CN105283176A - 鱼精蛋白纳米胶囊 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及用于活性物质给药的纳米胶囊系统的设计和开发,其中该系统中的纳米胶囊的平均直径小于1μm,且特征性地包含(a)鱼精蛋白外壳,(b)油性核心和一种或多种表面活性剂,其亲水-亲油比率(亲水-亲油平衡值(HLB))大于8,其中所述活性剂不是磷脂。
Description
技术领域
本发明涉及用于活性成分给药的包含基于鱼精蛋白的纳米级纳米胶囊的系统,还涉及包含所述系统的药学组合物,及其制备方法。
背景技术
将活性成分装入纳米级系统中帮助解决了这些分子的制剂限制,还附带地提高了其治疗潜力。活性分子的纳米胶囊化或其在聚合物外壳中的吸附所提供的部分优点在于,提高了溶解性,防止降解,或提高活性成分渗透。还已知,所述系统穿越外部屏障进入有机体内部的能力取决于其尺寸和成分。小分子的给药程度高于较大分子,而直径小于1μm的纳米系统满足该标准。
此外,可以用聚合物材料涂覆所述纳米胶囊。为此,鱼精蛋白是其中一种可能的材料,其属于富含精氨酸的天然多肽族,在许多动植物的精子生成过程中的最后精细胞期中合成。FriedrichMiescher早在1868年就开始相关研究,至今已有许多研究工作来表征这一分子量约为4000–10000Da的强碱性脂肪族多肽种类。鱼精蛋白被证实为一种药学赋形剂,其目前主要应用在于胰岛素制剂NPH(中性鱼精蛋白锌胰岛素)的缓释制剂中,且由于是肝素中毒的解毒剂而被用作活性物质。
已有许多关于该赋形剂的研究,主要是与脂质体联用以从细胞内部释放DNA(GeneTher.1997.4,961–968),标记寡核苷酸,用作血管活性肠肽释放的纳米颗粒(称为proticle)(JControlRelease.2008.10;130(2):192-8),利用其理论抗菌活性(JAntimicrobChemother.2008Mar;61(3):651-7)等等。
上述研究中,鉴于鱼精蛋白的内在活性,其与遗传物质形成复合物的能力得到了广泛应用和研究,该能力是通过精氨酸基团与核酸阴离子基团的相互作用所赋予的高正电荷的静电相互作用,由此,鱼精蛋白可在用作给药载体的结构中与DNA结合并沉淀。
还有研究证明,该多肽的佐剂能力能够提高白细胞介素2和干扰素γ的分泌,以及T细胞增殖(JControlRelease.2008;10;130(2):161-7)。
尽管如此,鱼精蛋白尚不能用于含有油性核心的鱼精蛋白纳米胶囊制剂中,因为该多肽会破坏油/水乳剂的稳定性。鉴于此,有必要设计一种稳定性不受鱼精蛋白影响并能从其性质受益的新型纳米胶囊系统。
发明内容
本发明的发明人研究出了一种纳米胶囊系统,其含有鱼精蛋白,但不会因此而失去稳定性。该纳米胶囊系统稳定,易生产,且还能有效地联合不同种类的亲水和亲脂活性成分。所述纳米胶囊的小尺寸(直径小于1μm)和鱼精蛋白的表面正电荷能够与带负电荷的有机体生物表面(例如粘膜)相互作用,能够穿越所述表面进入细胞。聚合物外壳的存在还给纳米胶囊提供了更高的稳定性和鱼精蛋白的典型有益特征。
因此,本发明的第一方面涉及一种用于活性成分给药的纳米胶囊系统(下文中称“本发明的纳米胶囊系统”),该纳米胶囊系统包括:
a.含有多肽鱼精蛋白或由多肽鱼精蛋白组成的表面层;
b.油性核心;
c.表面活性剂,其亲水-亲油比率(亲水-亲油平衡值(HLB))大于8;以及
d.可选地,至少一种活性物质,
其中,所述活性剂不是磷脂。
适用于实施本发明的表面活性剂的例子为:聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温),聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯(吐温),聚氧乙烯脱水山梨醇单硬脂酸酯(吐温),聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温),聚氧乙烯脱水山梨醇三硬脂酸酯(吐温),聚氧乙烯山梨糖醇三油酸酯(吐温),聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯(吐温),聚乙二醇单硬脂酸酯,聚乙二醇硬脂酸酯,聚乙二醇二月桂酸酯,聚乙二醇单棕榈酸酯,聚乙二醇硬脂酸酯,泊洛沙姆124,泊洛沙姆188,泊洛沙姆237,泊洛沙姆338,泊洛沙姆407,SOLUTOLTPGS,三乙醇铵油酸酯,油酸钠,胆酸钠,脱氧胆酸钠,月桂基硫酸钠,油酸三乙醇胺,黄蓍胶,十二烷基硫酸钠,或上述表面活性剂的任意组合。所述表面活性剂选自:胆酸钠,聚乙二醇硬脂酸酯,SolutolTPGS,聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温),聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯(吐温),或所述表面活性剂的任意组合。
适用于实施本发明的油性核心为:棉籽油,橄榄油,蓖麻油,大豆油,红花油,棕榈油,α生育酚(维生素E),肉豆蔻酸异丙酯,鲨烯,和或其任意组合。优选地,该油性核心选自:(例如Miglyol812),鲨烯,α生育酚,或其任意组合。
本发明的第一方面的一个特定实施例中,本发明的纳米胶囊系统包括:
a.含有多肽鱼精蛋白或由多肽鱼精蛋白组成的表面层;
b.选自鲨烯、α生育酚或其任意组合的油性核心;
c.表面活性剂,其亲水-亲油比率(亲水-亲油平衡值(HLB))大于8,选自胆酸钠,聚乙二醇硬脂酸酯,TPGS,聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温),聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯(吐温)或其任意组合;以及
d.可选地,至少一种活性物质。
本发明的第一方面的又一个实施例中,本发明的纳米胶囊系统的特征在于,其为冻干形式。
本发明的第二方面涉及用于制备本发明的纳米胶囊系统(下文称为“本发明的制备方法”)的方法。因此,为了制备期望尺寸范围的纳米胶囊,该方法制得含有油和一种或多种表面活性剂的油性核心,并通过不同类型相互作用在其表面上结合聚合物涂层。因此,其为一种溶剂分散方法,其以可控形式进行,并为该系统提供稳定性,而无需在成分之间制造共价键。
因此,本发明的第二方面的一个特定实施例中,本发明的制备方法是一步式溶剂扩散方法,包括以下步骤:
a.制备含有多肽鱼精蛋白的水溶液;
b.制备含有油性核心成分和一种或多种特征亲水-亲油比率大于8的表面活性剂成分的有机溶液;
c.搅拌混合根据步骤a和b制得的所述溶液,生成纳米胶囊;以及
d.可选地,令根据前述步骤所制得的混合物中的有机溶剂全部蒸发或部分蒸发至恒定体积,
其中,所述表面活性剂不是磷脂。
本发明的第二方面的又一个优选实施例中,本发明的制备方法是两步式溶剂扩散方法,包括以下步骤:
a.制备含有油性核心成分和一种或多种特征亲水-亲油比率大于8的表面活性剂成分的有机溶液;
b.将步骤a制得的所述溶液添加到可选地包含水溶性表面活性剂的水相中,搅拌生成纳米乳剂;
c.可选地,令有机溶剂全部蒸发或部分蒸发至恒定体积;以及
d.将根据前述步骤所制得的纳米乳剂与含鱼精蛋白的水溶液共培养,以涂覆所述纳米乳剂,
其中,所述表面活性剂不是磷脂。
当本发明的纳米胶囊系统包含活性物质时,本发明的制备方法可包含:若所述活性成分若为亲脂性,则添加到所述有机溶液中,若为亲水性,则添加到所述水溶液中。优选地,所述活性物质选自多西紫杉醇,重组乙肝抗原(rHBsAg),H1N1流感抗原,核酸,糖类化合物,肽,蛋白质或其任意组合。
本发明的第三方面涉及本发明的纳米胶囊系统的治疗用途。
本发明的第三方面的一个优选实施例中,本发明的纳米胶囊系统包含多西紫杉醇作为活性物质,且用于治疗癌症,优选为肺癌或胰腺癌。
本发明的第三方面的又一个优选实施例中,本发明的纳米胶囊系统包含重组乙肝抗原(rHBsAg)作为活性物质,且用于治疗或预防乙肝。
本发明的第三方面的又一个优选实施例中,本发明的纳米胶囊系统包含H1N1流感重组抗原(HI)作为活性物质,且用于治疗或预防H1N1流感。
本发明的第四方面涉及包含本发明的纳米胶囊系统且可选地包含一种或多种药学可接受的赋形剂的药物组合物。
附图说明
图1:A549癌细胞系与载有DCX的鱼精蛋白纳米胶囊、空白鱼精蛋白纳米胶囊、DCX的乙醇溶液和乙醇接触24小时和48小时后的细胞活性。
图2:H460癌细胞系与载有DCX的鱼精蛋白纳米胶囊、空白鱼精蛋白纳米胶囊、DCX的乙醇溶液和乙醇接触24小时和48小时后的细胞活性。
图3:MiaPaCa2癌细胞系与载有DCX的鱼精蛋白纳米胶囊、空白鱼精蛋白纳米胶囊、DCX的乙醇溶液和乙醇接触24小时和48小时后的细胞活性。
图4:BxPC3癌细胞系与载有DCX的鱼精蛋白纳米胶囊、空白鱼精蛋白纳米胶囊、DCX的乙醇溶液和乙醇接触24小时和48小时后的细胞活性。
图5:经载有乙肝抗原(10μg)的鲨烯油(SQL)和α生育酚(TCPH)鱼精蛋白纳米胶囊的鼻腔给药(in)(3剂)、肌肉内给药(im)(2剂)和联合给药(im,in)(肌肉内1剂,鼻腔2剂)的小鼠,与经氢氧化铝吸附抗原的肌肉内给药(2剂)的小鼠相比的血液IgG抗体水平。
图6:经载有剂量为2和7.5μg的流感抗原的α生育酚(TCPH)鱼精蛋白纳米胶囊的皮下给药的小鼠的血液IgG抗体水平的相应吸光度水平。
图7:鱼精蛋白纳米胶囊中吸附的重组乙肝抗原在冻干处理后的免疫印迹分析。
图8:RAW264.7巨噬细胞系与鲨烯(SQL)或α生育酚(TCPH)核心的鱼精蛋白纳米胶囊接触24小时和48小时后的细胞活性。
图9:以PEG硬脂酸/胆酸钠表面活性剂和油组合制备的鱼精蛋白纳米胶囊的透射电子显微镜(TEM)图像。
图10:以PEG硬脂酸/胆酸钠表面活性剂和α生育酚油制备的鱼精蛋白纳米胶囊的共聚焦显微镜图像。其装载了流感(H1N1)抗原作为活性分子。
