CN105273045A

CN105273045A - 阿加曲班有关物质的合成与分离鉴定方法

Info

Publication number: CN105273045A
Application number: CN201410254533.2A
Authority: CN
Inventors: 尚德斌
Original assignee: Chongqing Co Ltd Of Hui Zhi Drug Research Institute; Chongqing Shenghuaxi Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Chongqing Co Ltd Of Hui Zhi Drug Research Institute; Chongqing Shenghuaxi Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2014-06-10
Filing date: 2014-06-10
Publication date: 2016-01-27

Abstract

本发明公开阿加曲班（Aragatroban）两种有关物质的制备与分离鉴定的方法。本发明是以阿加曲班为原料，经由发烟硝酸硝化，分离得到（2R，4R）-1-[N^G-硝基-N²-（（R，S）-3-甲基-1，2，3，4-四氢-8-喹啉磺酰基）-L-精氨酰基]-4-甲基-2-哌啶甲酸（阿加曲班有关物质A）；以阿加曲班为原料，经过氢氧化钠、氢氧化钡等强碱性试剂水溶液进行水解，分离得到（2R，4R）-1-[N-（（R，S）-3-甲基-1，2，3，4-四氢-8-喹啉磺酰基）-L-鸟氨酰基]-4-甲基-2-哌啶甲酸（阿加曲班有关物质B）。本发明提供的阿加曲班有关物质制备方法，简单易行，成本低廉，避免了阿加曲班有关物质全合成的复杂、繁琐操作过程，是阿加曲班有关物质合宜的制备方法。阿加曲班有关物质A

Description

阿加曲班有关物质的合成与分离鉴定方法

技术领域

本发明涉及两种阿加曲班有关物质A【(2R，4R)-1-[N^G-硝基-N²-((R，S)-3-甲基-1，2，3，4-四氢-8-喹啉磺酰基)-L-精氨酰基]-4-甲基-2-哌啶甲酸】和阿加曲班有关物质B【(2R，4R)-1-[N-((R，S)-3-甲基-1，2，3，4-四氢-8-喹啉磺酰基)-L-鸟氨酰基]-4-甲基-2-哌啶甲酸】的合成与分离鉴定，属于医药化合物合成领域。

背景技术

阿加曲班是由日本三菱化学公司研究开发的一种新型抗凝血酶活性物质，为静脉注射剂，已在多国上市，临床应用前景良好。阿加曲班的化学名称为：(2R，4R)-1-[N²-((R，S)-3-甲基-1，2，3，4-四氢-8-喹啉磺酰基)-L-精氨酰基]-4-甲基哌啶-2-甲酸一水合物。化学结构式如下：

阿加曲班原研公司三菱化学公司的研究结果表明，阿加曲班在合成和贮存过程中，易产生几种副产物和分解产物，其中阿加曲班有关物质A【(2R，4R)-1-[N-((R，S)-3-甲基-1，2，3，4-四氢-8-喹啉磺酰基)-L-鸟氨酰基]-4-甲基-2-哌啶甲酸】、阿加曲班有关物质B【(2R，4R)-1-[N-((R，S)-3-甲基-1，2，3，4-四氢-8-喹啉磺酰基)-L-鸟氨酰基]-4-甲基-2-哌啶甲酸】和阿加曲班有关物质C【(2R，4R)-1-[N²-(3-甲基-8-喹啉磺酰基)-L-精氨酰基]-4-甲基-2-哌啶甲酸】难以与阿加曲班分离，大大增加了纯化的难度，影响了阿加曲班的质量，A\B\C三杂质的结构式分别为：

阿加曲班有关物质A

阿加曲班有关物质B

阿加曲班有关物质C

其中，阿加曲班有关物质A和有关物质C为合成过程中产生的副产物，有关物质B为贮存过程中产生的降解产物。由于阿加曲班有关物质A、B、C与阿加曲班结构相近，不易分离，使得阿加曲班成品难以纯化，故必须对这些杂质进行定性定量检测，以保证产品质量，因此，需要获得该3种杂质的对照品。阿加曲班有关物质研究的文献报道非常少，2007年，天津炜杰科技有限公司的宋红海等人报道了阿加曲班有关物质C的合成【CN101033223A】。它是以阿加曲班中间体1【(2R，4R)-1-[N^G-硝基-N²-(-3-甲基-8-喹啉磺酰基)-L-精氨酰基]-4-甲基-2-哌啶甲酸】为原料，经过钯碳或氯化亚锡的不完全还原，选择性脱掉胍基上面的硝基保护基，得到阿加曲班有关物质C，其合成路线为：

