CN105250360A - 一种夜来香提取物，该提取物的制备方法及医药用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种夜来香提取物，该提取物的制备方法及医药用途，制备方法包括：(a)以重量计，每100份药材包含干燥的夜来香80～90份和干燥的甘草10～20份，混合粉碎；(b)用65～75％乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液；(c)对步骤(b)浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(d)正丁醇萃取物用大孔树脂富集，先用20～30％乙醇冲洗7～9个柱体积除去多糖，再用55～65％乙醇洗脱9～11个柱体积，收集55～65％乙醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥。该提取物可以用于杀灭甲1型流感病毒。

Description

一种夜来香提取物，该提取物的制备方法及医药用途

技术领域

本发明涉及中药领域，具体涉及一种夜来香提取物，该提取物的制备方法及医药用途。

背景技术

夜来香为柳叶菜科植物红萼月见草的根。秋季采收。别名月见草。

原植物红萼月见草为二年生草本。茎直立，高1米左右，基部有红色长毛。叶互生，茎下部的叶有柄，上部的叶近无柄；叶片长椭圆状披针形，长6～9厘米，宽1.5～3厘米，先端短尖，基部楔形，边缘疏有细锯齿，两面均被白色柔毛。花单生于枝端叶腋，排成疏穗状；萼管细长，先端4裂，裂片披针形，反折；花瓣4，黄色，倒卵形或倒心脏形；柱头4裂。蒴果圆筒形，先端狭，外被白色长毛。花期7～8月。多栽培于庭园中。

发明内容

本发明的目的在于提供一种夜来香提取物，该提取物的制备方法和液相分析方法，含有该提取物的药物制剂及利用该提取物制备抗甲1型流感病毒药物的用途。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：

一种夜来香提取物，该提取物由以下方法制备：

(a)以重量计，每100份药材包含干燥的夜来香80～90份和干燥的甘草10～20份，混合粉碎；(b)用65～75％乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液；(c)对步骤(b)浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(d)正丁醇萃取物用大孔树脂富集，先用20～30％乙醇冲洗7～9个柱体积除去多糖，再用55～65％乙醇洗脱9～11个柱体积，收集55～65％乙醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥。

进一步地，步骤(d)中所述大孔树脂为AB-8型大孔树脂。

进一步地，步骤(b)中所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为70％。

进一步地，步骤(d)为用正丁醇萃取物用大孔树脂富集，先用25％乙醇冲洗8个柱体积除去多糖，再用60％乙醇洗脱10个柱体积，收集60％乙醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥。

为了能够通过建立HPLC指纹图谱的方法控制不同产地、批次药材制备的夜来香提取物批间差异，所述提取物的液相分析方法为：

色谱柱：AgilentZorbaxSBC18柱(4.6mm×250mm，5μm)；

流动相：A为甲醇，B为0.1％磷酸水溶液；

梯度洗脱程序：0～15min，A25％～35％；15～25min，A35％～50％；25～32min，A50％；32～35min，A50％～25％；35～40min，A25％；

流动相流速：1.0mL·min^-1；检测波长：275nm；

柱温：30℃；进样量：10μL。

药物制剂，含有治疗有效量的所述夜来香提取物和药学上可接受的载体。

所述的夜来香提取物在制备治疗甲1型流感病毒的药物中的应用。

所述的药物制剂在制备治疗甲1型流感病毒的药物中的应用。

本发明提取物用作药物时，可以直接使用，或者以药物制剂的形式使用。

所述药物制剂含有治疗有效量的本发明夜来香提取物，其余为药物学上可接受的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。

所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将本发明的药物制剂以单位体重服用量的形式使用。本发明提取物可通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。

本发明的优点：本发明通过对夜来香药材进行提取、除杂、富集处理，能得到治疗甲1型流感病毒的提取物；本发明提供的液相分析方法可以用于建立该提取物的指纹图谱，用于控制不同产地、批次药材制备的提取物的批间差异。

