CN105293717B - 一种爬山虎叶固化水体脱氮微生物制剂的制备方法 - Google Patents
一种爬山虎叶固化水体脱氮微生物制剂的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种爬山虎叶固化水体脱氮微生物制剂的制备方法，属于微生物制剂制备领域。本发明微生物制剂是取爬山虎树叶处理得碎叶备用，取甘露醇、胰蛋白胨、淀粉和琼脂制得微生物培养基，将处理后的池塘污泥置于培养基中培养，与无菌水混合过滤得滤液接种至微生物培养基上，添加营养液反复培养，与无菌水混合过滤得滤液，离心分离后得脱氮生物菌种，再与备用的爬山虎碎叶屑、甘油和脱脂乳混合，经烘干过筛制得。本发明的有益效果是：本发明制得的微生物制剂性状稳定，有效活菌数多，易保存，保存期为10～18个月；制备方法简单，成本低，处理时耗时短，脱氮率达92%以上，值得推广与使用。
Description
技术领域
本发明涉及一种爬山虎叶固化水体脱氮微生物制剂的制备方法，属于微生物制剂制备领域。
背景技术
随着水产养殖行业的迅速发展，致使养殖水体日趋富营养化，对周边水域环境和生态环境造成了巨大的危害。养殖过程中抗生素、杀菌剂等的不规范使用，一方面导致养殖水域出现药物残留，继而出现各种药菌，另一方面水体有益微生物减少，造成养殖水体有机物降解率降低，水体自净能力遭到破坏。因此对养殖池塘进行水体修复愈加迫切，水产养殖用微生物制剂这一新兴产业成为水产养殖未来发展的重点方向。微生态制剂是在微生态学理论的指导下，调整生态失调，保持微生态平衡，提高人、动物、植物健康水平或增进健康状态的生理性活菌制品，及其代谢产物以及促进这些生理菌群生长繁殖的物质制品。微生物修复养殖水体环境虽然有着诸多优势，但微生物制剂的活性受水体各种环境因子影响较大，耗时长，需长期使用且施用效果单一，使用时性状不稳定，有效活菌数少。现有的水产养殖用微生物制剂技术还处于较低水平，主要为引进国外的有益微生物菌剂或通用的菌剂，缺乏高效的、特效的微生物菌剂，特别是缺乏快速降解水体氨氮和亚硝氮的微生物制剂。液态微生物制剂体积大，保存期短，作用不方便。因此，市场急需一种高效的新型养殖水质修复用微生物制剂产品。
发明内容
本发明所要解决的技术问题：针对目前微生物制剂处理养殖水体时微生物活性受水体各种环境因子影响较大，需长期使用，使用时性状不稳定，有效活菌数少，且现有微生物制剂大多为引进国外的通用菌剂，导致处理耗时长、施用效果单一，处理成本高的弊端，提供了一种爬山虎叶固化水体脱氮微生物制剂的制备方法，本发明是取爬山虎树叶处理得碎叶备用，取甘露醇、胰蛋白胨等物质制得微生物培养基，将池塘污泥置于培养基中培养，与无菌水混合过滤得滤液接种至微生物培养基上，添加营养液反复培养，与无菌水混合过滤得滤液，离心分离后得脱氮生物菌种，再与备用的爬山虎碎叶屑、甘油和脱脂乳混合，经烘干过筛制得。本发明制备方法简单，所得产品性状稳定，有效活菌数多。
为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是：
(1)选取夏季生长1～2月的爬山虎树叶，将其取下并冲洗干净，将其置于阳光下暴晒至完全枯黄脱水，并将其进行揉搓挤压至爬山虎叶子完全与主茎脉分离，收集破碎叶片并置于气流粉碎机中粉碎过筛，制得100～120目爬山虎碎叶屑备用；
(2)按重量份数计，选取20～65份的甘露醇、5～15份的胰蛋白胨、15～20份的淀粉和20～45份的琼脂，搅拌混合形成培养基，并加入去离子水调节pH为5.0～5.5即可，待调节完pH后，对其升温至120℃灭菌10～20min，制得微生物培养基；
