和TBTU(2.77g,8.62mmol)于DMF(15mL)中的混合物中添加三乙胺(2.297mL,16.48mmol)。将混合物在室温搅拌1.5小时。将反应混合物移液至水和20％饱和的NaHCO3的混合物中。将所得的混合物搅拌5min。通过过滤收集固体，用水洗涤，并干燥。将固体通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)，得到制备例1A和1B的1:1混合物(3.94g,90％):HPLC:RT＝3.441min(H2O/MeOH，含有TFA，SpeedROD,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝576[M+H+]。
实施例1和制备例1C:(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N1-((R)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
向制备例1A和1B的1:1混合物(3.94g,6.85mmol)于DCM(20mL)中的悬浮液中添加TFA(20mL)。将溶液在室温搅拌1h50min。接着，添加甲苯。将溶液浓缩并将残余物与甲苯/DCM共沸三次。将黄色固体真空干燥30min。向上述固体羧酸于THF(50mL)中的溶液中添加HOBt(3.14g,20.54mmol)。将混合物搅拌5min，然后添加EDC(3.94g,20.54mmol)。在再搅拌5min后，将混合物冷却至8℃，并添加氨(20.54mL,41.1mmol,2M于IPA中)。在室温过夜搅拌该混合物。将混合物浓缩至少量体积。添加水和饱和NaHCO3(80/20)的溶液，并通过过滤收集固体，用水洗涤，然后干燥。然后将固体用Et2O研磨，然后通过过滤收集，用醚淋洗，并干燥得到3.49g固体。然后将固体经受SFC手性分离[Lux-Cell4(5x25cm)20％MeOH于CO2中,320mL/min,254nm,40℃,100巴,3.5mL/3min]。将第二洗脱级份浓缩，将固体用少量MeOH超声，通过过滤收集并干燥得到实施例1(1.25g,32％):HPLC:RT＝2.555min(H2O/MeOH，含有TFA，SpeedROD,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝519[M+H+]；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.70-7.38(m,6H),7.36-7.14(m,2H),5.43(s,1H),2.79-2.70(m,1H),2.70-2.61(m,1H),2.60-2.42(m,1H),2.33-2.15(m,1H),1.90-1.66(m,3H),1.30(ddd,J＝13.6,7.6,3.4Hz,1H),0.79-0.66(m,1H),0.54-0.40(m,2H),0.20-0.11(m,1H),0.10-0.01(m,1H)。
将从SFC纯化，得到的第一洗脱级份浓缩，得到制备例1C(1.47g,38％):HPLC:RT＝2.643min(H2O/MeOH，含有TFA，SpeedROD,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝519[M+H+]；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.62-7.40(m,1H),7.28(td,J＝8.1,5.0Hz,1H),7.22-7.16(m,1H),5.45(s,1H),2.81-2.60(m,3H),2.40-2.16(m,3H),1.94-1.66(m,4H),1.43(ddd,J＝13.8,7.8,3.5Hz,1H),0.77-0.63(m,1H),0.51-0.36(m,2H),0.21-0.13(m,1H),0.10-0.00(m,1H)。
晶型M3-1(三甲醇化物)通过将约3mg实施例1添加至约0.7mL甲醇溶液中制备。在室温缓慢蒸发溶液一天后，获得无色柱状晶体(prism-likecrystals)。
晶型CA-2(具有溶剂化通道的水合物)通过将约3mg实施例1添加至约0.7mL乙腈/水/乙酸溶液(5:2:1)中制备。在室温缓慢蒸发溶液三天后，获得无色针状晶体。
晶型SA-3(二甲醇化一水合物)通过通过将约3mg实施例1添加至约0.7mL甲醇/水溶液(10:1)中制备。在室温缓慢蒸发溶液四天后，获得无色针状晶体。
晶型E2.5-4(2.5乙醇化物)通过将约5mg实施例1添加至约0.5mL无水乙醇溶液中制备。在室温缓慢蒸发溶液一天后，获得无色针状晶体。
晶型IPA2-5(二异丙醇化物)通过将约3mg实施例1添加至约0.5mL异丙醇溶液中制备。在室温缓慢蒸发溶液30min后，获得无色针状晶体。
实施例2
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-甲氧基-2-氧代-5-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
制备例2A:(2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-(((S)-9-甲氧基-2-氧代-5-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨甲酰基)己酸叔丁基酯，和
制备例2B:(2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-(((R)-9-甲氧基-2-氧代-5-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨甲酰基)己酸叔丁基酯
在0℃向中间体B5氢溴酸盐(100mg,0.263mmol)于DMF(1mL)中的溶液中添加中间体S1(106mg,0.289mmol)，然后添加TBTU(253mg,0.789mmol)和三乙胺(0.220mL,1.578mmol)。将反应混合物在室温搅拌1h，然后添加水并将混合物搅拌10min。将固体滤除，然后溶解于EtOAc中并用水稀释。将有机层分离，用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到制备例2A和制备例2B的粗制混合物，其直接用于下一反应。HPLC:RT＝3.901min(H2O/MeOH，含有H3PO4，YMCS5ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝648[M+H+]。
制备例2C:(2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-(((S)-9-甲氧基-2-氧代-5-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨甲酰基)己酸，和
制备例2D:(2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-(((R)-9-甲氧基-2-氧代-5-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨甲酰基)己酸
将制备例2A和制备例2B的混合物溶解于DCM(2mL)中并冷却至0℃。滴加TFA(1mL)。在室温搅拌该混合物2小时。将溶剂蒸发，然后将残余物用EtOAc和1NNaOH稀释。将有机层分离并弃除。将水层用1NHCl调整至pH1，然后用EtOAc萃取。将有机层分离并用水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到制备例2C和制备例2D的混合物(110mg,71％)。HPLC:RT＝3.461min(H2O/MeOH，含有H3PO4，YMCS5ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝592[M+H+]。
实施例2
将制备例2C和制备例2D(75mg,0.125mmol)的混合物溶解于THF(2mL)中。添加EDC(48.0mg,0.250mmol)、1-羟基苯并三唑(33.8mg,0.250mmol)和氨(2M于iPrOH中,0.375mL,0.750mmol)。将反应混合物在室温搅拌24小时，然后添加水。将沉淀的固体滤除，用水洗涤并干燥。将固体溶解于EtOAc和水中。将有机层分离并用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。将该物质通过硅胶色谱纯化(DCM/EtOAc)。
将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,AS25X3cmID,5μm,80/20CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例2。HPLC:RT＝11.1min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝599.3[M+H+]；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.94(s,1H),7.84-7.69(m,2H),7.66-7.55(m,1H),7.35-7.17(m,2H),6.91(dd,J＝7.7,1.3Hz,1H),5.39(s,1H),4.01(s,3H),2.80-2.58(m,2H),2.57-2.40(m,1H),2.30-2.11(m,1H),1.87-1.62(m,3H),0.96-0.80(m,1H),0.74-0.61(m,1H),0.53-0.35(m,2H),0.19-0.08(m,1H),0.06-0.01(m,1H)。
实施例3
(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-5-(3-氟-5-甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例3自中间体B4和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,IC425X3cmID,5μm,85/15CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例3。HPLC:RT＝9.109min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝567[M+H+]；δ1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.77(dd,J＝7.7,1.5Hz,1H),7.37-7.24(m,2H),7.16(s,1H),7.14-7.06(m,2H),5.35(s,1H),2.78-2.67(m,1H),2.65-2.58(m,1H),2.48(d,J＝11.7Hz,1H),2.37(s,3H),2.27-2.13(m,1H),1.85-1.62(m,3H),1.33-1.21(m,1H),0.69(d,J＝7.0Hz,1H),0.51-0.36(m,2H),0.19-0.09(m,1H),0.06--0.02(m,1H)。
实施例4
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-5-(3-氟苯基)-9-甲氧基-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例4自中间体B6和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGIII,IC25X3cmID,5μm,90/10CO2/MeOH,220mL/min)，得到实施例4。HPLC:RT＝10.46min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝549.2[M+H+]；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.47-7.19(m,7H),6.93(dd,J＝7.7,1.5Hz,1H),5.36(s,1H),4.00(s,3H),2.78-2.57(m,2H),2.54-2.35(m,1H),2.31-2.11(m,1H),1.84-1.62(m,3H),1.37-1.27(m,1H),0.76-0.61(m,1H),0.50-0.34(m,2H),0.17-0.10(m,1H),0.08-0.01(m,1H)。
实施例5
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-(环丙基氧基)-5-(3-氟苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例5自中间体B7和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,RegisWhelk-OR,R25X3cmID,5μm,83/17CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例5。HPLC:RT＝10.52min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝575.29[M+H+]；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.62(dd,J＝8.1,1.1Hz,1H),7.53-7.17(m,5H),6.97(dd,J＝8.1,1.1Hz,1H),5.37(s,1H),4.00(t,J＝4.4Hz,1H),2.86-2.58(m,2H),2.58-2.10(m,2H),1.98-1.62(m,3H),1.46-1.15(m,1H),1.05-0.82(m,4H),0.81-0.59(m,1H),0.58-0.36(m,2H),0.25-0.10(m,2H)。
实施例6
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-(环丙基氧基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例6自中间体B8和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,IC,25x3cmID,5μm,82/18CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例6。HPLC:RT＝9.07min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝557.6[M+H+]；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.69-7.34(m,1H),7.24(t,J＝8.0Hz,1H),6.94(dd,J＝7.9,1.1Hz,1H),5.37(s,1H),4.10-3.86(m,1H),2.91-2.60(m,2H),2.60-2.09(m,2H),1.99-1.61(m,3H),1.57-1.19(m,2H),1.10-0.83(m,4H),0.80-0.61(m,1H),0.57-0.34(m,2H),0.22--0.05(m,2H)。
实施例7
(2R,3S)-N-((3S)-5-(4-氯苯基)-9-环丙基-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
制备例7A:9-溴-5-(4-氯苯基)-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-2(3H)-酮
向中间体A31(6.5g,20.93mmol)于DCM(70.00mL)中的搅拌溶液中一次性添加吡啶(2.031mL,25.1mmol)，然后在0℃滴加溴乙酰溴(3.64mL,41.9mmol)。将反应混合物在室温搅拌1h，然后将反应混合物用DCM(50ml)稀释并用水洗涤两次，然后用盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到粗2-溴-N-(2-溴-6-(4-氯苯甲酰基)苯基)乙酰胺。将该物质溶于2M氨于MeOH中的溶液(80.00ml,160mmol)并在室温搅拌16h。将反应混合物浓缩并将残余物通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)，得到制备例7A(2.1g,31.6％收率):HPLC:RT＝2.029min(H2O/CH3CN，含有TFA，BEHC182.5μm,2.1x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝349[M+H+]。
制备例7B:9-溴-5-(4-氯苯基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-2(3H)-酮
向制备例7A(1.5g,4.29mmol)于DMF(25.00mL)中的搅拌溶液中添加K2CO3(1.779g,12.87mmol)，然后一次性添加1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(0.873mL,6.44mmol)。将反应混合物在室温搅拌2h，然后将反应混合物用EtOAc稀释并用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗物质通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)，得到制备例7B(1.1g,54.6％收率):MS(ES):m/z＝469[M+H+]。
制备例7C:3-叠氮基-9-溴-5-(4-氯苯基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-2(3H)-酮
在-78℃历时15s向制备例7B(1.00g,2.129mmol)于THF(50.00mL)中的搅拌溶液中滴加LDA的THF溶液(2.129ml,4.26mmol)。将反应混合物在-78℃搅拌2h，然后添加2,4,6-三异丙基苯磺酰基叠氮(1.317g,4.26mmol)于THF(50.00mL)中的溶液。将反应混合物在-78℃搅拌2h，然后滴加AcOH(0.3ml,5.24mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌16h。将反应用10％NaHCO3(aq)(50ml)淬灭。将混合物用EtOAC萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗物质通过硅胶色谱纯化，得到制备例7C(0.6g,1.175mmol,55.2％收率):MS(ES):m/z＝510[M+H+]。
制备例7D:3-氨基-9-溴-5-(4-氯苯基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-2(3H)-酮
向制备例7C(0.550g,1.077mmol)于THF(5.00mL)和水(5.00mL)中的搅拌溶液中一次性添加三苯基膦(0.282g,1.077mmol)。将反应混合物在室温搅拌3h。将反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取三次，将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗物质通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)，得到制备例7D(0.480g,0.495mmol,46.0％收率):MS(ES):m/z＝484[M+H+]。
制备例7E:3-氨基-9-溴-5-(4-氯苯基)-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-2(3H)-酮
向制备例7D(0.480g,0.990mmol)于TFA(10.00mL,130mmol)中的搅拌溶液中添加苯甲醚(1.082mL,9.90mmol)，然后一次性添加三氟甲磺酸(4.40μl,0.050mmol)。将反应混合物在室温搅拌16h，然后浓缩。将固体用10％NaHCO3水溶液碱化至pH-8-9并用EtOAC萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗物质通过自EtOAC(10ml)中结晶纯化。将固体过滤并真空干燥得到制备例7E(0.170g,0.466mmol,47.1％收率):HPLC:RT＝1.680min(H2O/CH3CN，含有TFA，BEHC182.5μm,2.1x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝364[M+H+]。
制备例7F:(2S,3R)-3-((9-溴-5-(4-氯苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨甲酰基)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟己酸叔丁基酯
向制备例7E(0.120g,0.329mmol)和中间体S1(0.128g,0.395mmol)于DMF(1.2mL)中的搅拌溶液中一次性添加TBTU(0.116g,0.362mmol)，然后历时15s滴加TEA(0.138mL,0.987mmol)。将反应混合物在室温搅拌1h，然后向该反应混合物中添加水。将形成的固体搅拌10min，过滤，并真空干燥。将粗物质通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)，得到制备例7F(0.160g,72.5％收率):HPLC:RT＝3.017min(H2O/CH3CN，含有TFA，BEHC182.5μm,2.1x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝670[M+H+]。
制备例7F和制备例7G:(2S,3R)-3-((3S)-(5-(4-氯苯基)-9-环丙基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨甲酰基)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟己酸叔丁基酯和(2S,3R)-3-((3R)-(5-(4-氯苯基)-9-环丙基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨甲酰基)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟己酸叔丁基酯