附图说明

图1为夜来香提取物HPLC液相图谱。

具体实施方式

下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

实施例1：夜来香提取物制备

药材来源：夜来香和甘草购自安徽亳州中药材市场。

主要试剂：食品级乙醇购自上海凌峰化学试剂有限公司；医药级AB-8大孔树脂购自天津波鸿树脂有限公司；甲醇为HPLC级，购于TEDIA；85％磷酸为HPLC级，购于TEDIA；色谱用纯净水为哇哈哈纯净水。

将8.5kg干燥的夜来香和1.5kg干燥甘草混合粉碎，用70％乙醇热回流提取(25L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液(6L)；对浓缩液依次用石油醚(6L×3次)、乙酸乙酯(6L×3次)和水饱和的正丁醇(6L×3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物285g，正丁醇萃取物用5L蒸馏水溶解后用AB-8大孔树脂(2kg，柱体积1.5L)富集，先用25％乙醇冲洗8个柱体积(12L)，再用60％乙醇洗脱10个柱体积(15L)，收集60％洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥得夜来香提取物浸膏粉约155g。

实施例2：夜来香提取物②制备(80份夜来香，20份甘草)

制备方法：将8.0kg干燥的夜来香和2.0kg干燥甘草混合粉碎，用70％乙醇热回流提取(25L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液(6L)；对浓缩液依次用石油醚(6L×3次)、乙酸乙酯(6L×3次)和水饱和的正丁醇(6L×3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物285g，正丁醇萃取物用5L蒸馏水溶解后用AB-8大孔树脂(2kg，柱体积1.5L)富集，先用25％乙醇冲洗8个柱体积(12L)，再用60％乙醇洗脱10个柱体积(15L)，收集60％洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥得夜来香提取物浸膏粉约155g。

实施例3：夜来香提取物③制备(90份夜来香，10份甘草)

制备方法：将9.0kg干燥的夜来香和1.0kg干燥甘草混合粉碎，用70％乙醇热回流提取(25L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液(6L)；对浓缩液依次用石油醚(6L×3次)、乙酸乙酯(6L×3次)和水饱和的正丁醇(6L×3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物285g，正丁醇萃取物用5L蒸馏水溶解后用AB-8大孔树脂(2kg，柱体积1.5L)富集，先用25％乙醇冲洗8个柱体积(12L)，再用60％乙醇洗脱10个柱体积(15L)，收集60％洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥得夜来香提取物浸膏粉约155g。

实施例4：夜来香提取物④制备(75份夜来香，25份甘草)

制备方法：将7.5kg干燥的夜来香和2.5kg干燥甘草混合粉碎，用70％乙醇热回流提取(25L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液(6L)；对浓缩液依次用石油醚(6L×3次)、乙酸乙酯(6L×3次)和水饱和的正丁醇(6L×3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物285g，正丁醇萃取物用5L蒸馏水溶解后用AB-8大孔树脂(2kg，柱体积1.5L)富集，先用25％乙醇冲洗8个柱体积(12L)，再用60％乙醇洗脱10个柱体积(15L)，收集60％洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥得夜来香提取物浸膏粉约155g。

实施例5：夜来香提取物⑤制备(95份夜来香，5份甘草)

制备方法：将9.5kg干燥的夜来香和0.5kg干燥甘草混合粉碎，用70％乙醇热回流提取(25L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液(6L)；对浓缩液依次用石油醚(6L×3次)、乙酸乙酯(6L×3次)和水饱和的正丁醇(6L×3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物285g，正丁醇萃取物用5L蒸馏水溶解后用AB-8大孔树脂(2kg，柱体积1.5L)富集，先用25％乙醇冲洗8个柱体积(12L)，再用60％乙醇洗脱10个柱体积(15L)，收集60％洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥得夜来香提取物浸膏粉约155g。