(3)选取需要治理的池塘污泥，将其置于阴凉处风干至含水量为60～70％，随后按20g/份将风干后的池塘污泥置于上述制备的微生物培养基中，在18～20℃下培养2～3周，随后将培养完成的培养基和无菌水按质量比1:10进行混合搅拌并对其过滤，收集滤液1；
(4)将收集的滤液1接种至步骤(2)制备的培养基上，进行培养，培养2～3天后滴加20mL含有2mL质量浓度为10％的氨水溶液的营养液，随后每隔2～3天将掺加的氨水溶液浓度提高5％，直至氨水溶液浓度为80％后，停止滴加营养液培养5～7天，收集培养基并按质量比1:10，将培养基和无菌水搅拌混合并对其过滤，收集滤液2；
(5)将收集的滤液2在18～20℃下，置于12000～15000r/min下离心分离10min，弃去上清液，收集脱氮生物菌种，按质量份数计，分别选取10～35份步骤(1)备用的爬山虎碎叶屑、5～10份脱氮生物菌种、20～30份甘油和40～50份脱脂乳搅拌混合，随后将其置于30～40℃下烘干并过筛，得粒径大小为1～2mm的爬山虎叶固化水体脱氮微生物制剂。
本发明的应用方法：取20～40mg制得的爬山虎叶固化水体脱氮微生物制剂负载于孔径为20μm的筛网上，将筛网竖起安放在养殖水体池塘中，每隔50～60cm安放一个，处理1～3h，测得养殖水体中氮浓度含量从200～400mg/m3降低到15.8～17.6mg/m3，脱氮率达92％以上，水体修复使用效果好。
本发明与其他方法相比，有益技术效果是：
(1)本发明制得的微生物制剂性状稳定，有效活菌数多，易保存，保存期为10～18个月；
(2)本发明制备方法简单，成本低，处理时耗时短，脱氮率达92％以上。
具体实施方式
首先选取夏季生长1～2月的爬山虎树叶，将其取下并冲洗干净，将其置于阳光下暴晒至完全枯黄脱水，并将其进行揉搓挤压至爬山虎叶子完全与主茎脉分离，收集破碎叶片并置于气流粉碎机中粉碎过筛，制得100～120目爬山虎碎叶屑备用；然后按重量份数计，选取20～65份的甘露醇、5～15份的胰蛋白胨、15～20份的淀粉和20～45份的琼脂，搅拌混合形成培养基，并加入去离子水调节pH为5.0～5.5即可，待调节完pH后，对其升温至120℃灭菌10～20min，制得微生物培养基；再选取需要治理的池塘污泥，将其置于阴凉处风干至含水量为60～70％，随后按20g/份将风干后的池塘污泥置于上述制备的微生物培养基中，在18～20℃下培养2～3周，随后将培养完成的培养基和无菌水按质量比1:10进行混合搅拌并对其过滤，收集滤液1；将收集的滤液1接种至制备的微生物培养基上，进行培养，培养2～3天后滴加20mL含有2mL质量浓度为10％的氨水溶液的营养液，随后每隔2～3天将掺加的氨水溶液浓度提高5％，直至氨水溶液浓度为80％后，停止滴加营养液培养5～7天，收集培养基并按质量比1:10，将培养基和无菌水搅拌混合并对其过滤，收集滤液2；最后将收集的滤液2在18～20℃下，置于12000～15000r/min下离心分离10min，弃去上清液，收集脱氮生物菌种，按质量份数计，分别选取10～35份备用的爬山虎碎叶屑、5～10份脱氮生物菌种、20～30份甘油和40～50份脱脂乳搅拌混合，随后将其置于30～40℃下烘干并过筛，得粒径大小为1～2mm的爬山虎叶固化水体脱氮微生物制剂。
实例1
