CN105254774A - 一种葛仙米多糖的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种葛仙米多糖的提取方法，该方法包括如下步骤：精选葛仙米，将其进行干燥，将干燥的葛仙米进行粉碎，过50-100目筛；用纯化水浸泡葛仙米粉20-24h；然后加入纯化水进行提取，提取温度85-95℃，提取时间1-5h；之后进行过滤除去杂质，得到提取液；在提取液中加入蛋白酶，得到酶解液，再过滤去除酶解液中的固体杂质；在酶解液中加入活性炭脱色，离心除去活性炭，将溶液浓缩到1/4后加乙醇进行醇沉，得到葛仙米多糖湿品；将葛仙米多糖湿品在真空下冷冻干燥，得到葛仙米多糖成品。本发明方法工艺稳定，葛仙米多糖得率高，提取得到的葛仙米多糖纯度高，杂质少、外观佳，本发明方法是一种适用于工业化生产的绿色生产工艺。
Description
技术领域
本发明涉及化工技术领域，更具体涉及一种葛仙米多糖的提取方法。
背景技术
葛仙米是念珠藻属(NostocVauch)中的拟球状念珠藻(NostocsphaeoidesKützing)的俗称，它属于蓝藻门(Cyanophyta)，蓝藻纲(Cyanophyceae)，念珠藻目(Nostocales)，念珠藻科(Nostocaceae)。又称天仙米、天仙菜、珍珠菜、水木耳、田木耳，是我国传统出口的一种珍贵野生食药两用淡水固氮蓝藻。
葛仙米在我国历史悠久，不仅是一道营养丰富的传统佳肴，而且具有较高的医疗和保健功效。据记载，葛仙米有治疗夜盲症，脱肛，烫伤和兼具美容之功效，另外还具有明目益气、解热清膈、利肠胃、久食延年、消除疲劳、收敛等功效。葛仙米富含蛋白质、维生素和微量元素，还含有多种具有生物活性的多糖，早在东晋就被作为一种美食和中草药成分，在民间广为流传。
随着微藻产业的兴起与稳步发展，微藻多糖的抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗辐射以及免疫调节等功效正逐渐被人们所认识和接受，为这类产物成为药物、功能食品或化妆品提供了基础。因此需要研发一种得率高、纯度高的葛仙米多糖的制备方法。
发明内容
(一)要解决的技术问题
本发明要解决的技术问题就是如何提高葛仙米多糖的得率和纯度，而提供一种葛仙米多糖的提取方法。
(二)技术方案
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种葛仙米多糖的提取方法，该方法包括如下步骤：
步骤一：备料：精选葛仙米，将其烘干，干燥温度为50-80℃，时间1-5h；将干燥的葛仙米进行粉碎，过50-100目筛；
步骤二：浸泡：用纯化水浸泡葛仙米粉，葛仙米粉与纯化水的重量比为1:30-80，浸泡时间20-24h；
步骤三：水提：在浸泡后的葛仙米中加入纯化水，葛仙米粉与纯化水的重量比为1:12-18，提取温度85-95℃，提取时间1-5h，降温至室温，离心去渣，得到提取液；
步骤四：酶解：将提取液加热到50-60℃，加入提取液体积0.05-0.5％的蛋白酶(104u/g)(w/v)，酶解2-5h。降温至室温，离心去渣，得到酶解液，然后加热至90-100℃，保持5-15min，以灭绝活酶，降温至室温，再过滤以去除酶解液中的固体杂质；
步骤五：脱色：将酶解液加温至65-75℃，搅拌加入滤液体积0.5-2％的活性炭，继续保温搅拌0.5-2h，静置过夜；离心除去活性炭，得无色透明的液体；