实施例6：液相色谱分析

供试品溶液配制：取实施例1方法制得的提取物浸膏粉5mg至50mL棕色容量瓶中，加30mL25％甲醇水溶液超声溶解，冷却至室温后，继续加25％甲醇水溶液定容。

分析方法：

高效液相色谱仪：Agilent1100，二元泵；

色谱柱：AgilentZorbaxSBC18柱(4.6mm×250mm，5μm)；

流动相：A为甲醇，B为0.1％磷酸水溶液；

梯度洗脱程序：0～15min，A25％～35％；15～25min，A35％～50％；25～32min，A50％；32～35min，A50％～25％；35～40min，A25％；

流动相流速：1.0mL·min^-1；检测波长：275nm；

柱温：30℃；进样量：10μL。

对用10批不同批次夜来香制备的提取物进行分析，建立指纹图谱进行匹配，结果1～5号峰在10批样品色谱图中均出现。因此标定5个峰为共有指纹峰，据此建立该提取物的HPLC指纹图谱，结果见图1。

实施例7：夜来香提取物药理试验

一、材料与方法

1.1药物：夜来香提取物①～⑤分别按照实施例1～5制得。溶于极少量的二甲基亚砜中，以细胞维持液稀释成所需浓度用于体外实验；用少量聚山梨酯-80溶解后以蒸馏水释成体内实验所用药物浓度。阳性药达菲(奥司他韦尔)由中国农业大学提供，对狗肾细胞(MDCK)的最大无毒浓度为100μmol/L。

1.2细胞和病毒株：MDCK细胞，由甘肃省疾病预防控制中心流感病毒实验室提供。细胞生长液为含10％胎牛血清的DMEM培养基，维持液为含2％胎牛血清的DMEM培养基，病毒分离液为含40μg/mL胰蛋白酶的MEM培养基。甲1型流感病毒鼠肺适应株(A/PR/8/1934，IAV)，由中国疾病预防控制中心提供，经10日龄鸡胚尿囊腔接种培养传代，微量血凝试验滴定病毒效价，血凝效价测定1:256为体外实验用；1:512的病毒株为体内实验用毒株。正式实验前测定小鼠病毒半数致死量(LD50)。

1.3实验动物：昆明种小鼠，体质量18～22g，雌雄各半，由兰州大学动物实验中心提供。

1.4仪器和试剂：DMEM培养基、MTT(Sigma公司)，L-谷氨酰胺(华绿渊生物技术)、二甲基亚砜(DMSO)(Sigma公司)，胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)，胰蛋白酶(绿生源生物技术)；座式自动电热压力蒸汽灭菌器(上海申安)，离心机(AnkeTDL80-2B)，CO₂培养箱(SHEL-LAB)，倒置显微镜(奥林巴斯)，生物安全柜(上海瑞仰净化装备有限公司)，酶标仪(ThermoMulti-skanMK3)。

1.5病毒感染性滴度的测定

将生长良好的MDCK细胞加入96孔板，待细胞长成致密单层后，用未含抗生素的维持液将血凝效价为1:256甲1型流感病毒以10倍第次稀释法稀释成9种不同浓度(10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7、10^-8、10^-9)，每个稀释度设8个孔，将9种不同浓度的病毒液分别接种到长成单层MDCK细胞的96孔板，每孔50μL，置于5％CO₂恒温培养箱内，37℃吸附1h后，弃上清，以Hank′s液洗3次，加维持液每孔0.1mL，同时设细胞对照孔8孔，置37℃，5％CO₂培养箱培养，每日检查病毒生长情况，在倒置显微镜下观察细胞的形态变化并记录特征性细胞病变(CPE)的孔数，5d后记录结果。用Reed-Muench法计算病毒的半数感染量(TCID₅₀)。细胞出现病变(CPE)程度按6级标准记录：-：细胞生长正常，无病变出现；±：细胞病变少于整个单层细胞的10％；+：细胞病变少于整个单层细胞的25％；++：细胞病变少于整个单层细胞的50％；+++：细胞病变少于整个单层细胞的75％；++++：细胞病变占整个单层细胞的75％以上。下同。

