CN111912946A - 一种眼贴刺激性的快速鉴定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种眼贴刺激性的快速鉴定方法，取多个孵化10‑14天的受精鸡胚，使鸡胚绒毛尿囊膜即CAM暴露出来，将聚四氟乙烯环作为内置环放置于鸡胚的CAM上，取眼贴样品挤出药液40μL加至处理好的鸡胚的CAM内置环中，在鸡胚外壳上覆盖一层保鲜膜，防止鸡胚内组织液蒸发，并将鸡胚置于孵化箱中继续培养30分钟，借助光照观察并比较内置环环内与环外CAM血管的变化，确定受试样品的刺激性大小。本发明眼贴刺激性的快速鉴定方法，模拟度高，依据血管损伤程度评分标准快速检测眼贴刺激性，操作简便，检测结果准确。
Description
技术领域
本发明涉及医疗器械技术领域，尤其是涉及一种眼贴刺激性的快速鉴定方法。
背景技术
眼贴中含有黄柏等中药材，另外含有一些有机溶剂、矿物油、香精成分等化学物质，对于耐受度低的肌肤和敏感型肌肤来说有一定刺激性。每个人的皮肤敏感性和耐受度不同，面部和眼部神经和血管众多，对疼痛和刺激非常敏感，且眼贴成分会间接接触眼球表面，因此需要对眼贴接触皮肤的刺激性进行检测。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种眼贴刺激性的快速鉴定方法，采用受精鸡胚模拟人体血管，模拟度高，依据血管损伤程度评分标准快速检测眼贴刺激性，操作简便，检测结果准确。
为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：一种眼贴刺激性的快速鉴定方法，包括如下步骤：
S1，准备鸡胚：取多个孵化10-14天的受精鸡胚，用眼科镊在鸡胚小端即气室端上开一个小孔，用锯齿镊小心扩大鸡胚上的小口，将开口扩大至整个气室区域；
S2，处理鸡胚绒毛尿囊膜：将生理盐水滴满整个气室部分，充分润湿蛋壳膜，然后用眼科镊小心撕掉蛋壳膜，使鸡胚绒毛尿囊膜即CAM暴露出来；
S3，将聚四氟乙烯环作为内置环放置于鸡胚的CAM上，将CAM内置环区域作为受试样品的作用区域；
S4，取眼贴样品挤出药液作为一个受试样品，将多个相同受试样品分别加至处理好的鸡胚的CAM内置环中，在鸡胚外壳上覆盖一层保鲜膜，并将鸡胚置于孵化箱中继续培养；
S5，将鸡胚从孵化箱中取出，借助光照，观察并比较内置环环内与环外CAM血管的变化，确定受试样品的刺激性大小。
进一步地，步骤4中取眼贴样品挤出药液40μL作为一个受试样品，鸡胚置于孵化箱中继续培养30分钟。
进一步地，步骤5中确定受试样品刺激性大小的方法为：根据血管损伤程度进行刺激度评分，取多个相同受试样品刺激度评分的平均值即NC值，根据NC值的大小来确定受试样品的刺激性大小。
进一步地，根据血管损伤程度进行刺激度评分方法为：通过血管效应表征不同等级血管损伤程度，不同血管效应对应不同的刺激度分值；
当观察不到反应，CAM正常时，血管效应为无反应，刺激度评分为0；
当观察到血管内无血流，血管清晰时，血管效应为鬼影血管，刺激度评分为1；
当观察到充血，或CAM小血管血流增加时，血管效应为毛细血管损伤，刺激度评分为2；
当观察到环内有可数的细小出血点1-10个时，血管效应为极轻微出血，刺激度评分为3；
当观察到环内有可数的细小出血点＞10个或小出血点不可数且覆盖环内区域不足12.5％时，血管效应为轻微出血，刺激度评分为4；
当观察到环内出血点覆盖面积12.5-25％，不包括25％，或环内没有出血点但红晕覆盖面积不足25％时，血管效应为极轻度出血，刺激度评分为5；
当观察到环内出血点覆盖面积25-50％，不包括50％，或环内没有出血点但红晕覆盖面积为25-50％，不包括50％时，血管效应为轻度出血，刺激度评分为6；
当观察到环内大量出血点或小区域出血范围达到50-75％，不包括75％时，血管效应为中度出血，刺激度评分为7；
当观察到环内出血点区域大于等于75％或结痂形成时，血管效应为严重出血，刺激度评分为8。
进一步地，取多个相同受试样品的刺激度评分计算出NC值，根据NC值的大小来确定受试样品的刺激性大小的方法为：
当0﹤NC≤2时，毛细血管未有出血损伤，确定为应激性刺激，即无损伤性刺激；