图11:鱼精蛋白纳米胶囊诱导的补体活化的免疫印迹分析。研究了不同浓度的α生育酚(TCPH,左)或鲨烯(SQL,右)鱼精蛋白纳米胶囊。阴性对照是PBS(C-),阳性对照是眼镜蛇毒(C+)。
图12::α生育酚(TCPH)核心的鱼精蛋白纳米胶囊对RAW264.7活性的影响,通过xCELLigence测定。培养了不同浓度的鱼精蛋白纳米胶囊(25为灰色,50为虚线,100为黑色实线,单位μg/ml)。数值表示相对于对照(仅以培养基培养的细胞)的正态化细胞指数。
图13:室温下保存的载有冻干rHBsAg并重悬浮的鱼精蛋白纳米胶囊的物化表征。
图14:载有rHBsAg的冻干鱼精蛋白纳米胶囊室温下保存一年后的抗原(rHBsAg)免疫印迹分析。
图15:通过琼脂糖凝胶电泳分析pDNA与鱼精蛋白纳米胶囊的结合。电泳道:1:分子量标记;2:对照pDNA;3:鱼精蛋白纳米胶囊+pDNA;4:肝素+对照pDNA;5:鱼精蛋白纳米胶囊+pDNA。将样品与过量肝素共培养,以允许pDNA从制剂中转移(2h,37℃)。每道使用1μgpDNA。使用siRNA得到了类似实验结果。
图16:鱼精蛋白纳米胶囊结合的pEGFPF转染后48小时的荧光显微镜图像。每孔含1μgpEGFPF(24孔板),培养4h。转染后48小时生成图像。
具体实施方式
本发明涉及用于活性物质给药的纳米胶囊系统的设计和开发,其中该系统中的纳米胶囊的平均直径小于1μm,且特征性地包含(a)鱼精蛋白外壳,(b)油性核心和一种或多种表面活性剂,其亲水-亲油比率(亲水-亲油平衡值(HLB))大于8,其中所述活性剂不是磷脂。
已知鱼精蛋白令油/水乳剂不稳定。事实上,哪怕使用表面活性剂,例如脂蛋白或其他具有磷脂结构的表面活性剂(例如卵磷脂,磷脂酰甘油,磷脂酰丝氨酸,磷脂酰肌醇,双磷脂酰甘油,磷脂酸,磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺),也无法稳定含有鱼精蛋白的油/水乳剂。本发明的实施例1确认了该事实,其中发明人试图使用磷脂(例如卵磷脂、修饰卵磷脂或溶血卵磷脂)作为表面活性剂来制备以包含(a)鱼精蛋白外壳和(b)油性核心为特征、平均直径小于1μm的纳米胶囊系统,但没有成功。
因此,无法使用鱼精蛋白制备此类制剂。因此,为了解决该问题,本发明的发明人设计了不被鱼精蛋白破坏稳定性且能受益于其性质的新型纳米胶囊系统。
在此意义上,本发明的发明人发现,使用特征为亲水-亲脂比率(亲水-亲脂平衡(HLB))大于8(优选为大于12)的某些类型的表面活性剂,可以生产包含以含有(a)鱼精蛋白外壳和(b)油性核心为特征的鱼精蛋白纳米胶囊的系统。因此,实施例2.1至2.18说明了如何使用不同表面活性剂、油性核心和系统制备方法来制备此类系统,前提是所用的表面活性剂具有HLB>8且并非磷脂的特征。所述实施例还表明了该系统在其物化性质上的多功能性。
因此,本发明的第一方面涉及一种用于活性成分给药的纳米胶囊系统(下文中称“本发明的纳米胶囊系统”),该纳米胶囊系统包括:
a.含有多肽鱼精蛋白或由多肽鱼精蛋白组成的表面层;
b.油性核心;
c.表面活性剂,其亲水-亲油比率(亲水-亲油平衡值(HLB))大于8;以及
d.可选地,至少一种活性物质,
其中,所述活性剂不是磷脂。
相对于其他已知的纳米胶囊系统或纳米乳剂系统,本发明的特定纳米胶囊系统的优点在于外壳中存在多肽鱼精蛋白。该多肽向纳米胶囊提供了稳定性和保护性,与指定目标细胞相互作用中的穿透能力和特异性。纳米胶囊表面含有鱼精蛋白,还提供了更高的免疫细胞应答,因其具有已证实的佐剂活性。鱼精蛋白是一种天然蛋白,其相对于其他聚合物的优点在于精氨酸(例如聚精氨酸,一种合成分子)含量高。因此,鱼精蛋白的存在允许本发明的纳米胶囊成为一种能够迅速代谢和排出的安全载体,从而防止达到有毒浓度及在生物体中累积。此外,在鱼精蛋白外壳的存在下,本发明的纳米胶囊冻干时无需冷冻保护剂,也无需高度稀释来防止有害的聚集。
此外,从本发明的内容中应当可以看出,术语鱼精蛋白包括水溶性鱼精蛋白盐和水溶性鱼精蛋白衍生物。此外,与其他通常适用于受限载药量的系统(例如脂质体或纳米颗粒)相比,本发明的纳米胶囊由于含有油性核心,具有更高的载药量可能性,尤其是对亲脂性药物。本发明的纳米胶囊的众多优点中的另外一个,在于能够合并不同类型的药物,能够在核心中封装亲脂性药物并在外壳中结合亲水性药物;相似地,外壳为其提供稳定性、保护性和特异性。
相对于其他较大尺度的系统(微粒、丸剂、薄膜、海绵等),所述系统在其生物应用中也具有优势。事实上,已知药物释放系统与生物表面的相互作用受到其尺寸的高度制约。因此,所述纳米胶囊能够穿越粘膜并被细胞内吞,从而用作药物释放系统,而微粒则无此能力。相似地,所述系统的生物分散系受到尺寸的高度制约。近年来对纳米药物和药物释放纳米系统的认知允许清楚地区分纳米系统(尺寸小于1微米,例如纳米颗粒和纳米胶囊)和微米系统(微粒和微胶囊)。除了在细胞内吞和穿越复杂生物屏障方面的能力上的行为差异外,对于用于静脉内给药的抗肿瘤药物制剂,使用纳米尺度释放系统对于防止阻塞毛细血管是必要的。类似地,已知纳米系统到达肿瘤组织的可能性与其尺寸严格相关,也受到其表面亲水性的影响。同样重要的是,强调纳米胶囊系统和“复合体”之间的差异。“复合体”被看做是由于聚合电解质间或聚合电解质和相反电荷的表面活性剂之间的相互作用而形成的纳米结构。本发明的纳米胶囊系统与复合体的不同之处在于,其是一种容器式的纳米胶囊载体系统,其核心可以包封重要数目的对该油性核心多少有些亲和性的分子(封装),而在其外壳中可以包含对该外壳具有某种亲和性的亲水性分子(吸附)。这些特性能够保持纳米结构完整性和功能性,以及提高其在生物液体的存在下的稳定性。
因此,与其他给药和/或释放系统相比,本发明的纳米胶囊系统的如下独特行为使其具有优势:
活性物质的封装/结合:该系统可以包含一种或多种亲水性或亲脂性活性物质或佐剂物质,其含量比率高于纳米颗粒、微胶粒、复合体、纳米微凝胶;
在生物液体中的稳定性:所述聚合物外壳为油性核心提供了巨大的稳定性,这是相对于其他微米级和纳米级乳剂系统的优势;
与指定生物表面的特异性相互作用:所述聚合物外壳使得油性核心可能与粘膜表面和上皮及特定细胞相互作用;
鱼精蛋白的快速代谢和分泌,使得该系统具有药代动力学安全特性,而其他种类外壳(例如聚精氨酸)的其他纳米胶囊系统无此性质;
冻干期间的稳定性:本发明的纳米胶囊在冻干过程中无需冷冻保护剂或高度稀释来防止有害的聚集。本发明的系统中的纳米胶囊的平均直径小于1μm,由此与纳米系统的定义相一致,即基于小于1μm的聚合物(即尺寸在1-999nm之间,优选为30-500nm之间)的胶体系统。平均直径理解为通过动态光散射(DLS)技术测量的直径,其限定为与待测颗粒以相同速度散射的球体的流体动态直径。所述纳米胶囊的尺寸主要受到其组成成分和形成条件的影响,且可以使用本领域技术人员已知的标准方法进行测量,如实施例部分所述。由此,可以证实,在调整该制剂的外壳化合物比率时,其尺寸不会显著变化,所有的情况下均得到纳米尺度的系统。
本文所述的纳米胶囊系统在悬浮液和冻干形式中均具有适当稳定性。由此,稳定性研究似乎表面,其对人体或动物体给药后,并未发生迅速凝集或破坏过程,但可预见其保持纳米胶囊形式直至达到目标组织或细胞。
另一方面,如上所述,本发明的纳米胶囊系统包括至少一种表面活性剂。本发明中,术语“表面活性剂”指的是具有能够同时与该制剂的亲脂性和亲水性部分相互作用的功能基团和/或结构的成分。为了制备本发明的纳米胶囊系统,有必要考虑到所用的表面活性剂的HLB。HLB的概念基于根据乳剂稳定性的相关数据将某一HLB数值分配给一种乳化剂的试验方法。该HLB数值隐含了数种指标,并表明了该系统的亲水性-亲脂性平衡。本发明中限定的HLB计算方法是基于研究对象分子的功能团,并考虑到了亲水基团力,计算如下:
HLB=7+m*Hh-n*Hl
其中m是亲水基团数目,Hh是亲水基团的值,n是亲脂基团数目,Hl是其值(Davies,J.T.(1957)“Aquantitativekinetictheoryofemulsiontype.I.Physicalchemistryoftheemulsifyingagent.Gas/LiquidandLiquid/LiquidInterfaces”.Proceedingsof2ndInternationalCongressSurfaceActivity,Butterworths,London,pp.426-38)。
适用于实施本发明的表面活性剂的例子选自聚山梨醇酯和脂肪酸酯。在特定实施例中,所述山梨醇酯选自:聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温),聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯(吐温),聚氧乙烯脱水山梨醇单硬脂酸酯(吐温),聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温),聚氧乙烯脱水山梨醇三硬脂酸酯(吐温),聚氧乙烯山梨糖醇三油酸酯(吐温)和聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯(吐温)。在又一特定实施例中,所述脂肪酸酯选自:聚乙二醇单硬脂酸酯,聚乙二醇硬脂酸酯,聚乙二醇二月桂酸酯,聚乙二醇单棕榈酸酯,聚乙二醇硬脂酸酯,泊洛沙姆124,泊洛沙姆188,泊洛沙姆237,泊洛沙姆338,泊洛沙姆407,SOLUTOL(聚乙二醇15羟基硬脂酸酯),TPGS(D-α生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯)。三乙醇铵油酸酯,油酸钠,胆酸钠,脱氧胆酸钠,月桂基硫酸钠,油酸三乙醇胺,黄蓍胶,十二烷基硫酸钠。在又一特定实施例中,所述表面活性剂选自胆酸钠,聚乙二醇硬脂酸酯,TPGS,Solutol吐温吐温或所述表面活性剂的任意组合。
泊洛沙姆可以定义为合成嵌段共聚物环氧乙烷和氧化丙烯(聚氧乙烯-聚氧丙烯醚),如下通式所示:
可选地,可以添加适合的抗氧化剂。
(EuropeanPharmacopoeia5.0,pages2264-2265).
