CN105294860A - 一种抗龋齿菌抗体的制备方法及其应用 - Google Patents
一种抗龋齿菌抗体的制备方法及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
一种抗龋齿菌抗体的制备方法及其应用，用多型变异链球菌作为复合免疫原，采用多点免疫技术对脯乳类动物（马牛羊兔等）进行免疫，采集动物血清，用离心法结合层析法提取抗体。用本发明获得的抗体效价高于其它来源的抗体，对变异链球菌具有较强的免疫抑制活性，对该菌株的C型和D型均有较强的交叉抑制活性，以该抗体为有效成分制备相应的功能食品和保健品，具有使用安全防治效果好等特点，可有效地的防止人类龋齿等口腔疾病的发生。
Description
技术领域
本发明属于医学技术领域，具体是一种龋齿抗体的制备方法。
背景技术
变异链球菌被公认为是龋齿主要的致龋菌。目前对变异链球菌进行被动免疫的措施有两种，一是将单一的或混合的变异链球菌菌体蛋白作抗原，免疫马牛羊兔等哺乳类动物，从动物血清中提取抗体，进行被动免疫防龋；二是将变异链球菌菌体中的葡糖基转移酶作为抗原，免疫脯乳类动物，从血清中提取抗体，进行被动免疫防龋。但现有的抗体制备技术存在以下问题：（1）抗体制备成本过高，特别是用葡糖基转移酶作抗原时，抗原提取困难；（2）抗体的效价较低，现有制备技术抗体效价最高也只有1:320。
发明内容
本发明的目的是提供一种抗龋齿菌抗体IgG的制备方法，使抗体的生产成本降低，抗体效价提高。本发明的另一目的，是抗龋齿菌抗体IgG的应用，提供以本发明制备的抗变异链球菌抗体IgG和抗菌剂作为有效成份的防止龋齿的组合物。
采用的技术方案是：
一种抗龋齿菌抗体的制备方法，包括下述步骤：
1、取c型和d型两种变异链球菌，分别在BHI培养基或TTY培养基中培养2-3天；将培养好的两种变异链球菌分别进行离心处理，收集菌体，用pH值为6-7、浓度为0.05-0.2M的磷酸缓冲生理盐水洗菌体4-6次，50-65℃的温度下，加热25-35分钟，进行热处理，得到c型变异链球菌液和d型变异链球菌液。
将c型变异链球菌液和d型变异链球菌液，按1-2:1的比例混合，并加入与上述两液体之总量等量的福氏佐剂，用高速匀浆器处理，制得菌体抗原。
c型变异链球菌液，d型变异链球菌液和其它型菌液的混合比例最好为1：1：1。
每次取本发明的变异链球菌抗原1.0ml，对脯乳类动物进行淋巴结和背部皮下多点注射，注射三次，每隔三周一次；经检测效价合格后采集血清。取免疫血清搅拌下加入适量盐水稀释，调节pH值至7.5-8.5，加入等量饱和硫酸铵溶液，在2-8℃温度下静置20-30小时，高速离心20-30分钟，取其沉淀，经复融超滤浓缩除盐、除菌后冷冻干燥，即得抗龋齿菌抗体IgG粗提物（粗品）。
3、将抗龋齿菌抗体IgG粗提物离心纯化，离心纯化速度为5000-2500rpm，离心次数为2-5次，再经DEAE-SephadexA50层析柱层析。用含0.03-0.1MNaCl的磷酸缓冲液进行连续或分段梯度洗脱，洗脱液磷酸缓冲液浓度为0.003-0.02M。再用凝胶过滤柱层析洗脱液磷酸缓冲液浓度为0.01-0.2M，所含NaCl的浓度为0.1-0.5M。亲和层析洗脱液浓度为0.1-0.5M。
自动收集洗脱液；收集各蛋白洗脱峰，并以ELISA检测各蛋白的抗体活性；收集留取有抗体活性的蛋白洗脱液，调节蛋白含量为20mg/ml。
将前一步骤所得的蛋白洗脱液再经SephadexG200凝胶柱层析。用含0.05-0.2MNaCl的磷酸缓冲液进行连续或分段梯度洗脱，自动收集洗脱液；收集各蛋白洗脱峰，并以ELISA检测各蛋白的抗体活性；收集留取有抗体活性的蛋白洗脱液，0.22μ膜过滤除菌，冷冻干燥，即得抗龋齿菌抗体IgG纯品。