1.6药物细胞毒性试验

取生长良好的MDCK细胞，将细胞加入96孔板，每孔100μL(约1×104/孔)，待细胞长成单层后，用维持液将夜来香提取物①～⑤均分别稀释为1.0、0.50、0.25、0.125、0.063、0.032、0.016、0.008g/L，将各质量浓度药物以每孔200μL加入培养板，每个质量浓度设2孔，同时设正常细胞对照组4孔，置37℃、5％CO2培养箱培养，倒置显微镜下每日检查细胞生长情况，观察细胞的形态变化，以CPE法观察记录药物对MDCK细胞的毒性结果后，进行细胞MTT比色法:每孔加入MTT染液20μL(5g/L)，置5％CO₂培养箱中，37℃培养4h，弃染色液，每孔加入DMSO150μL，振荡10min，在酶标仪490nm波长处测吸光度值，推算半数中毒浓度(TC₅₀)和最大无毒浓度(TC₀)。实验重复3次，取3次平均值作为结果。

1.7夜来香提取物体外抗病毒试验

将MDCK细胞按照2×105/mL接种于96孔板中，0.1mL/孔，培养2d形成单层细胞后进行体外抗病毒试验。分正常细胞对照组(加维持液)；病毒对照组；药物对照组为100μmol/L的达菲(奥司他韦尔)；夜来香提取物①～⑤各设4组，质量浓度分别为0.016、0.032、0.063、0.125g/L。试验以3种方式进行：①药物对IAV的直接灭活作用：病毒悬液与含药培养液在37℃、5％CO₂培养箱培养1h后感染细胞。②药物对IAV吸附、侵入细胞的阻断作用：以含药培养液预先与细胞在37℃、5％CO₂培养箱培养1h后感染IAV。③药物对IAV增殖的抑制作用：细胞先感染IAV1h，再加入含药培养液，37℃、5％CO₂恒温箱培养。采用96孔细胞培养板，每1组加4孔，待病毒对照孔病变达+++，细胞对照组正常时，进行MTT染色，在酶标仪490nm波长处测吸光度(A)值，计算细胞存活率和药物对IAV的抑制率。重复3次。

细胞存活率＝A药物组/A细胞对照组×100％

抑制率＝(A药物组-A病毒对照组)/A病毒对照组×100％

1.8对流感病毒株致小鼠肺炎的作用

将130只体质量18～22g的昆明种小鼠随机分为13组：模型对照组、正常对照组、达菲组(3mg/kg)及夜来香提取物①～⑤高、低剂量(100、50mg/kg)组，雌雄各半，每组10只。除正常对照组外，各组在乙醚轻度麻醉下感染1/3LD50甲1型流感病毒鼠肺适应株50μL，于感染后4h开始ig给药，0.2mL/次，连续5d；正常对照组给予同体积无菌蒸馏水。治疗5d后称体质量后摘眼球放血处死动物，打开胸腔摘出全肺，以生理盐水洗涤两次，用滤纸吸干表面水分，用电子天平称肺质量，计算肺指数[肺指数＝肺质量/体质量×100％]、肺指数抑制率[肺指数抑制率＝(病毒对照组平均肺指数-实验组平均肺指数)/病毒对照组平均肺指数×100％]。低温条件下，将各组肺置匀浆器中加生理盐水(1:9)，研磨制成匀浆，4℃、2500r/min离心30min后取上清，按常规方法作微量血凝试验。

1.9对体内感染流感病毒小鼠的死亡保护和延长生命的作用

将小鼠随机分为模型对照组、达菲组(3mg/kg)、夜来香提取物①～⑤高、低剂量(100、50mg/kg)组，每组10只，各组在乙醚轻度麻醉下感染25LD50甲1型流感病毒鼠肺适应株50μL，感染后4h开始ig给药，0.2mL/次，每天2次，连续5d，另设正常对照组给予同容积无菌蒸馏水。观察、记录动物发病和死亡数，共观察14d，计算死亡保护率[死亡保护率＝病毒对照组死亡数-给药组死亡数)/病毒对照组死亡数×100％]、生命延长率[生命延长率＝(给药组平均存活时间-病毒对照组平均存活时间)/病毒对照组平均存活时间×100％]。