合成方法一：

合成方法二：

目前，尚未见到阿加曲班有关物质A和阿加曲班有关物质B的相关研究的报道。

发明内容

本发明提供了阿加曲班有关物质A【(2R，4R)-1-[N^G-硝基-N²-((R，S)-3-甲基-1，2，3，4-四氢-8-喹啉磺酰基)-L-精氨酰基]-4-甲基-2-哌啶甲酸】和有关物质B【(2R，4R)-1-[N-((R，S)-3-甲基-1，2，3，4-四氢-8-喹啉磺酰基)-L-鸟氨酰基]-4-甲基-2-哌啶甲酸】的合成和分离鉴定方法。本发明以阿加曲班为原料，分别通过一步反应，得到阿加曲班有关物质A和阿加曲班有关物质B，反应设计合理，操作简单易行，是合成和研究阿加曲班有关物质简便有效的方法。

所述的阿加曲班有关物质A和有关物质B的合成与分离方法包括：

1、使阿加曲班经发烟硝酸硝化，将其分子结构中胍基上面的末端氨基进行硝基化，得到阿加曲班有关物质A，具体合成步骤为：

1)、于三口瓶中加入发烟硝酸/发烟硫酸、或发烟硝酸/醋酸、或发烟硝酸/高氯酸，置于冰盐浴中，降温至-10℃；

2)、将阿加曲班加入上述三口瓶中，控低温搅拌反应。其中发烟硝酸与阿加曲班的质量比为5∶1，尤以5∶1.5为最佳；反应温度为-30℃～0℃，以-10℃～0℃为最佳；反应时间为1h～3h，以1h为最佳；

3)、高效液相监测原料反应完全，加入碎冰，剧烈搅拌，氨水调pH至6-7，析出类白色至淡黄色固体，冷却，抽滤，干燥，得到阿加曲班有关物质A。

2、使阿加曲班经强碱性试剂水解，将其分子结构中胍基水解成末端伯氨基，分离得到阿加曲班有关物质B，具体合成步骤为：

1)、于三口瓶中加入阿加曲班与氢氧化钡或氢氧化钙、氢氧化钠或氢氧化钾水溶液，阿加曲班与强碱水溶液的质量比为：1∶10～1∶50，以1∶30为最佳；

2)、所述水解反应加热温度为60～100℃，以80～90℃为最佳；反应时间为8-24h，以12h为最佳；

3)、高效液相监测阿加曲班有关物质B的含量不再增加后，停止反应，冷却，用稀硫酸调节反应体系为中性，加入适量乙酸乙酯，抽滤，除去不溶性物质，滤液静置分层，水相再用乙酸乙酯或二氯甲烷或氯仿等溶剂提取，合并有机相，饱和食盐水洗、无水硫酸镁干燥、抽滤除去干燥剂；

4)、减压蒸馏浓缩，得到阿加曲班有关物质B。

上述方法得到的阿加曲班有关物质A和有关物质B的产品，可以进一步采用常规方法如重结晶得到符合要求纯度的杂质对照品。

本发明提供的阿加曲班有关物质A和有关物质B的合成方法尚未有人报道。它是以阿加曲班为原料，分别经过简单的一步反应，然后经分离纯化，即可得到纯度较高的阿加曲班有关物质，操作简便，简单易行，成本低廉，为阿加曲班有关物质的研究提供了快捷、高效的研究手段。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

实施例一

于100ml三口瓶中加入20ml发烟硝酸/10ml发烟硫酸，降温至-10℃以下，缓慢加入8.8g阿加曲班，加料毕，控温-10℃～-5℃搅拌反应1.5h，高效液相监测原料反应完全，停止反应。控制低温，向反应体系中加入300g碎冰，然后用浓氨水调节pH至6-7，有类白色至淡黄色固体析出，抽滤，滤饼用水洗，40℃真空干燥6h，得到阿加曲班有关物质A5.1g，纯度95.6％，收率53.2％。产物鉴定：MS(m/z)，理论值：553，实测值：554[M+H⁺]。