将制备例7E(0.16g,0.238mmol)、环丙基硼酸(0.041g,0.477mmol)、磷酸钾(0.202g,0.954mmol)和三环己基膦(6.69mg,0.024mmol)于甲苯(0.3mL)和水(0.100mL)中的搅拌溶液脱气两次并加热至90℃。添加乙酸钯(II)(6.96mg,0.031mmol)，并将反应混合物在100℃加热3h。将反应混合物冷却至室温并用EtOAc萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗物质通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)，得到起始物质和产物的混合物。
将一部分该物质(0.09g,0.134mmol)、环丙基硼酸(0.012g,0.134mmol)、磷酸钾(0.114g,0.537mmol)、三环己基膦(3.76mg,0.013mmol)于甲苯(2.0mL)和水(0.667mL)中的搅拌溶液脱气两次并加热至90℃。添加乙酸钯(II)(3.91mg,0.017mmol)，并将反应混合物加热至100℃持续2h。将反应混合物冷却至室温并用EtOAc萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗物质通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)。
将该物质通过SFC纯化(IA,250x4.6mmID,5μm,75/25CO2/MeOH,3mL/min)，得到制备例7G(0.04g,0.063mmol,26％收率)和制备例7F(0.045g,0.071mmol,30％收率)。
制备例7F(SFC中的第二峰):HPLC:RT＝3.064min(H2O/CH3CN，含有TFA，BEHC182.5μm,2.1x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝632[M+H+]；手性HPLC:RT＝3.90min(CO2/MeOH,IA5μm,4.6x250mm,梯度＝9min,波长＝223nm)。
制备例7G(SFC中的第一峰):HPLC:RT＝3.064min(H2O/CH3CN，含有TFA，BEHC182.5μm,2.1x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝632[M+H+]；手性HPLC:RT＝2.72min(CO2/MeOH,IA5μm,4.6x250mm,梯度＝9min,波长＝223nm)。
制备例7H:(2S,3R)-3-(((3S)-5-(4-氯苯基)-9-环丙基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨甲酰基)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟己酸
向制备例7F(0.045g,0.071mmol)于DCM(0.5mL)中的搅拌溶液中一次性添加TFA(0.225ml,2.92mmol)。将反应混合物在室温搅拌2h，然后浓缩。添加水并搅拌10min，将固体过滤并真空干燥得到制备例7H(0.030g,73.2％收率):HPLC:RT＝2.582min(H2O/CH3CN，含有TFA，BEHC182.5μm,2.1x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝576[M+H+]。
实施例7
在N2下向制备例7H(30.5mg,0.053mmol)于THF(0.40mL)中的搅拌溶液中添加EDC(25.4mg,0.132mmol)、HOBt(25.9mg,0.169mmol)和氨(2M于IPA中)(0.164mL,0.328mmol)。将反应混合物搅拌3.5h，然后用10mL水稀释并过滤。将固体用水淋洗，然后真空干燥。将该物质通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)，得到实施例7(12.8mg,41.2％):HPLC:RT＝12.09min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝575.1[M+H+]；1HNMR(400MHz,MeOD)δ7.60-7.54(m,2H),7.46-7.41(m,2H),7.40-7.35(m,1H),7.25-7.14(m,2H),5.32(s,1H),2.76-2.67(m,1H),2.65-2.58(m,1H),2.56-2.42(m,1H),2.31-2.16(m,1H),2.10(tt,J＝8.4,5.5Hz,1H),1.87-1.73(m,2H),1.72-1.61(m,1H),1.36-1.20(m,2H),1.18-1.03(m,2H),0.83-0.76(m,1H),0.74-0.64(m,1H),0.50-0.36(m,2H),0.17-0.07(m,1H),0.05--0.05(m,1H)。
实施例8
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-羟基-5-(3-甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
将实施例31(50mg,0.092mmol)于DCM(10mL)中的溶液冷却至0℃。添加BBr3(1M于DCM,0.459mL,0.459mmol)。将反应混合物从冷却浴中移除并温热至室温。在1h后，将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。将水层再用乙酸乙酯萃取两次。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗物质通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,AC-H250x30mmID,5μm,85/15CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例8(18mg,36％)。HPLC:RT＝8.00min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝531[M+H+]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.29(d,J＝7.3Hz,1H),7.59(br.s.,1H),7.40(s,1H),7.34(d,J＝5.1Hz,2H),7.30-7.22(m,1H),7.15-7.02(m,2H),6.96(br.s.,1H),6.71(d,J＝7.0Hz,1H),5.19(d,J＝7.0Hz,1H),3.18(s,3H),2.75-2.64(m,2H),2.25(br.s.,1H),1.72-1.43(m,3H),1.11-0.99(m,1H),0.57(d,J＝7.0Hz,1H),0.39-0.27(m,2H),0.10--0.14(m,2H)。
实施例9
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-甲基-2-氧代-5-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例9自中间体B9和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。在通过制备型SFC色谱(仪器:BergerSFCMGII,柱:LuxCellulose225x3cm,5μm；流动相:88/12CO2/MeOH，流速:85mL/min；在220nm处检测)分离非对映异构体后，获得实施例9。HPLC:RT＝9.269min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,3.0x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝583.1[M+H+]；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.98(s,1H),7.82(d,J＝7.9Hz,1H),7.77(d,J＝7.9Hz,1H),7.67-7.60(m,1H),7.59-7.53(m,1H),7.27-7.17(m,2H),5.38(s,1H),2.80-2.71(m,1H),2.71-2.61(m,1H),2.59-2.47(m,4H),2.29-2.17(m,1H),1.90-1.65(m,3H),1.30(ddd,J＝13.5,7.5,3.4Hz,1H),0.77-0.66(m,1H),0.52-0.38(m,2H),0.19-0.09(m,1H),0.08--0.02(m,1H)。
实施例10
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-5-(3-氟苯基)-9-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例10自中间体B10和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。在通过制备型SFC色谱(仪器:BergerSFCMGII,柱:手性IC25x3cm,5μm；流动相:85/15CO2/MeOH，流速:85mL/min；在220nm处检测)分离非对映异构体后，获得实施例10。HPLC:RT＝8.688min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,3.0x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝533.1[M+H+]；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.76-7.59(m,1H),7.53(dd,J＝5.5,3.5Hz,1H),7.48-7.35(m,2H),7.32(d,J＝7.7Hz,1H),7.28-7.19(m,3H),5.34(s,1H),4.22(dd,J＝5.6,1.9Hz,1H),2.78-2.68(m,1H),2.67-2.58(m,1H),2.56-2.43(m,4H),2.28-2.16(m,1H),1.86-1.65(m,3H),1.47-1.41(m,1H),0.76-0.63(m,1H),0.50-0.40(m,2H),0.18-0.09(m,1H),0.07--0.01(m,1H)。
实施例11
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例11自中间体B11和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。在分离非对映异构体后，获得实施例11。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,手性IC250X30mmID,5μm,85/15CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例11。HPLC:RT＝7.673min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝515[M+H+]；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.62-7.56(m,2H),7.55-7.48(m,2H),7.47-7.39(m,2H),7.23-7.16(m,2H),5.35(s,1H),2.80-2.70(m,1H),2.67(dd,J＝10.7,3.4Hz,1H),2.49(s,4H),2.35-2.14(m,1H),1.91-1.65(m,3H),1.35-1.24(m,1H),0.78-0.64(m,1H),0.53-0.39(m,2H),0.14(br.s.,1H),0.05(d,J＝4.2Hz,1H)。
实施例12
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((4S)-5-(3-氟苯基)-9-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例12自中间体B12和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。在通过制备型SFC色谱(仪器:BergerSFCMGII,柱:手性OD25x3cm,5μm；流动相:85/15CO2/MeOH，流速:85mL/min；在220nm处检测)分离非对映异构体后，获得实施例12。HPLC:RT＝8.744min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,3.0x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝533.1[M+H+]；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.65-7.59(m,2H),7.51(dd,J＝5.6,3.0Hz,1H),7.24-7.11(m,4H),4.22(dd,J＝5.7,1.8Hz,1H),2.76-2.66(m,1H),2.66-2.58(m,1H),2.55-2.43(m,4H),2.22(td,J＝10.2,5.7Hz,1H),1.78(ddd,J＝15.8,11.1,4.6Hz,2H),1.73-1.68(m,1H),1.47-1.41(m,1H),0.74-0.63(m,1H),0.51-0.37(m,2H),0.16-0.08(m,1H),0.06--0.02(m,1H)。
实施例13
(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-5-(2-甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例13自中间体B13和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,手性IC25X3cmID,5mm,80/20CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例13。HPLC:RT＝10.699min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝549[M+H+]；1HNMR(500MHz,甲醇-d4)δ7.72(dd,J＝7.9,1.5Hz,1H),7.41-7.33(m,1H),7.30-7.23(m,3H),7.18(t,J＝7.9Hz,1H),7.08(dd,J＝7.9,1.5Hz,1H),5.42(s,1H),2.75-2.67(m,1H),2.66-2.59(m,1H),2.50-2.33(m,1H),2.29-2.11(m,1H),2.04(s,3H),1.87-1.71(m,2H),1.67(ddd,J＝13.7,10.8,6.4Hz,1H),1.25(ddd,J＝13.6,7.6,3.5Hz,1H),0.76-0.62(m,1H),0.50-0.36(m,2H),0.13-0.06(m,1H),0.04--0.05(m,1H)。
实施例14
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-(9-环丙基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例14自中间体B14和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。在非对映异构体分离后(制备型SFC色谱,BergerSFCMGII,OD250X21mmID,5μm,86/14CO2/MeOH,85mL/min)，获得实施例14。HPLC:RT＝11.10min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝541.2[M+H+]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.26(s,1H),9.28(d,J＝7.0Hz,1H),7.57(br.s.,1H),7.55-7.50(m,3H),7.48-7.41(m,2H),7.30-7.25(m,1H),7.19(t,J＝7.7Hz,1H),7.13-7.09(m,1H),6.96(br.s.,1H),5.18(d,J＝7.0Hz,1H),2.75-2.63(m,2H),2.27-2.11(m,2H),1.66-1.58(m,3H),1.55-1.47(m,1H),1.12-1.00(m,3H),0.79(td,J＝5.4,3.6Hz,1H),0.66(td,J＝5.5,3.7Hz,1H),0.60-0.50(m,1H),0.40-0.29(m,2H),0.07--0.02(m,1H),-0.06--0.16(m,1H)。
实施例15
(2R,3S)-N-((3S)-9-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例15自中间体B11和中间体S2根据实施例1所示的一般操作制备。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,手性IC25X3cmID,5μm,85/15CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例15。HPLC:RT＝8.414min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝[M+H+]；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.64-7.56(m,2H),7.54-7.47(m,2H),7.46-7.35(m,2H),7.20-7.14(m,2H),5.35(s,1H),2.78-2.66(m,1H),2.52(m,2H),2.47(s,3H),2.22(d,J＝11.4Hz,1H),1.89-1.70(m,2H),1.65(d,J＝8.1Hz,1H),1.51-1.19(m,3H),0.99-0.86(m,3H)。
实施例16
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-5-(4-甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
制备例16A:(2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-(((S)-9-氟-2-氧代-5-(对甲苯基)-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨甲酰基)己酸叔丁酯，和
制备例16B:(2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-(((R)-9-氟-2-氧代-5-(对甲苯基)-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨甲酰基)己酸叔丁酯
制备例16A和制备例16B根据制备例1A和制备例1B所示的一般操作自中间体B15(220mg,0.777mmol)和中间体S1(277mg,0.854mmol)制备。获得制备例16A和制备例16B(400mg,87％)的混合物。HPLC:RT＝2.228min(H2O/MeOH，含有TFA，SBC185μm,4.6x50mm,梯度＝3min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝590[M+H+]。
制备例16C:(2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-(((S)-9-氟-2-氧代-5-(对甲苯基)-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨甲酰基)己酸，和
制备例16D:(2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-(((R)-9-氟-2-氧代-5-(对甲苯基)-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨甲酰基)己酸
将制备例16A和制备例16B的混合物(400mg,0.678mmol)溶解于DCM(8mL)中并冷却至0℃。添加TFA(4mL,52mmol)，然后将反应混合物温热至室温。在4小时后，将反应混合物浓缩。添加冰水，然后将沉淀的固体滤出并用水洗涤。将固体干燥得到制备例16C和制备例16D的混合物(250mg,69％)。HPLC:RT＝0.98min(H2O/MeCN，含有TFA，AcquityBEHC-181.7μm,2.1x50mm,梯度＝2min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝534[M+H+]。
实施例16
将制备例16C和制备例16D的混合物(0.1g,0.187mmol)溶解于DMSO(1mL)中并冷却至0℃。添加氯化铵(0.080g,1.499mmol)、二异丙基乙基胺(0.098mL,0.562mmol)和PyBOP(0.161g,0.309mmol)，并将反应混合物在室温搅拌过夜。将反应混合物用水稀释，然后将固体过滤并干燥。将固体溶解于DCM(50mL)中，用水(10mL)洗涤，然后用盐水(10mL)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥并浓缩。将粗物质通过硅胶色谱纯化(氯仿/甲醇)。
在通过制备型HPLC纯化(AD-H250X4.6mm,5μm,70/30己烷/EtOH,1mL/min)后，获得实施例16。HPLC:RT＝9.342min(H2O/CH3CN，含有TFA，XBridge3.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝533[M+H+]；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.38(d,J＝4Hz,1H),7.45-7.50(m,3H),7.19-7.30(m,4H),5.41(d,J＝4Hz,1H),2.62-2.72(m,2H),2.48-2.52(m,1H),2.42(s,3H),2.21-2.26(m,1H),1.68-1.85(m,3H),1.28-1.34(m,1H),0.70-0.73(m,1H),0.43-0.49(m,2H),0.11-0.12(m,1H),0.01-0.11(m,1H)。
实施例17
