CN105158449A - 一种化妆品及其原材料的检测方法 - Google Patents

Abstract

一种化妆品及其原材料的检测方法，包括以下步骤：取若干动物受精蛋胚，在蛋壳的气室端打开一个开口，向开口内加入生理盐水，再撕掉气室膜，露出绒毛尿囊膜；将四氟环贴合固定在动物受精蛋胚的绒毛尿囊膜上，处于四氟环的环内部分形成受试区域；取待测样品若干，加入到受试区域，然后在动物受精蛋胚外侧覆盖一层保鲜膜，再将动物受精蛋胚置于孵箱中；一段时间后，将动物受精蛋胚从孵箱中取出，观察并比较环内与环外绒毛尿囊膜上血管的变化，确定损伤等级，根据损伤等级确定待测样品的刺激等级。本申请不以人体为实验对象，降低了安全风险，便于重复测试。

Description

一种化妆品及其原材料的检测方法

技术领域

本申请涉及化妆品技术领域，尤其是一种化妆品及其原材料的检测方法。

背景技术

现阶段，消费者或者检测机构对化妆品及其原料进行皮肤刺激性检测，从而检测化妆品的好坏。这种检测一般是用皮肤斑贴试验，该实验从医学检测中的过敏源筛查检测演变而来。皮肤斑贴试验因其实验简单，适用范围广，被大量用于化妆品及其原材料过敏性测试。

具体方法为：随机寻找10名以上受试个体，个体要求成年健康、无特殊过敏史、无重大疾病史，性别不限，以女性为主。用生理盐水反复清洗受试个体前臂内侧，手腕上部。将0.5ml受试物均匀涂抹在斑贴纱布上，再将其贴敷在受试个体手腕上部，每个个体做两次平行试验，同时以生理盐水作为对照试验，并在贴敷后6小时、12小时各观察一次。根据观察结果，将刺激反应分为五个等级：1.“—”阴性：受试部位无任何反应；2.“±”可疑：皮肤出现瘙痒或轻微发红；3.“+”弱阳性：皮肤出现单纯红斑、瘙痒；4.“++”中度阳性：皮肤出现水肿性红斑、丘疹；5.“+++”强阳性：皮肤出现显著红斑、丘疹及水疱。最后将所有受试个体的反应现状进行统计评价，从而得出受试物刺激强弱。

但是，该方法以人体为直接实验对象，实验有潜在健康风险，不易做重复性测试。

发明内容

本申请提供一种化妆品的检测方法，解决现有技术中化妆品检测以人体未实验对象，存在安全风险且不易重复测试的问题。

一种化妆品及其原材料的检测方法，包括以下步骤：取若干动物受精蛋胚，在蛋壳的气室端打开一个开口，向开口内加入生理盐水，再撕掉气室膜，露出绒毛尿囊膜；将四氟环贴合固定在动物受精蛋胚的绒毛尿囊膜上，处于四氟环的环内部分形成受试区域；取待测样品若干，加入到受试区域，然后在动物受精蛋胚外侧覆盖一层保鲜膜，再将动物受精蛋胚置于孵箱中；一段时间后，将动物受精蛋胚从孵箱中取出，观察并比较环内与环外绒毛尿囊膜上血管的变化，确定损伤等级，根据损伤等级确定待测样品的刺激等级。

优选的，所述观察并比较环内与环外绒毛尿囊膜上血管的变化，确定损伤等级，具体为：观察并比较环内与环外绒毛尿囊膜上血管的变化，确定血管效应值，血管效应值对应如下：血管流动正常，无血流出，血管效应值为0；血管内无血流，血管效应值为1；血管充血或血流增加，血管效应值为2；环内有1-10个出血点，血管效应值为3；环内出血点大于10个或者出血点不可数但覆盖面积小于环内面积的1/8，血管效应值为4；环内出血点不可数但覆盖面积大于或等于环内面积的1/8且小于环内面积的1/4，或者环内没有出血点但红晕覆盖面积小于环内面积的1/4，血管效应值为5；环内出血点不可数但覆盖面积大于或等于环内面积的1/4且小于环内面积的1/2，或者环内没有出血点但红晕覆盖面积大于或等于环内面积的1/4且小于环内面积的1/2，血管效应值为6；环内大量出血，出血面积大于或等于环内面积的1/2且小于环内面积的3/4，血管效应值为7；环内大量出血，出血面积大于或等于环内面积的3/4，或者形成结痂，血管效应值为8。