首先选取夏季生长1月的爬山虎树叶，将其取下并冲洗干净，将其置于阳光下暴晒至完全枯黄脱水，并将其进行揉搓挤压至爬山虎叶子完全与主茎脉分离，收集破碎叶片并置于气流粉碎机中粉碎过筛，制得100目爬山虎碎叶屑备用；然后按重量份数计，选取42份的甘露醇、5份的胰蛋白胨、18份的淀粉和35份的琼脂，搅拌混合形成培养基，并加入去离子水调节pH为5.0即可，待调节完pH后，对其升温至120℃灭菌10min，制得微生物培养基；再选取需要治理的池塘污泥，将其置于阴凉处风干至含水量为60％，随后按20g/份将风干后的池塘污泥置于上述制备的微生物培养基中，在18℃下培养2周，随后将培养完成的培养基和无菌水按质量比1:10进行混合搅拌并对其过滤，收集滤液1；将收集的滤液1接种至制备的微生物培养基上，进行培养，培养2天后滴加20mL含有2mL质量浓度为10％的氨水溶液的营养液，随后每隔2天将掺加的氨水溶液浓度提高5％，直至氨水溶液浓度为80％后，停止滴加营养液培养5天，收集培养基并按质量比1:10，将培养基和无菌水搅拌混合并对其过滤，收集滤液2；最后将收集的滤液2在18℃下，置于12000r/min下离心分离10min，弃去上清液，收集脱氮生物菌种，按质量份数计，分别选取20份备用的爬山虎碎叶屑、8份脱氮生物菌种、25份甘油和47份脱脂乳搅拌混合，随后将其置于30℃下烘干并过筛，得粒径大小为1mm的爬山虎叶固化水体脱氮微生物制剂。
取20mg制得的爬山虎叶固化水体脱氮微生物制剂负载于孔径为20μm的筛网上，将筛网竖起安放在养殖水体池塘中，每隔50cm安放一个，处理1h，测得养殖水体中氮浓度含量从200mg/m3降低到15.8mg/m3，脱氮率达92.1％，水体修复使用效果好。
实例2
首先选取夏季生长1.5月的爬山虎树叶，将其取下并冲洗干净，将其置于阳光下暴晒至完全枯黄脱水，并将其进行揉搓挤压至爬山虎叶子完全与主茎脉分离，收集破碎叶片并置于气流粉碎机中粉碎过筛，制得110目爬山虎碎叶屑备用；然后按重量份数计，选取45份的甘露醇、10份的胰蛋白胨、15份的淀粉和30份的琼脂，搅拌混合形成培养基，并加入去离子水调节pH为5.2即可，待调节完pH后，对其升温至120℃灭菌15min，制得微生物培养基；再选取需要治理的池塘污泥，将其置于阴凉处风干至含水量为65％，随后按20g/份将风干后的池塘污泥置于上述制备的微生物培养基中，在19℃下培养2.5周，随后将培养完成的培养基和无菌水按质量比1:10进行混合搅拌并对其过滤，收集滤液1；将收集的滤液1接种至制备的微生物培养基上，进行培养，培养2天后滴加20mL含有2mL质量浓度为10％的氨水溶液的营养液，随后每隔3天将掺加的氨水溶液浓度提高5％，直至氨水溶液浓度为80％后，停止滴加营养液培养6天，收集培养基并按质量比1:10，将培养基和无菌水搅拌混合并对其过滤，收集滤液2；最后将收集的滤液2在19℃下，置于13500r/min下离心分离10min，弃去上清液，收集脱氮生物菌种，按质量份数计，分别选取18份备用的爬山虎碎叶屑、10份脱氮生物菌种、30份甘油和42份脱脂乳搅拌混合，随后将其置于35℃下烘干并过筛，得粒径大小为1.5mm的爬山虎叶固化水体脱氮微生物制剂。
取30mg制得的爬山虎叶固化水体脱氮微生物制剂负载于孔径为20μm的筛网上，将筛网竖起安放在养殖水体池塘中，每隔55cm安放一个，处理2h，测得养殖水体中氮浓度含量从300mg/m3降低到17.1mg/m3，脱氮率达94.3％，水体修复使用效果好。
实例3