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-7-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3，3，3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例17自中间体B16和中间体S1根据实施例16所示的一般操作制备。在通过制备型HPLC纯化(AD-H250X4.6mm,5μm,70/30己烷/EtOH,1mL/min)后，获得实施例17。HPLC:RT＝1.87min(H2O/MeOH，含有TFA，5μm,4.6x50mm,梯度＝2min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝533[M+H+]；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.58-7.560(m,2H),7.52-7.56(m,1H),7.44-7.47(m,2H),7.32-7.35(dd,J＝11.0,1.4Hz,1H),7.00(brs,1H),5.43(d,J＝3.6Hz,1H),2.62-2.74(m,2H),2.42-2.58(m,1H),2.36(s,3H),2.18-2.31(m,1H),1.68-1.85(m,3H),1.27-1.32(m,1H),0.71-0.74(m,1H),0.44-0.50(m,2H),0.10-0.19(m,1H),0.04-0.08(m,1H)。
实施例18
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-8-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例18自中间体B17和中间体S1根据实施例16所示的一般操作制备。在通过制备型HPLC纯化(AD-H250X4.6mm,5μm,70/30己烷/EtOH,1mL/min)后，获得实施例18。LCMS:RT＝1.72min(H2O/MeCN，含有NH4OAc，StarRP-183μm,4x55mm,梯度＝2min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝533[M+H+]；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.57-7.59(m,2H),7.51-7.55(m,1H),7.43-7.46(m,2H),7.16(t,J＝7.6Hz,1H),7.07-7.09(m,1H),5.42(s,1H),2.65-2.75(m,2H),2.45-2.55(m,1H),2.43(s,3H),2.16-2.32(m,1H),1.68-1.83(m,3H),1.27-1.30(m,1H),0.69-0.74(m,1H),0.44-0.50(m,2H),0.10-0.17(m,1H),0.03-0.09(m,1H)。
实施例19
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-5-(3-甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例19自中间体B18和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,手性IC25X3cmID,5μm,88/12CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例19。HPLC:RT＝8.608min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝533[M+H+]；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.50-7.42(m,2H),7.36-7.22(m,4H),7.20-7.14(m,1H),5.40(s,1H),2.76-2.68(m,1H),2.65(dd,J＝10.7,3.4Hz,1H),2.53-2.42(m,1H),2.37(s,3H),2.21(d,J＝10.6Hz,1H),1.84-1.64(m,3H),1.33-1.23(m,1H),0.71(s,1H),0.50-0.39(m,2H),0.16-0.10(d,J＝4.2Hz,1H),0.09-0.00(m,1H)。
实施例20
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
向实施例1(30mg,0.058mmol)和Cs2CO3(37.7mg,0.116mmol)于DMF(0.6mL)中的混合物中添加碘甲烷(6.51μl,0.104mmol)。将混合物在室温搅拌15min。添加水并通过过滤收集所得固体，用水淋洗并干燥得到实施例20(25mg,81％)。HPLC:RT＝2.735min(SpeedROD柱4.6x50mm,历时4min10-90％含有0.1％TFA的甲醇水溶液，4mL/min,在220nm处监测)；MS(ES):m/z＝533[M+H]+；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.71-7.65(m,2H),7.59-7.38(m,5H),7.22(d,J＝7.7Hz,1H),5.45(s,1H),3.40(d,J＝4.0Hz,3H),2.78-2.68(m,1H),2.68-2.59(m,1H),2.58-2.41(m,1H),2.33-2.15(m,1H),1.89-1.64(m,3H),1.26(ddd,J＝13.6,7.6,3.4Hz,1H),0.77-0.64(m,1H),0.52-0.39(m,2H),0.17-0.10(m,1H),0.07--0.01(m,1H)。
实施例21
(2R,3S)-N-((3S)-5-(4-氯苯基)-9-甲氧基-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例21自中间体B19和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。在通过制备型SFC色谱(仪器:BergerSFCMGII,柱:手性IA25x2cm,5μm；流动相:85/15CO2/MeOH，流速:60mL/min；在220nm处检测)分离非对映异构体后，获得实施例21。HPLC:RT＝4.121min(H2O/MeOH，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝565[M+H+]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.08(s,1H),9.34(d,J＝7.0Hz,1H),7.64-7.48(m,5H),7.35-7.28(m,1H),7.27-7.18(m,1H),6.95(br.s.,1H),6.91-6.84(m,1H),5.17(d,J＝6.8Hz,1H),3.92(s,3H),2.75-2.60(m,2H),2.57-2.53(m,1H),2.30-2.14(m,1H),1.67-1.56(m,2H),1.56-1.43(m,1H),1.09-0.96(m,1H),0.64-0.46(m,1H),0.39-0.25(m,2H),0.00(dd,J＝7.6,3.0Hz,1H),-0.07--0.18(m,1H)。
实施例22
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-5-(3-甲氧基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例22自中间体B20和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。在通过制备型SFC色谱(仪器:BergerSFCMGII,柱:手性OD-H25x3cm,5μm；流动相:80/20CO2/MeOH，流速:85mL/min；在220nm处检测)分离非对映异构体后，获得实施例22。HPLC:RT＝3.806min(SunFireC18,5.0um,4.6mmx50mm,10-90％含有0.2％H3PO4的甲醇水溶液,4min梯度,在220nm处监测)。MS(ES):m/z＝549.4[M+H+]；1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ7.61-7.51(m,1H),7.35(s,1H),7.29(d,J＝8.1Hz,1H),7.20(s,2H),7.10(s,1H),7.03(dd,J＝8.4,2.6Hz,2H),5.85(br.s.,1H),5.63(br.s.,1H),5.56(d,J＝7.7Hz,1H),3.82(s,3H),2.72(s,1H),2.59(s,1H),2.37-2.08(m,2H),2.00-1.90(m,1H),1.88-1.75(m,2H),1.50-1.39(m,1H),0.80-0.67(m,1H),0.55-0.38(m,2H),0.25-0.17(m,1H),0.13-0.04(m,1H)。
实施例23
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-5-(3-氟苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例23自中间体B21和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,IC250X30mmID,5μm,86/14CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例23。HPLC:RT＝2.630min(H2O/CH3CN，含有TFA，SpeedROD,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝537[M+H+]；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.54-7.37(m,3H),7.37-7.25(m,3H),7.25-7.20(m,1H),5.44(s,1H),2.79-2.61(m,2H),2.59-2.41(m,1H),2.33-2.14(m,1H),1.90-1.65(m,3H),1.31(ddd,J＝13.6,7.5,3.5Hz,1H),0.78-0.65(m,1H),0.53-0.40(m,2H),0.19-0.11(m,1H),0.09-0.01(m,1H)。
实施例24
(2R,3S)-N-((3S)-5-(3-氯苯基)-9-氟-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例24自中间体B22和中间体S1根据实施例16所示的一般操作制备。在通过制备型HPLC纯化(IA250X4.6mm,5μm,90/10己烷/EtOH,1mL/min)后，获得实施例24。HPLC:RT＝1.929min(H2O/MeOH，含有TFA，SBC185μm,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝553[M+H+]；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.68-7.68(m,1H),7.48-7.57(m,2H),7.43-7.44(m,2H),7.31(m,1H),7.22(d,J＝8.00Hz,1H),5.44(s,1H),2.65-2.74(m,2H),2.45-2.55(m,1H),2.20-2.29(m,1H),1.68-1.85(m,3H),1.28-1.28(m,1H),0.71-0.74(m,1H),0.44-0.50(m,2H),0.12-0.18(m,1H),0.04-0.07(m,1H)。
实施例25
(2R,3S)-N-((3S)-5-(4-氯苯基)-9-甲氧基-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例25自中间体B19和中间体S2根据实施例1所示的一般操作制备。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,AS-H250x30mmID,5μm,88/12CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例25。HPLC:RT＝9.13min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝553[M+H+]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.09(s,1H),9.40(d,J＝7.3Hz,1H),7.56(d,J＝2.6Hz,4H),7.37-7.31(m,1H),7.30-7.17(m,2H),6.97-6.85(m,2H),5.21(d,J＝7.0Hz,1H),4.04-3.82(m,3H),2.74-2.61(m,2H),2.44-2.35(m,1H),2.24(br.s.,1H),1.68-1.42(m,3H),1.31-1.07(m,3H),0.81(t,J＝6.9Hz,3H)。
实施例26
(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-5-(3-氯苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例26自中间体B23和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,AS-H250x30mmID,5μm,82/18CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例26。HPLC:RT＝2.05min(H2O/MeOH，含有TFA，SunFireC182.5μm,2.1x30mm,梯度＝3min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝569[M+H+]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.65(br.s.,1H),7.60(br.s.,1H),7.50(t,J＝7.6Hz,1H),7.40(d,J＝7.0Hz,2H),7.33(br.s.,1H),7.10(d,J＝6.2Hz,1H),6.97(br.s.,1H),2.64-2.54(m,2H),2.25(d,J＝11.7Hz,1H),1.70-1.57(m,2H),1.54(br.s.,1H),1.25(s,1H),1.09(br.s.,1H),0.58(d,J＝6.6Hz,1H),0.41-0.27(m,2H),0.02(t,J＝9.1Hz,1H),-0.09(d,J＝4.6Hz,1H)。
实施例27
(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-5-(4-氯苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例27自中间体B2和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,AS-H250x30mmID,5μm,88/12CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例27。HPLC:RT＝9.33min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝569[M+H+]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.49(br.s.,1H),9.37(br.s.,1H),7.83(br.s.,1H),7.68-7.49(m,4H),7.32(br.s.,1H),6.97(br.s.,1H),5.20(br.s.,1H),2.79-2.57(m,2H),2.36-2.29(m,1H),2.25(br.s.,1H),1.71-1.57(m,2H),1.57-1.41(m,1H),1.06(br.s.,1H),0.57(br.s.,1H),0.43-0.24(m,2H),0.12--0.05(m,1H),-0.05--0.22(m,1H)。
实施例28
(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-5-(4-氯苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例28自中间体B2和中间体S2根据实施例1所示的一般操作制备。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,AS-H250x30mmID,5μm,82/18CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例28。HPLC:RT＝9.27min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝557[M+H+]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.42(br.s.,1H),7.85(d,J＝6.8Hz,1H),7.64-7.49(m,4H),7.34(br.s.,1H),6.95(s,1H),5.24(br.s.,1H),2.79-2.64(m,2H),2.45-2.29(m,2H),2.24(br.s.,1H),1.68-1.55(m,1H),1.47(d,J＝8.8Hz,1H),1.24(br.s.,2H),1.21-1.03(m,1H),0.82(t,J＝6.9Hz,2H)。
实施例29
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-8-甲氧基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例29自中间体B24和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,手性IC25X3cmID,5μm,83/17CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例29。HPLC:RT＝8.524min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,3.0x150mm,梯度＝15min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝519[M+H+]；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.60-7.54(m,2H),7.50(d,J＝7.5Hz,1H),7.45-7.38(m,2H),7.17-7.10(m,1H),7.08-7.01(m,1H),5.42(s,1H),3.99(s,3H),2.78-2.67(m,1H),2.65(dd,J＝10.5,3.4Hz,1H),2.55-2.41(m,1H),2.28-2.13(m,1H),1.90-1.62(m,3H),1.33-1.22(m,1H),0.70(br.s.,1H),0.51-0.38(m,2H),0.19-0.10(m,1H),0.08--0.02(m,1H)。
实施例30
(3R,3S)-N-((3S)-9-氯-5-(2-甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例30自中间体B25和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,LuxCellulose-4-250X30mmID,5μm,83/17CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例30。HPLC:RT＝2.03min(H2O/MeOH，含有TFA，SunFireC183.5μm,2.1x30mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝549[M+H+]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.46(br.s.,1H),9.34(br.s.,1H),7.83(t,J＝4.5Hz,1H),7.60(br.s.,1H),7.45-7.21(m,6H),6.97(br.s.,1H),5.19(d,J＝5.7Hz,1H),2.75-2.61(m,2H),2.47(d,J＝3.5Hz,1H),2.39-2.31(m,3H),2.30-2.18(m,1H),1.70-1.48(m,3H),1.07(ddd,J＝13.3,7.5,3.4Hz,1H),0.64-0.53(m,1H),0.41-0.29(m,2H),0.07--0.02(m,1H),-0.05--0.14(m,1H)。
实施例31
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-甲氧基-5-(3-甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例31自中间体B26和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,AS-H250x30mmID,5μm,80/20CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例31。HPLC:RT＝8.81min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝545[M+H+]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.04(s,1H),9.32(d,J＝7.0Hz,1H),7.59(br.s.,1H),7.39(s,1H),7.37-7.22(m,6H),6.96(br.s.,1H),6.87(dd,J＝7.9,1.1Hz,1H),5.18(d,J＝7.3Hz,1H),3.93(s,3H),2.75-2.60(m,2H),2.35(s,3H),2.30-2.15(m,1H),1.71-1.46(m,3H),1.05(ddd,J＝13.3,7.4,3.1Hz,1H),0.67-0.50(m,1H),0.42-0.24(m,2H),0.08--0.02(m,1H),-0.05--0.16(m,1H)。
实施例32
(2R,3S)-N-((3S)-9-氰基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
制备例32A:((2S,3R)-3-((9-溴-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨甲酰基)-6,6,6-三氟-2-丙基己酸叔丁酯
向中间体B27(412.9mg,0.839mmol)、中间体S2(279.2mg,0.894mmol)和TBTU(294.5mg,0.917mmol)于DMF(3.4mL)中的搅拌溶液中添加三乙胺(0.47mL,3.37mmol)。将反应混合物搅拌过夜，然后添加水。通过过滤收集沉淀，用水洗涤，并空气干燥得到制备例32A(456mg,87％收率)):HPLCRT＝2.292min(MeOH/H2O，含有TFA，WatersSunFireC182.1x30mm,2min梯度,波长＝254nm)；MS(ES):m/z＝624[M+H]+。
