CN105287399A - 一种多西他赛冻干粉 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物制剂技术领域，具体为一种多西他赛冻干粉。其包括质量比为(3.21～26.48)：100的多西他赛和聚乙二醇甲醚-聚丙交酯-天冬氨酸两组分；采用注射用水、生理盐水或葡萄糖注射液复溶后，粒径在20.6～28.1nm之间。本发明的优点在于：采用聚乙二醇甲醚-聚丙交酯-天冬氨酸作为载体材料与多西他赛制成冻干粉，其配方简单，复溶后的粒径较小、稳定性较高，冻干粉中多西他赛载药量最高可超过20％，制备工艺简单，易于工业应用。

Description

一种多西他赛冻干粉

技术领域

本发明属于医药制剂技术领域，具体涉及一种多西他赛冻干粉。

背景技术

多西他赛(多西紫杉醇，Docetaxel，C₄₃H₅₃NO₁₄)，是在天然抗肿瘤药物紫杉醇的结构基础上，经结构修饰后获得的一种新的抗肿瘤药物，其抗谱与紫杉醇类似，作用机制是促进微管蛋白聚合和阻止微管解聚，从而抑制癌细胞的有丝分裂和增殖，药效比紫杉醇强。

体外的研究表明，在人乳腺、结肠、膀胱和上皮样的细胞株，其IC50比紫杉醇低9倍。体内研究表明，多西他赛具有有高度抗肿瘤活性，用药后鼠肿瘤和小鼠移植肿瘤可完全消退。更重要的是，多西他赛对紫杉醇耐药的细胞株不会自发地产生对多烯紫杉醇的交叉耐药性。

多西他赛为白色或类白色的粉末，是高度脂溶性且难溶于水的药物，其在水中的溶解度为6-7μg/ml。为了增加其溶解性，目前市售的多西他赛制剂均配方中均需添加吐温80作为表面活性剂。而采用吐温80有两大缺点。

第一个缺点是给患者带来较强的不良反应。吐温80可能引起包括过敏反应、溶血作用、心血管不良反应和体液潴留等在内的不良反应。(《吐温-80引起动物类过敏反应的原因初步探索》，《毒理学杂志》2007年04期；《药用辅料吐温80的药理、药动学及分析方法研究进展》，《中国药事》2008年第22卷第8期)。因此需要提前给患者口服糖皮质激素类药物进行脱敏，对已经发生过敏反应的病人需要注射肾上腺素，这无疑加重了患者的负担。

第二个缺点是给药方法比较复杂，增加了使用的难度。以泰索帝为例：需要首先混合浓缩药物与稀释溶液以制备预混合溶液，然后用0.9％的生理盐水将预混合溶液稀释，制得预混合稀释液后的4小时内对得到的预混合稀释液进行约1小时的滴注。此过程中需要小心地将混合了稀释溶液的浓缩药物颠倒45秒，而不进行搅拌，这样得到的溶液中可能形成气泡，因此需要将该溶液静置5分钟以使气泡排出。齐鲁制药生产的多西他赛注射液“多帕菲”的产品说明书中有如下的说明文字：“每瓶标示量为1ml:20mg的多帕菲，实际装有1.2ml浓度为20mg/ml的多西他赛溶液，相当于24mg的多西他赛。此容积已经对在准备过程中由于药液粘稠导致的药液粘着瓶壁及不能抽出的“死容积”等原因造成的液体损失进行了补充。使用时，用注射器将每瓶溶液抽取干净并稀释到5％葡萄糖注射液或0.9％氯化钠注射液中。为避免药物过量引起毒副反应。切勿用溶剂洗涮西林瓶和注射器！”。

聚合物胶束是由两亲性嵌段共聚物自发形成的一种核壳结构，具有纳米级粒径。聚合物胶束作为一种给药载体由Bader等在1984年首次提出。使用两亲性嵌段共聚物将药物包封在胶束的疏水内核内，达到增溶难溶性药物进一步提高生物利用度的效果。此外，良好的聚合物胶束能延长药物体内循环时间，降低药物毒性，及能通过EPR效应达到被动靶向作用。