实施例二

于100ml三口瓶中加入10ml发烟硝酸和20m醋酸，降温至-10℃以下，缓慢加入4.4g阿加曲班。加料毕，控温-10℃～0℃搅拌反应2.5h，高效液相监测原料反应完全，停止反应。控制低温，向反应体系中加入200g碎冰，氨水调节pH至6-7，有类白色至淡黄色固体析出，抽滤，滤饼用水洗，40℃真空干燥6h，得到阿加曲班有关物质A1.6g，纯度89.2％，收率33.4％。产物鉴定：MS(m/z)，理论值：553，实测值：554[M+H⁺]。

实施例三

于250ml三口瓶中加入3g阿加曲班和90ml氢氧化钡或氢氧化钙的饱和水溶液，搅拌加热至回流，并保持回流12h，高效液相监测阿加曲班有关物质B含量不再增加，停止反应。冷却至室温，加入100ml乙酸乙酯，稀硫酸调节pH至中性，抽滤，除去不溶性物质。滤液分层，水相用60ml乙酸乙酯提取，合并有机层，饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液浓缩，得到油状阿加曲班有关物质B0.4g，纯度93.6％，收率14.5％。产物鉴定：MS(m/z)，理论值：466，实测值：467[M+H⁺]。

实施例四

于250ml三口瓶中加入2g阿加曲班和1mol/L氢氧化钠或氢氧化钾(60ml)，搅拌加热至60℃，控温反应至高效液相监测阿加曲班有关物质B含量不再增加，停止反应。冷却至室温，加入50ml氯仿，稀盐酸调节pH至中性，分层，取乙酸乙酯层，水相再用30ml氯仿提取一次。合并有机层，饱和食盐水(50ml×3)洗涤，无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液浓缩，得到油状阿加曲班有关物质B0.18g，纯度88.7％，收率9.8％。产物鉴定：MS(m/z)，理论值：466，实测值：467[M+H⁺]。

实施例五

于250ml三口瓶中加入2g阿加曲班和4mol/L氢氧化钠(60ml)，搅拌加热至80℃，控温搅拌反应至高效液相监测阿加曲班有关物质B含量不再增加，停止反应。冷却至室温，加入50ml二氯甲烷，稀盐酸调节pH至中性，分层，取乙酸乙酯层，水相再用30ml二氯甲烷提取一次。合并有几层，饱和食盐水(50ml×3)洗涤，无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液浓缩，得到油状阿加曲班有关物质B0.25g，纯度90.9％，收率11.5％。产物鉴定：MS(m/z)，理论值：466，实测值：467[M+H⁺]。

Claims

1.阿加曲班两种有关物质的制备与分离鉴定方法，其特征在于阿加曲班有关物质A为：（2R，4R）-1-[N^G-硝基-N²-（（R，S）-3-甲基-1，2，3，4-四氢-8-喹啉磺酰基）-L-精氨酰基]-4-甲基-2-哌啶甲酸，其结构式为：

阿加曲班有关物质A

阿加曲班有关物质B为：（2R，4R）-1-[N-（（R，S）-3-甲基-1，2，3，4-四氢-8-喹啉磺酰基）-L-鸟氨酰基]-4-甲基-2-哌啶甲酸，其结构式为：

阿加曲班有关物质B

它们的制备方法为：

1）以阿加曲班为原料，经发烟硝酸硝化，分离得到阿加曲班有关物质A；

2）以阿加曲班为原料，经过氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化钡等强碱性水溶液加热水解，分离得到阿加曲班有关物质B。

2.根据权利要求1所述阿加曲班有关物质A的制备方法，其特征在于：

1）阿加曲班有关物质A的制备是以阿加曲班为原料，在发烟硝酸/发烟硫酸、发烟硝酸/醋酸、发烟硝酸/高氯酸等强酸性体系中，将阿加曲班末端氨基进行硝基化而得到；

2）如步骤1）的方法，硝基化反应温度为-30℃～0℃，反应时间为1h～3h；

3）如步骤1）的方法，硝基化反应结束，通过氨水调pH析晶进行分离纯化得到阿加曲班有关物质A。

3.根据权利要求1所述阿加曲班有关物质B的制备方法，其特征在于：

1）以阿加曲班为原料，在强碱性试剂存在下进行水解反应，将阿加曲班末端胍基水解为伯氨基而得到，所述试剂为氢氧化钡、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙等强碱性物质；

2）如步骤1）的方法，碱性水解温度为60℃-100℃，水解时间为6-12h；

3）其分离纯化是用乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿等溶剂进行萃取分离得到阿加曲班有关物质B。