适用于实施例本发明的其他表面活性剂的例子选自非离子型、医药品级的表面活性剂。适用于实施本发明的非离子型、医药品级的表面活性剂优选为选自具有8-18个碳原子的长链羟基衍生物(脂肪醇),乙氧基化羧酸,乙氧基化酰胺,乙氧基化甘油酯,乙二醇酯及其衍生物,甘油单酯,聚甘油酯,酯和多元醇醚,山梨糖醇/山梨糖醇酯,磷酸三酯,乙氧基化脂肪醇衍生物和聚乙二醇醚。
此外,本发明的纳米胶囊系统的特征在于具有油性核心,该油性核心除其他成分之外还由挥发性或非挥发性油组成。本发明的范围中,该油性核心理解为组成本发明的纳米胶囊内部结构的核心,且由至少一种油和至少一种前述的表面活性剂构成。所述油可以选自要用的天然、半合成、合成油,例如植物油或动物油、烃油或硅酮油。适用于实施本发明的油包括但不限于,矿物油,鲨烯油,调味油,硅酮油,精油,非水溶性维生素,硬脂酸异丙酯,硬脂酸丁酯,棕榈酸辛酯,棕榈酸十六酯,十三烷醇山嵛酸酯,己二酸二异丙酯,癸二酸二辛酯,薄荷基氨基苯甲酸酯,辛酸鲸蜡酯,水杨酸辛酯,肉豆蔻酸异丙酯,新戊二醇二癸酸酯酮醇,油酸癸酯,C12-C15烷基乳酸酯,十六烷基乳酸酯,月桂醇乳酸酯,异硬脂醇新戊酸,肉豆蔻醇乳酸酯,异鲸蜡硬脂酰硬脂酸酯,辛基十二烷基硬脂酰硬脂酸酯,烃油,异链烷烃,流体石蜡,异十二烷,凡士林,摩洛哥坚果油,菜子油,辣椒油,椰子油,玉米油,棉籽油,亚麻籽油,葡萄籽油,芥子油,橄榄油,棕榈油,棕榈分提油,花生油,蓖麻油,松子油,罂粟籽油,南瓜子油,米糠油,红花油,茶油,松露油,植物油,杏仁油,霍霍巴油,澳洲坚果油,小麦胚芽油,杏仁油,大豆油,芝麻籽油,榛子油,向日葵油,大麻子油,玫瑰木油,夏威夷胡桃油,鳄梨油,核桃油,鱼油,果油,多香果油,桧油,籽油,杏仁籽油,茴香子油,芹菜子油,枯茗籽油,肉豆蔻籽油,紫苏叶油,月桂叶油,肉桂叶油,普通鼠尾草叶油,桉树叶油,柠檬叶油,白千层叶油,牛至油,广藿香叶油,薄荷叶油,松针油,迷迭香叶油,绿薄荷油,茶树叶油,百里香油,东树莓叶油,花油,甘菊油,鼠尾草油,丁香油,天竺葵花油,海索草花油,茉莉油,熏衣草油,紫茉莉花油,马郁兰花油,橙花油,玫瑰花油,依兰花油,树皮油,桂皮油,肉桂皮油,黄樟树皮油,木油,樟木油,柏木油,玫瑰木油,檀香油,姜木油,妥尔油,蓖麻油,没药油,果皮油,香柠檬果皮油,葡萄柚果皮油,柠檬皮油,石灰果皮油,橙皮油,陈皮油,根油,缬草油,油酸,亚油酸,油醇,异硬脂醇,油酸乙酯,(癸酰基甘油酯和辛酰基甘油酯混合物),(油酰基聚氧基-6-甘油酯),(丙二醇二辛酸酯),(脂肪酸混合物),(甘油单油酸酯)和(甘油单亚油酸酯),合成或半合成衍生物及其组合。优选地,所述油选自:花生油,棉籽油,橄榄油,蓖麻油,大豆油,红花油,棕榈油,α生育酚(维生素E),肉豆蔻酸异丙酯,鲨烯,和或其混合物。更优选地,所述油为(例如Miglyol812(辛酸/癸酸甘油三酯)、鲨烯或α生育酚。
适用于实施例本发明的其他油选自由异戊二烯单元(2-甲基丁-1,3-二烯)组成并根据其碳原子再分类的萜烯家族的油:半萜(C5),单萜(C10),倍半萜(C15),双萜(C20),二倍半萜(C25),三萜(C30),四萜(C40,类胡萝卜素)和多萜,维生素A和鲨烯。
如上所述,可选地,本发明的纳米胶囊还包括至少一种活性物质。术语“活性物质”指代任何用于治疗、治愈、预防或诊断疾病或用于提高人体和动物体的问题的生理和心理健康的物质。该活性物质可以是,例如,药物、抗原、维生素等。本发明主题的纳米胶囊系统适用于包含亲脂性或亲水性活性物质。
在一个优选实施例中,所述活性成分是重组乙肝表面抗原,流感(H1N1)抗原和多西紫杉醇。
各情况下,所含活性物质比率取决于需包含的活性成分,其应用的适应症和给药效率。
另一方面,用于制备本发明的纳米胶囊系统的制备方法是防止例如高温等激烈条件的简单方法。此外,无需执行任何种类的化学反应来制备该系统,因为如上所述,制备该系统不涉及非共价相互作用。因此,得以保持本系统所包含的易降解分子的完整性。为了制备期望尺寸范围的纳米胶囊,该方法制得含有油和一种或多种表面活性剂的油性核心,并通过不同相互作用类型在其表面上结合聚合物涂层。因此,其为一种溶剂分散方法,其以可控形式进行,并提供该系统的稳定性,而无需在成分之间制造共价键。
用于制备本发明的系统的特定方法(在实施例中称为一步式溶剂扩散方法)包括以下步骤:
a.制备含有多肽鱼精蛋白且可选地包含水溶性表面活性剂的水溶液;
b.制备含有油和一种或多种特征亲水-亲油比率大于8的表面活性剂的有机溶液,其中,所述表面活性剂不是磷脂;
c.搅拌混合根据步骤a和b制得的所述溶液,自发生成纳米胶囊;以及
d.可选地,令根据前述步骤所制得的混合物中的有机溶剂全部蒸发或部分蒸发至恒定体积。
可以通过一种替代性方法(实施例中称为两步溶剂扩散法)来制备本发明的系统,该方法包括通过与鱼精蛋白水溶液共培养来对纳米乳剂涂覆该聚合物。相似地,可以通过超声(实施例中称为超声处理法)或均质化(实施例中称为均质化法)来促进纳米乳剂的形成。
在特定实施例中,该培养过程包括将纳米乳剂与涂层聚合物的水溶液混合。所述纳米乳剂由至少一种油、一种或多种以亲水性-亲脂性比率大于8为特征的表面活性剂、一种水相组成。该水相可以包含其他表面活性剂、盐和其他助剂。
用于制备所述纳米乳剂的制备方法已为本领域现有技术所知,可以包括扩散、超声处理或均质化过程(Pregoetal.J.Nanosci.Nanotechnol.(2006)6:1;Tadrosetal.Adv.ColloidInterfaceSci.(2004)109:303)。
用于制备纳米乳剂的一种特定方法(在实施例中称为溶剂分散法)包括:
i)制备含有一种油、一种或多种以亲水性-亲脂性比率大于8为特征的表面活性剂的有机溶液,所述表面活性剂不是磷脂;
ii)将步骤i制得溶液添加到可选地包含水溶性表面活性剂的水相中,并在搅拌下形成纳米乳剂;
iii)可选地,令有机溶剂全部蒸发或部分蒸发至恒定体积。
用于制备纳米乳剂的另一种特定方法(在实施例中称为超声处理法)包括:
i)制备含有一种油、一种或多种以亲水性-亲脂性比率大于8为特征的表面活性剂的有机溶液,所述表面活性剂不是磷脂;
ii)将步骤i制得溶液添加到可选地包含水溶性表面活性剂的水相中,并进行超声处理;
iii)用水稀释步骤ii所得乳剂;
iv)可选地,令有机溶剂全部蒸发或部分蒸发至恒定体积。
用于制备纳米乳剂的另一种特定方法(在实施例中称为均质化法)包括:
i)制备含有一种油、一种或多种以亲水性-亲脂性比率大于8为特征的表面活性剂的有机溶液,所述表面活性剂不是磷脂;
ii)将步骤i制得溶液添加到可选地包含水溶性表面活性剂的水相中,并进行均质化处理;
iii)用水稀释步骤ii所得乳剂,并进行均质化处理;
iv)可选地,令有机溶剂全部蒸发或部分蒸发至恒定体积。
在前述方法的特定实施例中,若活性物质是亲脂性或两亲性的,则所述活性成分添加到步骤b或步骤i的有机溶液中。在其他特定实施例中,若活性物质是亲水性的,则所述活性物质添加到步骤a或步骤ii的溶液中。所述亲水性活性物质优选为添加溶解到水溶液中。还可能在步骤d中通过吸附方式或在纳米胶囊形成后的培养过程中,将所述亲水活性成分包含在所得纳米胶囊悬浮液中。
用于制备纳米乳剂的另一种特定方法(在实施例中称为溶剂扩散法的变形(通过滴注))包括:
i)制备含有鱼精蛋白并可选地含有水溶性表面活性剂的水溶液;
ii)制备含有一种油、一种或多种以亲水性-亲脂性比率大于8为特征的表面活性剂的有机溶液,所述表面活性剂不是磷脂;
iii)在指定时间间隔下,以小份将步骤ii制得溶液添加到步骤i制得的水溶液中,或以小份将步
骤i制得的水溶液添加到步骤ii制得溶液中;
iv)可选地,令有机溶剂全部蒸发或部分蒸发至恒定体积。
在前述方法的特定实施例中,若活性物质是亲脂性或两亲性的,则所述活性成分添加到步骤ii的有机溶液中。在其他特定实施例中,若活性物质是亲水性的,则所述活性物质添加到步骤i的溶液中。所述亲水性活性物质优选为添加溶解到水溶液中。还可能通过吸附方式或在纳米胶囊形成后的培养过程中,将所述亲水活性成分通过吸附方式包含在所得纳米胶囊悬浮液中。
本发明的范围中,亲脂性理解为自身无法与水分子相互作用而主要溶解于非极性溶剂的分子、物质、活性物质、结构或其部分。
本发明的范围中,两亲性理解为同时具有疏水性和亲水性的分子、物质、活性物质、结构或其部分。
本发明的范围中,亲水性理解为被水吸引而能溶解于水或极性溶剂的分子、物质、活性物质、结构或其部分。
混合含有纳米乳剂的上述溶液和不同比率的涂层聚合物(改变涂层聚合物比率)的水溶液,从而形成纳米胶囊。
所述有机溶液的溶剂优选为极性溶剂(例如乙醇、异丙醇和丙酮)的混合物,还可以包括非极性溶剂(例如二氯甲烷)。该油相中包含所述油和一种或多种以亲水性-亲脂性比率大于8为特征的表面活性剂。所述活性成分类似地包含在特定组成成分中。
根据上述第一种方法制备本发明的纳米胶囊系统的一个特定实施例包括:
a)制备20ml溶解有浓度为0.05w/v鱼精蛋白的水溶液;