制备例32B:((2S,3R)-3-((9-溴-2-氧代-5-苯基-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨甲酰基)-6,6,6-三氟-2-丙基己酸叔丁酯
向制备例32A(242.8mg,0.389mmol)于DMF(4mL)中的搅拌溶液中添加Cs2CO3(638.3mg,1.959mmol)、2-(三甲基硅烷基)乙氧基甲基氯(0.21mL,1.184mmol)和四丁基碘化铵(21.4mg,0.058mmol)。将反应混合物搅拌过夜，然后用EtOAc稀释，用10％LiCl洗涤三次，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化(庚烷/EtOAc)，得到制备例32B(214.7mg,73.2％收率):LCMS:RT＝2.542min(MeOH/H2O，含有TFA，WatersSunFireC182.1x30mm,2min梯度,波长＝254nm)；MS(ES):m/z＝754[M+H]+。
制备例32C:((2S,3R)-3-((9-氰基-2-氧代-5-苯基-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨甲酰基)-6,6,6-三氟-2-丙基己酸叔丁酯
将制备例32B(214.7mg,0.284mmol)、氰化锌(36.7mg,0.313mmol)和锌(18.60mg,0.284mmol)于DMA(22mL)中的悬浮液冰冻/抽真空/融解除气三次。添加二(三丁基膦)钯(0)(29.1mg,0.057mmol)，将烧瓶用氮气排气两次，然后将混合物在搅拌下加热至100℃过夜。将反应混合物冷却至室温并过滤。将滤液用EtOAc稀释，用10％LiCl洗涤三次，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化(庚烷/EtOAc)，得到制备例32C(110.9mg,55.6％收率):HPLCRT＝2.408min(MeOH/H2O，含有TFA，WatersSunFireC182.1x30mm,2min梯度,波长＝254nm)；MS(ES):m/z＝701[M+H]+；1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ7.94(1H,dd,J＝7.7,1.3Hz),7.59-7.67(3H,m),7.38-7.55(5H,m),5.89(1H,d,J＝11.0Hz),5.57(1H,dd,J＝8.1,3.7Hz),5.41(1H,d,J＝11.2Hz),3.16-3.31(2H,m),2.52-2.68(2H,m),2.09-2.48(2H,m),1.89-2.06(1H,m),1.57-1.87(3H,m),1.50(9H,d,J＝2.9Hz),1.22-1.48(3H,m),0.87-1.00(3H,m),0.68(1H,ddd,J＝13.5,10.9,6.4Hz),0.40-0.51(1H,m),-0.30(9H,d,J＝0.4Hz)。
制备例32D:((2S,3R)-3-((9-氰基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨甲酰基)-6,6,6-三氟-2-丙基己酸
在N2下向制备例32C(110mg,0.157mmol)于DCM(2mL)中的搅拌溶液中添加TFA(2mL,26.0mmol)。在60min后，将反应混合物用甲苯稀释，浓缩，并真空干燥过夜。将残余物通过硅胶色谱纯化(DCM/EtOAc)，得到制备例32D(67.0mg,83％收率):HPLCRT＝1.877min(MeOH/H2O，含有TFA，WatersSunFireC182.1x30mm,2min梯度,波长＝254nm)；MS(ES):m/z＝515[M+H]+。
实施例32
向制备例32D(70.7mg,1.322mmol)、氯化铵(70.7mg,1.322mmol)、EDC(84.1mg,0.439mmol)和HOBt(58.1mg,0.379mmol)于DMF(1.0mL)中的搅拌溶液中添加三乙胺(0.27mL,1.937mmol)。将反应混合物搅拌过夜，然后添加水。将水相用EtOAc萃取，将合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将物质通过制备型HPLC纯化(Luna5μmC18(30x100mm),H2O/MeOHw/0.1％TFA,20min梯度,35-50％B,220nm)。将含有产物的级份在中浓缩，然后用DCM稀释，用饱和NaHCO3洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将固体溶解于MeCN中，用水稀释，冰冻，并冻干得到实施例32(13.8mg,0.026mmol,20％):HPLC:RT＝1.745min(MeOH/H2O/0.1％TFA,WatersSunFireC182.1x30mm,2min梯度,波长＝254nm)；MS(ES):m/z＝514[M+H+]；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.04(1H,dd,J＝7.7,1.3Hz),7.66(1H,dd,J＝8.0,1.4Hz),7.56-7.61(2H,m),7.49-7.56(1H,m),7.38-7.48(3H,m),5.43(1H,s),2.73(1H,td,J＝10.5,3.7Hz),2.42-2.59(2H,m),2.14-2.34(1H,m),1.56-1.90(3H,m),1.19-1.52(4H,m),0.92(3H,t,J＝7.0Hz)。
实施例33
(2R,3S)-N-((3S)-9-甲氧基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-((1-甲基环丙基)甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例33自中间体B28和中间体S3根据实施例1所示的一般操作制备。HPLC:RT＝9.173min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝545[M+H+]；1HNMR(500MHz,DMS-d6)δ10.05(s,1H),9.31(d,J＝7.2Hz,1H),7.64(br.s.,1H),7.56-7.50(m,3H),7.49-7.43(m,2H),7.34-7.29(m,1H),7.24(t,J＝8.0Hz,1H),6.94(br.s.,1H),6.87(dd,J＝7.8,1.1Hz,1H),5.20(d,J＝7.2Hz,1H),3.93(s,3H),2.59(d,J＝7.8Hz,2H),2.29-2.16(m,1H),1.61(d,J＝6.7Hz,2H),1.47(d,J＝13.6Hz,1H),1.28-1.19(m,1H),0.96(s,3H),0.37-0.30(m,1H),0.18-0.06(m,3H)。
实施例34
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-8,9-二氯-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例34自中间体B29和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,LuxCellulose-425X3cmID,5μm,83/17CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例34。HPLC:RT＝2.080min(H2O/MeOH，含有TFA，SunFireC183.5μm,2.1x30mm,梯度＝2min,波长＝254nm)；MS(ES):m/z＝569[M+H+]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.63(1H,br.s.),9.33(1H,br.s.),7.51-7.63(5H,m),7.43-7.51(2H,m),7.29(1H,d,J＝8.6Hz),6.96(1H,br.s.),5.24(1H,br.s.),2.67-2.76(1H,m),2.16-2.31(1H,m),1.58-1.66(2H,m),1.53(1H,ddd,J＝13.3,10.6,6.3Hz),1.07(1H,ddd,J＝13.1,7.4,3.2Hz),0.51-0.64(1H,m),0.27-0.40(2H,m),-0.03-0.05(1H,m),-0.15--0.07(1H,m)。
实施例35
(2R,3S)-N-((3S)-2-氧代-5-苯基-9-(三氟甲基)-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例35自中间体B30和中间体S2根据实施例1所示的一般操作制备。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,IC250x30mmID,5μm,85/15CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例35。HPLC:RT＝8.848min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝557.1[M+H+]；1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ7.91(s,2H),7.60(t,J＝8.3Hz,2H),7.56-7.46(m,3H),7.45-7.31(m,3H),5.80(br.s.,1H),5.60(d,J＝7.9Hz,1H),5.57(br.s.,1H),2.70(td,J＝9.9,3.7Hz,1H),2.50(td,J＝9.9,3.7Hz,1H),2.32-2.08(m,2H),2.00-1.87(m,1H),1.87-1.75(m,2H),1.72-1.62(m,1H),1.54-1.42(m,1H),1.39-1.29(m,1H),0.98(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例36
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-2-氧代-5-苯基-9-(三氟甲基)-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例36自中间体B30和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,IC250X30mmID,5μm,88/12CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例36。HPLC:RT＝3.391min(H2O/MeOH，含有H3PO4，SunFireC183.5μm,4.6x50mm,梯度＝15min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝569[M+H+]；1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ7.97(br.s.,1H),7.91(d,J＝7.0Hz,1H),7.67-7.58(m,2H),7.54-7.46(m,3H),7.45-7.32(m,3H),5.86(br.s.,1H),5.67(br.s.,1H),5.57(d,J＝7.9Hz,1H),2.74(td,J＝9.8,3.6Hz,1H),2.59(td,J＝10.0,3.5Hz,1H),2.30-2.09(m,2H),2.01-1.76(m,3H),1.47(ddd,J＝13.6,7.9,3.5Hz,1H),0.82-0.72(m,1H),0.57-0.42(m,2H),0.27-0.18(m,1H),0.13(dt,J＝8.6,4.4Hz,1H)。
实施例37
(2R,3S)-N-((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例37自中间体B1和中间体S2根据实施例1所示的一般操作制备。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,手性IC250X30mmID,5μm,82/18CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例37。HPLC:RT＝7.635min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝507[M+H+]；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.58-7.64(2H,m),7.41-7.57(4H,m),7.29(1H,td,J＝8.09,4.95Hz),7.18-7.24(1H,m),5.46(1H,s),2.75(1H,td,J＝10.51,3.85Hz),2.43-2.59(2H,m),2.15-2.33(1H,m),1.59-1.93(3H,m),1.19-1.55(5H,m),0.91-1.00(3H,m)。
实施例38
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-甲氧基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例38自中间体B28和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。在通过制备型HPLC(YMCODS-A5μm30x250mm,10-90％含有0.1％TFA甲醇溶液,25mL/min,40min梯度,在254nm处监测)分离非对映异构体后，获得实施例38。HPLC:RT＝3.846min(H2O/MeOH，含有H3PO4，SunFireC185μm,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝531[M+H+]；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.52-7.58(2H,m),7.46-7.52(1H,m),7.37-7.44(2H,m),7.25-7.29(1H,m),7.22(1H,t,J＝8.03Hz),6.91(1H,dd,J＝7.81,1.43Hz),5.36(1H,s),4.00(3H,s),2.68-2.76(1H,m),2.59-2.67(1H,m),2.37-2.54(1H,m),2.13-2.31(2H,m),1.64-1.88(3H,m),1.26-1.33(1H,m),0.63-0.77(1H,m),0.36-0.52(2H,m),0.11-0.18(1H,m),-0.01-0.08(1H,m)。
实施例39
(2R,3S)-N-((3S)-8-溴-9-甲氧基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例39自中间体B31和中间体S2根据实施例1所示的一般操作制备。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,手性IC250X30mmID,5μm,85/15CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例39。HPLC:RT＝9.299min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝597.4[M+H+]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm10.54(1H,br.s.),9.31(1H,br.s.),7.49-7.60(4H,m),7.46(3H,t,J＝7.26Hz),6.99(1H,d,J＝8.36Hz),6.94(1H,br.s.),5.20(1H,br.s.),3.86(3H,s),2.56-2.77(2H,m),2.40(1H,t,J＝9.90Hz),2.16-2.35(1H,m),1.55-1.69(2H,m),1.41-1.54(1H,m),1.04-1.32(3H,m),0.82(3H,t,J＝6.93Hz)。
实施例40
(2R,3S)-N-((3S)-9-甲氧基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例40自中间体B28和中间体S2根据实施例1所示的一般操作制备。将非对映异构体通过硅胶色谱(己烷/EtOAc)分离得到实施例40。HPLC:RT＝8.6min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝519.3[M+H+]；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.61-7.55(m,2H),7.52-7.47(m,1H),7.46-7.36(m,2H),7.32-7.18(m,2H),6.92(dd,J＝7.8,1.4Hz,1H),5.39(s,1H),4.01(s,3H),2.73(td,J＝10.5,3.9Hz,1H),2.56-2.36(m,2H),2.22(d,J＝11.4Hz,1H),1.87-1.71(m,2H),1.71-1.59(m,1H),1.54-1.35(m,2H),1.35-1.20(m,1H),0.99-0.88(m,3H)。
实施例41
(2R,3S)-N-((3S)-9-羟基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
在室温向实施例40(100mg,0.193mmol)于DCM(3mL)中的溶液中缓慢添加1MBBr3的DCM溶液(0.579mL,0.579mmol)。将反应混合物在室温搅拌3h，然后添加MeOH并搅拌30min。将反应混合物浓缩并再将该过程重复两次。将反应混合物用EtOAc和饱和NaHCO3水溶液稀释。分离各层并将有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到粗物质。将粗物质通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)。然后将该物质经制备型HPLC纯化(H2O/MeOH，含有TFA，WatersXbridgeC1819x100mm,梯度＝12min,波长＝220nm,RT＝8.656min)。在浓缩后，获得实施例41(28mg,30.8％收率)，为浅黄色固体；HPLC:RT＝7.55min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝505.3[M+H+]；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.60-7.54(m,2H),7.49(t,J＝7.4Hz,1H),7.40(t,J＝7.5Hz,2H),7.14-7.04(m,2H),6.81(dd,J＝7.2,2.1Hz,1H),5.41(s,1H),2.72(td,J＝10.5,4.0Hz,1H),2.57-2.37(m,2H),2.30-2.10(m,1H),1.87-1.59(m,3H),1.54-1.34(m,2H),1.34-1.20(m,1H),0.98-0.87(m,3H)。
实施例42
(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例42自中间体B32和中间体S1根据实施例1所示的一般操作制备。将该固体通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFCMGII,IC25X2.1cmID,5μm,85/15CO2/MeOH,45mL/min)，得到实施例42。HPLC:RT＝0.88min(H2O/CH3CN，含有TFA，BEHC181.7μm,2.1x50mm,梯度＝2min,波长＝254nm)；MS(ES):m/z＝535[M+H+]；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.68-7.84(1H,m),7.50-7.66(3H,m),7.38-7.51(2H,m),7.22-7.40(2H,m),5.28-5.46(1H,m),2.60-2.82(2H,m),2.42-2.61(1H,m),2.09-2.35(1H,m),1.63-1.96(3H,m),1.21-1.38(1H,m),0.63-0.81(1H,m),0.36-0.56(2H,m),0.10-0.22(1H,m),-0.10-0.11(1H,m)。
实施例43
(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例43自中间体B32和中间体S2根据实施例1所示的一般操作制备。将非对映异构体分离(制备型SFC色谱,BergerSFCMGII,LuxCel2250x30mmID,5μm,80/20CO2/MeOH,85mL/min)，得到实施例43。HPLC:RT＝8.95min(H2O/CH3CN，含有TFA，SunFireC183.5μm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES):m/z＝523[M+H+]；1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ8.02(s,1H),7.69(dd,J＝7.9,1.5Hz,1H),7.57-7.46(m,4H),7.44-7.38(m,2H),7.34(dd,J＝7.9,1.3Hz,1H),7.24-7.16(m,1H),5.84(br.s.,1H),5.57(d,J＝7.9Hz,1H),5.53(br.s.,1H),2.67(td,J＝9.8,3.7Hz,1H),2.53(td,J＝9.8,3.6Hz,1H),2.34-2.12(m,2H),2.01-1.91(m,1H),1.88-1.71(m,2H),1.69-1.58(m,1H),1.54-1.44(m,1H),1.41-1.28(m,1H),0.98(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例44
(4-(膦酰基氧基)苯基)乙酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯
制备例44A:(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N1-((S)-9-氟-1-(甲硫基甲基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