步骤六：醇沉：将步骤五得到的液体进行浓缩，浓缩至原体积的1/4-1/5，加入质量浓度85-95％乙醇，浓缩液与乙醇的体积比为1:3-5，醇沉时间3-5h，离心收集葛仙米多糖沉淀，得到葛仙米多糖湿品；
步骤七：冻干：将葛仙米多糖湿品进行真空冷冻干燥，温度为-18至-24℃，时间6-24h，即得葛仙米多糖成品。
优选地，在步骤一中，所述葛仙米粉过80目筛。
优选地，在步骤二中，所述葛仙米粉与纯化水的重量比为1:50。
优选地，在步骤三中，所述的提取温度为90℃。
优选地，在步骤三中，所述的提取时间为2h。
优选地，在步骤四中，所述的蛋白酶为木瓜蛋白酶(市购可得)、胰蛋白酶(市购可得)、猕猴桃蛋白酶(市购可得)中的一种或者几种。
优选地，所述的蛋白酶为木瓜蛋白酶。
优选地，在步骤四中，加入提取液体积0.05％的木瓜蛋白酶。
优选地，在步骤六中，所述的浓缩液与乙醇的体积比为1:4，醇沉时间4h。
优选地，本发明葛仙米多糖的提取方法包括如下步骤：
步骤一：备料：精选葛仙米，将其烘干，干燥温度60℃，时间2h；将干燥的葛仙米进行粉碎，过80目筛；
步骤二：浸泡：用纯化水浸泡葛仙米粉，葛仙米粉与纯化水的重量比为1:50，浸泡时间24h；
步骤三：水提：在浸泡后的葛仙米中加入纯化水，葛仙米粉与纯化水的重量比为1:15(加入吸水后葛仙米质量的15倍水)，提取温度90℃，提取时间2h，降温至室温，离心去渣，得到提取液；
步骤四：酶解：将提取液加热到55℃，加入提取液体积0.05％的木瓜蛋白酶(104u/g)(w/v)，酶解2h，加热到100℃，保持10min，以灭绝活酶，降温至室温，再过滤以去除酶解液中的固体杂质；
步骤五：脱色：将酶解液加温至70℃，搅拌加入滤液体积1％的活性炭，继续保温搅拌0.5h，静置过夜；离心除去活性炭，得无色透明的液体；
步骤六：醇沉：将步骤五得到的液体进行浓缩，浓缩至原体积的1/4，加入质量浓度95％乙醇，浓缩液与乙醇的体积比为1:4，醇沉时间4h，离心收集葛仙米多糖沉淀，得到葛仙米多糖湿品；
步骤七：冻干：将葛仙米多糖湿品进行真空冷冻干燥，温度为-24℃，时间20h，即得葛仙米多糖成品。
本发明还提供了上述葛仙米多糖的提取方法所制得的葛仙米多糖。
(三)有益效果
本发明方法工艺稳定，葛仙米多糖得率高，提取得到的葛仙米多糖纯度高，杂质少、外观佳，本发明方法是一种适用于工业化生产的绿色生产工艺。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不能用来限制本发明的范围。
实施例1
步骤一：备料：精选葛仙米，将其烘干，干燥温度为60℃，时间5h；将干燥的葛仙米进行粉碎，过80目筛；
步骤二：浸泡：用纯化水浸泡葛仙米粉，葛仙米粉与纯化水的重量比为1:50，浸泡时间24h；
步骤三：水提：在浸泡后的葛仙米中加入纯化水，料液比1:15(加入吸水后葛仙米质量的15倍水)，提取温度90℃，提取时间2h，料液降温至室温离心弃去料渣，收集料液；
步骤四：酶解：料液加热到55℃，加入料液体积0.05％的木瓜蛋白酶(104u/g)(w/v)酶解2h。料液降温至室温离心弃去料渣，收集料液，然后加热至100℃，保持10min，以灭绝活酶，再过滤以去除酶解液中的固体杂质；
步骤五：脱色：滤液再次加温至70℃，搅拌加入滤液体积1％的活性炭，继续保温搅拌0.5h，关闭搅拌，静置过夜；使用碟式离心机过滤掉活性炭，得澄清透明的液体；
步骤六：醇沉：过滤液使用外循环蒸发器进行浓缩，浓缩至原体积的1/4，在酶解液中加入95％乙醇，酶解液与乙醇的体积比为1:4，醇沉时间4h，离心，收集葛仙米多糖沉淀，则得到葛仙米多糖湿品；