b)制备由乙醇/丙酮溶液、一种或多种表面活性剂(胆酸钠和/或PEG硬脂酸酯)组成的油相,并加入812;
c)将步骤a和b制得的溶液在磁力搅拌下混合,自发生成纳米胶囊;
d)可选地,蒸发上述步骤制得的混合物的有机溶剂至恒定体积。
用于制备纳米胶囊系统的制备方法可以包括额外的动感步骤,以储藏保藏纳米胶囊系统,从而保护其初始特性。由于本发明的纳米胶囊外壳的性质及其特征,冻干期间无需使用冷冻保护剂。另一项优点在于,冻干前无需稀释该胶系统统,因为本发明的纳米胶囊系统不会在冻干重构期间形成聚集体。
可选地,可以添加一种或多种具有冷冻保护作用的糖,例如海藻糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖、麦芽糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。冻干形式下的所述纳米胶囊可以长期储存并易于根据需要再生,只需添加最佳体积的水即可。
在此额外步骤中,本发明还涉及含有冻干形式的鱼精蛋白外壳的纳米胶囊系统。
在一个特定实施例中,本发明还涉及本发明的纳米胶囊系统在治疗中的应用。更具体而言,其涉及含有本发明的纳米胶囊系统的药学组合物,且可选地包含一种或多种药学可接受的赋形剂。特别地,在本发明的纳米胶囊中包含活性物质得到的纳米胶囊系统,在其组成成分、性质和形态方面具有用作优秀备选治疗剂的特征。将包含在本发明的系统中的活性物质是具有适合用于该制剂预期治疗用途的医疗性质的物质。在一个特定实施例中,该活性物质选自多肽、蛋白质、脂质或亲脂性化合物、多糖化合物、核酸或核苷酸化合物(例如寡核苷酸、多核苷酸)或上述分子的组合。
在一个优选实施例中,所述亲脂性活性物质为多西紫杉醇。
在又一个优选实施例中,所述活性物质为疏水性、两亲性或亲水性。疏水性或两亲性活性物质优选为在用于制备本发明纳米胶囊的制备方法中的步骤b中添加。亲水性活性物质优选为在本方法步骤a中或在步骤d之后的步骤中以培养的方式添加。但是,本发明还构思了其他实施例,例如在步骤b中添加溶解在少量水相中的疏水活性物质。与封装在纳米胶囊中的疏水活性物质不同,亲水活性物质可以通过吸附的方式与纳米胶囊表面结合。
在一个优选实施例中,所述亲水活性物质是重组乙肝表面抗原和流感(H1N1)抗原。
所述药用组合物可以通过不同给药途径给药,例如粘膜给药、外用给药或非消化道给药。
包含在所述系统中的活性物质在所述纳米胶囊系统成分中的质量比例可以是占总干基重的最高约50%。但是,各种情况下的合适比例取决于需包含的活性成分、其应用的适应症和给药效率。在一个特定实施例中,亲脂性活性物质的重量比例可以达到最高约10%,优选为最高约5%。
如上所述,本发明所述的纳米胶囊系统可能包含多种活性物质,所述活性物质可以溶于或不同溶液中,取决于需包含的分子的性质,以防止其相互之间发生任何种类的物理或化学相互作用。
如上所述,本发明涉及所述系统在制备医用产品中的用途。在一个特定实施例中,所述用途涉及疫苗或癌症疗法的用途。在此意义上,在本发明的一个优选实施例中,本发明的纳米胶囊系统包含多西紫杉醇作为活性物质,并用于治疗癌症,优选为肺癌活胰腺癌。可选地,本发明还涉及将本发明中包含多西紫杉醇作为活性物质的纳米胶囊系统用于制备治疗癌症(优选为肺癌活胰腺癌)的药物的用途。
本发明的又一优选实施例中,本发明的纳米胶囊系统包含重组乙肝抗原(rHBsAg)作为活性物质,并用于治疗或预防乙肝。可选地,本发明还涉及将本发明中包含重组乙肝抗原(rHBsAg)作为活性物质的纳米胶囊系统用于制备治疗或预防乙肝的药物的用途。
本发明的又一优选实施例中,本发明的纳米胶囊系统包含H1N1流感(HI)重组抗原作为活性物质,并用于治疗或预防H1N1型流感。可选地,本发明还涉及将本发明中包含H1N1流感(HI)重组抗原作为活性物质的纳米胶囊系统用于制备治疗或预防H1N1型流感的药物的用途。
为了更好地理解本发明的特征和有点,下面将引用一系列描述性的实施例,以完善前述内容,且前述内容不受到所述实施例的任何限制。
实施例
以下是实施例中通用的简写的说明。
1.Pr:鱼精蛋白;以下实施例中所用的相关盐是鱼精蛋白硫酸盐(YukiGoseiKogyoCo,Ltd.)。另一种鱼精蛋白盐(SIGMA)也用于所有实施例,无显著差异。
2.PEG:聚乙二醇硬脂酸酯。M52PEG-2000(Seppic)。
3.纳米乳剂(NE):为简便起见,在实施例中使用该术语来指代含有油和一种或多种HLB大于8的表面活性剂的纳米系统;优选地,所述一种或多种表面活性剂为:胆酸钠、PEG硬脂酸酯、SolutolTPGS、吐温吐温或其组合。其与纳米胶囊之间的唯一差别在于系统表面涂层中不含鱼精蛋白。4.Pr纳米胶囊(NCs):为简便起见,在实施例中使用该术语来指代其纳米胶囊含有油和一种或多种HLB大于8的表面活性剂的纳米系统;优选地,所述一种或多种表面活性剂为:胆酸钠、PEG硬脂酸酯、SolutolTPGS、吐温吐温或其组合。最后,其涂层为鱼精蛋白。
5.DCX:多西紫杉醇。
6.rHBsAg:重组乙肝抗原。
7.HI:H1N1流感抗原。
8.Miglyol812。
实施例1:
实施例1.1根据一步溶剂扩散法制备由油性核心组成的鱼精蛋白纳米胶囊
i)制备溶解有浓度为0.05w/v的鱼精蛋白水溶液(10ml);
ii)制备由乙醇/丙酮溶液(0.25:4.5ml)、62.5μl和15mg磷脂(卵磷脂、溶血卵磷脂、羟基化卵磷脂无油卵磷脂)组成的油相;
iii)将步骤i和ii制得的溶液在磁力搅拌下混合10分钟,自发生成纳米胶囊;
iv)蒸发有机溶剂至恒定体积。
制得成品后,则测量其平均直径、多散射指数(PI)和表面电荷(电动电位)。下表1展示了测得的所述参数值。
表1
实施例1.2根据两步溶剂扩散法制备由油性核心组成的鱼精蛋白纳米胶囊
i)制备由乙醇/丙酮溶液(0.25:4.5ml)、62.5μl和不同量的磷脂(卵磷脂或溶血卵磷脂)组成的油相;
ii)将步骤i制得的溶液添加到10ml水溶液中,在磁力搅拌下混合10分钟,自发生成纳米胶囊;
iii)蒸发有机溶剂至恒定体积;
iv)将步骤iii中的纳米乳剂与由1或2mg/ml浓度的Pr组成的水溶液(1ml)以1:1和1:2的比例(纳米乳剂ml:鱼精蛋白mg)共培养,从而涂覆所述纳米乳剂,所述涂层立即生成,无视温度。
制得成品后,则测量其平均直径、多散射指数(PI)和表面电荷(电动电位)。下表2展示了步骤iv中的磷脂量和不同鱼精蛋白比率下测得的所述参数值。
表2
实施例1.3根据一步溶剂扩散法制备由油性核心组成的鱼精蛋白纳米胶囊
i)制备溶解有浓度为0.05w/v鱼精蛋白的水溶液(10ml);
ii)制备由二氯甲烷/丙酮溶液(比例为0.1:4.5ml至0.25:4.5ml)、62.5μl和一定量的羟基化卵磷脂或无油卵磷脂组成的油相;
iii)将步骤i和ii制得的溶液在磁力搅拌下混合10分钟,自发生成纳米胶囊;
iv)蒸发有机溶剂至恒定体积。
制得成品后,则测量其平均直径、多散射指数(PI)和表面电荷(电动电位)。下表1展示了测得的所述参数值。
表1
实施例1.4根据两步溶剂扩散法制备由油性核心组成的鱼精蛋白纳米胶囊
i)制备由乙醇/丙酮溶液(比例为0.1:4.5ml至0.25:4.5ml)、62.5μl和不同量的磷脂(羟基化卵磷脂或无油卵磷脂)组成的油相;
ii)在磁力搅拌下将步骤i制得的溶液添加到10ml水溶液中,并保持10分钟,自发生成纳米胶囊;
iii)蒸发有机溶剂至恒定体积;
iv)将步骤iii中的纳米乳剂与由1或2mg/ml浓度的Pr组成的水溶液(1ml)以1:1和1:2的比例(纳米乳剂ml:鱼精蛋白mg)共培养,从而涂覆所述纳米乳剂,所述涂层立即生成,无视温度。
制得成品后,则测量其平均直径、多散射指数(PI)和表面电荷(电动电位)。下表2展示了步骤iv中的磷脂量和不同鱼精蛋白比率下测得的所述参数值。
表2
实施例2:
实施例:2.1根据一步溶剂扩散法制备由油性核心组成的鱼精蛋白纳米胶囊
i)制备溶解有浓度为0.05w/v的鱼精蛋白水溶液(10ml);此外,该溶液可以含有0.25%w/v泊洛沙姆188;
ii)制备由乙醇/丙酮溶液(0.25:4.5ml)、62.5μl40mg胆酸钠和48mgPEG硬脂酸酯组成的油相;
iii)将步骤i和ii制得的溶液在磁力搅拌下混合10分钟,自发生成纳米胶囊;
iv)蒸发有机溶剂至恒定体积。
制得成品后,则测量其平均直径、多散射指数(PI)和表面电荷(电动电位)。下表3展示了测得的所述参数值。
表3
实施例2.2根据两步溶剂扩散法制备由油性核心组成的鱼精蛋白纳米胶囊
i)制备由乙醇/丙酮溶液(0.25:4.5ml)、62.5μl40mg胆酸钠和48mgPEG硬脂酸酯组成的油相;
ii)将步骤i制得的溶液在磁力搅拌下添加到10ml水溶液中,并保持10分钟,由此自发生成纳米胶囊;
iii)蒸发有机溶剂至恒定体积;
iv)将步骤iii中的纳米乳剂与由1或2mg/ml浓度的Pr组成的水溶液(1ml)以1:1和1:2的比例(纳米乳剂ml:鱼精蛋白mg)共培养,从而涂覆所述纳米乳剂,所述涂层立即生成,无视温度。