在氮气下向于DMF(2.00mL)中的实施例1和制备例1C的1:1混合物(100mg,0.193mmol)中添加Cs2CO3(170mg,0.521mmol)和(氯甲基)(甲基)硫烷(46.6mg,0.919mmol)。将该混合物在室温搅拌55min，然后用水稀释。将水层用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，然后经无水硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩，得到制备例44A(56.4mg,51％):HPLC:RT＝3.825min(H2O/MeOH，含有TFA，ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝579[M+H+]。
制备例44B:2-(4-(二叔丁氧基磷酰基氧基)苯基)乙酸甲酯
向2-(4-羟基苯基)乙酸甲酯(1.80g,10.83mmol)于乙腈(35mL)中的搅拌溶液中添加1H-四唑(3％1H-四唑于MeCN中,65.0mL,22.1mmol)，然后添加二乙基亚磷酰胺二叔丁酯(di-tert-butyldiethylphosphoramidite)(5.91g,23.70mmol)。将反应混合物在室温搅拌35min并浓缩，得到固体。在50mLDCM中向该固体添加30％H2O2(30mL)。将所得混合物在室温搅拌30min并用DCM稀释。将有机相分离，连续地用水、饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤，然后浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)，得到制备例44B(3.94g,100％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.25-7.14(m,4H),3.69(s,3H),3.59(s,2H),1.51(s,18H)。
制备例44C:2-(4-(二-叔丁氧基磷酰基氧基)苯基)乙酸
向制备例44B(0.635g,1.772mmol)于THF(12.0mL)和水(3.00mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(0.122g,2.14mmol)。将反应混合物在室温搅拌2h。将混合物浓缩以除去有机物并用10mLpH4磷酸盐溶液稀释。通过pH试纸检测，水相pH为6-7。将所得混合物用EtOAc萃取。将合并的EtOAc萃取物用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到制备例44C(0.462g,76％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.30(br.s.,1H),7.25(d,J＝8.4Hz,2H),7.13-7.03(m,2H),3.55(s,2H),1.44(s,1H)。
制备例44D:2-(4-(二-叔丁氧基磷酰基氧基)-2-氟苯基)乙酸((S)-3-((R)-2-((S)-1-氨基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酰氨基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-1-基)甲基酯
在氮气下向制备例44A(156mg,0.270mmol)和三乙胺盐酸盐(74.2mg,0.539mmol)于DCM(2.40mL)中的搅拌溶液中添加硫酰氯(0.033mL,0.404mmol)。将混合物在室温搅拌15min并浓缩至干得到黄色固体。在室温在氮气下将制备例44C(187mg,0.543mmol)和Cs2CO3(372mg,1.141mmol)在DMF(1.00mL)中合并。向该混合物中添加上述黄色固体于DMF(2.00mL)中的溶液。将所得混合物在室温搅拌70min，然后用水和EtOAc稀释。分离各层并将有机层连续地用10％LiCl溶液和盐水洗涤。将有机层用无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将粗物质通过快速色谱纯化(TeledyneISCOCombiFlash0％至100％溶剂A/B＝己烷/EtOAc,SiO240g,在254nM处检测,并在220nM处监测)。适当级份的浓缩，得到两种非对映异构体的混合物(143mg)。然后将这些非对映异构体通过制备型SFC色谱分离(BergerSFCMGII,RegisWhelk-OR,R25X3cmID,5μm,80/20CO2/MeOH,85mL/min)。将含有产物的级份浓缩，真空干燥过夜得到制备例44D(45.2mg,19.0％)，为无色固体:手性HPLC:RT＝12.519min,BergerSFC,RegisWhelk-OR,R250x4.6mmID,5μm,80/20CO2/MeOH,2.0mL/min；HPLC:RT＝3.680min(H2O/MeOH，含有TFA，ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝875[M+H+]。
实施例44
在0℃向制备例44D(28.6mg,0.033mmol)于DCM(1.00mL)中的搅拌溶液中添加TFA(0.10mL,1.30mmol)。在0℃将反应混合物搅拌15min，然后在室温搅拌20min。将混合物减压浓缩，得到实施例44(24.2mg,92％)。HPLC:RT＝2.760min(H2O/MeOH，含有TFA，ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝763[M+H+]；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.63-7.49(m,4H),7.48-7.37(m,3H),7.15(d,J＝7.7Hz,1H),7.01-6.91(m,2H),6.87-6.82(m,2H),6.07(d,J＝10.3Hz,1H),5.68(d,J＝10.3Hz,1H),5.46(s,1H),3.41-3.32(m,2H),2.78-2.67(m,1H),2.61(td,J＝10.7,3.4Hz,1H),2.54-2.38(m,1H),2.29-2.13(m,1H),1.84-1.72(m,2H),1.70-1.60(m,1H),1.23-1.15(m,1H),0.76-0.62(m,1H),0.51-0.33(m,2H),0.15-0.06(m,1H),0.05--0.04(m,1H)。
实施例45
二氢磷酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯
制备例45A:磷酸((S)-3-((R)-2-((S)-1-氨基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酰氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-1-基)甲基·二叔丁基酯
在氮气下向制备例44A(174mg,0.301mmol)和三乙胺盐酸盐(83.0mg,0.601mmol)于DCM(3.00mL)中的搅拌溶液中添加硫酰氯(0.037mL,0.451mmol)。将混合物在室温搅拌50min并浓缩至干得到黄色固体。在室温在氮气下将该黄色固体磷酸二叔丁酯四丁基铵盐(325mg,0.719mmol)和碘化钠(43.1mg,0.287mmol)在THF(5.00mL)中合并。将混合物在65℃加热21h并冷却至室温，然后用EtOAc稀释并连续地用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤。将有机层用无水MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)。将所得的两种非对映异构体的混合物通过制备型SFC色谱分离(BergerSFCMGII,ChiralIC25x3cmID,5μm,85/15CO2/MeOH,85mL/min)。将含有产物的级份浓缩，真空干燥过夜得到制备例45A(59.0mg,27.7％)，为无色固体:手性SFC:RT＝3.478min,手性IC250x4.6mmID,5μm,80/20CO2/MeOH,2.0mL/min；HPLC:RT＝3.443min(H2O/MeOH，含有TFA，ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝741[M+H+]。
实施例45
将制备例45A(53.0mg,0.072mmol)在2打兰玻璃瓶中在冰浴中溶解于DCM(4.50mL)。通过该2打兰小瓶的一侧添加TFA(0.45mL,5.84mmol)。将该混合物在0℃搅拌105min，用30mLDCM稀释并浓缩，得到实施例45(42.2mg,92％):HPLC:RT＝2.432min(H2O/MeOH，含有TFA，ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝629[M+H+]；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.73-7.66(m,2H),7.57-7.49(m,2H),7.47-7.38(m,3H),7.17(d,J＝7.7Hz,1H),6.18(t,J＝9.8Hz,1H),5.48(s,1H),5.42(dd,J＝9.8,8.3Hz,1H),3.27-3.24(m,1H),2.75-2.66(m,1H),2.65-2.56(m,1H),2.55-2.38(m,1H),2.29-2.12(m,1H),1.86-1.71(m,2H),1.66(ddd,J＝13.5,10.7,6.4Hz,1H),1.22(ddd,J＝13.6,7.7,3.3Hz,1H),0.74-0.62(m,1H),0.50-0.35(m,2H),0.17-0.06(m,1H)。
实施例46
3-((膦酰基氧基)甲基)苯甲酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-1-氨基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯
制备例46A:3-((二-叔丁氧基磷酰基氧基)甲基)苯甲酸甲基酯
向3-(溴甲基)苯甲酸甲酯(1.08g,4.71mmol)于DMF(20mL)中的搅拌混合物中添加磷酸二叔丁酯四丁基铵盐(2.34g,5.19mmol)。将混合物在室温搅拌1.5h，然后用醚稀释并连续地用10％LiCl溶液和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将粗物质通过快速色谱纯化(TeledyneISCOCombiFlash0％至100％溶剂A/B＝己烷/EtOAc,SiO240g,在254nM处检测,并在220nM处监测)。适当的级份的浓缩，得到制备例46A(1.38g,82％):HPLC:RT＝3.163min(H2O/MeOH，含有TFA，ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝359[M+H+]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.01(s,1H),7.94-7.89(m,1H),7.66(d,J＝7.9Hz,1H),7.58-7.48(m,1H),5.01(d,J＝8.4Hz,2H),3.86(s,3H),1.41(s,18H)。
制备例46B:3-((二-叔丁氧基磷酰基氧基)甲基)苯甲酸
制备例46B根据制备例44C所示的一般操作自制备例46A(425mg,1.186mmol)制备。获得制备例46B(380mg,93％)。HPLC:RT＝2.853min(H2O/MeOH，含有TFA，ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝345[M+H+]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.99(br.s.,1H),7.98(d,J＝1.5Hz,1H),7.90(dt,J＝7.7,1.4Hz,1H),7.62(d,J＝8.1Hz,1H),7.55-7.47(m,1H),5.00(d,J＝8.4Hz,2H),1.41(s,18H)。
制备例46C:3-((二-叔丁氧基磷酰基氧基)甲基)苯甲酸((S)-3-((R)-2-((S)-1-氨基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酰氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-1-基)甲基酯
制备例46C根据制备例44D所示的一般操作自制备例46B(115mg,0.203mmol)和制备例44A(116mg,0.200mmol)制备。获得两种非对映异构体的混合物，其通过制备型SFC色谱分离(BergerSFCMGII,RegisWhelk-OR,R25x3cmID,5μm,80/20CO2/MeOH,85mL/min)。将含有所需产物的级份浓缩，真空干燥过夜得到制备例46C(59.0mg,27.7％)，为无色固体:手性SFC:RT＝12.331min,RegisWhelk-OR,R250x4.6mmID,5μm,80/20CO2/MeOH,2.0mL/min；HPLC:RT＝3.67min(H2O/MeOH，含有TFA，ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝875[M+H+]。
实施例46
实施例46根据实施例44所示的一般操作自制备例46C(47.0mg,0.054mmol)制备。获得实施例46(39.7mg,95％)。HPLC:RT＝2.898min(H2O/MeOH，含有TFA，ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝763[M+H+]；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.70(s,1H),7.65-7.51(m,3H),7.49-7.37(m,4H),7.26(q,J＝7.7Hz,3H),7.14(d,J＝7.9Hz,1H),6.35(d,J＝10.3Hz,1H),5.98(d,J＝10.6Hz,1H),5.53(s,1H),4.89-4.85(m,2H),3.35(d,J＝1.8Hz,1H),2.76-2.67(m,1H),2.65-2.57(m,1H),2.55-2.40(m,1H),2.30-2.15(m,1H),1.87-1.72(m,2H),1.66(ddd,J＝13.6,10.7,6.7Hz,1H),1.21(ddd,J＝13.6,7.6,3.4Hz,1H),0.72-0.61(m,1H),0.48-0.34(m,2H),0.12-0.06(m,1H)。
实施例47
5-((膦酰基氧基)甲基)-吡啶-2-甲酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯
制备例47A:5-((叔丁基二甲基硅烷基氧基)甲基)-2-氯吡啶
向(6-氯吡啶-3-基)甲醇(643mg,4.48mmol)于DMF(15mL)中的搅拌溶液中添加叔丁基氯二甲基硅烷(675mg,4.48mmol)和咪唑(610mg,8.96mmol)。将反应混合物在室温搅拌5h，然后用200mL醚稀释，用饱和NaHCO3溶液、10％LiCl溶液和盐水洗涤。将溶液经无水MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)，得到制备例47A(869mg,75％)。HPLC:RT＝3.623min(H2O/MeOH，含有TFA，ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝258[M+H+]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.35(d,J＝1.8Hz,1H),7.77(dd,J＝8.1,2.4Hz,1H),7.50(d,J＝8.4Hz,1H),4.75(s,2H),0.93-0.86(m,9H),0.12-0.06(m,6H)。
制备例47B:5-((叔丁基二甲基硅烷基氧基)甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
在钢制反应釜中向制备例47A(1.76g,6.83mmol)于DMF(10.0mL)和甲醇(10.0mL)中的搅拌溶液中添加Et3N(3.20mL,22.96mmol)。然后添加乙酸钯(II)(0.267g,1.189mmol)和(S)-(-)-2,2′-二(二苯基膦基)-1,1′-联萘(1.30g,2.088mmol)。将钢制反应釜排真空并填充一氧化氮至50psi，然后密封并在75℃加热18.5h并冷却至室温。将混合物浓缩以除去MeOH。将混合物用80mL水稀释并用醚萃取。将醚萃取物用10％LiCl溶液和盐水洗涤，然后经无水MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)，得到制备例47B(1.47g,77％)。HPLC:RT＝3.400min(H2O/MeOH，含有TFA，ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝282[M+H+]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72-8.54(m,1H),8.05(d,J＝7.9Hz,1H),7.89-7.82(m,1H),4.85(s,2H),3.87(s,3H),0.99-0.81(m,9H),0.19--0.07(m,6H)。
制备例47C:5-(羟基甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
向制备例47B(1310mg,4.65mmol)于无水MeOH(95.00mL)中的搅拌溶液中添加TFA(9.00mL,117mmol)。将混合物在室温搅拌3天并浓缩。将其用20mL饱和NaHCO3溶液稀释，进一步用固体NaHCO3饱和，并用EtOAc萃取。将合并的EtOAc萃取物用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，浓缩，并通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)，得到制备例47C(496mg,64％):HPLC:RT＝0.615min(H2O/MeOH，含有TFA，ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝168[M+H+]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.67-8.62(m,1H),8.03(d,J＝8.1Hz,1H),7.94-7.85(m,1H),5.48(t,J＝5.7Hz,1H),4.63(d,J＝5.5Hz,2H),3.87(s,3H)。
制备例47D:5-((二-叔丁氧基磷酰基氧基)甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
制备例47D根据制备例44B所示的一般操作自制备例47C(208mg,1.244mmol)制备。获得制备例47D(196mg,43.8％):HPLC:RT＝2.633min(H2O/MeOH，含有TFA，ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝360[M+H+]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(d,J＝1.5Hz,1H),8.09(dd,J＝8.0,0.6Hz,1H),7.99(dd,J＝8.1,2.2Hz,1H),5.08(d,J＝8.4Hz,2H),3.89(s,3H),1.40(s,18H)。
制备例47E:5-((二-叔丁氧基磷酰基氧基)甲基)吡啶-2-甲酸
制备例47E根据制备例44C所示的一般操作自制备例47D(55.0mg,0.153mmol)制备。获得制备例47E(35.5mg,67.2％)。HPLC:RT＝2.185min(H2O/MeOH，含有TFA，ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝346[M+H+]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm13.27(br.s.,1H),8.72(d,J＝1.5Hz,1H),8.08(d,J＝8.1Hz,1H),7.98(dd,J＝8.0,2.1Hz,1H),5.09(d,J＝8.6Hz,2H),1.43(s,18H)。
制备例47F:6-((二-叔丁氧基磷酰基氧基)甲基)吡啶-2-甲酸((S)-3-((R)-2-((S)-1-氨基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酰氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-1-基)甲基酯
制备例47F根据制备例44D所示的一般操作自制备例47E(33.0mg,0.096mmol)和制备例44A(46.0mg,0.079mmol)制备得到两种非对映异构体的混合物，其通过制备型SFC色谱(BergerSFCMGII,LuxCellulose-425x3cmID,5μm,75/25CO2/MeOH,85mL/min)分离。将含有产物的级份浓缩，真空干燥过夜得到制备例47F(10.3mg,14.8％)，为无色固体:手性HPLC:RT＝7.494min,BergerSFC,LuxCellulose-4250x4.6mmID,5μm,70/30CO2/MeOH,2.0mL/min；HPLC:RT＝3.413min(H2O/MeOH，含有TFA，ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝876[M+H+]；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.60(s,1H),7.81-7.77(m,2H),7.67-7.57(m,1H),7.52-7.46(m,3H),7.45-7.39(m,1H),7.31-7.23(m,2H),7.18(d,J＝7.7Hz,1H),6.45(d,J＝10.6Hz,1H),6.08(d,J＝10.3Hz,1H),5.57(s,1H),5.09(d,J＝8.4Hz,2H),3.39-3.35(m,1H),2.79-2.71(m,1H),2.68-2.60(m,1H),2.58-2.43(m,1H),2.32-2.17(m,1H),1.88-1.76(m,2H),1.73-1.63(m,1H),1.50(s,18H),1.24(ddd,J＝13.7,7.6,3.5Hz,1H),0.77-0.62(m,1H),0.53-0.36(m,2H),0.18-0.08(m,1H)。
实施例47