1.10统计学分析：应用SPSS13.0统计软件，对实验数据进行多因素方差分析。

二、结果

2.1病毒感染性滴度的测定：用Reed-Muench法计算病毒的半数感染量TCID₅₀为10^-4.59/0.1mL，病毒攻击量为100TCID₅₀。

2.2夜来香提取物对MDCK细胞的毒性：夜来香提取物①～⑤在0.125g/L时，对MDCK细胞无不良影响，与正常细胞对照组无明显区别，表明夜来香提取物低于0.125g/L质量浓度对MDCK细胞无毒性作用。

2.3体外抗甲1型流感病毒试验

2.3.1药物对IAV的直接灭活作用

提取物①～③各剂量组与病毒对照组(模型组)比，各组A值略有升高(P<0.01)；与对照药物达菲比，各组A值有所下降(P<0.01)；提取物④～⑤各剂量组与模型组比无显著差异。见表1(与正常细胞对照组比较：△△P<0.01；与病毒对照组比较：*P<0.05，**P<0.01；与达菲组比较：▲P<0.05，▲▲P<0.01)。

2.3.2药物对IAV吸附、侵入细胞的阻断作用

提取物①～③各剂量组与模型组比较，各组的A值显著升高(P<0.01)；与对照药物达菲相比，A值无显著差异(P>0.05)；提取物④～⑤各剂量组与模型组比无显著差异。见表1。

2.3.3对IAV增殖的抑制作用

提取物①～③各剂量组与模型组比较，各组的A值显著升高(P<0.01)；与对照药物达菲相比，各组A值略有下降(P<0.05)；提取物④～⑤各剂量组与模型组比无显著差异。见表1。

表1夜来香提取物体外抗病毒作用(x±s，n＝8)

2.4对小鼠流感病毒性肺炎的影响

高、低剂量夜来香提取物①～③对流感病毒感染小鼠的肺指数具有抑制率；肺组织悬液病毒血凝滴度和肺指数均有所降低，与模型对照组相比有显著性差异(P<0.01)，与对照药物组达菲相比，无统计学意义(P>0.05)。夜来香提取物④～⑤高低剂量组与模型组无显著差异。结果见表2(与模型对照组比较：**P<0.01)。

表2夜来香提取物对IAV感染小鼠肺指数和血凝滴度的影响(x±s，n＝10)

组别	剂量	血凝滴度(InX)	肺指数	肺指数抑制率/％
					空白组	-	-	0.72±0.23**	-
模型组	-	2.78±0.17	1.26±0.25	-
					达菲组	3	1.52±0.91**	0.85±0.11**	26.7
提取物①低剂量组	50	1.59±0.65**	0.94±0.46**	19.0
					提取物①高剂量组	100	1.71±0.22**	0.89±0.31**	23.3
提取物②低剂量组	50	1.58±0.63**	0.92±0.42**	18.9
					提取物②高剂量组	100	1.70±0.20**	0.87±0.30**	23.2
提取物③低剂量组	50	1.57±0.64**	0.91±0.38**	18.8
					提取物③高剂量组	100	1.69±0.20**	0.86±0.32**	23.1
提取物④低剂量组	50	2.72±0.19	1.22±0.25	3.1
					提取物④高剂量组	100	2.74±0.18	1.19±0.23	2.9
提取物⑤低剂量组	50	2.68±0.21	1.20±0.21	3.0
					提取物⑤高剂量组	100	2.70±0.19	1.18±0.24	2.8

2.5对IAV感染小鼠生命的保护作用

高、低剂量夜来香提取物①～③对流感病毒感染小鼠的死亡保护率和生命延长率与模型对照组相比有显著性差异(P<0.01)，高剂量夜来香提取物组与对照药物达菲相比，无统计学意义(P>0.05)；高、低剂量夜来香提取物④～⑤对流感病毒感染小鼠的死亡保护率和生命延长率与模型对照组相比无显著性差异。结果见表3(与模型对照组比较：**P<0.01)。