制得成品后,则测量其平均直径、多散射指数(PI)和表面电荷(电动电位)。下表4展示了步骤iv中不同Pr量下测得的所述参数值。
表4
实施例2.3根据一步溶剂扩散法制备由油性α-生育酚核心和不同量的PEG硬脂酸酯组成的鱼精蛋白纳米胶囊
i)制备溶解有浓度为0.05mg/ml的鱼精蛋白水溶液(10ml);
ii)制备由乙醇/丙酮溶液(0.25:4.5ml)、60mgα-生育酚和不同量的PEG硬脂酸酯组成的油相;
iii)将步骤i和ii制得的溶液在磁力搅拌下混合10分钟,自发生成纳米胶囊;
iv)蒸发有机溶剂至恒定体积。
制得成品后,则测量其平均直径、多散射指数(PI)和表面电荷(电动电位)。下表5展示了步骤iv中PEG硬脂酸酯量下测得的所述参数值。
表5
实施例2.4根据两步溶剂扩散法制备由油性α-生育酚核心组成的鱼精蛋白纳米胶囊
i)制备由乙醇/丙酮溶液(0.25:4.5ml)、60mgα-生育酚和不同量的PEG硬脂酸酯组成的油相;
ii)将步骤i制得的溶液在磁力搅拌下添加到10ml水溶液中,保持10分钟,自发生成纳米胶囊;
iii)蒸发有机溶剂至恒定体积;
iv)将步骤iii中的纳米乳剂与由1或2mg/ml浓度的Pr组成的水溶液(1ml)以1:1和1:2的比例(纳米乳剂ml:鱼精蛋白mg)共培养,从而涂覆所述纳米乳剂,所述涂层立即生成,无视温度。
制得成品后,则测量其平均直径、多散射指数(PI)和表面电荷(电动电位)。下表2展示了步骤iv中的PEG硬脂酸量和不同鱼精蛋白比率下测得的所述参数值。
表6
实施例2.5根据一步溶剂扩散法制备由油性鲨烯核心和不同量的表面活性剂组成的鱼精蛋白纳米胶囊
i)制备溶解有浓度为0.05w/v的鱼精蛋白水溶液(10ml);
ii)制备由丙酮溶液(4.75ml)、62.5μl鲨烯和不同量的PEG硬脂酸酯组成的油相;
iii)将步骤i和ii制得的溶液在磁力搅拌下混合10分钟,自发生成纳米胶囊;
iv)蒸发有机溶剂至恒定体积。
制得成品后,则测量其平均直径、多散射指数(PI)和表面电荷(电动电位)。下表7展示了根据PEG硬脂酸酯量测得的所述参数值。
表7
实施例2.6根据两步溶剂扩散法制备由油性鲨烯核心组成的鱼精蛋白纳米胶囊
i)制备由丙酮溶液(4.5ml)、62.5μl鲨烯和不同量的PEG硬脂酸酯组成的油相;
ii)将步骤i制得的溶液在磁力搅拌下添加到10ml水溶液中,保持10分钟,自发生成纳米胶囊;
iii)蒸发有机溶剂至恒定体积;
iv)将步骤iii中的纳米乳剂与由1或2mg/ml浓度的Pr组成的水溶液(1ml)以1:1和1:2的比例(纳米乳剂ml:鱼精蛋白mg)共培养,从而涂覆所述纳米乳剂,所述涂层立即生成,无视温度。
制得成品后,则测量其平均直径、多散射指数(PI)和表面电荷(电动电位)。下表8展示了步骤iv中的PEG硬脂酸酯量和不同鱼精蛋白比率下测得的所述参数值。
表8
实施例2.7根据一步溶剂扩散法制备由油性α-生育酚核心和不同表面活性剂组成的鱼精蛋白纳米胶囊
i)制备溶解有浓度为0.05w/v鱼精蛋白的水溶液(10ml);
ii)制备由乙醇/丙酮溶液(0.25:4.5ml)和3种不同的α-生育酚比率组成的油相;使用PEG-硬脂酸酯(PEG-st)或SolutolHS15作为表面活性剂。α-生育酚:表面活性剂质量比率分别为12:12,60:12和60:60;
iii)将步骤i和ii制得的溶液在磁力搅拌下混合10分钟,自发生成纳米胶囊;
iv)蒸发有机溶剂至恒定体积。
制得成品后,则测量其平均直径、多散射指数(PI)和表面电荷(电动电位)。下表9展示了测得的所述参数值。
表9
实施例2.8根据一步溶剂扩散法制备由油性α-生育酚核心和不同表面活性剂组成的鱼精蛋白纳米胶囊
i)制备溶解有浓度为0.05w/v的鱼精蛋白水溶液(10ml);
ii)制备由乙醇/丙酮溶液(0.25:4.5ml)和3种不同的α-生育酚比率组成的油相;使用吐温20或吐温80作为表面活性剂。α-生育酚:表面活性剂质量比率分别为12:12和60:12;
iii)将步骤i和ii制得的溶液在磁力搅拌下混合10分钟,自发生成纳米胶囊;
iv)蒸发有机溶剂至恒定体积。
制得成品后,则测量其平均直径、多散射指数(PI)和表面电荷(电动电位)。下表10展示了测得的所述参数值。
表10
实施例2.9根据一步溶剂扩散法制备由油性α-生育酚核心和TPGS组成的鱼精蛋白纳米胶囊
i)制备溶解有浓度为0.05mg/ml的鱼精蛋白水溶液(10ml);
ii)制备由乙醇/丙酮溶液(0.25:4.5ml),60mgα-生育酚和24mgTPGS组成的油相;
iii)将步骤i和ii制得的溶液在磁力搅拌下混合10分钟,自发生成纳米胶囊;
iv)蒸发有机溶剂至恒定体积。
制得成品后,则测量其平均直径、多散射指数(PI)和表面电荷(电动电位)。下表11展示了测得的所述参数值。
表11
实施例2.10根据一步溶剂扩散法制备由油性核心组成的鱼精蛋白纳米胶囊
i)制备溶解有浓度为0.05w/v的鱼精蛋白水溶液(10ml);
ii)制备由乙醇/丙酮溶液(0.25:4.5ml)、62.5μl和40mg胆酸钠组成的油相;
iii)将步骤i和ii制得的溶液在磁力搅拌下混合10分钟,自发生成纳米胶囊;
iv)蒸发有机溶剂至恒定体积。
制得成品后,则测量其平均直径、多散射指数(PI)和表面电荷(电动电位)。下表12展示了测得的所述参数值。
表12
实施例2.11根据两步溶剂扩散法制备由油性核心组成的鱼精蛋白纳米胶囊
i)制备由乙醇/丙酮溶液(0.25:4.5ml)、62.5μl和40mg胆酸钠组成的油相;
ii)将步骤i制得的溶液在磁力搅拌下添加到10ml水溶液中,保持10分钟,自发生成纳米胶囊;
iii)蒸发有机溶剂至恒定体积;
iv)将步骤iii中的纳米乳剂与由1或2mg/ml浓度的Pr组成的水溶液(1ml)以1:1和1:2的比例(纳米乳剂ml:鱼精蛋白mg)共培养,从而涂覆所述纳米乳剂,所述涂层立即生成,无视温度。
制得成品后,则测量其平均直径、多散射指数(PI)和表面电荷(电动电位)。下表13展示了步骤iv中的Pr量下测得的所述参数值。
表13
实施例2.12根据一步溶剂扩散法制备由油性α-生育酚核心组成的鱼精蛋白纳米胶囊
i)制备由24mgPEG硬脂酸酯,120mgα-生育酚的二氯甲烷(1ml)溶液组成的油相;
ii)制备溶解有浓度为0.05mg/ml的鱼精蛋白水溶液;
iii)将步骤i制得的溶液添加到2ml水中,并超声处理30秒;
iv)将所得乳剂以步骤ii制得的溶液加以稀释(1:10稀释比率),以生成纳米胶囊;
v)蒸发有机溶剂至恒定体积。
制得成品后,则测量其平均直径、多散射指数(PI)和表面电荷(电动电位)。下表14展示了测得的所述参数值。
表14
制剂 | 尺寸(nm) | PI | 电动电位(mv) |
NC鱼精蛋白 | 340±131 | 0.4 | -5±1 |
实施例2.13根据一步溶剂扩散法制备由油性α-生育酚核心组成的鱼精蛋白纳米胶囊
i)制备由24mgPEG硬脂酸酯,120mgα-生育酚的二氯甲烷(1ml)溶液组成的油相;
ii)制备溶解有浓度为0.05w/v鱼精蛋白的水溶液;
iii)将步骤i制得的溶液添加到2ml水中,16000rpm下均质化5分钟,然后19000rpm下均质化5分钟;
iv)将所得乳剂以步骤ii制得的溶液加以稀释(1:10稀释比率),并以22000rpm均质化3分钟,以生成纳米胶囊;
v)蒸发有机溶剂至恒定体积。
制得成品后,则测量其平均直径、多散射指数(PI)和表面电荷(电动电位)。下表15展示了测得的所述参数值。
表15
实施例2.14根据一步溶剂扩散法制备由油性α-生育酚核心组成的鱼精蛋白纳米胶囊
i)制备由24mgPEG硬脂酸酯,120mgα-生育酚的二氯甲烷(1ml)溶液组成的油相;
ii)将步骤i制得的溶液添加到2ml水中,并超声处理30秒;
iii)将所得乳剂加水稀释(1:10稀释比率);
iv)蒸发有机溶剂至恒定体积,以形成阳离子纳米乳剂;
v)将步骤iii中的纳米乳剂与由1或2mg/ml浓度的Pr组成的水溶液(1ml)以1:1和1:2的比例(纳米乳剂ml:鱼精蛋白mg)共培养,从而涂覆所述纳米乳剂,所述涂层立即生成,无视温度。
制得成品后,则测量其平均直径、多散射指数(PI)和表面电荷(电动电位)。下表16展示了测得的所述参数值。
表16
实施例2.15根据两步溶剂扩散法制备由油性α-生育酚核心组成的鱼精蛋白纳米胶囊
i)制备由24mgPEG硬脂酸酯,120mgα-生育酚的二氯甲烷(1ml)溶液组成的油相;
ii)将步骤i制得的溶液添加到2ml水中,16000rpm下均质化5分钟,然后19000rpm下均质化5分钟;
iii)将所得乳剂加水稀释(1:10稀释比率),并以22000rpm均质化3分钟;
iv)蒸发有机溶剂至恒定体积,以形成阳离子纳米乳剂;
v)将步骤iii中的纳米乳剂与由1或2mg/ml浓度的Pr组成的水溶液(1ml)以1:1和1:2的比例(纳米乳剂ml:鱼精蛋白mg)共培养,从而涂覆所述纳米乳剂,所述涂层立即生成,无视温度。