实施例47根据实施例44所示的一般操作自制备例47F(10.3mg,0.012mmol)制备。获得实施例47(8.44mg,81％)。HPLC:RT＝2.558min(H2O/MeOH，含有TFA，ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝764[M+H+]；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.56(s,1H),7.75(s,2H),7.62-7.54(m,1H),7.53-7.34(m,4H),7.27-7.19(m,2H),7.15(d,J＝7.7Hz,1H),6.43(d,J＝10.3Hz,1H),6.05(d,J＝10.6Hz,1H),5.53(s,1H),5.06(d,J＝7.7Hz,2H),3.35(br.s.,1H),2.77-2.67(m,1H),2.65-2.56(m,1H),2.55-2.39(m,1H),2.33-2.15(m,1H),1.86-1.71(m,2H),1.69-1.57(m,1H),1.21(ddd,J＝13.5,7.7,3.2Hz,1H),0.68(d,J＝6.6Hz,1H),0.49-0.32(m,2H),0.15-0.04(m,1H)。
实施例48
3-(2,4-二甲基-6-(膦酰基氧基)苯基)-3-甲基丁酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-3-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯
制备例48A:(2R,3S)-N1-(1-(氯甲基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
将于CH2Cl2(5mL)中的制备例44A(173mg,0.299mmol)和三乙胺盐酸盐(123mg,0.897mmol)添加至100mL圆底烧瓶中。添加硫酰氯(0.036mL,0.448mmol)，并将反应混合物在室温搅拌30min。添加额外的硫酰氯(7.29μl,0.090mmol)，并将反应混合物搅拌15min，然后浓缩。将残余物溶解于2mLCH2Cl2中并再次浓缩，然后在真空中干燥。获得制备例48A。HPLC:RT＝3.138min(ODS4.6x50mm(4min梯度)历时4分钟用10-90％含TFA的MeOH水溶液洗脱，4mL/min,在220nm处监测)。
制备例48B:3-(2-(二(苄基氧基)磷酰基氧基)-4,6-二甲基苯基)-3-甲基丁酸(3-((R)-2-((S)-1-氨基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酰氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-1-基)甲基酯
向3-(2-((二(苄基氧基)磷酰基)氧基)-4,6-二甲基苯基)-3-甲基丁酸(284mg,0.588mmol)(J.Org.Chem.,61(24):8636(1996))于DMF(4mL)中的溶液中添加Cs2CO3(488mg,1.499mmol)。将混合物在室温搅拌1min，然后滴加于DMF(6mL)中的制备例48A(170mg,0.300mmol)。将反应混合物在室温搅拌17h。然后将反应混合物用EtOAc稀释并用10％LiCl水溶液洗涤三次。将有机层经MgSO4干燥，过滤并浓缩。然后将粗物质通过硅胶色谱纯化(己烷/丙酮)。将产物收集并浓缩，得到制备例48B(192.8mg,64％)，为非对映异构体的1:1混合物。HPLC:RT＝4.031min(ODS4.6x50mm(4min梯度)历时4分钟用10-90％含TFA的MeOH水溶液洗脱，4mL/min,在220nm处监测)；MS(ES):m/z＝1013[M+H]+。
实施例48
向制备例48B(192.8mg,0.190mmol)于EtOH(5mL)中的溶液中添加10％Pd/C(60.8mg,0.057mmol)。将气氛用氢气置换5次。接着，将反应混合物在室温在氢气囊下搅拌。在再搅拌45min后，添加10％Pd/C(60.8mg,0.057mmol)并将所得混合物在氢气囊下搅拌。在搅拌额外40min后，将反应混合物通过0.45μm膜在EtOH淋洗下过滤。将母液浓缩并在制备型HPLC柱(C18Luna30x100用12min梯度从55％B至75％B(MeOH/H2O/TFA)3次进样中保持时间为30min)上分离非对映异构体的混合物。将产物收集并浓缩，得到实施例48(43.8mg,27％):1HNMR(500MHz,CD3OD)δ7.73-7.64(m,2H),7.59-7.39(m,5H),7.19(d,J＝7.5Hz,1H),7.04(s,1H),6.64(s,1H),5.95(d,J＝10.5Hz,1H),5.50(d,J＝10.5Hz,1H),2.77-2.66(m,3H),2.61(td,J＝10.8,3.5Hz,1H),2.54-2.40(m,1H),2.33(s,3H),2.28-2.20(m,1H),2.18(s,3H),1.88-1.70(m,2H),1.66(ddd,J＝13.7,10.8,6.5Hz,1H),1.33(s,3H),1.31(s,3H),1.22(ddd,J＝13.7,7.6,3.6Hz,1H),0.74-0.62(m,1H),0.50-0.37(m,2H),0.16-0.07(m,1H),0.04--0.03(m,1H)；HPLC:RT＝3.391min(ODS4.6x50mm(4mingrad)历时4min用10-90％含0.％TFA的MeOH水溶液洗脱,4mL/min,在220nm处监测)；MS(ES):m/z＝883[M+H]+。
实施例49
S-(((2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨甲酰基)己酰基)氨基)-L-半胱氨酸·TFA
制备例49A:(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(((2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-(((S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨甲酰基)己酰氨基)硫基)丙酸叔丁酯
将硝酸银(131mg,0.771mmol)于甲醇(3mL)中的溶液用(2R,2′R)-二叔丁基3,3′-二硫二基二(2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸酯)(426mg,0.771mmol)处理。将混合物搅拌30min，然后用实施例1(100mg,0.193mmol)和TEA(0.108mL,0.771mmol)处理，得到浅黄色溶液。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后浓缩至干。将粗产物溶解于少量CH2Cl2中并通过硅胶色谱纯化(乙酸乙酯/己烷)，得到制备例49A(53mg,34.6％):HPLC:RT＝4.508min(SunFireC18,5.0um,4.6mmx50mm,10-90％含有0.2％H3PO4的甲醇水溶液,4min梯度,在220nm处监测)；MS(ES):m/z＝794.6[M+H]+。
实施例49
在0℃将制备例49A(7.8mg,9.83μmol)于DCM(2mL)中的溶液用TFA(0.2mL,2.60mmol)处理。将反应混合物缓慢温热至室温并搅拌6小时，然后浓缩至干。将粗反应混合物溶解于少量MeOH中并通过反相HPLC纯化(YMCODS-A5μm30x250mm,10-90％含0.1％TFA的甲醇水溶液,25mL/min,30min梯度,在220nm处监测)。将所需化合物冻干得到实施例49·TFA(2.8mg,36.5％):1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.60-7.54(m,2H),7.53-7.49(m,1H),7.48-7.40(m,3H),7.27(td,J＝8.1,5.0Hz,1H),7.17(d,J＝7.9Hz,1H),5.44-5.38(m,1H),3.98(dd,J＝10.8,3.7Hz,1H),3.55(dd,J＝15.4,3.7Hz,1H),2.98-2.89(m,1H),2.88-2.76(m,2H),2.54-2.35(m,1H),2.29-2.10(m,1H),1.88-1.69(m,2H),1.67-1.56(m,1H),1.43(ddd,J＝13.8,7.0,3.4Hz,1H),0.70-0.57(m,1H),0.54-0.44(m,2H),0.16-0.03(m,2H).HPLC:RT＝3.350min(SunFireC18,5.0um,4.6mmx50mm,10-90％含有0.2％H3PO4的甲醇水溶液,4min梯度,在220nm处监测)；MS(ES):m/z＝638.3[M+H]+。
实施例50
(2S,3R)-N1-((2-氨基乙基)硫烷基)-2-(环丙基甲基)-N4-((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺·TFA
制备例50A:2-((2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-((S,Z)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基氨甲酰基)己酰氨基硫基)乙基氨甲酸叔丁基酯
将硝酸银(39.3mg,0.231mmol)于甲醇(1mL)中的轻微悬浮液用2,2′-二硫二基二(乙烷-2,1-二基)二氨甲酸叔丁酯(82mg,0.23mmol)处理。将混合物搅拌30min，然后添加实施例1(30mg,0.058mmol)和TEA(0.032mL,0.231mmol)，生成浅黄色溶液。将反应混合物在室温搅拌5小时，然后浓缩至干。将粗产物溶解于少量CH2Cl2中并通过硅胶色谱纯化(乙酸乙酯/己烷)，得到制备例50A(21.8mg,54.3％)。HPLC:RT＝4.285min(SunFireC18,5.0um,4.6mmx50mm,10-90％含有0.2％H3PO4的甲醇水溶液,4min梯度,在220nm处监测)；MS(ES):m/z＝694.4[M+H]+。
实施例50
在0℃将制备例50A(20mg,0.029mmol)于DCM(2mL)中的悬浮液用TFA(0.2mL,2.60mmol)处理并历时1小时缓慢温热至室温。然后将反应混合物浓缩至干。将粗反应混合物溶解于少量MeOH中并通过反相HPLC纯化(YMCODS-A5μm30x250mm,10-90％含0.1％TFA的甲醇水溶液,20mL/min,30min梯度,在220nm处监测)。将产物(保留时间＝18.679分钟)分离并冻干得到实施例50·TFA(17.8mg,84％):1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.63-7.41(m,1H),7.34-7.24(m,1H),7.19(d,J＝7.9Hz,1H),5.47-5.39(m,1H),3.24-3.15(m,2H),3.12-2.94(m,2H),2.92-2.77(m,2H),2.58-2.39(m,1H),2.31-2.13(m,1H),1.93-1.79(m,1H),1.78-1.59(m,2H),1.50-1.40(m,1H),0.70-0.57(m,1H),0.52-0.43(m,2H),0.15-0.05(m,2H)；HPLC:RT＝3.135min(SunFireC18,5.0um,4.6mmx50mm,10-90％含有0.2％H3PO4的甲醇水溶液,4min梯度,在220nm处监测)；MS(ES):m/z＝594.4[M+H]+。
实施例51
S-(((2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨甲酰基)己酰基)氨基)-L-半胱氨酸甲酯·TFA
制备例51A:(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(((2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-(((S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨甲酰基)己酰氨基)硫基)丙酸甲酯
将硝酸银(39.3mg,0.231mmol)于甲醇(1mL)中的轻微悬浮液用(2R,2′R)-3,3′-二硫二基二(2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸二甲酯(108mg,0.231mmol)。将混合物搅拌30min，然后添加实施例1(30mg,0.058mmol)和TEA(0.032mL,0.231mmol)，生成浅黄色溶液。将混合物在室温搅拌48小时。将粗混合物浓缩至干。将粗产物溶解于少量CH2Cl2中并通过硅胶色谱纯化(乙酸乙酯/己烷)，得到制备例51A(15.2mg,34.9％):HPLC:RT＝4.260min(SunFireC18,5.0um,4.6mmx50mm,10-90％含有0.2％H3PO4的甲醇水溶液,4min梯度,在220nm处监测)；MS(ES):m/z＝752.31[M+H]+。
实施例51
在0℃将制备例51A(15mg,0.020mmol)于DCM(1mL)中的溶液用TFA(100μl,1.298mmol)处理并缓慢温热至室温。在4小时后，起始物料被耗尽。将反应混合物浓缩至干。将粗反应混合物溶解于少量MeOH中并通过反相HPLC纯化(YMCODSC185μm20x100mm,10-90％含0.1％TFA的甲醇水溶液,20mL/min,30min梯度,在220nm处监测)。将产物(保留时间＝19.644分钟)分离并冻干得到实施例51·TFA(3.2mg,20.4％):1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.82(s,1H),9.56(s,1H),9.45(d,J＝7.0Hz,1H),8.59(br.s.,3H),7.64-7.56(m,1H),7.56-7.52(m,2H),7.50-7.44(m,2H),7.31(td,J＝8.0,5.1Hz,1H),7.16(d,J＝7.9Hz,1H),5.28(d,J＝7.0Hz,1H),4.10(dd,J＝8.8,4.2Hz,1H),3.75(s,3H),3.27(dd,J＝15.0,4.2Hz,1H),2.98(dd,J＝15.1,9.1Hz,1H),2.86-2.77(m,1H),2.72(dd,J＝10.3,3.3Hz,1H),2.64-2.55(m,1H),2.30-2.14(m,1H),1.66-1.36(m,3H),1.25(ddd,J＝13.5,6.8,3.2Hz,1H),0.58-0.45(m,1H),0.40-0.30(m,2H),0.03--0.11(m,2H)；HPLC:RT＝3.175min(SunFireC18,5.0um,4.6mmx50mm,10-90％含有0.2％H3PO4的甲醇水溶液,4min梯度,在220nm处监测)；MS(ES):m/z＝652.4[M+H]+。
实施例52
L-缬氨酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯
制备例52A:(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酸氯甲酯
在0℃向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酸(1g,4.60mmol)、碳酸钠(2.439g,23.01mmol)和四丁基硫酸氢铵(0.313g,0.921mmol)于DCM(10mL)和水(5mL)的混合物中的搅拌溶液中添加氯硫酸氯甲酯(1.519g,9.21mmol)。将反应混合物温热至室温过夜。将混合物用DCM和水稀释，将有机层分离，用盐水溶液洗涤，并经Na2SO4干燥。将溶液过滤并在真空中浓缩，将获得的残余物通过快速色谱纯化(SiO2,0-10％EtOAc于己烷中)，得到制备例52A(0.9g,73.6％)为无色油状物。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.93(d,J＝6.80Hz,3H),1.00(d,J＝6.80Hz,3H),1.43(s,9H),2.17-2.18(m,1H),4.25-4.27(m,1H),4.96(d,J＝7.60Hz,1H),5.62(d,J＝6.00Hz,1H),5.88(d,J＝6.00Hz,1H)。
制备例52B:_2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸(S)-((S,Z)-3-((R)-2-((R)-1-氨基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酰氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-1-基)甲基酯
制备例52C:2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸(S)-((R,Z)-3-((R)-2-((R)-1-氨基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酰氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-1-基)甲基酯
向实施例1(30mg,0.058mmol)于DMF(0.5mL)中的搅拌溶液中添加K2CO3(15.99mg,0.116mmol)并将混合物搅拌10min。添加制备例52A(77mg,0.289mmol)并将反应混合物在室温搅拌过夜。减压浓缩该反应混合物。将混合物用EtOAc和水稀释，将有机层分离，用盐水溶液洗涤，并经Na2SO4干燥。将混合物过滤并在真空中浓缩，将获得的残余物通过制备型TLC色谱纯化(SiO2,40％EtOAc于己烷中)，得到制备例52B和52C的非对映异构体混合物(20mg,46％收率)，为灰白色固体:HPLCRT＝2.045min(SBC18(4.6x50)mm,5μm,正离子模式；流动相A:10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA,流动相B:90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA,流速:5ml/min；在220nm处监测)；MS(ESI):m/z＝748[M+H]+。
实施例52
在0℃向制备例52B和52C的混合物(20mg,0.027mmol)于DCM(0.5mL)中的搅拌溶液中添加4MHCl的二噁烷溶液(0.020mL,0.080mmol)。将反应混合物温热至室温，持续2h。将所得混合物减压浓缩，并将获得的固体溶解于水和乙醚的混合物中。收集水层并冻干得到非对映异构体的混合物。将非对映异构体的混合物通过反相HPLC(SunFireC18150×19mm5μ,流动相A:0.1％含TFA的水:CH3CN(90:10),流动相B:甲醇,Flow:15.0ml/min)分离。将适当的级份冻干得到实施例52(3mg)，为灰白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm9.47(d,J＝8.00Hz,1H),8.2(brs,3H),7.73-7.78(ddd,J＝11.6Hz,8.4Hz和1.2Hz,1H),7.49-7.63(m,8H),7.25(d,J＝8.00Hz,1H),6.98(s,1H),5.98(d,J＝12.00Hz,1H),5.83(d,J＝12.00Hz,1H),5.42(d,J＝8.00Hz,1H),3.75-3.79(m,2H),2.50-2.52(td,在溶剂峰下面J＝6.8Hz和J＝3.2Hz,2H),1.63(AB中的A,JAB＝7.6Hz,2H),1.59(AB中的B,JBA＝7.6Hz,2H),1.47-1.53(m,5H),1.00-1.07(m,3H),0.84-0.86(m,4H),0.61(d,J＝8.00Hz,3H),0.56(d,J＝8.00Hz,3H),0.51(t,J＝8.00Hz,1H),0.32-0.35(m,2H),-0.14--0.11(m,1H)；HPLCRT＝6.198min(柱:SunFireC18(4.6×150)mm,3.5micronSC/862,缓冲液:经NH3调节的0.05％含TFA的水，pH2.5,流动相A:缓冲液：乙腈(95:5),流动相B:乙腈:缓冲液(95:5),流速:1ml/min,在220nm处监测)；MS(ESI):m/z＝648[M+H]+。
实施例53
1-氨基环丙烷甲酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯
制备例53A:1-(叔丁氧基羰基氨基)环丙烷甲酸氯甲酯
在0℃向1-((叔丁氧基羰基)氨基)环丙烷甲酸(0.55g,2.73mmol)、碳酸钠(1.449g,13.67mmol)和四丁基硫酸氢铵(0.186g,0.547mmol)于DCM(10mL)和水(5mL)的混合物中的搅拌溶液中添加氯硫酸氯甲酯(0.902g,5.47mmol)。将反应混合物温热至室温过夜。将混合物用DCM和水稀释，将有机层分离，用盐水溶液洗涤，并经Na2SO4干燥。将混合物过滤并在真空中浓缩，将获得的残余物通过快速色谱纯化(SiO2,0-10％EtOAc于己烷中)，得到制备例53A(0.5g,73.3％)，为灰白色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ1.24-1.26(m,2H),1.46(s,9H),1.60-1.61(m,2H),5.13(s,1H),5.71(s,2H)。
制备例53B:1-(叔丁氧基羰基氨基)环丙烷甲酸((S)-3-((R)-2-((S)-1-氨基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酰氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-1-基)甲基酯
向实施例1(0.040g,0.077mmol)于DMF(1.2mL)中的溶液中添加K2CO3(0.021g,0.154mmol)，然后添加制备例53A(0.096g,0.386mmol)。将反应混合物在24℃搅拌5h。向该反应混合物中添加水(8mL)，然后用EtOAc萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将粗物质通过制备型-TLC纯化(0-60％EtOAc/己烷)，得到制备例53B:(0.034g,60.2％):HPLC:RT＝10.596(柱:XBridge苯基(4.6×150)mm,3.5micron,缓冲液:经稀NH3调节的含0.05％TFA的水，pH2.5,流动相A:缓冲液:乙腈(95:5),流动相B:乙腈:缓冲液(95:5),流速-1mL/min,在220nm处监测)；MS(ES):m/z＝732[M+H]+。
实施例53
