CN105154499A - L-天门冬氨酸-l-鸟氨酸的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸的制备方法，涉及有两个氨基酸已知序列的制备技术领域。包括以下步骤：用超大孔聚苯乙烯微球，加去离子水洗涤后过滤作为载体，将精氨酸酶固定于载体上；然后将L-精氨酸加入去离子水中，加入催化剂硫酸锰或醋酸锰，搅拌使溶解，用盐酸或硫酸调节pH值至8.3-8.7，得到L-精氨酸溶液，加入固定化酶，进行酶解反应，过滤得到转化液；再将转化液通过强酸性阳离子和强碱性阴离子交换树脂吸附洗脱，得到游离L-鸟氨酸溶液；之后与L-天门冬氨酸成盐反应得到L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸溶液；最后脱色、结晶，得产品。本发明反应条件温和，L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸收率高，成本低，纯度高。
Description
技术领域
本发明涉及一种有两个氨基酸的已知序列的制备技术领域。
背景技术
L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸，化学名为(S)-2-氨基丁二酸-(S)-2，5-二氨基戊酸盐，分子式为C9H19N3O6，分子量为265.26，结构式为：
L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸主要用于治疗肝性脑病及急、慢性肝病（如各型肝炎、肝硬化、脂肪肝、肝炎后综合症）引发的血氨升高，如伴发或继发于肝脏解毒功能受损或发作期肝性脑病，尤其适用于治疗肝昏迷早期或肝昏迷期的意识模糊状态。
现有的L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸的制备方法中，L-鸟氨酸多以盐酸盐、硫酸盐、醋酸盐的形式存在，如何去除L-鸟氨酸中的盐成为影响其制备工艺的技术关键。
文献GB965637、GB1067742、EP477991公开的L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸的制备方法中，重要通过阳离子交换树脂来处理L-鸟氨酸盐，以得到游离的L-鸟氨酸，再与L-天门冬氨酸反应，制得L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸。该方法的缺点是：产品收率低（约50%），且需要耗费大量的树脂，而树脂再生过程中需要消耗大量的水，并生产大量待处理且算是困难的酸水，三废产生量大，成本偏高，难以实现工业化生产。
CN101100435A公开了一种L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸的制备方法，将L-鸟氨酸硫酸盐溶于蒸馏水中，加入L-天门冬氨酸，加热溶解后用氢氧化钡中和硫酸，过滤，再用D403树脂螯合残余的钡离子，过滤除去螯合树脂，溶液减压浓缩，活性炭脱色，加入无水乙醇在搅拌、加热、回流状态下结晶。该方法用到了剧毒的钡离子，且仍需要树脂来去除重金属离子，存在制造成本较高，操作复杂、不利于工业化生产等缺陷。
CN101798275A公开了一种L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸的制备方法，包括下述步骤：将L-鸟氨酸醋酸盐溶于水后，加入L-天门冬氨酸，用氨水调节pH值至6-9，加入活性炭脱色过滤，滤液中加入适量的乙醇或甲醇，搅拌析晶，过滤，干燥，即得。该方法存在产品纯度不高，单杂超过0.1%，难以作为原料药进行制剂生产，且起始原料价格较高（700元/kg），不利于工业化生产等缺陷。
CN102102118A公开了一种L-鸟氨酸-L-天门冬氨酸盐的制备方法，通过精氨酸酶转化生产L-鸟氨酸-L-天门冬氨酸盐，包括以下步骤：(1)固定化酶的制备：取三乙醇胺阴离子苯乙烯树脂，用碳酸钾溶液浸泡6-18h后过滤，再将滤出的三乙醇胺阴离子苯乙烯树脂与碳酸钾、溴化氢按重量比为1∶(0.1-0.6)∶(0.2-0.5)配制成溶液，于冰浴中反应5-60min，调节pH值至7-10，再加入精氨酸酶，使其与三乙醇胺阴离子苯乙烯树脂的重量比为(0.002-0.01)∶1，于1-10℃反应12-48h，洗涤后用饱和食盐水浸泡0.5-3h，再利用去离子水洗净至溶液中检测不出氯离子，即得固定化酶，保存于水中；(2)转化条件的优化：固定化酶与精氨酸、乙酸锰按重量比1∶(1-3)∶(0.004-0.02)混合，加入去离子水中，搅拌，采用L-天门冬氨酸调节pH值至8.8-9.6，在30-50℃下，反应15-18h得固定化酶混悬液；(3)产物提取和精制工艺步骤：将步骤(2)中的固定化酶混悬液过滤后，向滤液中加L-天门冬氨酸、活性炭，于30-70℃下搅拌反应5-30min后，过滤，将滤液减压浓缩，浓缩结束，加入醇类，搅拌0.5-1h，析出L-鸟氨酸-L-天门冬氨酸，保温3-5h，再经降温至20-25℃、离心、干燥即得产品。该专利酶解碱性强，温度高，时间长，会导致鸟氨酸聚合产生杂质。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸的制备方法，该方法反应条件温和，L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸收率高，且产品成本低、纯度高，易于实现工业化生产。
为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：一种L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸的制备方法，包括以下步骤：