制得成品后,则测量其平均直径、多散射指数(PI)和表面电荷(电动电位)。下表17展示了测得的所述参数值。
表17
实施例3:评估不同量鱼精蛋白下的油性α-生育酚核心纳米胶囊的物化特性
实施例3.1::根据一步溶剂扩散法制备由油性α-生育酚核心组成的鱼精蛋白纳米胶囊:
i)制备溶解有1-100mg鱼精蛋白的鱼精蛋白水溶液(10ml);
ii)制备由乙醇/丙酮溶液(0.25:4.5ml)、60mgα-生育酚、5mg胆酸钠和12mgPEG硬脂酸酯组成的油相;
iii)将步骤ii制得的溶液在磁力搅拌下添加到10ml步骤i中制得的鱼精蛋白水溶液中,保持10分钟,自发生成纳米胶囊;
iv)蒸发有机溶剂至恒定体积。
制得成品后,则测量其平均直径、多散射指数(PI)和表面电荷(电动电位)。下表18展示了步骤i水溶液中的鱼精蛋白量下测得的所述参数值。虽然存在Pr变化,但可以观察到产生该系统的可能性。
表18
实施例4:评估将亲脂药物多西紫杉醇封装在鱼精蛋白纳米胶囊中的能力
制备具有由PEG硬脂酸酯和α-生育酚或组成的油性核心的鱼精蛋白纳米胶囊。然后,装入亲脂性药物,在本例中为多西紫杉醇,一种不溶于水的抗癌药剂。该制备方法相当于改进后的此前实施例2.1中所述方法,其改进在于向油相中放入了少量的活性成分乙醇储藏液(1-100mg/ml)。然后,通过旋转蒸发仪去除有机溶剂,直至恒定体积,形成封装有多西紫杉醇的鱼精蛋白纳米胶囊。
根据本发明方法制备纳米胶囊后,测定封装效率(利用高效液相色谱法评估游离药物,λ=227nm),测得封装效率35%。还测量了平均粒径、多散射指数和电动电位参数(表19)。可以看出,可以有效地包含疏水活性物质,而无需显著改变NE中包含的Pr。
表19
实施例5:鱼精蛋白纳米胶囊的细胞增殖抑制能力研究
根据如实施例4所述方法制备鱼精蛋白纳米胶囊,以评估封装有多西紫杉醇的鱼精蛋白纳米胶囊对肺癌细胞系NCI-H460和A549和胰腺癌细胞系MiaPaCa2和BxPC3的细胞增殖的抑制能力。为此研究,分析了4种处理:(i)乙醇;(ii)DCX的乙醇溶液;(iii)空白纳米胶囊,作为对照;以及(iv)装有以培养基(DMEM)稀释的DCX的纳米胶囊。培养时间(24和28小时)后,以结晶紫处理样品,并以分光光度法(λ=590nm)定量测量溶解的细胞。下列附图(图1-4)展示了本研究的结果:
如不同附图中所示,在不同时间点和不同细胞系中,多西紫杉醇乙醇溶液与封装在PrNCs中的同一药物活性相仿。由此可以推断,所述系统可以体内给药而无需其他赋形剂(例如使得所述系统不合理分布及引发不良反应的氢化蓖麻油或高浓度吐温80)。
实施例6:评估鱼精蛋白纳米胶囊封装其他亲脂性分子的能力
实施例6.1罗丹明6G在鱼精蛋白纳米胶囊中的封装
制备具有由α-生育酚组成的油性核心的鱼精蛋白纳米胶囊。然后,装入亲脂性分子,在本例中为罗丹明6G(一种有机杂环化合物和荧光对比剂,术语罗丹明家族)。该制备方法相当于改进后的此前实施例2.1中所述方法,其改进在于向油相中放入了少量的活性成分乙醇储藏液(1mg/ml)。然后,去除有机溶剂,直至恒定体积,形成封装有罗丹明6G的鱼精蛋白纳米胶囊。
根据本发明方法制备纳米胶囊后,测定封装效率(利用高效液相色谱法评估游离药物,λ=530nm)。还测量了平均粒径、多散射指数和电动电位参数(表20)。可以推断,可以在PrNCs的核心中包含不同的疏水分子。
表20
实施例6.2:姜黄色素在鱼精蛋白纳米胶囊中的封装
制备具有由α-生育酚组成的油性核心的鱼精蛋白纳米胶囊。然后,装入亲脂性分子,在本例中为姜黄色素,一种具有一定抗癌、止痛和抗菌等活性的天然苯酚。该制备方法相当于改进后的此前实施例2.8中所述方法,其中使用吐温80作为表面活性剂,α-生育酚:吐温80的质量比率为60:12,其改进在于向油相中放入了少量的活性成分乙醇储藏液(1-100mg/ml)。然后,去除有机溶剂,直至恒定体积,形成封装有姜黄色素的鱼精蛋白纳米胶囊。
根据本发明方法制备纳米胶囊后,测定封装效率(利用荧光法评估游离姜黄色素)。
还测量了平均粒径、多散射指数和电动电位参数(表21)。可以推断,可以在PrNCs的核心中包含不同的疏水分子,无论使用何种表面活性剂。
表21
实施例7:评估重组乙肝抗原在鱼精蛋白纳米胶囊中的吸附能力
使用α-生育酚、鲨烯或812作为油,制备具有由PEG硬脂酸酯组成的油性核心的鱼精蛋白纳米胶囊。然后,装入亲水性抗原,本例中为重组乙肝抗原(rHBsAg)。该制备方法相当于此前实施例2.1中所述方法。然后,以不同质量比率(鱼精蛋白:抗原)将小份抗原与已经形成的鱼精蛋白纳米胶囊共培养。根据本发明方法制备吸附有抗原的纳米胶囊后,利用ELISA测定其中某些制剂的结合效率,并测量平均粒径、多散射指数和电动电位参数(表22)。从表中可以看出,PrNCs表面有效地结合了大量rHBsAg。
表22
实施例8:载有重组乙肝抗原的鱼精蛋白纳米胶囊的免疫研究
制备具有由α-生育酚(TCPH)和鲨烯(SQL)组成的油性核心的鱼精蛋白纳米胶囊。然后,装入重组乙肝抗原(rHBsAg),结合比率为NC:rHBsAg=4:1。该制备方法相当于此前实施例7中所述方法。
在雌性BALB/c小鼠中测量了Ncs诱导免疫应答的能力,在第42、126、183天通过ELISA定量测量该应答。实验动物经历12小时光/12小时暗循环及恒温22℃,并给予自由采食水和食物。实验动物在免疫接种和采样期间保持清醒。对小鼠的使用遵循西班牙法律(RoyalDecree1201/2005)。随机选定每组7只小鼠,以10μg剂量的NCsPr封装抗原,在第0天和第28天通过肌肉内给药(im)和在第0、28和112天通过鼻腔给药(in)给药进行免疫接种。并以NCPr-TOCOPH进行联合给药测试,该联合给药为第0天肌肉内给药(im)和第28、112天鼻腔给药(in)。下图展示了该实验研究中所得的结果。
考虑到100(mIU/ml)IgG值被看作是保护值,图5中可以看出,肌肉内给药和联合疗法(im和in)给药的NCsPr均达到了所述保护,无论所用为何种油。虽然鼻腔给药未达到该水平,但是已知此类粘膜给药优选为刺激细胞类免疫应答;因此,并不能排除其对于此种疾病的保护。
实施例9:评估载有α-生育酚的鱼精蛋白纳米胶囊的流感抗原吸附能力
使用α-生育酚作为油,制备具有由PEG硬脂酸酯组成的油性核心的鱼精蛋白纳米胶囊。然后,装入亲水性蛋白抗原,本例中为H1N1流感抗原(HI)。该制备方法相当于此前实施例2.1中所述方法。然后,以不同质量比率(鱼精蛋白:抗原)将小份抗原与已经形成的鱼精蛋白纳米胶囊共培养。
根据本发明方法制备吸附有抗原的纳米胶囊后,利用免疫印迹分析测定其中NC:抗原=4:1的制剂的结合效率,并测量平均粒径、多散射指数和电动电位参数(表23)。
从表23中可以看出,该系统吸附HI后,其物化性质未受影响。PrNCs有效地结合了所述蛋白抗原。
表23
实施例10:载有H1N1流感抗原的鱼精蛋白纳米胶囊的免疫研究
使用α-生育酚作为油性核心制备鱼精蛋白纳米胶囊。然后,以4:1的NC:HI比率结合H1N1流感抗原(HI)。该制备方法相当于此前实施例9中所述方法。
在雌性BALB/c小鼠中测量了Ncs诱导免疫应答的能力,在第21、35、49、196天通过ELISA定量测量该应答。实验动物经历12小时光/12小时暗循环及恒温22℃,并给予自由采食水和食物。实验动物在免疫接种和采样期间保持清醒。对小鼠的使用遵循西班牙法律(RoyalDecree1201/2005)。随机选定每组5只小鼠,以7.5或2μg剂量吸附在NCsPr中的抗原,在第0、21、35天通过皮下给药进行免疫接种,并以ELISA技术测试了特异针对该抗原的IgG抗体的存在。图6展示了该实验研究中所得的结果。
如图所示,NCsPr诱导的血凝反应滴定量高于1:64稀释液,后者被认为是足以保护避免流感感染的。
实施例11:评估α-生育酚核心的鱼精蛋白纳米胶囊吸附遗传材料的能力
使用PEG硬脂酸酯或PEG硬脂酸酯和胆酸钠作为表面活性剂,制备以α-生育酚为油性核心的鱼精蛋白纳米胶囊。然后,结合遗传材料EGFP-C1。该制备方法相当于此前实施例2.1中所述方法。然后,以不同质量比率(5、10和20%,相对于Pr质量)将小份质粒与已经形成的鱼精蛋白纳米胶囊共培养。培养吸附有pDNA的纳米胶囊后,测量平均粒径、多散射指数和电动电位参数(表24)。
如表21所示,所述系统的表面电荷显著下降,甚至观察到电位逆转,表明该遗传材料吸附到了NCsPr表面。
表24
实施例12
实施例12.1评估海藻糖和葡萄糖对鱼精蛋白纳米胶囊冻干处理后的粒径的影响
根据前述方法,制备具有由PEG硬脂酸酯和鲨烯组成的油性核心的鱼精蛋白纳米胶囊。使用5和10%w/v这两种冷冻保护剂浓度,分析评估冷冻保护剂葡萄糖和海藻糖在鱼精蛋白纳米胶囊冻干处理和后续重悬浮后的粒径恢复的影响。还评估了纳米胶囊浓度(0.025;0.05;0.08;0.1;0.25;0.5;0.75;和1%w/v)对需冻干的悬浮液的影响。作为对照,对浓度为1.54%的NCsPr悬浮液不实用冷冻保护剂地进行冻干。下表中的结果展示了冻干鱼精蛋白纳米胶囊在重悬浮后的粒径(表25)。