在0℃向制备例53B(0.034g,0.046mmol)于DCM(2mL)中的溶液中滴加4MHCl的二噁烷溶液(0.116mL,0.465mmol)。将混合物温热至室温并在24℃搅拌4h。然后将反应混合物浓缩至干。将粗物质通过制备型反相HPLC纯化(柱:RP18(150×19mm),流动相A:含0.1％TFA的水:ACN(90:10),流动相B:ACN,流速:15mL/min)，得到实施例53(0.0083g,28.3％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.41(d,J＝8.00Hz,1H),8.58(brs,3H),7.72-7.77(ddd,J＝11.6Hz,8.4Hz和1.2Hz,1H),7.51-7.62(m,7H),7.23(d,J＝8.00Hz,1H),6.98(s,1H),6.10(d,J＝12.00Hz,1H),5.73(d,J＝12.00Hz,1H),5.42(d,J＝8.00Hz,1H),2.68-2.71(m,1H),2.44-2.47(td,在溶剂峰下J＝6.8Hz和J＝3.2Hz2H),2.33(s,1H),1.64(AB中的A,JAB＝7.6Hz,2H),1.60(AB中的B,JBA＝7.6Hz,2H),1.49-1.50(m,1H),1.00-1.08(m,3H),0.93-0.98(m,1H),0.82-0.86(m,1H),0.55(t,J＝8.00Hz,1H),0.33(m,2H),-0.14--0.11(m,1H)；HPLC:RT＝6.272min(SunFireC18(4.6×150)mm,3.5micron,缓冲液:经NH3调节的含0.05％TFA的水,pH2.5,流动相A:缓冲液:乙腈(95:5),流动相B:乙腈:缓冲液(95:5),流速:1mL/min,在220nm处监测)；MS(ES):m/z＝632[M+H]+。
实施例54
(2S,3R)-2-(环丙基甲基)-N4-((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-N1-(1-吡咯烷基甲基)-3-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
将实施例1(0.020g,0.039mmol)溶解于甲醛(0.57mL,7.71mmol)和吡咯烷(0.549g,7.71mmol)于MeOH(1.0mL)中的溶液中.将反应混合物在24℃搅拌15h,然后减压浓缩至干。将所得残余物用水(8mL)稀释并用EtOAc萃取.将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将粗物质通过制备型反相HPLC纯化(柱:SymmetryC8(250x20mm),流动相A:含0.1％TFA的水:CH3CN(90:10),流动相B:CH3CN,流速:16.0mL/min)，得到实施例54(0.0128g,55.2％):1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.84(s,1H),9.95(s,1H),9.42-9.48(m,2H),7.47-7.64(m,6H),7.29-7.35(m,1H),7.17(d,J＝8.00Hz,1H),5.29(d,J＝8.00Hz,1H),3.10-3.13(m,9H),2.84(t,J＝5.6Hz,3H),2.66(m,3H),2.24-2.34(m,4H),1.83-1.98(m,10H),1.55-1.63(m,5H),1.19-1.25(m,2H),0.60(brm,1H),0.37(d,J＝8.00Hz,2H),0.008--0.05；HPLC:RT＝6.861min(Column:SunFireC18(4.6×150)mm,3.5micron,缓冲液:经NH3调节的含0.05％TFA的水,pH2.5,流动相A:缓冲液:乙腈(95:5),流动相B:乙腈:缓冲液(95:5),流速:1mL/min,在220nm处监测)；MS(ES):m/z＝602[M+H]+。
实施例55
4-((膦酰基氧基)甲基)苯甲酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯
制备例55A:4-((二-叔丁氧基磷酰基氧基)甲基)苯甲酸甲基酯
在氮气下将4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(1200mg,5.24mmol)、磷酸二叔丁酯钾(1431mg,5.76mmol)和碘化钠(785mg,5.24mmol)在DMF(3.00mL)中混合。将反应混合物在室温搅拌24h。将反应混合物用醚稀释，用10％LiCl溶液和盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)，过滤并在真空中浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)，得到制备例55A(571mg,1.593mmol,30％)：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.03(d,J＝8.4Hz,2H),7.53-7.37(m,2H),5.05(d,J＝7.5Hz,2H),3.92(s,3H),1.48(d,J＝0.4Hz,18H)。
制备例55B:4-((二-叔丁氧基磷酰基氧基)甲基)苯甲酸
向制备例55A(352mg,0.982mmol)于THF(8.00mL)和水(3.00mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(61.8mg,1.473mmol)。将反应混合物在室温搅拌8h。将混合物浓缩以除去有机物，然后用8mLpH4磷酸盐溶液稀释，生成pH6(通过pH试纸测定)溶液。将溶液用EtOAc萃取，然后用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到制备例55B(307mg,91％):HPLC:RT＝2.875min(H2O/MeOH，含有TFA，ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝343[M+H+]；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.97(br.s,1H),7.95(d,J＝8.1Hz,2H),7.61-7.29(m,2H),5.00(d,J＝7.9Hz,2H),1.41(s,18H)。
制备例55C:4-(((二-叔丁氧基磷酰基)氧基)甲基)苯甲酸((S)-3-((R)-2-((S)-1-氨基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酰氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂1-基)甲基酯
制备例55B根据制备例44D所示的一般操作自制备例44A(77mg,0.136mmol)和制备例55B(94mg,0.272mmol)制备。将所得的两种非对映异构体的混合物通过制备型SFC色谱分离(BergerSFCMGII,ChiralIC25x3cmID,5μm,80/20CO2/MeOH,85mL/min)。将含有产物的级份浓缩，真空干燥过夜得到制备例55C(31mg,26.3％)，为白色固体。HPLC:RT＝3.823min(H2O/MeOH，含有H3PO4，YMCS5ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝875[M+H+].1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.69(d,J＝8.4Hz,2H),7.63-7.53(m,1H),7.52-7.38(m,4H),7.34-7.21(m,4H),7.15(d,J＝7.7Hz,1H),6.36(d,J＝10.3Hz,1H),5.97(d,J＝10.3Hz,1H),4.98(d,J＝7.9Hz,2H),2.73(td,J＝10.3,4.2Hz,1H),2.62(td,J＝10.7,3.4Hz,1H),2.57-2.41(m,1H),2.24(td,J＝10.5,5.1Hz,1H),1.87-1.72(m,2H),1.72-1.56(m,1H),1.53-1.41(m,19H),1.22(ddd,J＝13.5,7.6,3.5Hz,1H),0.74-0.60(m,1H),0.47-0.35(m,2H),0.13-0.06(m,1H),0.05--0.11(m,1H)。
实施例55
实施例55(15mg,83％)根据实施例44所示的一般操作自制备例55C(20mg,0.023mmol)制备:HPLC:RT＝3.045min(H2O/MeOH，含有TFA，ODS,4.6x50mm,梯度＝4min,波长＝220nm)；MS(ES):m/z＝763.5[M+H+]；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.68(d,J＝8.4Hz,2H),7.62-7.52(m,1H),7.51-7.38(m,4H),7.33-7.20(m,4H),7.15(d,J＝7.7Hz,1H),6.36(d,J＝10.3Hz,1H),5.98(d,J＝10.3Hz,1H),5.57-5.46(m,1H),4.99(d,J＝7.3Hz,2H),2.72(td,J＝10.3,4.1Hz,1H),2.62(td,J＝10.7,3.5Hz,1H),2.56-2.40(m,1H),2.31-2.12(m,1H),1.88-1.73(m,2H),1.67(ddd,J＝13.6,10.8,6.4Hz,1H),1.22(ddd,J＝13.8,7.7,3.2Hz,1H),0.69(d,J＝6.2Hz,1H),0.50-0.32(m,2H),0.16-0.06(m,1H),0.00(dd,J＝8.5,4.3Hz,1H)。
对比化合物56-60
对比化合物56-60可分别根据美国专利7,053,084实施例8、12a、38、45a和28a所述的操作制备。
表12
生物分析
本发明化合物的药理学特性可通过多种生物分析来确定。已经对本发明化合物进行了下文所例示的生物分析。
Notch-CBF1转活化分析
基于Notch-CBF1(C启动子结合因子I)细胞的转活化分析是基于所释放的Notch细胞内结构域片段(NICD)连同CBF1和其它核因子一起作为转录因子的能力。使用荧光素酶分析法测量对Notch-CBF1转录活性的拮抗作用。用含有截短型Notch1、Notch2、Notch3或Notch4受体的pCDNA3.1/Hygro质粒和含有4个CBF1结合位点复本的PGL3荧光素酶报导子载体短暂共转染HeLa子宫颈癌细胞。接着在不存在或存在测试化合物下测试细胞的Notch-CBF1活性。在T175烧瓶(4.5×106个细胞/烧瓶)中，使用Monster转染试剂盒(Mirus编号MIR2906)，根据制造商说明书瞬时转染维持于DMEM(含HEPES的高葡萄糖)、1×谷氨酰胺/青霉素(penicillin)/链霉素(streptomycin)和10％胎牛血清中的HeLa细胞。表13表示了用于转染的各个DNA量。
表13
DNA(μg) CBF1(μg) 载体(μg) 总DNA(μg)
人类Notch1 6 14.4 15.6 36.0
人类Notch2 2 14.4 19.6 36.0
人类Notch3 0.3 14.4 21.3 36.0
DNA(μg) CBF1(μg) 载体(μg) 总DNA(μg)
人类Notch4 4 14.4 17.6 36.0
转染后6小时，以胰蛋白酶处理细胞且在95μL分析培养基(DMEM(含HEPES的高葡萄糖)、1×谷氨酰胺/青霉素/链霉素、0.0125％BSA、1×非必需氨基酸)中，以5×103个细胞/孔的密度涂布于已涂覆聚D-赖氨酸的384孔黑色组织培养板中。将含有最终浓度处于5μM至8.4×10-5μM(3倍连续稀释)范围内的测试化合物的分析培养基(5μL)添加至细胞中，接着在37℃和5％CO2下孵育细胞培养板18小时。对照孔含有DMSO媒介物(总计数)或0.5μM内部(in-house)小分子抑制剂(背景计数)。一式两份使用各样品。在与50μl荧光素酶试剂一起孵育20分钟后，根据制造商说明书(Promega，目录号：E2550)测量荧光素酶活性，且通过Envision培养板读取器(PerkinElmer,Boston,MA)分析。
化合物的拮抗剂作用是以100×[1-(平均样品-平均背景)/(平均总数-平均背景)]表示，其中样品为在测试化合物存在下的荧光素酶活性，背景等于在小分子抑制剂对照物存在下的荧光素酶活性，且总数为在DMSO孔中所诱导的信号。使用四参数逻辑拟合方程式将数据绘制成图，且IC50值定义为抑制50％荧光素酶活性时的化合物浓度。
下表14列出在上文Notch-CBF1转活化分析中所测量的本发明实施例1至43和对照化合物56至59的Notch1和Notch3IC50值。在一些情况中，该值为多个实验的平均值，其中N为实验进行的次数。如由实施例1至43所例示的本发明化合物展示16.1nM或16.1nM以下的Notch1IC50值和28.3nM或28.3nM以下的Notch3IC50值。
表13
高通量(HT)代谢稳定性组
肠胃外给予的化合物进入血流且一次或多次穿过肝脏。不容易被肝脏代谢的化合物可以治疗有效的血浆含量给予并维持治疗有效的期限。
口服给予的化合物通常经由肠壁吸收进入血流中且首次穿过肝脏。在此首次穿过肝脏时不轻易地代谢的化合物可以以治疗有效量分布至身体的其它区域。
代谢稳定性分析使用人类、大鼠、小鼠、狗和/或猴微粒体在孵育10分钟后体外评估CYP介导的代谢稳定性。一式两份测试各化合物。
这些分析的结果表示为在孵育10分钟后反应混合物中残留的母体化合物的份数(残留百分比)。一般而言，这些结果仅用于评估测试化合物的CYP介导的或NADPH依赖性的代谢程度。当化合物被显著代谢(残留<40％至50％)时，这表明因CYP介导的代谢作用而引起化合物的高体内清除率。然而，若化合物在这些体外分析中展现中(50％-80％)或低(>85％)代谢，则仍有可能经其它代谢和消除路径而引起高体内清除率。
假设CYP介导的代谢作用为主要消除路径，则这些分析的残留百分比结果预示着化合物体内清除率。在不同微粒体物种中，结果范围大致如表15所示。
表15
代谢稳定性-结果解释准则
方法与材料
与肝脏微粒体一起孵育
测试化合物以于100％DMSO中的3.5mM储备溶液形式得到。稀释测试化合物，得到含有1.4％DMSO的50μM乙腈(ACN)溶液，接着将其用作用于与微粒体一起孵育的100×储液。在代谢稳定性-人类、大鼠和小鼠分析组中对三个物种中的每一种或在代谢稳定性-狗或代谢稳定性-猴组中对单个物种分别地一式两份测试各化合物。在三步骤中组合化合物、NADPH和肝脏微粒体溶液进行孵育：
1.在37℃使于100mMNaPi(pH7.4)、5mMMgCl2缓冲液中蛋白质浓度为1.1mg/ml的152μl肝脏微粒体悬浮液预升温。
2.将1.7μl的50μM化合物(98.6％ACN，1.4％DMSO)添加至同一管中且在37℃预先孵育5分钟。
3.通过添加17μl预升温的于100mMNaPi(pH7.4)中的10mMNADPH溶液引发反应。
充分混合反应组分，且将75μl反应混合物立即转移至150μl淬灭/停止溶液中(零时间点，T0)。在37℃孵育反应物10分钟，接着再将75μl等分试样转移至150μl淬灭溶液中。使用含有100μMDMN(用于注射品质对照的UV标准品)的乙腈作为淬灭溶液以终止代谢反应。
在X-12离心机SX4750转子(BeckmanCoulterInc.,Fullerton,CA)中以1500rpm(约500×g)离心淬灭的混合物15分钟以使变性微粒体形成沉淀。接着将体积为90μl的含有母体化合物与其代谢物的混合物的上清液萃取物转移至另一96孔培养板中以进行UV-LC/MS-MS分析，从而测定混合物中残留的母体化合物的百分比。
表16
代谢稳定性分析-反应组分
样品分析-仪器
HPLC：泵-ThermoSurveyor；自动取样器-CTC/LEAPHTS；UV检测器-ThermoSurveyorPDAplus；柱-C18，3μm，2×20mm，具有0.5μm在线过滤器；用于结构完整性预分析的流动相：(A)含10mM乙酸铵的98％水、2％乙腈；(B)含10mM乙酸铵的10％水、90％乙腈；用于反应样品分析的流动相：(A)含0.1％甲酸的98％水、2％乙腈；(B)含0.1％甲酸的2％水、98％乙腈；(C)含0.1％氢氧化铵的水溶液；(D)含0.1％氢氧化铵的乙腈。
质谱仪：ThermoTSQUltra三重四极杆质谱仪(triple-quadrapolemassspectrometer)；
样品分析：结构完整性预分析。
使用代谢稳定性结构完整性预分析以评定所分析的化合物的纯度。将57μl3.5mM化合物的DMSO溶液容纳于96孔培养板中。用含有等体积乙腈、异丙醇和MilliQ-H2O的溶液18倍稀释3.5mM化合物DMSO储备溶液。通过在ThermoLCQDecaXPPlus离子阱质谱仪上，使用具有WatersSentry2.1mm保护柱的WatersXBridgeC18，5μm，2×50mm柱和下表中所述的LC条件，以5μl进样和1毫升/分钟的流速进行LC-UV/MS来分析所得溶液(200μM)的结构完整性。所获得的数据由220nm的UV吸光度反映纯度。仅报导那些纯度大于50％的化合物的结果。
表17
代谢稳定性-结构完整性梯度
梯度时间(分钟) A％ B％
0.00 100 0
4.00 0 100
5.00 0 100
5.10 100 0
6.00 100 0
样品分析-孵育样品
在装备有加热电喷雾(H-ESI)源的ThermoTSQ三重四极杆质谱仪上，通过自动注入进行MS/MS条件优化，以获得SRM跃迁和其相应碰撞能量值。以90微升/分钟的流速注入于1:1甲醇:水中浓度为20μM的化合物溶液，接着与流速为50微升/分钟的流动相组合，之后引入加热电喷雾源中。首先使用流动相A和B(50％A和50％B)，且必要时使用流动相C和D(也具有50:50组成)优化所有化合物。将优化参数(包括极性、SRM跃迁和碰撞能量)储存于MICROSOFT数据库中。
使用由自动注入获得的质谱条件来分析来自代谢稳定性分析的孵育样品。进样体积为5μl且流速为0.8毫升/分钟。所用梯度展示于下表中。首先使用流动相A和B以一定梯度进样所有样品。必要时(例如，出于色谱原因)，以相同梯度，但使用流动相C和D再进样样品。所有LC-MS/MS分析参数以电子方式记录于原始数据文件中。
表18
代谢稳定性-样品分析梯度
梯度时间(分钟) A％(或C％) B％(或D％)
0.00 95 5
0.20 95 5
0.30 0 100
1.05 0 100
1.10 95 5
1.50 95 5
数据分析
用软件进行峰积分。通过比较各化合物的T10分钟样品的LC-MS/MS峰面积与T0分钟样品的LC-MS/MS峰面积来进行残留百分比计算。
品质对照
在各分析培养板中连同测试化合物一起测试一组三种化合物。只有当这些对照化合物的结果处于下文所示的预期范围内时才接受并上传数据。
表19
代谢稳定性分析-各微粒体物种的对照化合物值
SD＝标准偏差
代谢稳定性半衰期组
使用在人类或动物肝脏微粒体中体外测定的代谢速率和半衰期来确定化合物的固有清除率(CLint)和肝脏清除率(CLh,b)。这些参数适用于预测体内人类清除率，所述清除率定义体内药物暴露量(Obach等人，1997，1999)。
代谢稳定性半衰期分析组评估体外人类、大鼠、小鼠、狗和猴微粒体中CYP介导(NADPH依赖)的代谢的时程和速率。时程跨越45分钟孵育，且包括第0分钟、第5分钟、第10分钟、第15分钟、第30分钟和第45分钟时间点，在各时间点测量混合物中残留的测试化合物的量。
结果解释准则
代谢稳定性半衰期分析的结果表示为半衰期(T1/2，分钟)。一般而言，这些结果仅用于评估测试化合物的由CYP介导或NADPH依赖性代谢的程度。当化合物显著代谢(T1/2<14分钟)时，这表明因CYP介导的代谢作用而引起高体内清除率。然而，若化合物在这些体外分析中展现中(14-70分钟)或低(>70分钟)代谢，则仍有可能经其它代谢和消除路径而引起高体内清除率。
假设CYP介导的代谢作用为主要消除路径，则这些分析的结果预示着化合物体内清除率。在人微粒体中，结果范围大致如下表所示：
表20
代谢稳定性半衰期-结果解释准则
方法与材料
肝脏微粒体是购自BD-Biosciences(Woburn,MA)且NADPH是购自AppliChemInc；所有其它试剂自Sigma获得。
与肝脏微粒体一起孵育
测试化合物以于100％DMSO中的3.5mM储备溶液形式得到。稀释测试化合物，得到含有1.4％DMSO的50μM乙腈(ACN)溶液，接着将其用作用于与微粒体一起孵育的100倍储液。在人类、大鼠、小鼠、狗和猴肝脏微粒体中测试各化合物。在三步骤中组合化合物、NADPH和肝脏微粒体溶液进行孵育：
1.在37℃使于100mMNaPi(pH7.4)、5mMMgCl2缓冲液中的蛋白质浓度为1.1mg/ml的450μl肝脏微粒体悬浮液预升温。
2.将5μl的50μM化合物(98.6％ACN，1.4％DMSO)添加至同一管中且在37℃预先孵育5分钟。
3.通过添加50μl预升温的于100mMNaPi(pH7.4)中的10mMNADPH溶液引发反应。
充分混合反应组分，且将65μl立即转移至130μl淬灭/停止溶液中(零时间点，T0)。在37℃孵育反应物5分钟、10分钟、15分钟、30分钟和45分钟且在各时间点将65μl等分试样转移至130μl淬灭溶液中。使用含有内标物(100ng/ml)的乙腈作为淬灭溶液以终止代谢反应。
在X-12离心机SX4750转子(BeckmanCoulterInc.,Fullerton,CA)中以1500rpm(约500×g)离心淬灭的混合物15分钟以使变性微粒体形成沉淀。接着将体积为90μl的含有母体化合物与其代谢物的混合物的上清液萃取物转移至另一96孔培养板中以进行LC/MS-MS分析，从而测定混合物中残留的母体化合物的百分比。
表21
代谢稳定性半衰期分析-反应组分
样品分析-仪器
HPLC：泵：ShimadzuLC-20AD系列二元泵；自动取样器：CTC/LEAPHTS。
下表22列出了本发明实施例1-43和对比化合物56-60在人代谢稳定性半衰期分析中测定的CYP-介导的代谢半衰期值。在一些情况中，该值为多个实验的平均值，其中N为实验进行的次数。本发明的化合物，如实施例1-43所示例的，具有30min或更长的代谢稳定性半衰期。相反，对比化合物56-60具有9min或更短的代谢稳定性半衰期。
表22
实施例 HLM(t1/2,min) N
1 85 61
2 46 1
3 77 1
4 83 3
5 74 3
6 83 3
7 97 1
8 37 1
9 90 1
10 72 4
11 76 5
12 104 1
13 >120 1
14 41 1
15 40 2
16 75 2
17 60 2
18 >120 2
19 56 2
20 106 4
21 62 2
22 32 3
23 69 3
24 76 2
25 31 2
26 96 1
27 81 1
28 39 2
29 99 3
30 74 1
31 52 3
32 55 1
33 47 2
34 >120 1
35 36 4
36 >120 1
实施例 HLM(t1/2,min) N
37 43 4
38 70 6
39 38 1
40 34 4
41 45 2
42 87 4
