CN105219877A - Ccdc59的激动剂在制备骨性关节炎药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及CCDC59的激动剂在制备骨性关节炎药物中的应用。发明人基于高通量测序结果筛选出CCDC59基于,分子生物学方法验证,证实了CCDC59在骨性关节炎组织中低表达,其激动剂可用于制备治疗骨性关节炎药物。本发明提供了一种新的骨性关节炎的治疗靶点,具有重要的临床应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域,具体涉及CCDC59的激动剂在制备骨性关节炎药物中的应用。
背景技术
骨性关节炎(osteoarthritis,OA)是中老年人最常见的疾病之一,由于人群预期寿命的延长,骨性关节炎的发病率也明显增高,尤其是肥胖的老年人群,60岁以上人群中,50%以上在X线上有骨性关节炎表现。其常见病理改变为软骨下骨硬化、关节周围骨赘形成、慢性滑膜炎,其引起的疼痛、功能障碍严重影响患者的生活质量。
现有的骨性关节炎治疗方法包括运动、药物、休息和关节保健、手术、疼痛缓解技术、替代治疗和体重控制。治疗骨性关节炎中常用的药物包括非甾族抗炎药如阿司匹林、布洛芬等;直接用于皮肤的局部疼痛缓解乳膏、橡胶和喷雾剂等。可进行手术以使骨表面重建、骨复位和置换关节。尽管各种药物疗法已被用于治疗疾病,但是它们对长期控制和预防是无效的。近年来研究发现在骨性关节炎的发生、发展的过程中多种细胞因子参与其病理过程并起到非常重要的作用。参与骨性关节炎的细胞因子主要分为分解代谢相关细胞因子、合成代谢相关细胞因子、炎性因子及一氧化氮、类花生酸类物质等其他细胞因子。这些靶标的发现为骨性关节炎的治疗提供了新思路。
发明人对7例骨性关节炎滑膜组织及4例对照样本进行高通量测序,结合生物信息学方法进行基因筛选,挑选出候选基因CCDC59,现有研究中并没有CCDC59和骨性关节炎相关的报道,进一步,发明人进行了分子生物学方法验证,证实了CCDC59在骨性关节炎组织中低表达,其激动剂可用于制备治疗骨性关节炎药物。本发明提供了一种新的骨性关节炎的治疗靶点,具有重要的临床应用价值。
发明内容
本发明的目的在于提供一种骨性关节炎诊断制剂,所述骨性关节炎诊断制剂检测CCDC59基因和/或基因的表达产物。进一步的,所述的CCDC59基因和/或基因的表达产物在骨性关节炎组织中低表达。
进一步,所述骨性关节炎诊断制剂采用荧光定量PCR试剂盒、基因芯片、免疫方法检测骨性关节炎组织中CCDC59基因的表达。优选的,所述的荧光定量PCR试剂盒中含有一对特异性扩增CCDC59基因的引物;所述的基因芯片中包括与CCDC59基因的核酸序列杂交的探针。更优选的,荧光定量PCR试剂盒内含有特异性检测CCDC59基因的上游引物和下游引物,上游引物序列为SEQIDNO.1,下游引物序列为SEQIDNO.2。
进一步,所述的骨性关节炎的诊断制剂采用免疫方法检测骨性关节炎滑膜组织中CCDC59基因的表达产物。优选的,所述免疫方法为ELISA检测和/或胶体金检测。进一步,所述检测CCDC59蛋白的ELISA法为使用ELISA检测试剂盒。所述试剂盒中的抗体可采用市售的CCDC59单克隆抗体或多克隆抗体。进一步,所述的试剂盒包括:包被CCDC59抗体的固相载体,酶标抗体,酶的底物,蛋白标准品,阴性对照品,稀释液,洗涤液,酶反应终止液等。
进一步,所述检测CCDC59蛋白的胶体金法为使用检测试剂盒,所述的抗体可采用市售的CCDC59单克隆抗体或多克隆抗体。进一步,所述的胶体金检测试剂盒采用胶体金免疫层析技术或胶体金渗滤法。进一步,所述的胶体金检测试剂盒硝酸纤维素膜上的检测区(T)喷点有抗CCDC59抗体、质控区(C)喷点有免疫球蛋白IgG。
本发明的目的在于提供上述骨性关节炎诊断制剂在制备骨性关节炎诊断工具中的应用。
本发明的目的在于提供一种治疗骨性关节炎的制剂,所述制剂中含有促进CCDC59基因的转录或表达的试剂或化合物。进一步的,所述的CCDC59基因和/或基因的表达产物在骨性关节炎组织中低表达。