当2﹤NC≤3时，毛细血管出现轻微性出血损伤，确定为轻微刺激，即此时已产生轻微损伤性刺激；
当3﹤NC≤5时，毛细血管出现较为严重的出血损伤，确定为中度刺激，即此时已产生较为严重的损伤性刺激；
当NC＞5时，毛细血管大面积出血，且出血量较大，为不可逆损伤，确定为严重刺激，即此时已产生极为严重的损伤性刺激。
本发明的有益效果是：
本发明眼贴刺激性的快速鉴定方法，使用鸡胚模拟人体血管对眼贴刺激性进行评价，利用孵化10-14天的受精鸡胚中期绒毛尿囊膜(CAM)血管与人眼结膜血管组成较为相似的特征，将一定量眼贴受试样品直接与鸡胚尿囊膜接触，通过将刺激物定向性的刺激CAM血管，通过作用一段时间之后观察鸡胚绒毛尿囊膜即CAM的血管损伤(如鬼影血管、毛细血管充血或出血)程度及周边组织变化，模拟待测刺激物对人眼结膜血管的刺激损伤，模拟度高。根据CAM上不同的血管损伤程度进行刺激度评分，从而判断受试样品的刺激性大小，操作简便，检测结果准确，可作为眼贴行业刺激性检测行业标准。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于这些实施例。
实施例1
一种眼贴刺激性的快速鉴定方法，包括如下步骤：
S1，准备鸡胚：取多个孵化10-14天的受精鸡胚，用眼科镊在鸡胚小端即气室端上开一个小孔，用锯齿镊小心扩大鸡胚上的小口，将开口扩大至整个气室区域；
S2，处理鸡胚绒毛尿囊膜：将生理盐水滴满整个气室部分，充分润湿蛋壳膜，然后用眼科镊小心撕掉蛋壳膜，使鸡胚绒毛尿囊膜即CAM暴露出来；
S3，将聚四氟乙烯环作为内置环放置于鸡胚的CAM上，将CAM内置环区域作为受试样品的作用区域；
S4，取眼贴样品挤出药液40μL作为一个受试样品，将多个相同受试样品分别加至处理好的鸡胚的CAM内置环中，在鸡胚外壳上覆盖一层保鲜膜，防止鸡胚内组织液蒸发，并将鸡胚置于孵化箱中继续培养30分钟；
S5，将鸡胚从孵化箱中取出，借助光照，观察并比较内置环环内与环外CAM血管的变化，确定受试样品的刺激性大小。
实施例2
本实施例与实施例1的不同之处在于：步骤5中确定受试样品刺激性大小的方法为：根据血管损伤程度进行刺激度评分，取多个相同受试样品刺激度评分的平均值即NC值，根据NC值的大小来确定受试样品的刺激性大小。
实施例3
本实施例与实施例2的不同之处在于：根据血管损伤程度进行刺激度评分方法为：通过血管效应表征不同等级血管损伤程度，不同血管效应对应不同的刺激度分值。
当观察不到反应，CAM正常时，血管效应为无反应，刺激度评分为0；
当观察到血管内无血流，血管清晰时，血管效应为鬼影血管，刺激度评分为1；
当观察到充血，或CAM小血管血流增加时，血管效应为毛细血管损伤，刺激度评分为2；
当观察到环内有可数的细小出血点1-10个时，血管效应为极轻微出血，刺激度评分为3；
当观察到环内有可数的细小出血点＞10个或小出血点不可数且覆盖环内区域不足12.5％时，血管效应为轻微出血，刺激度评分为4；
当观察到环内出血点覆盖面积12.5-25％(不包括25％)，或环内没有出血点但红晕覆盖面积不足25％时，血管效应为极轻度出血，刺激度评分为5；
当观察到环内出血点覆盖面积25-50％(不包括50％)，或环内没有出血点但红晕覆盖面积为25-50％(不包括50％)时，血管效应为轻度出血，刺激度评分为6；
当观察到环内大量出血点或小区域出血范围达到50-75％(不包括75％)时，血管效应为中度出血，刺激度评分为7；
当观察到环内出血点区域大于等于75％或结痂可能形成时，血管效应为严重出血，刺激度评分为8。
鬼影血管指血管内无血液灌注的血管。充血指血管内血液不流动或血管胀所致的血液充盈现象。出血指血液从血管内流出血管外，可以表现为血管外出现点状出血或絮状的弥漫性出血等多种形式。
实施例4
本实施例与实施例3的不同之处在于：取多个相同受试样品的刺激度评分计算出NC值，根据NC值的大小来确定受试样品的刺激性大小的方法为：
当0﹤NC≤2时，毛细血管未有出血损伤，确定为应激性刺激，即无损伤性刺激；
当2﹤NC≤3时，毛细血管出现轻微性出血损伤，确定为轻微刺激，即此时已产生轻微损伤性刺激。