冻干粉是一种保藏药物的有效方法。将需要干燥的制品在低温下使其所含的水分冻结，然后放在真空的环境下干燥，让水分由固体状态直接升华为水蒸气并从制品中排除而使制品活性干燥。该方法有效地防止了制品理化及生物特性的改变，有效保护热敏性药物有效成份的稳定性；冻干制品在干燥后形态疏松、颜色基本不发生改变，加水或者亲水性有机溶剂后能够快速溶解并恢复原有水溶液的理化特性和生物活性；由于干燥在真空条件下进行，对于一些易氧化的物质具有很好的保护作用；制品经过冻干后水份含量非常低，使制品的稳定性提高，受污染的机会减小，这不仅方便了运输还延长了制品保存期限。

目前对于多西他赛冻干粉的研究成果并未取得突破，尤其在组分、复溶后的粒径和载药量等方面。郝守祝公开了一种多西他赛冻干粉的制备方法(《一种多西他赛的药用组合物、制备方法及用途》专利申请号：200780000695.1)，但在冻干粉中依然含有吐温80。山东大学张娜等利用PLA-PEG共聚物得到多西他赛胶束冻干粉，但复溶后的粒径在200nm以上(《载多烯紫杉醇纳米粒混合胶束制剂及冻干剂的制备方法》，专利申请号：201010151501.1)。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种多西他赛冻干粉。其通过将聚乙二醇甲醚-聚丙交酯-天冬氨酸作为载体材料与多西他赛制成冻干粉获得，其配方简单，复溶后的粒径较小、稳定性较高，冻干粉中多西他赛载药量最高可超过20％，制备工艺简单，易于工业应用。

本发明的技术解决方案如下。

一种多西他赛冻干粉，其包括质量比为(3.21～26.48)：100的多西他赛和聚乙二醇甲醚-聚丙交酯-天冬氨酸两组分；其采用注射用水、生理盐水或葡萄糖注射液复溶后，粒径在20.6～28.1nm之间。

上述聚乙二醇甲醚-聚丙交酯-天冬氨酸的分子式如下所示：

其中a＝10-200，b＝3-30，聚乙二醇甲醚-聚丙交酯-天冬氨酸的平均分子量为2000-7000。嵌段聚乙二醇稳定性很高，较难被降解；嵌段聚丙交酯只有在强酸性条件下才易发生降解；接枝氨基酸在中性条件下反应。因此聚乙二醇甲醚-聚丙交酯-天冬氨酸在正常体液环境中的稳定性较高。可以通过质谱分析等手段得到聚乙二醇甲醚-聚丙交酯-天冬氨酸中不同嵌段平均分子量的数值。