本领域人员熟知促进基因及其表达产物的表达通常可以采用下述方法中的一种和/或几种:激活分子标志物的启动子、激活分子标志物表达的蛋白或因子、导入促进分子标志物转录或表达的载体。
优选的,所述治疗骨性关节炎的制剂中含有促进CCDC59基因的转录或表达的载体和/或激活CCDC59基因的启动子和/或激活CCDC59基因表达的蛋白或因子。
本发明的目的在于提供上述治疗骨性关节炎的制剂在制备骨性关节炎治疗药物或试剂中的应用。
为实现上述目的,本发明首先通过高通量测序结合生物信息学方法筛选到候选基因CCDC59基因,进而通过分子生物学方法验证了CCDC59基因与骨性关节炎的关系:CCDC59基因与骨性关节炎具有很好的相关性,可用于制备骨性关节炎辅助诊断制剂,具有重要的临床应用价值。
荧光定量PCR法是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。荧光定量PCR的出现,极大地简化了定量检测的过程,而且真正实现了绝对定量。多种检测系统的出现,使实验的选择性更强。自动化操作提高了工作效率,反应快速、重复性好、灵敏度高、特异性强、结果清晰。
基因芯片又称为DNA微阵列(DNAmicroarray),可分为三种主要类型:1)固定在聚合物基片(尼龙膜,硝酸纤维膜等)表面上的核酸探针或cDNA片段,通常用同位素标记的靶基因与其杂交,通过放射显影技术进行检测。2)用点样法固定在玻璃板上的DNA探针阵列,通过与荧光标记的靶基因杂交进行检测。3)在玻璃等硬质表面上直接合成的寡核苷酸探针阵列,与荧光标记的靶基因杂交进行检测。基因芯片作为一种先进的、大规模、高通量检测技术,应用于疾病的诊断,其优点有以下几个方面:一是高度的灵敏性和准确性;二是快速简便;三是可同时检测多种疾病。
酶联免疫吸附实验(ELISA)即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等,具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。ELISA检测试剂盒根据检测目的和操作步骤可分为间接法、双抗夹心法、竞争法、双位点一步法、捕获法测IgM抗体、应用亲和素和生物素的ELISA。ELISA检测试剂盒中生色底物可选择辣根过氧化物酶(HRP)或者碱性磷酸酶(AP)。
常用的免疫胶体金检测技术:(1)免疫胶体金光镜染色法细胞悬液涂片或组织切片,可用胶体金标记的抗体进行染色,也可在胶体金标记的基础上,以银显影液增强标记,使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面,可明显增强胶体金标记的敏感性。(2)免疫胶体金电镜染色法可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织超薄切片结合,然后进行负染。可用于病毒形态的观察和病毒检测。(3)斑点免疫金渗滤法应用微孔滤膜作载体,先将抗原或抗体点于膜上,封闭后加待检样本,洗涤后用胶体金标记的抗体检测相应的抗原或抗体。(4)胶体金免疫层析法将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上,胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上,当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后,通过毛细作用向前移动,溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应,当移动至固定的抗原或抗体的区域时,待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留,聚集在检测带上,可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条,使用十分方便。