当3﹤NC≤5时，毛细血管出现较为严重的出血损伤，可能为不可逆损伤，确定为中度刺激，即此时已产生较为严重的损伤性刺激。
当NC＞5时，毛细血管大面积出血，且出血量较大，为不可逆损伤，确定为严重刺激，即此时已产生极为严重的损伤性刺激。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，本领域普通技术人员对本发明的技术方案所做的其他修改或者等同替换，只要不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (5)
1.一种眼贴刺激性的快速鉴定方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1，准备鸡胚：取多个孵化10-14天的受精鸡胚，用眼科镊在鸡胚小端即气室端上开一个小孔，用锯齿镊小心扩大鸡胚上的小口，将开口扩大至整个气室区域；
S2，处理鸡胚绒毛尿囊膜：将生理盐水滴满整个气室部分，充分润湿蛋壳膜，然后用眼科镊小心撕掉蛋壳膜，使鸡胚绒毛尿囊膜即CAM暴露出来；
S3，将聚四氟乙烯环作为内置环放置于鸡胚的CAM上，将CAM内置环区域作为受试样品的作用区域；
S4，取眼贴样品挤出药液作为一个受试样品，将多个相同受试样品分别加至处理好的鸡胚的CAM内置环中，在鸡胚外壳上覆盖一层保鲜膜，并将鸡胚置于孵化箱中继续培养；
S5，将鸡胚从孵化箱中取出，借助光照，观察并比较内置环环内与环外CAM血管的变化，确定受试样品的刺激性大小。
2.根据权利要求1所述的眼贴刺激性的快速鉴定方法，其特征在于：步骤4中取眼贴样品挤出药液40μL作为一个受试样品，鸡胚置于孵化箱中继续培养30分钟。
3.根据权利要求1或2所述的眼贴刺激性的快速鉴定方法，其特征在于：步骤5中确定受试样品刺激性大小的方法为：根据血管损伤程度进行刺激度评分，取多个相同受试样品刺激度评分的平均值即NC值，根据NC值的大小来确定受试样品的刺激性大小。
4.根据权利要求3所述的眼贴刺激性的快速鉴定方法，其特征在于：根据血管损伤程度进行刺激度评分方法为：通过血管效应表征不同等级血管损伤程度，不同血管效应对应不同的刺激度分值；
当观察不到反应，CAM正常时，血管效应为无反应，刺激度评分为0；
当观察到血管内无血流，血管清晰时，血管效应为鬼影血管，刺激度评分为1；
当观察到充血，或CAM小血管血流增加时，血管效应为毛细血管损伤，刺激度评分为2；
当观察到环内有可数的细小出血点1-10个时，血管效应为极轻微出血，刺激度评分为3；
当观察到环内有可数的细小出血点＞10个或小出血点不可数且覆盖环内区域不足12.5％时，血管效应为轻微出血，刺激度评分为4；
当观察到环内出血点覆盖面积12.5-25％，不包括25％，或环内没有出血点但红晕覆盖面积不足25％时，血管效应为极轻度出血，刺激度评分为5；
当观察到环内出血点覆盖面积25-50％，不包括50％，或环内没有出血点但红晕覆盖面积为25-50％，不包括50％时，血管效应为轻度出血，刺激度评分为6；
当观察到环内大量出血点或小区域出血范围达到50-75％，不包括75％时，血管效应为中度出血，刺激度评分为7；
当观察到环内出血点区域大于等于75％或结痂形成时，血管效应为严重出血，刺激度评分为8。
5.根据权利要求4所述的眼贴刺激性的快速鉴定方法，其特征在于：取多个相同受试样品的刺激度评分计算出NC值，根据NC值的大小来确定受试样品的刺激性大小的方法为：
当0﹤NC≤2时，毛细血管未有出血损伤，确定为应激性刺激，即无损伤性刺激；
当2﹤NC≤3时，毛细血管出现轻微性出血损伤，确定为轻微刺激，即此时已产生轻微损伤性刺激；
当3﹤NC≤5时，毛细血管出现较为严重的出血损伤，确定为中度刺激，即此时已产生较为严重的损伤性刺激；
当NC＞5时，毛细血管大面积出血，且出血量较大，为不可逆损伤，确定为严重刺激，即此时已产生极为严重的损伤性刺激。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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