如表25所示,即使未使用冷冻保护剂,也可以获得物化性质也未受影响的NCsPr冻干制剂。已知干燥粉末形式的制剂比水悬浮液形式的制剂更为稳定,因此,可以预期所述制剂在室温下更为稳定。
表25
实施例12.2:评估冻干处理后对鱼精蛋白纳米胶囊的粒径和rHBsAg完整性的影响
根据前述方法,制备具有由α-生育酚、PEG硬脂酸酯和胆酸钠组成的油性核心的鱼精蛋白纳米胶囊。使用浓度为5%的冷冻保护剂葡萄糖和海藻糖,评估对浓度为1%的NCsPr的粒径的影响。下表展示了冻干的鱼精蛋白纳米胶囊重悬浮后的粒径(表26)。使用免疫印迹法分析吸附抗原的完整性。
如表26中所示,所得的载有吸附到其外壳的rHBsAg抗原的NCsPr干燥制剂并未受到物化性质损害。附图中展示了冻干处理后的NC-Pr-吸附rHBsAg抗原的完整性。
免疫印迹图像表明,该冻干过程后不存在降解。
表26
实施例13:评估储藏期间的鱼精蛋白纳米胶囊的粒径变化
根据实施例2.3中的前述方法,以12mgPEG-st制备具有由α-生育酚和PEG-st组成的油性核心的鱼精蛋白纳米胶囊。对粒径进行长期测量,以获得关于系统大小随时间变化的信息。还评估了储藏温度(4-8℃)对纳米胶囊稳定性的影响。表27中的结果表明,Pr纳米胶囊的大小在储藏期间几乎无变化。
表27
时间 | 尺寸 |
第0天 | 261±13 |
第7天 | 261±7 |
第14天 | 263±10 |
第21天 | 258±8 |
第28天 | 265±7 |
2个月 | 270±12 |
3个月 | 300±15 |
4个月 | 289±18 |
实施例14:评估鱼精蛋白纳米胶囊的细胞活性
为了评估鱼精蛋白纳米胶囊在RAW264.7免疫细胞中的活性,根据实施例2.1中的前述方法,制备具有由鲨烯(SQL)、α-生育酚油(TCPH)组成的油性核心的鱼精蛋白纳米胶囊。在实验中,在所述细胞系中以不同浓度培养纳米胶囊,并在24小时后和48小时后通过QCCS(快速细胞计数方案)方法定量测量其活性。
如图5所示,即使培养48小时后,不同浓度的鱼精蛋白纳米胶囊的活性仍在约75%左右,由此提供了本发明的毒性值。
实施例15:评估鱼精蛋白纳米胶囊在外周血单核细胞中诱导细胞因子分泌的能力
分别根据实施例2.3和2.5中的前述方法,制备具有α-生育酚或鲨烯油性核心的鱼精蛋白纳米胶囊。
纳米胶囊制成后,测定外周血单核细胞所分泌的不同细胞因子。为此,将取自3个健康个体的血肝素化,以PBS稀释并通过Ficoll-Hypaque梯度离心法分离,以允许分离单核细胞。为了定量测定细胞因子生成,取2x105所述细胞并在10和100μg/ml两种浓度的α-生育酚或鲨烯油性核心的鱼精蛋白纳米胶囊的存在下培养24小时,使用LPS(10μg/ml)作为阳性对照。使用Th1/Th2FlowCytomixTM流式细胞仪根据厂商说明测定分泌水平。如表28所示,该纳米胶囊可以诱导细胞因子分泌。该应答可以根据油性核心浓度和/或成分来调节。(n/3)=应答对象数目。
表28
实施例16:评估鱼精蛋白纳米胶囊的补体级联激活
分别根据实施例2.3和2.5中的前述方法,制备具有由油性α-生育酚或鲨烯核心的鱼精蛋白纳米胶囊。
制备好纳米胶囊后,通过免疫印迹法分析C3产物来测定补体活化。将不同浓度的鱼精蛋白纳米胶囊与人血浆共培养,并使用眼镜蛇毒作为阳性对照,PBS作为阴性对照。如图11所示,可以观察到,根据其油性核心成分和浓度,鱼精蛋白纳米胶囊活化了补体级联反应,该特征可用于开发新型预防或治疗免疫佐剂。
实施例17:评估Raw267.4细胞与鱼精蛋白纳米胶囊共培养后的细胞活性
根据实施例2.3中的前述方法,制备具有α-生育酚油性核心的鱼精蛋白纳米胶囊。
制备好纳米胶囊后,通过除实施例14所述以外的方法来测定鱼精蛋白纳米胶囊对细胞活性的影响。
为此,根据厂商说明用测定RAW264.7巨噬细胞中的细胞活性。测试了3种纳米胶囊浓度,且以无纳米胶囊的细胞(红线)作为阳性对照。该细胞活性与金电极的电阻具有相关性,在48小时内每15分钟定量测量细胞数目和形态。
如图12中所示,与细胞连续接触24小时后,高达50μg/ml的纳米胶囊未改变细胞生长(即,数据与对照相同)。
实施例18:评估结合乙肝抗原的冻干鱼精蛋白纳米胶囊的稳定性
根据实施例2.3中的前述方法,制备具有α-生育酚油性核心的鱼精蛋白纳米胶囊。
制备好纳米胶囊后,根据实施例7所述,以比例NC:rHBsAg=4:1结合重组乙肝抗原(rHBsAg)。然后,如实施例12所述,以5%海藻糖和1%浓度的纳米胶囊浓度冻干该制剂,并将冻干产品在室温(25℃)下保藏,并在不同时间重悬浮,以评估其物化性质。在各时间点通过免疫印迹法来分析抗原完整性。
在图13中的物化表征中可以观察到,冻干产品的纳米尺度和正动作电位保持稳定至少12个月。免疫印迹图像(图14)表明,鱼精蛋白纳米胶囊中吸附的抗原(第2、3、4道)未在冻干过程或室温储藏期间损失其结构或抗原性,且可与4℃储藏的抗原(第6道)相比。第5道表示室温储藏的游离冻干rHBsAg,可以看到其相对于鱼精蛋白纳米胶囊结合抗原的抗原相对损失。
本实施例说明了本发明的纳米胶囊至少为1年的热稳定性和与抗原或分子结合的载体所起到的保护作用。
实施例19:
根据实施例2.8中的前述方法,以改进的溶剂扩散法(通过滴注)减小所得制剂尺寸,制备具有α-生育酚油性核心的鱼精蛋白纳米胶囊。
i)制备溶解有浓度为0.25和0.125mg/ml的鱼精蛋白水溶液(10ml);
ii)制备由乙醇/丙酮溶液(0.750:4.25ml)、15mgα-生育酚和6mg吐温80组成的油相;
iii)将步骤ii制得的乙醇溶液以0.250ml小份每隔20秒添加至步骤i制得溶液中,自发生成纳米胶囊;
iv)蒸发有机溶剂至恒定体积(5ml)。
制得成品后,则测量其平均直径、多散射指数(PI)和表面电荷(电动电位)。下表29展示了测得的所述参数值。
表29
实施例20
以改进的溶剂扩散法(通过滴注)减小所得制剂尺寸,制备具有油性核心的鱼精蛋白纳米胶囊。
i)制备溶解有浓度为0.25和0.125mg/ml的鱼精蛋白水溶液(10ml);
ii)制备由乙醇/丙酮溶液(0.750:4.25ml)、15mg和6mg吐温80组成的油相;
iii)将步骤ii制得的乙醇溶液以0.250ml小份每隔20秒添加至步骤i制得溶液中,自发生成纳米胶囊;
iv)蒸发有机溶剂至恒定体积。
制得成品后,则测量其平均直径、多散射指数(PI)和表面电荷(电动电位)。下表30展示了测得的所述参数值。
表30
实施例21:评估α-生育酚核心的鱼精蛋白纳米胶囊的遗传材料吸附能力
使用吐温80作为表面活性剂,制备具有α-生育酚油性核心的鱼精蛋白纳米胶囊。然后,与遗传材料i)EGFP-C1pDNA和ii)GL3si-RNA结合。该制备方法对应于此前如实施例2.1中所述的方法。然后,取小份质粒和/或siRNA(0.050ml)与已经形成的鱼精蛋白纳米胶囊共培养,其中遗传材料与鱼精蛋白的质量比为15.4%。纳米胶囊与遗传材料共培养后,评估以下参数:平均粒径、多散射指数和电动电位(表31)。如表31所示,该系统的表面电荷显著下降,甚至观察到电势反转,表明该遗传材料已经吸附到NCsPr表面。
表31
另一方面,通过琼脂糖凝胶电泳来确认了遗传材料的结合(图15)。
实施例22:评估结合有EGFP-C1DNA质粒的α-生育酚核心鱼精蛋白纳米胶囊的细胞内吞能力和转染癌细
胞(如U87MG恶性胶质瘤)能力
使用吐温80作为表面活性剂,制备具有α-生育酚油性核心的鱼精蛋白纳米胶囊。然后,与遗传材料EGFP-C1pDNA结合。该制备方法对应于此前如实施例2.1中所述的方法。然后,取小份质粒和/或siRNA(0.050ml)与已经形成的鱼精蛋白纳米胶囊(0.250ml)共培养,其中遗传材料与鱼精蛋白的质量比为15.4%。纳米胶囊与遗传材料共培养后,评估以下参数:平均粒径、多散射指数和电动电位(表31),及其转染癌细胞(U87MG)的效力。为此,将该系统与细胞共培养4小时,然后与转然后48小时通过荧光显微镜法评估所结合的质粒编码的绿色荧光蛋白(GFP)的表达,如图16所示。
Claims (24)
1.用于活性成分给药的纳米胶囊系统,包括:
a.含有多肽鱼精蛋白的表面层;
b.油性核心;
c.表面活性剂,其亲水-亲油比率(亲水-亲油平衡值(HLB))大于8,且所述表面活性剂不是磷
脂;以及
d.可选地,至少一种活性物质。