本发明的目的在于提供一种检测骨性关节炎的基因检测试剂盒,所述试剂盒检测基因CCDC59,采用特异的上游引物和下游引物,上游引物序列为SEQIDNO.1,下游引物序列为SEQIDNO.2。
进一步,该PCR试剂盒适合于目前存在市场上的所有类型荧光定量基因扩增仪,灵敏度高,定量快速准确、稳定性好,具有良好的应用前景。
进一步,上述荧光定量PCR试剂盒组分包括:特异性引物、内参引物、荧光定量PCR反应液。所述内参为GAPDH。
所述的试剂盒还包含RNA抽提试剂。
本发明目的是提供了一种骨性关节炎蛋白检测试剂盒,所述的检测试剂盒检测CCDC59蛋白。进一步的,所述的试剂盒还包括其他检测试剂。
本发明目的是提供了一种检测骨性关节炎的基因芯片,所述的基因芯片包括与CCDC59基因的核酸序列杂交的探针。
附图说明
图1Westernblot测定滑膜组织中CCDC59蛋白的表达情况
具体实施方式
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明,仅用于解释本发明,而不能理解为对本发明的限制。本领域的普通技术人员可以理解:在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本发明的范围由权利要求及其等同物限定。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件或按照厂商所建议的条件实施检测。
实施例1病例的收集
取2012年10月到2014年12月期间在医院骨科就诊骨性关节炎患者,病例组共收集7例,对照来源于同时期骨科住院的其他疾病患者,收集共4例。获取所有研究对象的滑膜组织样本,编号后置-80℃低温冰箱保存。病例组均符合膝关节OA诊断标准,进行膝关节人工关节置换术患者;对照组为半月板损伤及交叉韧带损伤进行关节镜手术治疗的患者。
实施例2高通量测序及分析
对组织进行RNA提取,RNA提取后琼脂糖凝胶电泳,从电泳结果可以初步判定提取的RNA样品质量合格与否,是否可以用于进一步的转录组分析。进而通过NanoDrop1000分光光度计检测RNA样品的提取情况,RNA-seq测序的样品要求:OD260/OD280为1.8-2.2。
测序平台为Illumina公司的HiSeq2500高通量测序平台,进行高通量转录组深度测序,测序后我们运用Fast-QC(http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/)软件对测序数据的质量进行整体评估,包括碱基的质量值分布,质量值的位置分布,GC含量,PCRduplication含量,kmer的frequency等。在差异基因表达分析时,根据得到的FPKM值,采用国际公认算法EBSeq进行差异筛选。其中,筛选时,LOG2FC>1或<-1,FDR<0.05。为了更好的理解差异表达基因的功能,我们对差异表达基因进行了GeneOnlogy和信号通路分析,并对差异表达基因进行功能注释和蛋白质互相作用网络分析,鉴于以上数据分析的结果,结合文献我们筛选了差异表达基因CCDC59。
实施例3骨性关节炎患者及对照滑膜组织CCDC59基因表达情况
一、材料和方法
1、材料
选取39例骨性关节炎患者滑膜组织及8例对照滑膜组织,对其进行分组及编号。病例组均符合膝关节OA诊断标准,进行膝关节人工关节置换术患者;对照组为半月板损伤及交叉韧带损伤进行关节镜手术治疗的患者。
2、方法
2.1骨性关节炎患者及对照的滑膜组织总RNA的提取
采用Reagent(invitrogen,货号15596-018)进行样本RNA提取,实验操作按产品说明书进行,具体操作如下:
收集样本后冻存于液氮,取出后把组织放入已预冷的研钵中进行研磨,待组织样本成粉末状后:
①加入Trizol,室温保存5分钟;
②加氯仿0.2ml,用力振荡离心管,充分混匀,室温下放置5分钟-10分钟;
③12000rpm高速离心15分钟后吸取上层水相(吸70%)到另一新离心管管中,注意不要吸到两层水相之间的蛋白物质。移入新管,加入等体积的-20℃预冷异丙醇,充分颠倒混匀,置于冰上10分钟;
