CN105219742A - 一种展示重组猫致敏原rFel d 1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒、其表达载体及其制备与应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒、其表达载体及其制备与应用。构成所述病毒样颗粒的蛋白质亚基为乙肝病毒核心抗原与氨基酸序列为SEQIDNO:1的多肽的融合蛋白，其中，所述融合蛋白的氨基酸序列为所述SEQIDNO:1的多肽序列插入乙肝病毒核心抗原第78-81位氨基酸之间，并替换掉所述乙肝病毒核心抗原第79-80位的氨基酸序列所得；本发明提供的HBcAg-rFeld1融合蛋白可显著提高rFeld1的免疫原性，进而提高体外重组表达的rFeld1在体外诊断猫过敏症应用中的检测灵敏度。

Description

一种展示重组猫致敏原rFel d 1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒、其表达载体及其制备与应用

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒、其表达载体及其制备与应用。

背景技术

研究已经证实，Feld1是猫体内最主要的变应原，是诱发猫过敏症的罪魁祸首，用Feld1代替猫毛皮提取物对猫过敏症进行诊断被学者们所认可。因此，Feld1适合作为猫过敏反应的标志物。但是，现有研究获得的体外表达重组的rFeld1在体外诊断猫过敏症的灵敏度不高。

因此，有必要提供一种能够提高体外诊断猫过敏症灵敏度的方案。

乙肝病毒核心抗原(HepatitisBcore，HBc)是乙肝病毒的重要结构蛋白，在细菌、酵母菌及哺乳动物细胞内均能高效表达、自动装配成球形颗粒，并可插入外源短肽，同时保持外源肽或表位正确构象，有强免疫原性。目前还未有报道将重组猫致敏原rFeld1蛋白展示到乙肝病毒核心颗粒表面，并将所得融合蛋白免疫猫来提高猫体内Feld1特异性IgG水平的成功案例。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒、其表达载体及其制备与应用。

第一方面，本发明提供了一种展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒，构成该颗粒的蛋白质亚基为乙肝病毒核心抗原与氨基酸序列为SEQIDNO:1的多肽的融合蛋白，其中，所述融合蛋白的氨基酸序列为所述SEQIDNO:1的多肽序列插入乙肝病毒核心抗原第78-81位氨基酸之间，并替换掉所述乙肝病毒核心抗原第79-80位的氨基酸序列所得。

如本发明所述的，是将氨基酸序列为SEQIDNO:1的多肽替换到掉乙肝病毒核心抗原原始序列第79-80位氨基酸之间的序列。可以理解的是，本发明技术人员将目标氨基酸残基插入乙肝病毒核心抗原原始序列的方式即可以是直接增加目标氨基酸残基，也可以将乙肝病毒核心抗原上的部分氨基酸残基用目标氨基酸残基替换。

在本发明一实施方式中，所述SEQIDNO:1的的多肽序列的编码基因为SEQIDNO:2所示核苷酸序列。

如本发明所述的，所述乙肝病毒核心抗原为乙肝病毒核心抗原全长或其片段，包括主要免疫显性区域和次要免疫显性区域，至少包括乙肝病毒核心抗原全长的第1-149位氨基酸残基以形成病毒样颗粒。乙肝病毒核心抗原全长183个氨基酸，其序列如SEQIDN0:3所示，研究表明，为了能形成病毒样颗粒，至少应当保留乙肝病毒核心抗原的前149位氨基酸残基，第149位之后可保留原有的全部或部分残基，相比全长乙肝病毒核心抗原，省略149位以后氨基酸残基并不影响其自我装配。如本发明实施例具体列举的，至少保留了乙肝病毒核心抗原全长SEQIDNO:3的第1-149位氨基酸残基就能产生病毒样颗粒。

在本发明一实施方式中，所述乙肝病毒核心抗原全长SEQIDNO:3的第1-149位氨基酸残基的编码基因为SEQIDNO:4所示核苷酸序列。

在本发明一实施方式中，可在所述SEQIDNO:1的多肽一侧或两侧增设柔性氨基酸短肽。如实施例具体列举的，在所述SEQIDNO:1的多肽的两侧均连接了序列为:GGGGSGGGG(SEQIDN0:5)的柔性氨基酸短肽。