本发明制备的抗变异链球菌抗体IgG用于抗龋齿菌产品的添加量为每5-20g/Kg。其产品为以抗龋齿菌抗体IgG为有效成份的防龋齿的组合物。
本发明选择c型和d型变异链球菌作为抗原菌体，是基于以下研究结果考虑的。
变异链球菌按其血清分型，有a、b、c、d、e、f、g、h等血清型，但是对口腔中变异链球菌的检测表明，c型菌株约占60-90%，d型菌株约占10%，其它几种血清型菌的检出率很低。所以，c型和d型变异链球菌是引起龋齿的主要血清型菌，选择c型和d型变异链球菌作为主要抗原菌体，既避免了多种血清型混合菌作抗原时，主要血清型菌效用降低的问题；也避免了当单一血清型菌作抗原时，交叉免疫反应范围偏窄的问题。
另外，研究表明，从口腔变异链球菌的细胞壁提取出A和B蛋白抗原，其中c型变异链球菌的细胞壁含有A和B蛋白抗原，b型变异链球菌仅含有A蛋白抗原，a、d、e、f和g型变异链球菌则只含B蛋白抗原，所以，以c型菌和d型菌作为抗原，保证了抗体具有很大范围的交叉反应。
经检测表明本发明抗体IgG达到了PAGE纯，经分子量测定，抗体IgG分子量为160,000道尔顿。
抗体IgG理化实验结果表明，本发明抗体IgG在65℃条件下，90分钟内仍保持有活性；在pH4.0-11.0的环境中，37℃、8小时候活性无明显变化，但在pH2.0和pH12.0时活性迅速下降，并且很快失活；本发明抗体IgG具有较大的抗渗透压性质，可耐受40%的蔗糖渗透压。
抗体IgG间接血凝抑制实验表明，本发明抗体IgG能有效地抑制变异链球菌凝聚，其效价高达1:512；抗体IgG抑制变异链球菌粘附实验观察表明，本发明的抗体IgG稀释到1:8，仍具有明显的抑制变异链球菌粘附作用；动物实验表明，用本发明抗体IgG喂养感染变异链球菌的大白鼠，能有效地防止龋齿的发生，检测表明菌斑中变异链球菌数下降了70-80%。
本发明所述的防龋齿组合物是指以本发明抗体IgG和山梨酸钾、苯甲酸钠两种抗菌剂中至少一种作为有效成份的组合物。这种防龋齿组合物，可以是牙膏、口含液、漱口水等口腔用产品，也可以是口香糖、巧克力、雪糕、冰激凌等食物。本发明抗体IgG的加入量通常为0.05-0.2%，山梨酸钾、苯甲酸钠的加入量通常为0.01-0.02%。
本发明的防龋齿组合物为液体状态时，可将其装入小型携带式喷雾罐中喷雾使用。
本发明抗体IgG还可与牙齿着色除去剂、预防口臭剂等蛀牙预防剂配合，制成各种防治产品。也可以加入到各种口腔清新剂中，增加口腔清新剂的防龋齿功能。
本发明抗体IgG制备技术生产成本低，抗体效价高，抗渗透压强，对变异链球菌具有较强的免疫活性，且对变异链球菌具有很大范围的交叉反应。本发明的防龋齿组合物，具有抗体IgG加量小，使用安全，防治效果好等特点，能有效地防止龋齿的发生。
本发明将通过以下实施例作进一步的描述。
一、抗体的制备。
实施例1用BHI培养基，在37℃温度条件下，分别静置培养c型和d型变异链球菌48小时，将培养后的c型和d型变异链球菌分别用4000rpm离心10分钟，收集菌体；用pH值为6.0、浓度为0.2M的磷酸缓冲生理盐水洗菌体5次，50℃、25分钟加热处理，分别制得c型变异链球菌液（20亿/ml）和d型变异链球菌液（20亿/ml）；取c型变异链球菌液和d型变异链球菌液，按2:1的比例混合，得变异链球菌混合液（20亿/ml），然后加入与变异链球菌混合液等量的福氏佐剂，用高速匀浆器处理，制得变异链球菌菌体抗原。
每次取菌体抗原1.0ml，对动物进行皮下注射，免疫三次，每隔三周一次。
第三次免疫脯乳类动物20天后开始收集抗血清用盐水稀释，调节pH值至8.0，搅拌下加入等量饱和硫酸铵溶液置2-8℃静置24小时，8000rpm离心20分钟，取沉淀，经超滤除盐、浓缩、除菌后冷冻干燥，制得抗龋齿菌抗体IgG粗提物。