④12000rpm高速离15分钟后小心弃掉上清液,按Iml/mlTrizol的比例加入75%DEPC乙醇洗漆沉淀(4℃保存),洗漆沉淀物,振荡混合,4℃下12000rpm高速离心5分钟;
⑤弃去乙醇液体,室温下放置5分钟以充分晾干沉淀,加入DEPC处理过的水溶解沉淀;
⑥用Nanodrop2000紫外分光光度计测量RNA纯度及浓度,冻存于-70℃。RNA质量判定标准:RNA样本的OD260/OD280值为1.7-2.2之间;总RNA电泳图谱有清晰的28S、18S条带;70℃水浴保温1小时后的电泳图谱与水浴保温前的图谱无明显差异。
2.2逆转录合成cDNA
采用IIIReverseTranscriptase(invitrogen,货号18080-044)进行cDNA反转录,实验操作按产品说明书进行,具体操作如下:
使用逆转录试剂盒,用逆转录缓冲液对lμg总RNA进行逆反录合成cDNA。采用25μl反应体系,每个样品取1μg总RNA作为模板RNA。获得的cDNA保存放-20℃冰箱备用。
2.3Real-TimePCR
2.3.1仪器及分析方法
用ABI7500型荧光定量PCR仪,采用2-ΔΔCT法进行数据的相对定量分析。
2.3.2引物设计
采用在线引物设计软件,基因序列参照NCBI:NM_014167.4(CCDC59),内参选GAPDH,引物设计后由invitrogen公司合成。具体引物序列如下:
表1引物序列
操作过程如下:
(一)反应体系:用PowerGreenPCRMasterMix(invitrogen,货号4367659)进行扩增,实验操作按产品说明书进行。扩增程序为:95°5min,(95℃15sec,60℃45sec)×40个循环。
表2RealTime反应体系
组分 | 加入量 |
2×mix | 10μl |
上游引物(10uM) | 0.5μl |
下游引物(10uM) | 0.5μl |
模板 | 2μl |
加入灭菌蒸馏水 | 至25μl |
(二)引物筛选
将各样本cDNA混合后,以此为模板进行5倍梯度稀释,稀释后样品各取2μl作模板,分别用目的基因引物和内参基因引物进行扩增,同时在60-95℃进行融解曲线分析,根据扩增效率高和溶解曲线单峰原则进行引物筛选。
(三)样品RealTimePCR检测
将各样品cDNA10倍稀释后取2μl作模板,分别用目的基因引物和内参基因引物进行扩增。同时在60-95℃进行溶解曲线分析。
二、实验结果
实时定量PCR扩增曲线拐点清楚,扩增曲线整体平行性好,表明各反应管的扩增效率相近,极限平而无上扬现在,曲线指数期斜率较大,说明扩增效率较高;样本扩增产物溶解曲线都是单峰,说明扩增产物只有一条,为特异性扩增;根据qRT-PCR的相对定量公式:2-ΔCt×100%,比较CCDC59基因在骨性关节炎组织和对照组织中的表达水平。结果显示:qRT-PCR扩增结果稳定,其中CCDC59基因在骨性关节炎组织中的表达水平仅为对照组织的0.3倍,以上结果验证了高通量转录组表达数据的整合分析CCDC59基因在骨性关节炎患者中低表达的结果。
实施例4木瓜蛋白酶诱发的骨性关节炎模型
OA动物模型的建立有多种方法,如Hulth模型、前交叉韧带和半月板切除模型、关节内注射木瓜蛋白酶、卵巢切除、高脂肪食物喂养自发形成、关节制动等。相关研究表明,将木瓜蛋白酶注入兔、豚鼠的髓关节或膝关节腔内可引发迅速进展的骨性关节炎。木瓜蛋白酶可分解软骨基质中的蛋白多糖,促使其从软骨中丢失,而骨性关节炎患者软骨早期发生的最显著变化就是水分增加及蛋白多糖减少,故木瓜蛋白酶诱发的OA模型与人体骨性关节炎类似,是研究OA的较佳造模方法。
实验动物:30只健康雄性新西兰大白兔,6月龄,体重2kg左右,实验兔进入实验室后,单笼饲养一周以适应实验室环境,实验室温度控制在16-26℃之间,相对湿度40%-70%,换气次数为8-10次/小时,昼夜明暗交替时间为12/12,适应性喂养一周后,观察无明显全身疾患及其他异常后开始试验,自由摄食实验兔专用饲料和摄水。
实验分组:将实验动物按照随机分配表分为6组,每组均为5只,分别标明实验组为Al、A2、A3,分别标明对照组为C1、C2、C3。