步骤七：冻干：将葛仙米多糖湿品置于-24℃真空冻干机冷冻干燥12h，即得葛仙米多糖成品。
实施例2
步骤一：备料：精选葛仙米，将其烘干，干燥温度为60℃，时间5h；将干燥的葛仙米进行粉碎，过50目筛；
步骤二：浸泡：用纯化水浸泡葛仙米粉，葛仙米粉与纯化水的重量比为1:30，浸泡时间24h；
步骤三：水提：在浸泡后的葛仙米中加入纯化水，料液比1:15(加入吸水后葛仙米质量的15倍水)，提取温度85℃，提取时间5h，料液降温至室温离心弃去料渣，收集料液；
步骤四：酶解：料液加热到55℃，加入料液体积0.05％的木瓜蛋白酶(104u/g)(w/v)酶解2h。料液降温至室温离心弃去料渣，收集料液，然后加热至100℃，保持5min，以灭绝活酶，再过滤以去除酶解液中的固体杂质；
步骤五：脱色：滤液再次加温至70℃，搅拌加入滤液体积0.5％的活性炭，继续保温搅拌0.5h，关闭搅拌，静置过夜；使用碟式离心机过滤掉活性炭，得澄清透明的液体；
步骤六：醇沉：过滤液使用外循环蒸发器进行浓缩，浓缩至原体积的1/5，在酶解液中加入95％乙醇，酶解液与乙醇的体积比为1:3，醇沉时间3h，离心，收集葛仙米多糖沉淀，则得到葛仙米多糖湿品；
步骤七：冻干：将葛仙米多糖湿品置于-18℃真空冻干机冷冻干燥12h，即得葛仙米多糖成品。
实施例3
步骤一：备料：精选葛仙米，将其烘干，干燥温度为60℃，时间5h；将干燥的葛仙米进行粉碎，过100目筛；
步骤二：浸泡：用纯化水浸泡葛仙米粉，葛仙米粉与纯化水的重量比为1:80，浸泡时间24h；
步骤三：水提：在浸泡后的葛仙米中加入纯化水，料液比1:15(加入吸水后葛仙米质量的15倍水)，提取温度95℃，提取时间4h，料液降温至室温离心弃去料渣，收集料液；
步骤四：酶解：料液加热到55℃，加入料液体积0.05％的木瓜蛋白酶(104u/g)(w/v)酶解2h。料液降温至室温离心弃去料渣，收集料液，然后加热至100℃，保持15min，以灭绝活酶，再过滤以去除酶解液中的固体杂质；
步骤五：脱色：滤液再次加温至70℃，搅拌加入滤液体积2％的活性炭，继续保温搅拌0.5h，关闭搅拌，静置过夜；使用碟式离心机过滤掉活性炭，得澄清透明的液体；
步骤六：醇沉：过滤液使用外循环蒸发器进行浓缩，浓缩至原体积的1/4，在酶解液中加入95％乙醇，酶解液与乙醇的体积比为1:5，醇沉时间3h，离心，收集葛仙米多糖沉淀，则得到葛仙米多糖湿品；
步骤七：冻干：将葛仙米多糖湿品置于-24℃真空冻干机冷冻干燥24h，即得葛仙米多糖成品。
试验例1：木瓜蛋白酶酶量对葛仙米多糖的影响见下表1。
表1：木瓜蛋白酶酶量对葛仙米多糖的影响
由上表可看出，木瓜蛋白酶的量会影响到提取物的得率和多糖的含量，同时也会引入蛋白杂质。所以，需要根据具体需求综合考虑加入木瓜蛋白酶的量。
以上实施方式仅用于说明本发明，而非对本发明的限制。尽管参照实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，对本发明的技术方案进行各种组合、修改或者等同替换，都不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (9)
1.一种葛仙米多糖的提取方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
步骤一：备料：精选葛仙米，将其烘干，干燥温度为50-80℃，时间1-5h；将干燥的葛仙米进行粉碎，过50-100目筛；