优选的，所述根据损伤等级确定待测样品的刺激等级，具体为：求取血管效应值的平均值，根据平均值确定待测样品的刺激等级，刺激等级对应如下平均值=0，为无刺激；0＜平均值≤2，为应激性刺激；2﹤平均值≤3，为轻微刺激；3﹤平均值≤5，为中度刺激；平均值＞5，为重度刺激。

优选的，动物受精蛋胚为鸡胚、鸭胚和鹅胚中的一种。

优选的，待测样品包括甲基氯异噻唑啉酮、杰马液、十二烷基硫酸钠、尼泊金甲酯丙酯和苯氧乙醇中的至少一种。

优选的，孵箱环境为温度37.5℃±0.5℃，相对湿度50%-60%，孵化时间不低于30分钟。

优选的，取用至少十个动物受精蛋胚。

本申请的有益效果是，由于本申请使用动物受精蛋胚作为实验对象，不会作用到人体，就降低了安全风险，也便于重复测试。

同时，待测样品直接作用于绒毛尿囊膜，实验更加真实、准确。

附图说明

图1为血管效应值为0时绒毛尿囊膜血管的状态图；

图2为血管效应值为1时绒毛尿囊膜血管的状态图；

图3为血管效应值为2时绒毛尿囊膜血管的状态图；

图4为血管效应值为3时绒毛尿囊膜血管的状态图；

图5为血管效应值为4时绒毛尿囊膜血管的状态图；

图6为血管效应值为5时绒毛尿囊膜血管的状态图；

图7为血管效应值为6时绒毛尿囊膜血管的状态图；

图8为血管效应值为7时绒毛尿囊膜血管的状态图；

图9为血管效应值为8时绒毛尿囊膜血管的状态图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式结合附图对本发明作进一步详细说明。

由于绒毛尿囊膜血管与人眼结膜血管组成较为相似，而人体粘膜，如眼结膜、生殖器、嘴唇、肛门、鼻腔等，对外界刺激的敏感度远远大于皮肤的敏感度，尤其是人眼结膜的敏感度最高，因此，本申请使用未孵化的动物受精蛋胚，动物受精蛋胚可选用鸡胚、鸭胚、鹅胚等中的一种，这种实验结果更为真实、准确。

如图1所示，将四氟环20贴合固定在动物受精蛋胚上，处于四氟环20的环内部分形成受试区域11，取待测样品加入到受试区域11，从而在受试区域11进行实验。其中，四氟环20可以选用聚四氟乙烯环、四氟垫、四氟密封圈或四氟带。

观察并比较环内与环外绒毛尿囊膜上血管的变化，确定每个鸡胚的血管效应值，环内绒毛尿囊膜上血管的变化与血管效应值对应如下：

如图1所示，血管流动正常，无血流出，血管效应值为0。图2中，血管内无血流，血管效应值为1。图3中，血管有充血或血流增加的现象，血管效应值为2。图4中，环内有1-10个出血点31，血管效应值为3。图5中，环内出血点31大于10个，血管效应值为4。图6中，环内出血点31的数量难以统计但覆盖面积大于或等于环内面积的1/8且小于环内面积的1/4，血管效应值为5。图7中，环内出血点31数量更多，具体也不可数，但覆盖面积大于或等于环内面积的1/4且小于环内面积的1/2，血管效应值为6。图8中，环内已大量出血，形成红晕32，出血面积大于或等于环内面积的1/2且小于环内面积的3/4，血管效应值为7。图9中，环内出血量更大，出血面积已大于或等于环内面积的3/4，血管效应值为8。