在本发明一实施方式中，所述GGGGSGGGG柔性氨基酸短肽的编码基因为SEQIDNO:6所示核苷酸序列。

可以理解的是，为了便于实验室纯化，所述融合蛋白还可连接有用于纯化的蛋白质标签，如c-myc,flag,HA,GST或GFP标签，又如实施例具体列举的，His标签，所述His标签连接在所述融合蛋白的C端。

第二方面，本发明提供了一种表达产生如第一方面所述的展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒的表达载体，其中，所述表达载体的多克隆位点插入有编码如第一方面所述融合蛋白的基因。

如本发明所述的，所述表达载体可以选自但不限于原核表达载体如大肠杆菌或芽孢杆菌的表达载体，真核表达载体如酵母菌表达载体，哺乳动物细胞病毒如腺病毒、植物细胞病毒、动物细胞表达载体、植物细胞表达载体、噬菌体、逆转录病毒或其他表达载体。总之，只要能在宿主体内复制和稳定，任何质粒和载体都可以用。具体的，如大肠杆菌表达载体pET28a(+)。

第三方面，本发明提供了一种如第一方面所述的展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒的制备方法，为将如第二方面所述的表达载体导入合适的宿主，在适合表达所述展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒的条件下培养所述宿主，再从培养物中分离出所述免疫增强型病毒样颗粒。

第四方面，本发明提供了一种如第一方面所述的展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒或如第二方面所述的表达载体在制备免疫治疗、免疫预防或免疫诊断用药物或试剂中的用途。

第五方面，本发明提供了一种增强重组猫致敏原rFeld1蛋白免疫原性的疫苗，所述疫苗的主要有效成分为如第一方面所述的展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒。

在本发明一实施方式中，所述疫苗中还可包括药学上可接受的辅料。

第六方面，本发明提供了如第五方面所述疫苗在制备减少或抑制猫体内Feld1变应原产生的药物中的用途。

第七方面，本发明提供了一种刺激猫的免疫系统对于自身Feld1抗原产生免疫应答的方法，为经合适的方式将如第五方面所述疫苗免疫猫，从而得到抗自身Feld1抗原的抗血清或抗体。

在本发明一实施方式中，所述抗自身Feld1抗原的抗血清中包括IgG抗体。

在本发明一实施方式中，所述将如第五方面所述疫苗免疫猫的方式为肌肉注射或皮下注射或腹腔注射。

本发明提供的一种展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒、其表达载体及其制备与应用具有如下有益效果：本发明成功表达并纯化出了乙肝病毒核心抗原(HBcAg)与rFeld1融合表达的HBcAg-rFeld1融合蛋白，所述HBcAg-rFeld1融合蛋白呈现出病毒颗粒样结构。

本发明提供的HBcAg-rFeld1融合蛋白可显著提高rFeld1的免疫原性，进而提高体外重组表达的rFeld1在体外诊断猫过敏症应用中的检测灵敏度。

本发明参考文献如下：

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附图说明

图1为本发明实施例提供的乙肝病毒核心抗原(HBcAg)与rFeld1融合表达设计示意图；

图2为本发明实施例提供的大肠杆菌原核表达、纯化与透射电镜(TEM)检测HBcAg-rFeld1蛋白的结果；

图3为本发明实施例制得的HBcAg-rFeld1融合蛋白免疫纯种虎皮猫后所得Feld1特异性IgG水平的检测结果。

具体实施方式

下述实施例中所用的方法如无特别说明均为常规方法，具体步骤可参见：《MolecularCloning:ALaboratoryManual》(Sambrook,J.,Russell,DavidW.,MolecularCloning:ALaboratoryManual,3^rdedition,2001,NY,ColdSpringHarbor)。

本发明实施例所使用的质粒载体、所使用的菌株均为市售商品，所使用的试剂均为市售商品；所用引物及DNA序列均由上海Invitrogen公司合成。

本发明实施例涉及乙肝病毒核心抗原与猫致敏原Feld1蛋白融合表达，将重组猫致敏原rFeld1蛋白展示在乙肝病毒核心颗粒表面，以及将该融合蛋白免疫猫各步骤，免疫结果显示：本发明提供的蛋白融合显著地提高了猫体内Feld1特异性IgG水平。