将抗龋齿菌抗体IgG粗提物经DEAE-SephadexA50层析柱层析。柱床2.5×35cm，加样3.0ml（10mg/ml），用含0.07MNaCl的0.01M、pH7.0磷酸缓冲液进行洗脱，流速20ml/h，洗脱液按每管5.0ml自动收集；收集各蛋白洗脱峰，并以ELISA检测各蛋白的抗体活性；收集留取有抗体活性的蛋白洗脱液，调节蛋白含量为20mg/ml。继而将该液进一步经SephadexG200凝胶柱层析。柱床2.0×65cm，加样1.5ml，用含0.1MNaCl的0.01M、pH7.0磷酸缓冲液进行洗脱，流速8.0ml/h，洗脱液按每管5.0ml自动收集，收集各蛋白洗脱峰，并以ELISA检测各蛋白的抗体活性。收集留取有抗体活性的蛋白洗脱液，0.22μ膜过滤除菌，冷冻干燥，即得抗龋齿菌抗体IgG纯品。
二、防龋齿组合物产品的制备。
实施例2、抗体IgG口含液的制备。取本发明抗体IgG2.0g，山梨酸钾0.15g，苯甲酸钠0.15g，阿斯巴甜0.8g，薄荷脑0.15g，苹果香精0.4ml。将薄荷脑加入100ml的蒸馏水中，60℃溶化；其它固体成份各溶解于450ml的蒸馏水中，然后将各种溶解的液体均匀混合，用蒸馏水定容到1000ml。
实施例3、抗体IgG口香糖的制备。取本发明抗体IgG2.0g，山梨酸钾0.15g，阿斯巴甜0.8g，薄荷脑0.15g，微囊化苹果香精0.4g，胶基10.0g，羟甲基纤维素5.0g，按总量1千克，再加入基料。
实施例4、抗体IgG牙膏的制备。取本发明抗体IgG0.1g，山梨酸钾0.015g，苯甲酸钠0.015g，甘油10.0g，山梨糖醇8.0g，羟甲基纤维素2.0g，龙须菜1.3g，月桂基硫酸钠1.8g薄荷脑0.015g，阿斯巴甜0.015g，草莓香精0.05ml，磷酸钙二水物47.8g。将羟甲基纤维素、龙须菜加入约60ml的蒸馏水中，泡胀溶解，再先后加入其它成份，充分搅拌，使混合均匀，最后加入蒸馏水定容至100ml，搅拌均匀成膏状。
实施例5、抗体IgG护齿膏的制备。取本发明抗体IgG0.1g，苯甲酸钠0.01g，蜂蜡8.0g，硬脂酸10.0g甘油单硬脂酸酯2.0g，甘油10.0g，羟甲基纤维素1.0g，薄荷脑0.01g，阿斯巴甜0.05g，蒸馏水68.80ml，草莓香精0.02g。将蜂蜡、硬脂酸、甘油单硬脂酸酯、甘油混合，加热至70℃，混合溶解之液体称之为A液；将羟甲基纤维素溶解于50ml的蒸馏水中，泡胀溶解，再先后加入抗体IgG、薄荷脑、阿斯巴甜、山梨酸钾、草莓香精，充分搅拌，混合均匀，继而加入冷却后的A液，最后加入蒸馏水定容至100ml，搅拌均匀成膏状。
Claims (9)
1.一种抗龋齿菌抗体的制备方法，其特征在于包括下述步骤：
（1）取c型和d型两种变异链球菌，分别在BHI培养基或TTY培养基中培养2-3天；将培养好的两种变异链球菌分别进行离心处理，收集菌体，用pH值为6-7、浓度为0.05-0.2M的磷酸缓冲生理盐水洗菌体4-6次，50-65℃的温度下，加热25-35分钟，进行热处理，得到c型变异链球菌液和d型变异链球菌液；
将c型变异链球菌液和d型变异链球菌液，按1-2:1的比例混合，并加入与上述两液体之总量等量的福氏佐剂，用高速匀浆器处理，制得菌体抗原；
（2）、每次取变异链球菌抗原1.0ml，对脯乳类动物进行淋巴结和背部皮下多点注射，注射三次，每隔三周一次；经检测效价合格后采集血清，取免疫血清搅拌下加入适量盐水稀释，调节pH值至7.5-8.5，加入等量饱和硫酸铵溶液，在2-8℃温度下静置20-30小时，高速离心20-30分钟，取其沉淀，经复融超滤浓缩除盐、除菌后冷冻干燥，即得抗龋齿菌抗体IgG粗提物；