根据血管效应值的平均值确定待测样品的刺激等级。刺激等级对应如下：平均值=0，为无刺激；0＜平均值≤2，为应激性刺激；2﹤平均值≤3，为轻微刺激；3﹤平均值≤5，为中度刺激；平均值＞5，为重度刺激。

实施例1：

取10个孵化10天的鸡胚，用手捻钻在鸡胚气室端上开一个小孔，进而用锯齿镊小心扩大鸡胚上的小口，最终将开口扩大至整个气室区域。然后将生理盐水滴满整个气室端，充分润湿气室膜，然后用锯齿镊小心撕掉气室膜，使鸡胚绒毛尿囊膜CAM暴露出来。

将四氟环20贴合固定在CAM上，CAM处于四氟环20的环内部分形成受试区域11。将红石榴面膜用无菌水制成透明悬液，取一定量的悬液加入到受试区域11。然后在鸡胚外侧覆盖一层保鲜膜，防止鸡胚水分流失，并将鸡胚置于孵箱环境中，孵箱环境为温度37℃，相对湿度50%。

一段时间后，将鸡胚从孵箱中取出，观察并比较环内与环外绒毛尿囊膜上血管的变化，测得10个鸡胚的血管效应值分别为：0,0,0,0,0,0,0,0,0,0。去除一个最高值和一个最低值之后，求得平均值为0，则红石榴面膜对人体无刺激，对人体皮肤无害。

实施例2：

取5个孵化10天左右的鸡胚，用手捻钻在鸡胚气室端上开一个小孔，进而用锯齿镊小心扩大鸡胚上的小口，最终将开口扩大至整个气室区域。然后将生理盐水滴满整个气室端，充分润湿气室膜，然后用锯齿镊小心撕掉气室膜，使鸡胚绒毛尿囊膜CAM暴露出来。

将四氟环20贴合固定在CAM上，CAM处于四氟环20的环内部分形成受试区域11。将“百雀羚水嫩倍现盈彩精华面膜”用无菌水制成透明悬液，取一定量的悬液加入到受试区域11。然后在鸡胚外侧覆盖一层保鲜膜，防止鸡胚水分流失，并将鸡胚置于孵箱环境中，孵箱环境为温度37℃，相对湿度50%。

一段时间后，将鸡胚从孵箱中取出，观察并比较环内与环外绒毛尿囊膜上血管的变化，测得10个鸡胚的血管效应值分别为：5,6,6,6,3。去除一个最高值和一个最低值之后，求得平均值为4.6，则“百雀羚水嫩倍现盈彩精华面膜”对人体为中度刺激。

实施例3：

取5个孵化10天左右的鸡胚，用手捻钻在鸡胚气室端上开一个小孔，进而用锯齿镊小心扩大鸡胚上的小口，最终将开口扩大至整个气室区域。然后将生理盐水滴满整个气室端，充分润湿气室膜，然后用锯齿镊小心撕掉气室膜，使鸡胚绒毛尿囊膜CAM暴露出来。

将四氟环20贴合固定在CAM上，CAM处于四氟环20的环内部分形成受试区域11。将“百雀羚八杯水水嫩面膜”用无菌水制成透明悬液，取一定量的悬液加入到受试区域11。然后在鸡胚外侧覆盖一层保鲜膜，防止鸡胚水分流失，并将鸡胚置于孵箱环境中，孵箱环境为温度37℃，相对湿度50%。

一段时间后，将鸡胚从孵箱中取出，观察并比较环内与环外绒毛尿囊膜上血管的变化，测得10个鸡胚的血管效应值分别为：:2,2,0,2,2。去除一个最高值和一个最低值之后，求得平均值为1.6，则“百雀羚八杯水水嫩面膜”对人体为应激性刺激。

实施例4：

取10个孵化10天的鸡胚，用手捻钻在鸡胚气室端上开一个小孔，进而用锯齿镊小心扩大鸡胚上的小口，最终将开口扩大至整个气室区域。然后将生理盐水滴满整个气室端，充分润湿气室膜，然后用锯齿镊小心撕掉气室膜，使鸡胚绒毛尿囊膜CAM暴露出来。