首先选取夏季生长2月的爬山虎树叶，将其取下并冲洗干净，将其置于阳光下暴晒至完全枯黄脱水，并将其进行揉搓挤压至爬山虎叶子完全与主茎脉分离，收集破碎叶片并置于气流粉碎机中粉碎过筛，制得120目爬山虎碎叶屑备用；然后按重量份数计，选取35份的甘露醇、5份的胰蛋白胨、20份的淀粉和40份的琼脂，搅拌混合形成培养基，并加入去离子水调节pH为5.5即可，待调节完pH后，对其升温至120℃灭菌20min，制得微生物培养基；再选取需要治理的池塘污泥，将其置于阴凉处风干至含水量为70％，随后按20g/份将风干后的池塘污泥置于上述制备的微生物培养基中，在20℃下培养3周，随后将培养完成的培养基和无菌水按质量比1:10进行混合搅拌并对其过滤，收集滤液1；将收集的滤液1接种至制备的微生物培养基上，进行培养，培养3天后滴加20mL含有2mL质量浓度为10％的氨水溶液的营养液，随后每隔3天将掺加的氨水溶液浓度提高5％，直至氨水溶液浓度为80％后，停止滴加营养液培养7天，收集培养基并按质量比1:10，将培养基和无菌水搅拌混合并对其过滤，收集滤液2；最后将收集的滤液2在20℃下，置于15000r/min下离心分离10min，弃去上清液，收集脱氮生物菌种，按质量份数计，分别选取30份备用的爬山虎碎叶屑、5份脱氮生物菌种、20份甘油和45份脱脂乳搅拌混合，随后将其置于40℃下烘干并过筛，得粒径大小为2mm的爬山虎叶固化水体脱氮微生物制剂。
取40mg制得的爬山虎叶固化水体脱氮微生物制剂负载于孔径为20μm的筛网上，将筛网竖起安放在养殖水体池塘中，每隔60cm安放一个，处理3h，测得养殖水体中氮浓度含量从400mg/m3降低到17.6mg/m3，脱氮率达95.6％，水体修复使用效果好。
Claims (1)
1.一种爬山虎叶固化水体脱氮微生物制剂的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：
(1)选取夏季生长1～2月的爬山虎树叶，将其取下并冲洗干净，将其置于阳光下暴晒至完全枯黄脱水，并将其进行揉搓挤压至爬山虎叶子完全与主茎脉分离，收集破碎叶片并置于气流粉碎机中粉碎过筛，制得100～120目爬山虎碎叶屑备用；
(2)按重量份数计，选取20～65份的甘露醇、5～15份的胰蛋白胨、15～20份的淀粉和20～45份的琼脂，搅拌混合形成培养基，并加入去离子水调节pH为5.0～5.5即可，待调节完pH后，对其升温至120℃灭菌10～20min，制得微生物培养基；
(3)选取需要治理的池塘污泥，将其置于阴凉处风干至含水量为60～70％，随后按20g/份将风干后的池塘污泥置于上述制备的微生物培养基中，在18～20℃下培养2～3周，随后将培养完成的培养基和无菌水按质量比1:10进行混合搅拌并对其过滤，收集滤液1；
(4)将收集的滤液1接种至步骤(2)制备的培养基上，进行培养，培养2～3天后滴加20mL含有2mL质量浓度为10％的氨水溶液的营养液，随后每隔2～3天将掺加的氨水溶液浓度提高5％，直至氨水溶液浓度为80％后，停止滴加营养液培养5～7天，收集培养基并按质量比1:10，将培养基和无菌水搅拌混合并对其过滤，收集滤液2；
(5)将收集的滤液2在18～20℃下，置于12000～15000r/min下离心分离10min，弃去上清液，收集脱氮生物菌种，按质量份数计，分别选取10～35份步骤(1)备用的爬山虎碎叶屑、5～10份脱氮生物菌种、20～30份甘油和40～50份脱脂乳搅拌混合，随后将其置于30～40℃下烘干并过筛，得粒径大小为1～2mm的爬山虎叶固化水体脱氮微生物制剂。
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