（3）、将抗龋齿菌抗体IgG粗提物离心纯化后，再经DEAE-SephadexA50层析柱层析；用含NaCl的磷酸缓冲液进行连续或分段梯度洗脱，自动收集洗脱液；收集各蛋白洗脱峰，并以ELISA检测各蛋白的抗体活性；收集留取有抗体活性的蛋白洗脱液，调节蛋白含量为20mg/ml；
将前一步骤所得的蛋白洗脱液再经SephadexG200凝胶柱层析；用含NaCl的磷酸缓冲液进行连续或分段梯度洗脱，自动收集洗脱液；收集各蛋白洗脱峰，并以ELISA检测各蛋白的抗体活性；收集留取有抗体活性的蛋白洗脱液，0.22μ膜过滤除菌，冷冻干燥，即得抗龋齿菌抗体IgG纯品。
2.根据权利要求1所述的一种抗龋齿菌抗体的制备方法，其特征在于离心纯化的速度为5000-2500rpm，离心次数2-5次，DEAE阴离子交换层析法中，洗脱液磷酸缓冲液的浓度为0.003-0.02M，所含NaCl的浓度为0.03-0.1M，凝胶过滤柱层析洗脱液磷酸缓冲液浓度为0.01-0.2M，所含NaCl的浓度为0.1-0.5M；
亲和层析洗脱液浓度为0.1-0.5M。
3.根据权利要求1或2所述的一种抗龋齿菌抗体的制备方法，其特征在于：
c型变异链球菌液，d型变异链球菌液和其它型菌液的混合比例为1：1：1。
4.根据权利要求1所述的一种抗龋齿菌抗体的制备方法，其特征在于：
用BHI培养基，在37℃温度条件下，分别静置培养c型和d型变异链球菌48小时，将培养后的c型和d型变异链球菌分别用4000rpm离心10分钟，收集菌体；用pH值为6.0、浓度为0.2M的磷酸缓冲生理盐水洗菌体5次，50℃、25分钟加热处理，分别制得c型变异链球菌液20亿/ml和d型变异链球菌液20亿/ml；取c型变异链球菌液和d型变异链球菌液，按2:1的比例混合，得变异链球菌混合液20亿/ml，然后加入与变异链球菌混合液等量的福氏佐剂，用高速匀浆器处理，制得变异链球菌菌体抗原；
每次取菌体抗原1.0ml，对动物进行皮下注射，免疫三次，每隔三周一次；
第三次免疫脯乳类动物20天后开始收集抗血清用盐水稀释，调节pH值至8.0，搅拌下加入等量饱和硫酸铵溶液置2-8℃静置24小时，8000rpm离心20分钟，取沉淀，经超滤除盐、浓缩、除菌后冷冻干燥，制得抗龋齿菌抗体IgG粗提物；
将抗龋齿菌抗体IgG粗提物经DEAE-SephadexA50层析柱层析；柱床2.5×35cm，加入10mg/ml的样3.0ml，用含0.07MNaCl的0.01M、pH7.0磷酸缓冲液进行洗脱，流速20ml/h，洗脱液按每管5.0ml自动收集；收集各蛋白洗脱峰，并以ELISA检测各蛋白的抗体活性；收集留取有抗体活性的蛋白洗脱液，调节蛋白含量为20mg/ml；继而将该液进一步经SephadexG200凝胶柱层析；柱床2.0×65cm，加样1.5ml，用含0.1MNaCl的0.01M、pH7.0磷酸缓冲液进行洗脱，流速8.0ml/h，洗脱液按每管5.0ml自动收集，收集各蛋白洗脱峰，并以ELISA检测各蛋白的抗体活性；收集留取有抗体活性的蛋白洗脱液，0.22μ膜过滤除菌，冷冻干燥，即得抗龋齿菌抗体IgG纯品。
5.用本发明方法制备的抗龋齿菌抗体IgG，加入山梨酸钾、苯甲酸钠两种抗菌剂中至少一种作为有效成份的防龋齿组合物，包括牙膏、口含液、漱口水和喷雾剂型的口腔用产品，或是口香糖、巧克力、雪糕、冰激凌食物，本发明抗体IgG的加入量为0.05-0.2%，山梨酸钾、苯甲酸钠的加入量为0.01-0.02%。
6.采用本发明方法制备的抗龋齿菌抗体IgG，制备抗体IgG口含液的方法，是取本发明抗体IgG2.0g，山梨酸钾0.15g，苯甲酸钠0.15g，阿斯巴甜0.8g，薄荷脑0.15g，苹果香精0.4ml；将薄荷脑加入100ml的蒸馏水中，60℃溶化；其它固体成份各溶解于450ml的蒸馏水中，然后将各种溶解的液体均匀混合，用蒸馏水定容到1000ml，即得。