步骤二：浸泡：用纯化水浸泡葛仙米粉，葛仙米粉与纯化水的重量比为1:30-80，浸泡时间20-24h；
步骤三：水提：在浸泡后的葛仙米中加入纯化水，葛仙米粉与纯化水的重量比为1:12-18，提取温度85-95℃，提取时间1-5h，降温至室温，离心去渣，得到提取液；
步骤四：酶解：将提取液加热到50-60℃，加入提取液体积0.05-0.5％的蛋白酶，酶解2-5h。降温至室温，离心去渣，得到酶解液；然后加热至90-100℃，保持5-15min，以灭活酶，降温至室温，再过滤以去除酶解液中的固体杂质；
步骤五：脱色：将酶解液加温至65-75℃，搅拌加入滤液体积0.5-2％的活性炭，继续保温搅拌0.5-2h，静置过夜；离心除去活性炭，得无色透明的液体；
步骤六：醇沉：将步骤五得到的液体进行浓缩，浓缩至原体积的1/4-1/5，加入质量浓度85-95％乙醇，浓缩液与乙醇的体积比为1:3-5，醇沉时间3-5h，离心收集葛仙米多糖沉淀，得到葛仙米多糖湿品；
步骤七：冻干：将葛仙米多糖湿品进行真空冷冻干燥，温度为-18℃至-24℃，时间6-24h，即得葛仙米多糖成品。
2.根据权利要求1所述的葛仙米多糖的提取方法，其特征在于，在步骤一中，所述葛仙米粉过80目筛。
3.根据权利要求1所述的葛仙米多糖的提取方法，其特征在于，在步骤二中，所述葛仙米粉与纯化水的重量比为1:50。
4.根据权利要求1所述的葛仙米多糖的提取方法，其特征在于，在步骤四中，所述的蛋白酶为木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、猕猴桃蛋白酶中的一种或者几种。
5.根据权利要求4所述的葛仙米多糖的提取方法，其特征在于，在步骤四中，所述的蛋白酶为木瓜蛋白酶。
6.根据权利要求5所述的葛仙米多糖的提取方法，其特征在于，在步骤四中，加入提取液体积0.05％的木瓜蛋白酶。
7.根据权利要求1所述的葛仙米多糖的提取方法，其特征在于，在步骤六中，所述的浓缩液与乙醇的体积比为1:4，醇沉时间4h。
8.根据权利要求1-7任一项所述的葛仙米多糖的提取方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
步骤一：备料：精选葛仙米，将其烘干，干燥温度60℃，时间2h；将干燥的葛仙米进行粉碎，过80目筛；
步骤二：浸泡：用纯化水浸泡葛仙米粉，葛仙米粉与纯化水的重量比为1:50，浸泡时间24h；
步骤三：水提：在浸泡后的葛仙米中加入纯化水，葛仙米粉与纯化水的重量比为1:15，提取温度90℃，提取时间2h，降温至室温，离心去渣，得到提取液；
步骤四：酶解：将提取液加热到55℃，加入提取液体积0.05％的木瓜蛋白酶，酶解2h，加热到100℃，保持10min，以灭绝活酶，降温至室温，再过滤以去除酶解液中的固体杂质；
步骤五：脱色：将酶解液加温至70℃，搅拌加入滤液体积1％的活性炭，继续保温搅拌0.5h，静置过夜，离心除去活性炭，得无色透明的液体；
步骤六：醇沉：将步骤五得到的液体进行浓缩，浓缩至原体积的1/4，加入质量浓度95％乙醇，浓缩液与乙醇的体积比为1:4，醇沉时间4h，离心收集葛仙米多糖沉淀，得到葛仙米多糖湿品；
步骤七：冻干：将葛仙米多糖湿品进行真空冷冻干燥，温度为-24℃，时间20h，即得葛仙米多糖成品。
9.权利要求1-8任一项所述的葛仙米多糖的提取方法所制得的葛仙米多糖。
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