具体地，如图1所示，图1为本发明实施例提供的乙肝病毒核心抗原(HBcAg)与rFeld1融合表达设计示意图。本发明实施例首先将编码猫致敏原Feld1的基因Chain1和Chain2拼接起来，命名为Feld1(1+2)，简称为rFeld1。然后利用人工合成DNA的方法，合成了乙肝病毒核心蛋白必要的氨基酸的编码DNA序列和重组猫致敏原rFeld1蛋白的DNA序列。在合成过程中，利用乙肝病毒核心蛋白1-149位氨基酸的编码DNA序列为骨架，rFeld1蛋白的DNA序列则插入到乙肝病毒核心蛋白的第79-80位氨基酸的部位，取代了该两个氨基酸的编码核苷酸序列，而且rFeld1蛋白的DNA序列的两端分别设计了两段柔性氨基酸链。

然后，利用大肠杆菌表达并纯化出了乙肝病毒核心抗原(HBcAg)与rFeld1融合表达的HBcAg-rFeld1蛋白(如图2A所示)，利用透射电镜检测，最终表达的融合蛋白HBcAg-rFeld1呈现出病毒颗粒样结构(如图2B所示)。利用纯化的HBcAg-rFeld1蛋白对纯种虎皮猫进行免疫，诱导猫产生较高水平的Feld1-特异性IgG(如图3所示)，这表明了乙肝病毒核心抗原(HBcAg)与rFeld1融合表达后，显著提高了rFeld1的免疫原性，提高了体外表达重组的rFeld1在体外诊断猫过敏症的灵敏度。

实施例1

本发明实施例提供了一种展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒的构建方法，包括以下步骤：

一、表达产生展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒pET28a(+)-HBcAg-rFeld1重组表达载体的构建

(1)rFeld1融合蛋白基因的克隆

按SEQIDN0:7的序列全合成基因。

具体的，所述SEQIDN0:7的序列为：

ATGGACATTGACCCGTATAAAGAATTTGGAGCTTCTGTGGAGTTACTCTCTTTTTTGCCTTCTGACTTCTTTCCTTCTATTCGAGATCTCCTCGACACCGCCTCTGCTCTGTATCGGGAGGCCTTAGAGTCTCCGGAACATTGTTCACCTCACCATACAGCACTCAGGCAAGCTATTCTGTGTTGGGGTGAGTTGATGAATCTGGCCACCTGGGTGGGAAGTAATCTCGAGGACGGTGGTGGTGGTTCTGGTG GTGGTGGTGAAATCTGCCCGGCTGTTAAACGTGACGTTGACCTGTTCCTGACCGGTACCCCGGACGAATACGTTGAACAGGTTGCTCAGTACAAAGCTCTGCCGGTTGTTCTGGAAAACGCTCGTATCCTGAAAAACTGCGTTGACGCTAAAATGACCGAAGAAGACAAAGAAAACGCTCTGTCTCTGCTGGACAAAATCTACACCTCTCCGCTGTGCGTTAAAATGGCTGAAACCTGCCCGATCTTCTACGACGTTTTCTTCGCTGTTGCTAACGGTAACGAACTGCTGCTGGACCTGTCTCTGACCAAAGTTAACGCTACCGAACCGGAACGTACCGCTATGAAAAAAATCCAGGACTGCTACGTTGAAAACGGTCTGATCTCTCGTGTTCTGGACGGTCTGGTTATGACCACCATCTCTTCTTCTAAAGACTGCATGGGTGAAGCTGTTCAGAACACCGTTGAAGACCTGAAACTGAACACCCTGGGTCGTGGTGGTG GTGGTTCTGGTGGTGGTGGTTCTAGAGAATTAGTAGTCAGCTATGTCAATGTTAATATGGGCCTAAAAATTAGACAACTATTGTGGTTTCACATTTCCTGCCTTACTTTTGGAAGAGAAACTGTCCTTGAGTATTTGGTGTCTTTTGGAGTGTGGATTCGCACTCCTCCCGCTTACAGACCACCAAATGCCCCTATCTTATCAACACTTCCGGAAACTACTGTTGTT(下划线区域显示的是rFeld1序列两侧的柔性氨基酸链的序列)。

合成如下引物对：

F1(5’-3’):CATGCCATGGACATTGACCCGTATAAAG(SEQIDN0:8，下划线部分为NcoI)