7.用本发明方法制备的抗龋齿菌抗体IgG，制备口香糖的方法，是取本发明抗体IgG2.0g，山梨酸钾0.15g，阿斯巴甜0.8g，薄荷脑0.15g，微囊化苹果香精0.4g，胶基10.0g，羟甲基纤维素5.0g，按总量1千克，即得。
8.用本发明方法制备的抗龋齿菌抗体IgG，制牙膏的方法，是取本发明抗体IgG0.1g，山梨酸钾0.015g，苯甲酸钠0.015g，甘油10.0g，山梨糖醇8.0g，羟甲基纤维素2.0g，龙须菜1.3g，月桂基硫酸钠1.8g薄荷脑0.015g，阿斯巴甜0.015g，草莓香精0.05ml，磷酸钙二水物47.8g，将羟甲基纤维素、龙须菜加入约60ml的蒸馏水中，泡胀溶解，再先后加入其它成份，充分搅拌，使混合均匀，最后加入蒸馏水定容至100ml，搅拌均匀成膏状，即得。
9.用本发明方法制备的抗龋齿菌抗体IgG，制备护齿膏的方法，是取本发明抗体IgG0.1g，苯甲酸钠0.01g，蜂蜡8.0g，硬脂酸10.0g甘油单硬脂酸酯2.0g，甘油10.0g，羟甲基纤维素1.0g，薄荷脑0.01g，阿斯巴甜0.05g，蒸馏水68.80ml，草莓香精0.02g，将蜂蜡、硬脂酸、甘油单硬脂酸酯、甘油混合，加热至70℃，混合溶解之液体称之为A液；将羟甲基纤维素溶解于50ml的蒸馏水中，泡胀溶解，再先后加入抗体IgG、薄荷脑、阿斯巴甜、山梨酸钾、草莓香精，充分搅拌，混合均匀，继而加入冷却后的A液，最后加入蒸馏水定容至100ml，搅拌均匀成膏状，即得。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110872345A (zh) * | 2019-08-20 | 2020-03-10 | 中科世生(北京)医药科技有限公司 | 一种高纯免疫球蛋白g的制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1207048A (zh) * | 1995-11-09 | 1999-02-03 | 安蒂·S·阿尔托南 | 抗耳炎的预防免疫牛奶制剂 |
| CN1307061A (zh) * | 2000-01-25 | 2001-08-08 | 雅臣药业集团（远东）有限公司 | 抗龋齿菌IgY的制备及防龋齿组合物 |
-
2015
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1207048A (zh) * | 1995-11-09 | 1999-02-03 | 安蒂·S·阿尔托南 | 抗耳炎的预防免疫牛奶制剂 |
| CN1307061A (zh) * | 2000-01-25 | 2001-08-08 | 雅臣药业集团（远东）有限公司 | 抗龋齿菌IgY的制备及防龋齿组合物 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 王鸿利等: "《医学实验技术的理论与应用》", 30 November 2004, 上海科技教育出版社 * |
| 赵肃清等: "《生命科学及生物技术现状与前景》", 31 May 2015, 广东经济出版社 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110872345A (zh) * | 2019-08-20 | 2020-03-10 | 中科世生(北京)医药科技有限公司 | 一种高纯免疫球蛋白g的制备方法 |
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Application publication date: 20160203 |