上述多西他赛冻干粉中，还包括赋形剂；所述赋形剂选自乳糖、甘露醇、右旋糖苷、甘氨酸、葡萄糖中的一种或多种。

上述多西他赛冻干粉，通过下述具体步骤制备得到：

a.搁板预降温至0℃后放入载多西他赛的胶束制剂，降温至-45℃以下，确保载药胶束溶液温度降至-45℃，维持2-4h；

b.上述步骤结束后开启真空泵，抽真空1-1.5h；

c.隔板温度设定由-45℃升至-25℃，维持12h以上，极限真空度设定为0.013Bar；

d.隔板温度设定由-25℃升至0℃，维持8h以上，极限真空度设定为0.013Bar；

e.隔板温度设定由0℃升至5℃，维持3h以上，极限真空度设定为0.013Bar；

f.隔板温度设定由5℃升至20℃，制品温度达到20℃后，维持4h以上，然后结束冻干，得到疏松块状的多西他赛冻干粉。

上述载多西他赛的胶束制剂通过直接溶解法、透析法或者薄膜水化法制备得到。

本发明中，当多西他赛冻干粉中包括赋形剂时，通过先将赋形剂添加到载多西他赛的胶束制剂中，再冻干的工艺制备得到。

本发明中，所述的多西他赛是指无水多西他赛原料药，按照C43H53NO14计，纯度在98.0％以上。

本发明中，研究表明，聚乙二醇甲醚-聚丙交酯-天冬氨酸无明显的致癌性，无生殖毒性，无致畸、致突变性，在体内可降解为乳酸、氨基酸PEG，均可直接排出体外。对小鼠进行急性毒性试验，小鼠的LD50>2.00g/kg；长毒试验中，1.00g/kg剂量，1次/天，每周连续给药2天，停药5天，连续给药13周后，恢复4周后观察，未见明显毒副作用。

细胞毒性测试表明，聚乙二醇甲醚-聚丙交酯-天冬氨酸的细胞毒性比目前公认无毒的嵌段共聚物mPEG-PLA更低(见下表1)。

表1：MTT法肝细胞毒性测试结果

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

1.采用毒性更低的聚乙二醇甲醚-聚丙交酯-天冬氨酸为胶束载体，且多西他赛冻干粉配方简单，安全性更高。

2.多西他赛冻干粉具有良好的复溶溶解性，复溶后的粒径较小、稳定性较高。

3.多西他赛冻干粉中多西他赛载药量可达20％，制备工艺简单，易于工业应用。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做详细的说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例(1-7)

多西他赛为无水多西他赛原料药(CAS：114977-28-5)，由西安天风生物科技有限公司生产；

聚乙二醇甲醚-聚丙交酯-天冬氨酸，由发明人按照专利号PCT-CN-2013000453所述的工艺自行制备。采用质谱分析并结合反应原料的分子量确定不同嵌段的平均分子量。

一种多西他赛的冻干粉，通过下列步骤制备得到：

①按照不同的投料比称量多西他赛和聚乙二醇甲醚-聚丙交酯-天冬氨酸(见表2)；

②将上述原料投入容器中，加入有机溶剂至完全溶解。30-50℃旋转蒸发2h至有机溶剂蒸干为止，10-60℃下真空干燥＞12h去除残留的有机溶剂，得到含多西他赛的聚合物混合膜。有机溶剂的种类包括乙醇、乙腈等。

③混合膜于40-60℃水浴至透明状，加入相同温度预热的超纯水或生理盐水、磷酸盐缓冲液，充分振摇水化，得透明的载药胶束溶液。

④将所述载药胶束溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，得到载多西他赛的胶束制剂。

⑤不添加任何赋形剂，直接制备固态干粉，步骤如下。

a.搁板预降温至0℃后放入载多西他赛的胶束制剂，降温至-45℃以下，确保溶液温度降至-45℃，维持2-4h。

b.上述步骤结束后开启真空泵。抽真空1-1.5h。

c.隔板温度设定由-45℃升至-25℃，维持12h以上。极限真空度设定为0.013Bar。

d.隔板温度设定由-25℃升至0℃，维持8h以上。极限真空度设定为0.013Bar。

e.隔板温度设定由0℃升至5℃，维持3h以上。极限真空度设定为0.013Bar。

f.隔板温度设定由5℃升至20℃，制品温度达到20℃后，维持4h以上，然后结束冻干，得到疏松块状的多西他赛冻干粉。

或⑥添加赋形剂制备固态干粉的步骤如下。

向多西他赛的胶束制剂中添加不超过步骤①投料总重量5％的赋形剂，并使之充分溶解，再将得到的上述混合胶束溶液按步骤⑤所述工艺冻干，制得多西他赛冻干粉制剂；其中：所述赋形剂选自乳糖、甘露醇、右旋糖苷、甘氨酸、葡萄糖中的一种或多种。