2.根据权利要求1所述的纳米胶囊系统,其特征在于,所述表面活性剂选自:聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温),聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯(吐温),聚氧乙烯脱水山梨醇单硬脂酸酯(吐温),聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温),聚氧乙烯脱水山梨醇三硬脂酸酯(吐温),聚氧乙烯山梨糖醇三油酸酯(吐温),聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯(吐温),聚乙二醇单硬脂酸酯,聚乙二醇硬脂酸酯,聚乙二醇二月桂酸酯,聚乙二醇单棕榈酸酯,聚乙二醇硬脂酸酯,泊洛沙姆124,泊洛沙姆188,泊洛沙姆237,泊洛沙姆338,泊洛沙姆407,Solutol(聚乙二醇-15-羟基硬脂酸酯),TPGS(D-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯),三乙醇油酸铵,油酸钠,胆酸钠,脱氧胆酸钠,月桂基硫酸钠,油酸三乙醇胺,黄蓍胶,十二烷基硫酸钠或其任意组合。
3.根据权利要求1所述的纳米胶囊系统,其特征在于,所述表面活性剂选自聚山梨醇酯和脂肪酸酯。
4.根据权利要求3所述的纳米胶囊系统,其特征在于,所述表面活性剂选自:聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温),聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯(吐温),聚氧乙烯脱水山梨醇单硬脂酸酯(吐温),聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温),聚氧乙烯脱水山梨醇三硬脂酸酯(吐温),聚氧乙烯山梨糖醇三油酸酯(吐温),聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯(吐温)或其任意组合。
5.根据权利要求3所述的纳米胶囊系统,其特征在于,所述表面活性剂选自:聚乙二醇单硬脂酸酯,聚乙二醇硬脂酸酯,聚乙二醇二月桂酸酯,聚乙二醇单棕榈酸酯,聚乙二醇硬脂酸酯,泊洛沙姆124,泊洛沙姆188,泊洛沙姆237,泊洛沙姆338,泊洛沙姆407,Solutol(聚乙二醇-15-羟基硬脂酸酯),TPGS(D-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯)或其任意组合。
6.根据权利要求2所述的纳米胶囊系统,其特征在于,所述表面活性剂选自:三乙醇油酸铵,油酸钠,胆酸钠,脱氧胆酸钠,月桂基硫酸钠,油酸三乙醇胺,黄蓍胶,十二烷基硫酸钠或其任意组合。
7.根据权利要求2所述的纳米胶囊系统,其特征在于,所述表面活性剂是胆酸钠,聚乙二醇硬脂酸酯,Solutol(聚乙二醇-15-羟基硬脂酸酯),TPGS(D-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯),聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯(吐温)或其任意组合。
8.根据任一前述权利要求所述的纳米胶囊系统,其特征在于,所述油性亲脂核心选自花生油,棉籽油,橄榄油,蓖麻油,大豆油,红花油,棕榈油,α生育酚(维生素E),肉豆蔻酸异丙酯,鲨烯,(癸酰甘油酯和辛酰甘油酯的混合物),(油酰聚乙二醇-6-甘油酯),(丙二醇二辛酸酯),(甘油单油酸酯)和(甘油单亚油酸酯)或其任意组合。
9.根据权利要求1-7中任一项所述的纳米胶囊系统,其特征在于,所述油性亲脂核心选自(癸酰甘油酯和辛酰甘油酯的混合物),鲨烯或α生育酚。
10.根据任一前述权利要求所述的纳米胶囊系统,其特征在于,所述系统包括亲脂或亲水活性物质。
11.根据任一前述权利要求所述的纳米胶囊系统,其特征在于,所述活性物质选自多西紫杉醇,重组乙肝抗原,流感(H1N1)的抗原,核酸,糖类化合物,肽,蛋白质或其任意组合。
12.根据权利要求1-11任一项所述的纳米胶囊系统,其特征在于,所述系统为冻干形式的。
13.用于制备如权利要求1所述的纳米胶囊系统的一步式溶剂扩散方法,包括:
a.制备含有多肽鱼精蛋白的水溶液;
b.制备含有油和一种或多种表面活性剂的有机溶液,所述表面活性剂的亲水-亲油比率大于8;
c.将步骤a和b制得的溶液搅拌混合,以生成纳米胶囊;以及
d.可选地,令前述步骤所制得的混合物中的有机溶剂全部蒸发或部分蒸发至恒定体积。
14.用于制备如权利要求1所述的纳米胶囊系统的两步式溶剂扩散方法,包括:
a.制备含有油和一种或多种表面活性剂的有机溶液,所述表面活性剂的亲水-亲油比率大于8;
b.将步骤a制得的所述溶液添加到可选地包含水溶性表面活性剂的水相中,搅拌生成纳米乳剂;
c.可选地,令有机溶剂全部蒸发或部分蒸发至恒定体积;以及
d.通过将前述步骤所制得的纳米乳剂与含鱼精蛋白的水溶液共培养,涂覆所述纳米乳剂。
15.用于制备如权利要求1所述的纳米胶囊系统的两步式溶剂扩散方法,包括:
a.制备含有鱼精蛋白且可选地含有水溶性表面活性剂的水溶液;
b.制备含有油和一种或多种表面活性剂的油相,其中所述表面活性剂的亲水-亲油比率大于8,且不是磷脂;
c.将步骤ii所得溶液按等份试样以指定时间间隔添加到步骤i所得水溶液中,或将步骤i所得水溶液按等份试样以指定时间间隔添加到的步骤ii所得溶液中;
d.可选地,令有机溶剂全部蒸发或部分蒸发至恒定体积。
16.根据权利要求13-15的任一项所述的方法,其特征在于,所述纳米胶囊系统包含活性成分,若所述活性成分为亲脂性,则添加到所述有机溶液中,若为亲水性,则添加到所述水溶液中。
17.根据权利要求1-12任一项所述的方法在治疗中的用途。
18.根据权利要求10所述的纳米胶囊系统,其特征在于,所述活性物质为多西紫杉醇。
19.根据权利要求10所述的纳米胶囊系统,其特征在于,所述活性物质为重组乙肝抗原(rHBsAg)。
20.根据权利要求10所述的纳米胶囊系统,其特征在于,所述活性物质为重组H1N1流感(HI)抗原。
21.根据权利要求18所述的系统在制备用于治疗肺癌或胰腺癌的药品中的用途。
22.根据权利要求19所述的系统在制备用于治疗或预防乙肝的药品中的用途。
23.根据权利要求20所述的系统在制备用于治疗或预防H1N1流感的药品中的用途。
24.包含根据权利要求1-12任一项所述的纳米胶囊系统且可选地包含一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
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Cited By (3)
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---|---|---|---|---|
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Citations (6)
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---|---|---|---|---|
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---|---|---|---|---|
WO1999059714A1 (en) * | 1998-05-15 | 1999-11-25 | Nasa/Johnson Space Center | Microencapsulation and electrostatic processing method |
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CN101801358A (zh) * | 2007-07-16 | 2010-08-11 | 东北大学 | 治疗性稳定的纳米颗粒 |
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Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108096188A (zh) * | 2017-12-19 | 2018-06-01 | 复旦大学 | 负载疏水药物和营养物的水包油复合纳米乳液及其制备方法 |
CN108096188B (zh) * | 2017-12-19 | 2019-11-12 | 复旦大学 | 负载疏水药物和营养物的水包油复合纳米乳液及其制备方法 |
CN108403659A (zh) * | 2018-03-01 | 2018-08-17 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种硬乳液纳微球及其制备方法和应用 |
CN116348098A (zh) * | 2020-05-20 | 2023-06-27 | 斯菲拉封装有限责任公司 | 包封亲水性或两亲性生物化合物的颗粒 |
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