造模:分组后分别于第1、4、7日实验新西兰大白兔用固定架固定,使用3%戊巴比妥钠1ml/kg体重对兔子行耳缘静脉注射进行麻醉,麻醉后于兔膝关节周围进行剃毛,并使用脱毛膏脱去剩余兔毛,完整暴露兔膝关节,碘伏消毒3遍,轻度弯曲兔膝关节于骸韧带附着点外上方进针,针头从上前方向下倾斜刺入,直至针头阻力变小为止,然后针头稍后退,以垂直方向推入,当出现落空感后,表明已经进入关节腔内,即可开始注射。C1、C2、C3组注入1.6%木瓜蛋白酶溶液0.5mI,Al、A2、A3组注入等量的生理盐水溶液。注射完成后被动活动兔膝关节数次,使得液体在关节中尽可能均匀分布。
取样及处理:分别于造模后第2周末(A1),第4周末(A2),第6周末(A3)再次使用兔固定架固定,用气栓法处死兔子,处死后将兔置于动物手术台上,消毒兔膝关节,铺洞巾,逐层切开兔膝关节,观察标本滑膜,软骨的大体形态,切取股骨骸间的滑膜组织,使用滤纸拭去取出标本处的血液,置于PBS溶液中,并予1分钟之内存入液氮瓶中,待整组滑膜都切取结束后,将所有标本置入-80℃冰箱中保存。
实施例5WB方法检测骨性关节炎滑膜中CCDC59的表达
一、蛋白质样品制备及定量
1.RIPA裂解液(Beyotime)进行蛋白质样品制备,操作步骤如下:
将滑膜组织自冰箱取出,用滤纸擦拭组织上的PBS溶液,称取重量,并将滑膜组织置于机械组织匀浆器中,1:10组织比裂解液的重量体积比例加入相应体积的裂解液进行匀浆,10000-14000g离心3-5分钟,取上清液,按1:1加入样品缓冲液强力混匀后置于100度的水浴箱水浴加热3-5分钟,10000g离心10分钟,取上清液,将其转入另一洁净的试管中。
2.利用BCA蛋白浓度测定试剂盒进行总蛋白定量
采用康为世纪微量BCA蛋白定量试剂盒(货号:CW2011),具体步骤见其说明书。
二、SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
1.蛋白质样品变性:
a)根据BCA蛋白质浓度测定结果,每个凝胶加样孔中加入相同质量的总蛋白提取物。按照每1微升蛋白样品加入0.25微升蛋白上样缓冲液的比例,混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液(5×)。
b)100℃或沸水浴加热3-5分钟,以充分变性蛋白。
c)冷却到室温后,直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。
2.胶板制备:
采用Bio-Rad公司的微型垂直板电泳装置制备0.75mm厚的凝胶,照说明书安装好玻璃板后,先在小烧杯中配制5ml10%的分离胶,配方如下:
表3分离胶配方
组分 | 用量 |
30%丙烯酰胺溶液 | 1.7ml |
Tris-HCl(1.5M,pH8.8) | 1.3ml |
10%SDS | 0.05ml |
10%AP | 0.05ml |
TEMED | 0.002ml |
灭菌ddH2O | 补充至5ml |
混匀后立即灌胶,然后加lml蒸馏水覆盖,室温下放置约30min待胶聚合后,用蒸馏水洗2-3次,再用滤纸吸干。然后制备2m15%的浓缩胶,配方如下:
表4浓缩胶配方
组分 | 用量 |
30%丙烯酰胺溶液 | 0.33ml |
Tris-HCl(1.0M,pH6.8) | 0.25ml |
10%SDS | 0.02ml |
10%AP | 0.02ml |
TEMED | 0.002ml |
灭菌ddH2O | 补充至2ml |
混匀后立即灌胶,插入样品梳,避免产生气泡,待胶凝固后,取出样品梳,后用蒸馏水和1×蛋白电泳缓冲液先后冲洗样品孔。
三、上样及电泳
将凝胶板装在电泳装置上,内槽中加满l×蛋白电泳缓冲液,外槽中l×蛋白电泳缓冲液应超过铂丝,按顺序上样。在末端泳道中加入蛋白质质量标准蛋白梯度。电泳时蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。
四、蛋白质印迹