43 30 52
对比化合物56 8 1
对比化合物57 6 1
对比化合物58 6 1
对比化合物59 3 1
对比化合物60 9 1
由于在人代谢稳定性半衰期分析中的CYP介导代谢，本发明的示例化合物显示出令人惊讶的低清除率优势。本发明的化合物，如实施例1-43所示例的，在人代谢稳定性半衰期分析中具有30min至大于120min范围的代谢半衰期。相反，对比化合物56-60在人代谢稳定性半衰期分析中具有9min或更短的半衰期。对比化合物56-60在人类代谢稳定性分析中显示出高清除率，这表明这些化合物通过肝微粒体除去。
将本发明化合物(实施例1-43)与美国专利7,456,172公开的对比化合物56-60相比，发现本发明的化合物是尤其有优势的。本发明化合物作为Notch1和Notch3抑制剂的活性和对肝微粒体优良的代谢稳定性的组合而具有令人惊讶的优势。如表13和21所示，在所报告的测试中，本发明的实施例1-43的Notch1IC50值为16.1nM或更低并且Notch3IC50值为28.3nM或更低；在人代谢稳定性半衰期分析中，人代谢稳定性半衰期为30min或更长。相反，在类似的测试中，对比化合物56-59的Notch1IC50值的范围为5.1nM至64.1nM而Notch3IC50值的范围为12.5nM至74.5nM；对比化合物56-60的人代谢稳定性半衰期为9min或更短。
人类肿瘤异种移植小鼠模型
所有啮齿动物均获自HarlanSpragueDawleyCo.(Indianapolis,Indiana)，且在无氨环境中维持于确定且无病原体群落中。隔离所有小鼠约1周，之后将其用于肿瘤增殖和药物功效测试。小鼠随意取食食物和水。百时美施贵宝医药研究所(Bristol-MyersSquibbPharmaceuticalResearchInstitute)的动物照护计划完全由美国实验室动物照护评鉴协会(AmericanAssociationforAccreditationofLaboratoryAnimalCare，AAALAC)认可。所有实验根据百时美施贵宝(BMS)动物测试方法和准则进行。
使肿瘤异种移植物在免疫功能降低的balb/cnu/nu裸小鼠或NOD-SCID小鼠(HarlanSpragueDawley)中皮下(SC)生长并维持。使用自供体小鼠获得的肿瘤碎片使肿瘤在适当小鼠品系(表23)中以皮下移植物形式增殖。
表23
各种人类肿瘤异种移植物在小鼠中的增殖的组织学类型和宿主小鼠品系/性别要求
肿瘤类型 组织学 小鼠品系 性别
TALL-1 所有 NOD-SCID 雌性
MDA-MB-157 乳腺 NOD-SCID 雌性
MDA-MB-468 乳腺 NOD-SCID 雌性
临床前化学疗法试验
在实验开始时汇集检测有意义的应答需要的所需数目的动物且用13号套管针给予各动物肿瘤碎片的皮下植入物(约20mg)。使肿瘤生长至预定尺寸窗(sizewindow)(排除所述范围以外的肿瘤)且将动物平均分配至各个处理组和对照组中。每个处理组和对照组通常8只小鼠，其中例外为在SAL-IGF(此未包括在表23中)肿瘤模型中进行的实验，其中每个处理组和对照组通常5只小鼠。基于个体体重处理各动物。每天检查经处理的动物的处理相关毒性/死亡。在开始处理之前对各组动物进行称重(Wt1)，且在最后一次处理给药后再次称重(Wt2)。体重差(Wt2-Wt1)提供处理相关毒性的量度。
通过每周两次用测径规测量肿瘤来确定肿瘤应答，直至肿瘤达到0.5gm或1gm的预定“目标”尺寸为止，视肿瘤类型而定。自下式估算肿瘤重量(mg)：
肿瘤重量＝(长度×宽度2)÷2
肿瘤应答准则以肿瘤生长抑制(％TGI)表示。肿瘤生长延迟定义为经处理的肿瘤(T)达到预定目标尺寸所需的时间(天)相较于对照组(C)的差值。出于此目的，各组的肿瘤重量表示为中值肿瘤重量(MTW)。
肿瘤生长抑制如下计算：
其中，
Ct＝在处理结束时中值对照组肿瘤尺寸
C0＝在处理开始时中值对照组肿瘤尺寸
Tt＝在处理结束时处理组的中值肿瘤尺寸
T0＝在处理开始时处理组的中值肿瘤尺寸
活性是定义为达成50％或50％以上持久肿瘤生长抑制(也即TGI≥50％)或细胞对数杀灭为0.5或0.5以上(LCK≥0.5)并维持相当于至少1个肿瘤体积倍增时间的时间，且药物处理必须维持相当于至少2个肿瘤体积倍增时间的时间。
肿瘤应答也以肿瘤生长延迟(TGD值)表示，定义为经处理的肿瘤(T)达到预定目标尺寸所需的时间(天)相较于对照组(C)的差值。
在可能时，在直至最大耐受剂量(MTD)的剂量范围内测定抗肿瘤活性，所述最大耐受剂量是定义为仅低于出现过量毒性(也即，一例以上死亡)的剂量的剂量。当出现死亡时，记录死亡日。在肿瘤达到目标尺寸之前死亡的经处理小鼠视作因药物毒性而死亡。无带有小于目标尺寸的肿瘤的对照小鼠死亡。具有一例以上因药物毒性所致的死亡的处理组视作经受过度毒性处理且其数据不纳入评估化合物的抗肿瘤功效。
影响处理可耐受性的潜在药物毒性相互作用为组合化学疗法试验中的重要考虑事项。对组合治疗结果的解释必须基于比较在类似耐受剂量下单一药剂与组合的最佳可能应答的抗肿瘤活性。因此，治疗协同作用是定义为以组合药剂的耐受方案达成的治疗作用超过在单一疗法的任何耐受剂量下所达成的最佳作用。使用葛氏广义威尔卡逊检验(Gehan'sgeneralizedWilcoxontest)对数据进行统计学评估。在P<0.05时表示具统计显著性。
药物给予
在体外研究中，将所有药剂溶解于100％DMSO中，且在培养基/10％胎牛血清中连续稀释。为给予啮齿动物Notch抑制剂，使用以下赋形剂：ETOH/TPGS/PEG300(10:10:80)。虽然通常以QD×15(10天给药-2天中止-5天给药)的方案口服给予Notch抑制剂，但其它方案也经评估且展示为有效的。举例而言，由QD×12(4天给药，3天中止)组成的给药方案展示与QD×15(10天给药-2天中止-5天给药)同样有效。在BID研究中，在第一剂后6-12小时给予第二剂。
体内抗肿瘤活性
在植入小鼠体内的人类肿瘤异种移植物中评估口服(PO)给予的实施例1的抗肿瘤活性。如图12-16所示，实施例1展现抗肿瘤活性。
下表24列出在人类肿瘤异种移植小鼠模型中所测量的本发明实施例的抗肿瘤活性。如由实施例1、10、35、37、40和52所例示的本发明化合物在口服给予(PO)、BID和/或QD下展示抗肿瘤活性。
表24
方案：QD×10；口服给予
QD-每天一次
LCK-细胞杀灭对数值(LogCellKill)
前药评估
将雄性SPRAGUE大鼠(250-300g)用于药代动力学研究。将大鼠在给药前空腹过夜并在给药后4小时进食。在各研究中，各组动物(N＝2-3)通过经口喂食接受测试化合物。在给药后0.5、1、3、5、7和24h自颈静脉采集血液样品(～0.3mL)至含K2EDTA-的管中。将通过在4℃(1500-2000xg)离心获得的血浆样品在-20℃保存直至通过LC/MS/MS进行分析。
通过对血浆浓度(通过LC/MS/MS测定)vs.时间数据(ThermoKineticaSoftwareversion5.0)的非隔室分析获得药代动力学数据。自实验观察直接记录峰浓度(Cmax)和到达Cmax的时间Tmax。使用线性和对数梯形求和法计算从0时间至最后一次采样时间的曲线下面积(AUC0-t)。在IV给药后估算总血浆清除率(CLTp)、稳态分布容积(Vss)、表观消除半衰期(t1/2)和平均驻留时间(MRT)。使用最少3个具有可计量浓度的时间点估算t1/2。根据口服和IV给药的剂量标准化AUC值的比例估算绝对口服利用度F。将给予前药后的实施例1的血浆暴露(AUC0-24h或AUC0-7h)与给予实施例1后的暴露进行对比。估算前药/实施例1的相对利用度(表25)。
表25
*AUC0-7h。

Claims (11)

1.式(I)化合物和/或至少一种其盐，
其中：
R1为-CH2CH2CF3；
R2为-CH2(环丙基)、-CH(CH3)(环丙基)或-CH2CH2CH3；
R3为H、-CH3或Rx；
R4为H或Ry；
Rx为：-CH2OP(O)(OH)2、-CH2OC(O)CH(CH(CH3)2)NH2、
Ry为-SCH2CH2NH2、-SCH2CH(NH2)C(O)OH、-SCH2CH(NH2)C(O)OCH3或
Ra为F、Cl、Br、-CN、-OH、-CH3、-CH2OH、环丙基、-CF3、-OCH3或-O(环丙基)；
各Rb独立地为F、Cl、-CH3、-OCH3和/或-CF3；
Rc为Cl、Br、-CH3、-OCH3或-O(环丙基)；
y为0或1；且
z为0、1或2；
前提是如果R3为Rx，则R4为H；且如果R4为Ry，则R3为H或-CH3。
2.权利要求1的化合物和/或至少一种其盐，其中：
R2为-CH2(环丙基)或-CH(CH3)(环丙基)。
3.权利要求1的化合物和/或至少一种其盐，其中：
R2为-CH2CH2CH3。
4.权利要求1的化合物和/或至少一种其盐，其中：
R3为H或-CH3；
R4为H。
5.权利要求1的化合物和/或至少一种其盐，其中：
y为0。
6.权利要求1的化合物和/或至少一种其盐，其中：
R1为-CH2CH2CF3；
R2为-CH2(环丙基)；
R3为H或Rx；
Ra为F、-CH3或-CH2OH；
Rb为F；
y为0；且
z为0或1。
7.权利要求1的化合物，其选自：
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(1)；
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-甲氧基-2-氧代-5-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(2)；
(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-5-(3-氟-5-甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(3)；
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-5-(3-氟苯基)-9-甲氧基-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(4)；
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-(环丙基氧基)-5-(3-氟苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(5)；
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-(环丙基氧基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(6)；
(2R,3S)-N-((3S)-5-(4-氯苯基)-9-环丙基-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(7)；
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-羟基-5-(3-甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(8)；
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-甲基-2-氧代-5-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(9)；
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-5-(3-氟苯基)-9-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(10)；
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(11)；
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-5-(4-氟苯基)-9-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(12)；
(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-5-(2-甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(13)；
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-(9-环丙基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(14)；
(2R,3S)-N-((3S)-9-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(15)；
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-5-(4-甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(16)；
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-7-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(17)；
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-8-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(18)；
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-5-(3-甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(19)；
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(20)；
(2R,3S)-N-((3S)-5-(4-氯苯基)-9-甲氧基-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(21)；
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-5-(3-甲氧基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(22)；
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-5-(3-氟苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(23)；
(2R,3S)-N-((3S)-5-(3-氯苯基)-9-氟-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(24)；
(2R,3S)-N-((3S)-5-(4-氯苯基)-9-甲氧基-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(25)；
(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-5-(3-氯苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(26)；
(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-5-(4-氯苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(27)；
(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-5-(4-氯苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(28)；
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-氟-8-甲氧基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(29)；
(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-5-(3-甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(30)；
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-甲氧基-5-(3-甲基苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(31)；
(2R,3S)-N-((3S)-9-氰基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(32)；
(2R,3S)-N-((3S)-9-甲氧基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-((1-甲基环丙基)甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(33)；
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-8,9-二氯-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(34)；
(2R,3S)-N-((3S)-2-氧代-5-苯基-9-(三氟甲基)-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(35)；
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-2-氧代-5-苯基-9-(三氟甲基)-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(36)；
(2R,3S)-N-((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(37)；
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-9-甲氧基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(38)；
(2R,3S)-N-((3S)-8-溴-9-甲氧基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(39)；
(2R,3S)-N-((3S)-9-甲氧基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(40)；
(2R,3S)-N-((3S)-9-羟基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(41)；
(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(42)；
(2R,3S)-N-((3S)-9-氯-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-丙基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(43)；
(4-(膦酰基氧基)苯基)乙酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(44)；
二氢磷酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(45)；
3-((膦酰基氧基)甲基)苯甲酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-1-氨基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(46)；
5-((膦酰基氧基)甲基)-吡啶-2-甲酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(47)；
3-(2,4-二甲基-6-(膦酰基氧基)苯基)-3-甲基丁酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(48)；
S-(((2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨甲酰基)己酰基)氨基)-L-半胱氨酸·TFA(49)；
(2S,3R)-N1-((2-氨基乙基)硫烷基)-2-(环丙基甲基)-N4-((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-3-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺·TFA(50)；
S-(((2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨甲酰基)己酰基)氨基)-L-半胱氨酸甲基酯·TFA(51)；
L-缬氨酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(52)；
1-氨基环丙烷甲酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(53)；
(2S,3R)-2-(环丙基甲基)-N4-((3S)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-N1-(1-吡咯烷基甲基)-3-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(54)；
4-((膦酰基氧基)甲基)苯甲酸((3S)-3-(((2R)-2-((1S)-2-氨基-1-(环丙基甲基)-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酰基)氨基)-9-氟-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(55)；
和其盐。
8.药物组合物，其包含至少一种权利要求1的化合物和/或至少一种其盐；以及药学上可接受的载体。
9.权利要求1至8中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗癌症的疗法中。
10.权利要求9的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述疗法进一步包含一种或多种选自以下的其它药物，顺序给药或同时给药用于治疗癌症：达沙替尼、紫杉醇、他莫西芬、地塞米松和卡铂。
11.权利要求1至8任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其用于制备用于治疗癌症的药物。
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