R1(5’-3’):ATAAGAATGCGGCCGCAACAACAGTAGTTTCCGGAAG(SEQIDN0:9，下划线部分为NotI)

按照如下PCR体系及PCR程序扩增所述合成基因片段：

PCR反应体系为(100μl)：

PCR扩增程序为：

然后采用琼脂糖凝胶电泳回收PCR产物，PCR产物经过纯化后(QiagenPCR纯化试剂盒)，NcoI和NotI双酶切PCR产物与大肠杆菌表达载体pET28a后连接，将SEQIDNO:7的基因定向克隆进大肠杆菌表达载体pET28a的NcoI和NotI双位点，克隆质粒经DNA测序验证为正确，获得表达产生展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒的表达载体，即插入有rFeld1融合蛋白基因的pET28a-HBcAg-rFeld1重组表达载体。

(2)展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒的获得

将步骤(1)获得的pET28a-HBcAg-rFeld1重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)，挑选3-5个单独克隆，接种入3mlLB培养液含100ug/ml卡纳霉素，37℃摇床培养至OD₆₀₀值达到1.0-1.2，将3ml细菌培养液转接入500mlLB含100ug/ml卡纳霉素，37℃摇床培养至OD₆₀₀值为0.6后加入IPTG至终浓度为0.5mM，在25℃继续摇床培养8-12小时。细菌培养液经5000g，4℃离心15分钟，弃去上清，菌体可以-80℃保存或直接进行颗粒纯化。

菌体重新悬浮于适量(1-2克菌体加10ml缓冲液)冷的平衡缓冲液(pH8.0的50mM磷酸缓冲液含0.3MNaCl),15秒10次超声破菌体，每次超声间隔二分钟并置于湿冰中以保持菌体冷却。超声后的菌体在4℃经过12000g，30分钟离心后收集上清进一步经Ni纯化柱纯化。

2ml的Ni纯化预装柱，用10ml平衡缓冲液平衡，然后取细菌破碎上清10ml样品上样，15ml平衡缓冲液洗去未吸附的样品，然后用9ml洗脱缓冲液(pH8.0的50mM磷酸缓冲液含0.5MNaCl，含250mM咪唑)洗脱病毒样颗粒，洗脱液经10KDAmiconUltra-15ml离心浓缩以及交换缓冲液至PH8.0的50mM磷酸缓冲液含0.15MNaCl,0.5mMEDTA。纯化样品经SDS-PAGE电泳鉴定，如图2-A2所示，以及电镜鉴定为纯病毒样颗粒(即展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒)，如图2-B2及2-B3所示。

上述实施例1同时设置rFeld1蛋白对照组，参照步骤1-2，利用全基因合成SEQIDN0:7序列设计引物，进行PCR扩增出rFeld1蛋白的编码基因序列SEQIDN0:10，NcoI和NotI双酶切后的PCR片段插入至pET28a的NcoI和NotI双位点，获得插入有rFeld1蛋白基因的pET28a-rFeld1重组表达载体，表达、纯化，纯化样品经SDS-PAGE电泳鉴定，如图2-A1所示，以及电镜鉴定为rFeld1蛋白，如图2-B1所示。

具体的，所述SEQIDN0:10的序列为：

GAAATCTGCCCGGCTGTTAAACGTGACGTTGACCTGTTCCTGACCGGTACCCCGGACGAATACGTTGAACAGGTTGCTCAGTACAAAGCTCTGCCGGTTGTTCTGGAAAACGCTCGTATCCTGAAAAACTGCGTTGACGCTAAAATGACCGAAGAAGACAAAGAAAACGCTCTGTCTCTGCTGGACAAAATCTACACCTCTCCGCTGTGCGTTAAAATGGCTGAAACCTGCCCGATCTTCTACGACGTTTTCTTCGCTGTTGCTAACGGTAACGAACTGCTGCTGGACCTGTCTCTGACCAAAGTTAACGCTACCGAACCGGAACGTACCGCTATGAAAAAAATCCAGGACTGCTACGTTGAAAACGGTCTGATCTCTCGTGTTCTGGACGGTCTGGTTATGACCACCATCTCTTCTTCTAAAGACTGCATGGGTGAAGCTGTTCAGAACACCGTTGAAGACCTGAAACTGAACACCCTGGGTCGT