上述制备方法中，步骤②所述的有机溶剂是乙醇或乙腈。

赋形剂在冻干工艺中的作用主要是促使难于固态化的溶液最终得到固态粉末。而各种赋形剂也可不同程度的改善冻干制剂的外观、形态、溶解性、稳定性等性能指标。发明人在上述冻干工艺中尝试添加乳糖、甘氨酸、葡萄糖等赋形剂，但实验结果并未发现添加赋形剂对于降低工艺难度、改善最终制剂的形态和提升复溶溶液的稳定性等方面有明显的有益效果。添加乳糖和葡萄糖赋形剂对于冻干粉制剂的外观有一定的改善效果，当然这个有益效果对于本发明在医药领域的应用而言是否有实用价值还值得商榷。

实施例1-7分别选择不同的投料比，以及分别选用不同嵌段分子量的聚乙二醇甲醚-聚丙交酯-天冬氨酸，按照上述步骤制得多西他赛冻干粉。采用高效液相色谱测定其载药量(见表2)。

表2不同实施例实测载药量和粒径

载体＝聚乙二醇甲醚-聚丙交酯-天冬氨酸

按照多西他赛浓度3mg/ml的比例称量实施例1-7制得的多西他赛冻干粉和水，将上述冻干粉投入注射用水、生理盐水或葡萄糖注射液中，振荡60秒后所有多西他赛冻干粉均完全溶解，说明具有良好的溶解性。

表3：不同实施例复溶后平均粒径和稳定性测试结果

用动态光散射测定粒径分布，测得复溶溶液的粒径分布在10-100nm之间，平均粒径在20-29.2nm之间(见表3)。分别于15℃、25℃、30℃，正常室内光照条件下，每隔2h肉眼观察溶液，直至发现溶液出现浑浊或者发现有沉淀析出，则说明溶液结束了稳定状态。结果见表3，说明本发明具有良好的稳定性。

Claims (6)

1.一种多西他赛冻干粉，其特征在于，其包括质量比为(3.21～26.48)：100的多西他赛和聚乙二醇甲醚-聚丙交酯-天冬氨酸两组分；其采用注射用水、生理盐水或葡萄糖注射液复溶后，粒径在20.6～28.1nm之间。

2.根据权利要求1所述的多西他赛冻干粉，其特征在于，所述聚乙二醇甲醚-聚丙交酯-天冬氨酸的分子式如下所示：

其中a＝10-200，b＝3-30，聚乙二醇甲醚-聚丙交酯-天冬氨酸的平均分子量为2000-7000。

3.根据权利要求2所述的多西他赛冻干粉，其特征在于：所述的聚乙二醇甲醚-聚丙交酯-天冬氨酸中，聚乙二醇甲醚嵌段的平均分子量为987～3020，聚丙交酯嵌段的平均分子量为495～4996。

4.根据权利要求1-3之一所述的多西他赛冻干粉，其特征在于：还包括赋形剂；所述赋形剂选自乳糖、甘露醇、右旋糖苷、甘氨酸、葡萄糖中的一种或多种。

5.根据权利要求1或2所述的多西他赛冻干粉，其特征在于通过以下步骤制备：

a.搁板预降温至0℃后放入载多西他赛的胶束制剂，降温至-45℃以下，确保载药胶束溶液温度降至-45℃，维持2-4h；

b.上述步骤结束后开启真空泵，抽真空1-1.5h；

c.隔板温度设定由-45℃升至-25℃，维持12h以上，极限真空度设定为0.013Bar；

d.隔板温度设定由-25℃升至0℃，维持8h以上，极限真空度设定为0.013Bar；

e.隔板温度设定由0℃升至5℃，维持3h以上，极限真空度设定为0.013Bar；

f.隔板温度设定由5℃升至20℃，制品温度达到20℃后，维持4h以上，然后结束冻干，得到疏松块状的多西他赛冻干粉。

6.根据权利要求5所述的多西他赛冻干粉，其特征在于，所述载多西他赛的胶束制剂系通过直接溶解法、透析法或者薄膜水化法制备得到。