表3夜来香提取物对IAV感染小鼠生命的保护作用

组别	剂量	动物/只	死亡数/只	平均存活时间/d	死亡保护率/％	生命延长率/％
							模型组	-	10	8	8.8	-	-
达菲组	3	10	2	12.6**	75.0	43.2
							提取物①低剂量组	50	10	4	11.3**	50.0	28.4
提取物①高剂量组	100	10	3	12.1**	62.5	37.5
							提取物②低剂量组	50	10	4	11.2**	50.0	28.4
提取物②高剂量组	100	10	3	12.1**	62.5	37.5
							提取物③低剂量组	50	10	4	11.2**	50.0	28.4
提取物③高剂量组	100	10	3	12.0**	62.5	37.5
							提取物④低剂量组	50	10	7	9.0	12.5	2.3
提取物④高剂量组	100	10	7	9.2	12.5	4.5
							提取物⑤低剂量组	50	10	7	9.0	12.5	2.3
提取物⑤高剂量组	100	10	7	9.2	12.5	4.5

诸多报道均表明达菲能够明显改善流感病毒所致的各项临床症状，因此它是此模型中较为理想的阳性对照药物，其优异的抗病毒作用在本实验中得以证实。本实验结果证实：夜来香提取物在体外有显著的抗IAV活性的作用；对IAV感染小鼠的保护作用表现在:有效降低小鼠肺指数、降低肺组织悬液病毒血凝效价，并延长感染小鼠平均存活时间，降低感染病毒小鼠死亡率，且呈现出一定的量-效关系，但其临床治疗流感病毒感染的实际疗效还有待于进一步研究。但是，本发明中甘草含量对夜来香提取物的上述疗效具有至关重要的影响，过高或过低均不能产生上述作用。

实施例8：片剂的制备

按实施例1方法先制得提取物，按其与赋形剂重量比为1:8加入赋形剂，制粒压片。

实施例9：口服液的制备

按实施例1方法先制得提取物，按常规口服液制法制成口服液。

实施例10：胶囊剂或颗粒剂的制备

按实施例1方法先制得提取物，按其与赋形剂重量比为1:9的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂。

实施例11：注射液的制备

按实施例1方法制得提取物，加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。

实施例12：无菌粉针的制备

按实施例1方法先制得提取物，溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安瓿，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。

上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。

Claims (8)

1.一种夜来香提取物，其特征在于所述提取物由以下方法制备：（a）以重量计，每100份药材包含干燥的夜来香80~90份和干燥的甘草10~20份，混合粉碎；（b）用65~75%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液；（c）对步骤（b）浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（d）正丁醇萃取物用大孔树脂富集，先用20~30%乙醇冲洗7~9个柱体积除去多糖，再用55~65%乙醇洗脱9~11个柱体积，收集55~65%乙醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥。

2.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：步骤（d）中所述大孔树脂为AB-8型大孔树脂。

3.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：步骤（b）中所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为70%。

4.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：步骤（d）为用正丁醇萃取物用大孔树脂富集，先用25%乙醇冲洗8个柱体积除去多糖，再用60%乙醇洗脱10个柱体积，收集60%乙醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥。

5.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：所述提取物的液相分析方法为：

色谱柱：AgilentZorbaxSBC18柱（4.6mm×250mm，5μm）；

流动相：A为甲醇，B为0.1%磷酸水溶液；

梯度洗脱程序：0~15min，A25%~35%；15~25min，A35%~50%；25~32min，A50%；32~35min，A50%~25%；35~40min，A25%；

流动相流速：1.0mL·min^-1；

检测波长：275nm；

柱温：30℃；

进样量：10μL。

6.药物制剂，其特征在于：含有治疗有效量的权利要求1所述的提取物和药学上可接受的载体。

7.权利要求1所述的提取物在制备治疗甲1型流感病毒的药物中的应用。

8.权利要求6所述的药物制剂在制备治疗甲1型流感病毒的药物中的应用。