合成如下引物对：

F2(5’-3’):CATGCCATGGGAAATCTGCCCGGCTGTTAAACG(SEQIDN0:11，下划线部分为NcoI)

R2(5’-3’):ATAAGAATGCGGCCGCACGACCCAGGGTGTTCAG(SEQIDN0:12，下划线部分为NotI)

按照如下PCR体系及PCR程序扩增所述合成基因片段：

PCR反应体系为(100μl)：

PCR扩增程序为：

然后采用琼脂糖凝胶电泳回收PCR产物，PCR产物经过纯化后(QiagenPCR纯化试剂盒)，NcoI和NotI双酶切PCR产物与大肠杆菌表达载体pET28a后连接，将NcoI和NotI双酶切回收后的rFeld1基因片段定向克隆进大肠杆菌表达载体pET28a的NcoI和NotI双位点，克隆质粒经DNA测序验证为正确，获即插入有rFeld1融合蛋白基因的pET28a-rFeld1重组表达载体。

实施例2

本实施例提供了一种增强重组猫致敏原rFeld1蛋白免疫原性的疫苗的制备方法，包括如下步骤：

(1)动物免疫

分别采用实施例1纯化的展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒(HBcAg-rFeld1)与rFeld1蛋白分别经肌肉注射或皮下接种或腹腔接种纯种虎皮猫，每个处理组10只虎皮猫，接种蛋白量分别为1mg病毒样颗粒/只、1mgrFeld1蛋白/只，体积为1毫升，接种周期如图3-A所示，具体为：

第一次免疫：第0天，采用rFeld1蛋白或者HBcAg-rFeld1蛋白与弗氏完全佐剂按1:1混合(1mg蛋白/1ml佐剂)进行免疫，同时设置无免疫空白对照组。免疫当天记为第0天，免疫前先进行第一次取血。

第二次免疫：第14天，采用rFeld1蛋白或者HBcAg-rFeld1蛋白与弗氏不完全佐剂按1:1混合(1mg蛋白/1ml佐剂)进行免疫。

第三次免疫:第28天，第二次取血，然后采用rFeld1蛋白或者HBcAg-rFeld1蛋白与弗氏不完全佐剂按1:1混合(1mg蛋白/1ml佐剂)进行免疫。

第49天，进行第三次取血。

取血均采取猫大腿静脉采血方式，血液经室温孵育一小时后，4500g，4℃离心15分钟，取上清即为抗血清。

(2)抗血清中IgG抗体特异性检测

对实施例1里得到的抗血清进行Feld1特异性检测，利用纯化的重组rFeld1蛋白和购买的商品化天然的nFeld1蛋白(购自IndoorBiotechnologies,货号：NA-FD1)作为抗原，抗血清为一抗，兔抗猫IgG-HRP为二抗，经SDS-PAGE电泳及WB鉴定，如图3-B所示。

由图3-B可知，相对于无免疫对照组及rFeld1蛋白免疫组，本发明提供的HBcAg-rFeld1融合蛋白组所得IgG抗体量较大，浓度较高。且rFeld1蛋白免疫组的抗血清对rFeld1抗原的识别较好，但是对于少量的天然nFeld1抗原并未识别，而本发明制备的HBcAg-rFeld1融合蛋白免疫猫所得IgG抗体不仅能特异性针对rFeld1蛋白，还能被nFeld1蛋白(非重组表达蛋白，为猫体提取天然Feld1蛋白，购自IndoorBiotechnologies,货号：NA-FD1)检测出来。结果表明：本发明提供的HBcAg-rFeld1融合蛋白较现有重组表达的rFeld1蛋白对猫致敏原Feld1蛋白的检测灵敏度更高。

(3)抗血清中Feld1-特异性IgG抗体滴度检测

操作步骤

①抗原包被：利用原核表达纯化的rFeld1蛋白作为抗原，用包被液稀释成0.5mg/ml，100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反应板中，4℃孵育过夜。

②洗涤：次日倾去凹孔内的液体，洗涤液洗3次。

③封闭：加100μL/孔封闭液，37℃放置1h。

④洗涤：用洗涤液洗3次。

⑤加待测样品(一抗)：将实例2中得到的抗血清在用封闭液连续稀释(按照1：10)，100μL/孔加到已包被的板上，每个样品平行做三份，封闭液孵育或空白培养基作为阴性对照，已知样品作为阳性对照。加盖37℃恒温箱温育1～2h。