将四氟环20贴合固定在CAM上，CAM处于四氟环20的环内部分形成受试区域11，取40μL浓度为0.2%的甲基氯异噻唑啉酮，加入到受试区域11。然后在鸡胚外侧覆盖一层保鲜膜，防止鸡胚水分流失，并将鸡胚置于孵箱环境中，孵箱环境为温度37℃，相对湿度50%。

一段时间后，将鸡胚从孵箱中取出，观察并比较环内与环外绒毛尿囊膜上血管的变化，测得10个鸡胚的血管效应值分别为：5,6,5,5,5,2,2,5,2,5。去除一个最高值和一个最低值之后，求得平均值为4.3，则0.2%的甲基氯异噻唑啉酮为中度刺激，对人体皮肤有害。

实施例5：

取10个孵化11天的鸡胚，用手捻钻在鸡胚气室端上开一个小孔，进而用锯齿镊小心扩大鸡胚上的小口，最终将开口扩大至整个气室区域。然后将生理盐水滴满整个气室端，充分润湿气室膜，然后用锯齿镊小心撕掉气室膜，使鸡胚绒毛尿囊膜CAM暴露出来。

将四氟环20贴合固定在CAM上，CAM处于四氟环20的环内部分形成受试区域11，取40μL浓度为0.4%的杰马液，加入到受试区域11。然后在鸡胚外侧覆盖一层保鲜膜，防止鸡胚水分流失，并将鸡胚置于孵箱环境中，孵箱环境为温度37℃，相对湿度50%。

一段时间后，将鸡胚从孵箱中取出，观察并比较环内与环外绒毛尿囊膜上血管的变化，测得10个鸡胚的血管效应值分别为：2,0,2,0,0,1,3,1,4,3。去除一个最高值和一个最低值之后，求得平均值为1.5，则0.4%的杰马液为应激性刺激，对人体皮肤有一定刺激性。

实施例6：

取10个孵化12天的鸡胚，用手捻钻在鸡胚气室端上开一个小孔，进而用锯齿镊小心扩大鸡胚上的小口，最终将开口扩大至整个气室区域。然后将生理盐水滴满整个气室端，充分润湿气室膜，然后用锯齿镊小心撕掉气室膜，使鸡胚绒毛尿囊膜CAM暴露出来。

将四氟环20贴合固定在CAM上，CAM处于四氟环20的环内部分形成受试区域11，取40μL摩尔浓度为0.05mol/L的十二烷基硫酸钠，加入到受试区域11。然后在鸡胚外侧覆盖一层保鲜膜，防止鸡胚水分流失，并将鸡胚置于孵箱环境中，孵箱环境为温度37.5℃，相对湿度55%。

一段时间后，将鸡胚从孵箱中取出，观察并比较环内与环外绒毛尿囊膜上血管的变化，测得10个鸡胚的血管效应值分别为：8,8,7,6,6,6,6,5,6,7。去除一个最高值和一个最低值之后，求得平均值为6.5，则0.05mol/L的十二烷基硫酸钠为重度刺激，对人体皮肤十分有害。

实施例7：

取10个孵化13天的鸡胚，用手捻钻在鸡胚气室端上开一个小孔，进而用锯齿镊小心扩大鸡胚上的小口，最终将开口扩大至整个气室区域。然后将生理盐水滴满整个气室端，充分润湿气室膜，然后用锯齿镊小心撕掉气室膜，使鸡胚绒毛尿囊膜CAM暴露出来。

将四氟环20贴合固定在CAM上，CAM处于四氟环20的环内部分形成受试区域11，取一定量的0.25%尼泊金甲酯和0.15%尼泊金丙酯，加入到受试区域11。然后在鸡胚外侧覆盖一层保鲜膜，防止鸡胚水分流失，并将鸡胚置于孵箱环境中，孵箱环境为温度38℃，相对湿度60%。

一段时间后，将鸡胚从孵箱中取出，观察并比较环内与环外绒毛尿囊膜上血管的变化，测得10个鸡胚的血管效应值分别为：0,0,0,0,2,0,0,0,2,0。去除一个最高值和一个最低值之后，求得平均值为0.25，则尼泊金甲酯丙酯为应激性刺激，对人体刺激很小。