1.按照上述方法先进行SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白。
2.预先用转印缓冲液浸泡NC膜、滤纸、海棉垫。SDS-PAGE结束后取出凝胶,去除浓缩胶,在Tris/甘氨酸缓冲液中漂洗数秒,然后置于转印缓冲液中浸泡15-30min。打开电转印夹,每侧垫上一块专用的用转印缓冲液浸泡透的海棉垫,再各放一块转印液浸透的滤纸,滤纸与海面垫大小相同或与NC膜,凝胶大小相同均可,将凝胶平放在阴极侧滤纸上,最后将NC膜平放在凝胶上,去除气泡,夹好电转印夹。在电泳槽加满电转印液,插入电转印夹,将电泳槽放入冰箱内(电转印液之前要放入冰箱内预冷),连接好电极,接通电流,转印夹的NC膜应对电泳槽的正极。
3.封闭:用1×TBS漂洗一次。加入含5%的无脂奶粉TBS封闭缓冲液,置于振荡培养箱中进行封闭;
4.一抗杂交:弃封闭液,加入用一抗稀释液稀释的一抗(Anti-CCDC59antibody-C-terminal(ab139578))杂交溶液,置于4℃杂交过夜,第二天在振荡培养箱中进行杂交;
5.回收一抗杂交液,用TBST洗膜3次;
6.弃TBST,加入用封闭缓冲液稀释的二抗(GoatAnti-RabbitIgG,HRPConjugated(CW0103))杂交溶液,置于振荡培养箱中进行杂交;
7.弃二抗溶液,用TBST洗膜3次;
8.ECL化学发光及图像采集和分析:按照高灵敏度化学发光检测试剂盒(康为世纪货号CW0049B),具体步骤参照说明书。
9.以β-Actin作为内参进行数据标准化,以对照组滑膜组织中CCDC59作为参照样本,计算实验组中CCDC59蛋白的相对表达水平。
五、实验结果
分别在造模后第2周处死A1组和C1组、第4周处死A2组和C2组、第6周处死A3组和C3组取得的样品检测结果显示,实验组A1、A2、A3组与对照组C1、C2和C3组相比,CCDC59蛋白表达明显降低(P<0.01),对照组C1、C2和C3组内CCDC59蛋白表达无显著差异,但实验组A1、A2、A3组内CCDC59蛋白表达差异显著,其中A1>A2>A3(P<0.01)。具体见图1所示。
本发明采用高通量测序筛选出骨性关节炎相关基因CCDC59,结合分子生物学实验证实了CCDC59是骨性关节炎诊治标志物。
Claims (10)
1.一种骨性关节炎诊断制剂,其特征在于,所述骨性关节炎诊断制剂检测CCDC59基因和/或CCDC59基因的表达产物。
2.根据权利要求1所述的骨性关节炎诊断制剂,其特征在于,所述骨性关节炎诊断制剂采用荧光定量PCR试剂盒、基因芯片、免疫方法检测骨性关节炎组织中CCDC59基因的表达。
3.根据权利要求2所述的骨性关节炎诊断制剂,其特征在于,所述的荧光定量PCR试剂盒中含有一对特异性扩增CCDC59基因的引物;所述的基因芯片中包括与CCDC59基因的核酸序列杂交的探针。
4.根据权利要求2所述的骨性关节炎诊断制剂,其特征在于,荧光定量PCR试剂盒内含有特异性检测CCDC59基因的上游引物和下游引物,上游引物序列为SEQIDNO.1,下游引物序列为SEQIDNO.2。
5.根据权利要求1所述的骨性关节炎诊断制剂,其特征在于,所述的骨性关节炎的诊断制剂采用免疫方法检测骨性关节炎滑膜组织中CCDC59基因的表达产物。
6.根据权利要求5所述的骨性关节炎诊断制剂,其特征在于,所述免疫方法为ELISA检测和/或胶体金检测。
7.一种治疗骨性关节炎的制剂,其特征在于,所述制剂中含有促进CCDC59基因的转录或表达的试剂或化合物。
8.根据权利要求7所述的制剂,其特征在于,所述治疗骨性关节炎的制剂中含有促进CCDC59基因的转录或表达的载体和/或激活CCDC59基因的启动子和/或激活CCDC59基因表达的蛋白或因子。
9.权利要求1-6任意一项所述的骨性关节炎诊断制剂在制备骨性关节炎诊断工具中的应用。
10.权利要求7-8任意一项所述的制剂在制备骨性关节炎治疗药物或试剂中的应用。
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