⑥洗涤：用洗涤液洗3次。

⑦加酶标抗抗体：兔抗猫IgG-HRP，用封闭液l：8000稀释，100μL/孔，加盖37℃恒温箱温育1h。

⑧洗涤：用洗涤液洗5次，蒸馏水洗2次。

⑨显色：加新鲜配制的TMB底物溶液100μL/孔，37℃暗处放置5～10min，显示蓝色。

⑩终止反应、比色：加50μL/孔终止液。颜色变黄；用酶标仪测定450nm处各孔的吸光值，阳性反应的最大稀释度为待测样品的效价。

具体地，对抗血清中Feld1-特异性IgG抗体滴度检测所用的试剂如下：

①包被缓冲液(PH9.60.05M碳酸盐缓冲液):

NaCO₃1.59克

NaHCO₃2.93克

加蒸馏水至1000ml

加蒸馏水至1000ml

③封闭液：

脱脂奶粉5.0克

加洗涤缓冲液至100ml

或以牛血清白蛋白(BSA)与洗涤液配成1％使用。

④终止液(2MH₂SO₂)：

蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸(98％)21.7ml。

⑤底物缓冲液(PH5.0磷酸盐柠檬酸盐缓冲液):

0.2MNa₂HPO₄25.7ml

0.1M柠檬酸24.3ml

加蒸馏水至100ml。

⑥TMB(四甲基联苯胺)使用液:

TMB(10mg/5ml无水乙醇)0.5ml

底物缓冲液(PH5.5)10ml

0.75％H₂O₂32μl

滴度测试结果如图3-C所示，由图可知，相对于重组的rFeld1蛋白及无免疫组，采用本发明提供的展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒免疫虎皮猫后，所得的Feld1-特异性IgG抗体的滴度较高，在第二次免疫后超过10⁷，第三次免疫后将近10⁸，而重组rFeld1蛋白组分别为10⁵和10⁶，无免疫组则一直低于10⁵。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒，其特征在于，构成所述颗粒的蛋白质亚基为乙肝病毒核心抗原与氨基酸序列为SEQIDNO:1的多肽的融合蛋白，其中，所述融合蛋白的氨基酸序列为所述SEQIDNO:1的多肽序列插入乙肝病毒核心抗原第78-81位氨基酸之间，并替换掉所述乙肝病毒核心抗原第79-80位的氨基酸序列所得。

2.如权利要求1所述的展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒，其特征在于，在所述SEQIDNO:1的多肽一侧或两侧增设柔性氨基酸短肽。

3.一种表达产生如权利要求1所述的展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒的表达载体，其特征在于，所述表达载体的多克隆位点插入有编码如权利要求1所述融合蛋白的基因。

4.一种如权利要求1所述的展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，为将如权利要求3所述的表达载体导入合适的宿主，表达，纯化分离出所述免疫增强型病毒样颗粒。

5.一种如权利要求1所述的展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒或如权利要求3所述的表达载体在制备免疫治疗、免疫预防或免疫诊断用药物或试剂中的用途。

6.一种增强重组猫致敏原rFeld1蛋白免疫原性的疫苗，其特征在于，所述疫苗的主要有效成分为如权利要求1所述的展示重组猫致敏原rFeld1蛋白的免疫增强型病毒样颗粒。

7.如权利要求6所述的增强重组猫致敏原rFeld1蛋白免疫原性的疫苗，其特征在于，所述疫苗中还可包括药学上可接受的辅料。

8.如权利要求6所述的增强重组猫致敏原rFeld1蛋白免疫原性的疫苗，在制备减少或抑制猫体内Feld1变应原产生的药物中的用途。

9.一种刺激猫的免疫系统对于自身Feld1抗原产生免疫应答的方法，其特征在于，为如权利要求6所述疫苗免疫猫，从而得到抗自身Feld1抗原的抗血清或抗体。

10.如权利要求9所述的刺激猫的免疫系统对于自身Feld1抗原产生免疫应答的方法，其特征在于，所述抗自身Feld1抗原的抗血清中包括IgG抗体。