实施例8：

取10个孵化14天的鸡胚，用手捻钻在鸡胚气室端上开一个小孔，进而用锯齿镊小心扩大鸡胚上的小口，最终将开口扩大至整个气室区域。然后将生理盐水滴满整个气室端，充分润湿气室膜，然后用锯齿镊小心撕掉气室膜，使鸡胚绒毛尿囊膜CAM暴露出来。

将四氟环20贴合固定在CAM上，CAM处于四氟环20的环内部分形成受试区域11，取一定量的1%苯氧乙醇，加入到受试区域11。然后在鸡胚外侧覆盖一层保鲜膜，防止鸡胚水分流失，并将鸡胚置于孵箱环境中，孵箱环境为温度38℃，相对湿度60%。

一段时间后，将鸡胚从孵箱中取出，观察并比较环内与环外绒毛尿囊膜上血管的变化，测得10个鸡胚的血管效应值分别为：2,0,0,0,0,0,3,0,0,2。去除一个最高值和一个最低值之后，求得平均值为0.5，则苯氧乙醇为应激性刺激，对人体刺激很小。

以上内容是结合具体的实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换。

Claims (7)

1.一种化妆品及其原材料的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

取若干动物受精蛋胚，在蛋壳的气室端打开一个开口，向开口内加入生理盐水，再撕掉气室膜，露出绒毛尿囊膜；

将四氟环贴合固定在动物受精蛋胚的绒毛尿囊膜上，处于四氟环的环内部分形成受试区域；

取待测样品若干，加入到受试区域，然后在动物受精蛋胚外侧覆盖一层保鲜膜，再将动物受精蛋胚置于孵箱中；

一段时间后，将动物受精蛋胚从孵箱中取出，观察并比较环内与环外绒毛尿囊膜上血管的变化，确定损伤等级，根据损伤等级确定待测样品的刺激等级。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述观察并比较环内与环外绒毛尿囊膜上血管的变化，确定损伤等级，具体为：观察并比较环内与环外绒毛尿囊膜上血管的变化，确定血管效应值，血管效应值对应如下：

血管流动正常，无血流出，血管效应值为0；

血管内无血流，血管效应值为1；

血管充血或血流增加，血管效应值为2；

环内有1-10个出血点，血管效应值为3；

环内出血点大于10个或者出血点不可数但覆盖面积小于环内面积的1/8，血管效应值为4；

环内出血点不可数但覆盖面积大于或等于环内面积的1/8且小于环内面积的1/4，或者环内没有出血点但红晕覆盖面积小于环内面积的1/4，血管效应值为5；

环内出血点不可数但覆盖面积大于或等于环内面积的1/4且小于环内面积的1/2，或者环内没有出血点但红晕覆盖面积大于或等于环内面积的1/4且小于环内面积的1/2，血管效应值为6；

环内大量出血，出血面积大于或等于环内面积的1/2且小于环内面积的3/4，血管效应值为7；

环内大量出血，出血面积大于或等于环内面积的3/4，或者形成结痂，血管效应值为8。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：

所述根据损伤等级确定待测样品的刺激等级，具体为：求取血管效应值的平均值，根据平均值确定待测样品的刺激等级，刺激等级对应如下：

平均值=0，为无刺激；

0＜平均值≤2，为应激性刺激；

2﹤平均值≤3，为轻微刺激；

3﹤平均值≤5，为中度刺激；

平均值＞5，为重度刺激。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的方法，其特征在于：

动物受精蛋胚为鸡胚、鸭胚和鹅胚中的一种。

5.根据权利要求1-3任意一项所述的方法，其特征在于：

待测样品包括甲基氯异噻唑啉酮、杰马液、十二烷基硫酸钠、尼泊金甲酯丙酯和苯氧乙醇中的至少一种。

6.根据权利要求1-3任意一项所述的方法，其特征在于：

孵箱环境为温度37.5℃±0.5℃，相对湿度50%-60%。

7.根据权利要求1-3任意一项所述的方法，其特征在于：

取用至少十个动物受精蛋胚。