（1）固定化酶的制备：用超大孔聚苯乙烯微球，加去离子水洗涤后过滤作为载体；将L-精氨酸酶固定于该载体上,得到固定化酶；
（2）配料、酶解反应：将L-精氨酸加入去离子水中，加入硫酸锰或醋酸锰作为催化剂，搅拌使溶解，再用盐酸或硫酸调节pH值至8.3-8.7，得到L-精氨酸溶液，然后加入步骤（1）中制得的固定化酶；进行酶解反应，将L-精氨酸水溶液转化成L-鸟氨酸和尿素，反应结束后过滤得到转化液；
（3）纯化：转化液分别通过强酸性阳离子交换树脂、强碱性阴离子交换树脂吸附、洗脱，去除杂离子和尿素，得到游离L-鸟氨酸溶液；
（4）成盐反应：游离L-鸟氨酸溶液中加入L-天门冬氨酸，成盐反应得到L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸溶液；
（5）脱色、结晶，制得产品。
优选的，步骤（1）中超大孔聚苯乙烯微球平均粒径为100～200微米，孔隙率50～70%，比表面积30～40m2/g，交联度10～15%。
优选的，步骤（1）固定化酶的制备方法为：超大孔聚苯乙烯微球，加去离子水洗涤后过滤作为载体；取L-精氨酸酶0.05～0.1g，加去离子水溶解至40ml，加入Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液20ml，搅拌升温至36℃±1℃，加入5.0g载体，搅拌18～24小时，过滤并用去离子水洗涤，即得固定化酶，4℃～8℃冷藏保存；所述Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液的浓度为0.05～0.2mol/L，pH8.5～9.0。
超大孔聚苯乙烯微球，超大孔指大于生物大分子直径的10至20倍，内部既具有5-20nm的微孔，又具有50-100nm及100nm以上的超大孔，其中50-100nm及100nm以上的超大孔占微球内部孔容的10-60％。超大孔聚苯乙烯微球刚性大，化学性质稳定，耐受高压和高流速,耐受有机溶剂性能好，pH值的适用范围广，可耐100℃温度。
优选的，步骤（2）配料：得到的L-精氨酸溶液质量浓度为10～20%；催化剂的用量为L-精氨酸质量的0.15%-0.30%；固定化酶的用量为L-精氨酸质量的20-40%；酶解反应：控制酶解反应温度在25-35℃，搅拌2-10小时，将L-精氨酸水溶液转化成L-鸟氨酸和尿素，反应结束后过滤得到转化液。
进一步优选的，步骤（2）中催化剂为硫酸锰。
进一步优选的，步骤（2）中用盐酸调节溶液的pH值至8.5。
进一步优选的，步骤（2）中酶解反应温度为30℃。
优选的，步骤（4）成盐反应：游离L-鸟氨酸溶液中加入L-天门冬氨酸，成盐反应得到L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸溶液；L-天门冬氨酸与L-精氨酸的摩尔比为1∶1；成盐反应温度30-40℃，成盐反应时间2–4h。
优选的，步骤（3）中强酸性阳离子交换树脂的型号为001×7型、732型或D001型；强碱性阴离子交换树脂的型号为201×7型、717型或D201型。
进一步优选的，步骤（3）中强酸性阳离子交换树脂的型号为732型；强碱性阴离子交换树脂的型号为717型。
步骤（3）纯化：转化液通过强酸性阳离子交换树脂后主要吸附鸟氨酸，用氨水洗脱。通过强碱性阴离子交换树脂吸附后可吸附阴离子等杂质，用盐酸洗脱。
优选的，步骤（5）的方法为：将L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸溶液浓缩，得到浓缩液，浓缩液中加入活性炭脱色，过滤后滤液中加入有机溶剂进行结晶，过滤，干燥即得产品。
进一步优选的，步骤（5）中活性炭的型号为302型、767型或772型，脱色的温度为35-45℃，脱色的时间为30-60min；有机溶剂为甲醇、丙酮或体积浓度95%乙醇，有机溶剂的用量是滤液体积的3-5倍，结晶温度为35-45℃；干燥为鼓风干燥，干燥温度为50-70℃。
更进一步优选的，步骤（5）中活性炭的型号为767型；有机溶剂为甲醇；干燥温度为60℃。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于：
（1）本发明方法反应条件温和，固定化酶的专一性强，L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸收率高，且产品成本低、纯度高，易于实现工业化生产。
（2）酶解温度25-35℃，pH8.3-8.7，条件温和，利于操作。
（3）酶固定化后酶活稳定，转化时间短，转化率高，可达99%，且可连续使用，节约成本。
（4）终产品总收率达85%，且纯度高，杂质少，外标含量可达98.5%以上，具体数据见下表。
| 批次 | 酶解反应转化时间 | 酶解反应转化率 | 终产品总收率 | 终产品含量 |
| 1 | 2h | 99.38% | 86.94% | 98.53% |
| 2 | 3h | 99.43% | 86.01% | 98.66% |
| 3 | 3h | 99.26% | 86.25% | 98.57% |
| 4 | 3h | 99.18% | 87.67% | 98.55% |
| 5 | 4h | 99.34% | 87.11% | 98.57% |
| 6 | 4h | 99.28% | 87.52% | 98.68% |
| 7 | 5h | 99.16% | 86.50% | 98.62% |
| 8 | 5h | 99.24% | 88.28% | 98.76% |
| 9 | 5h | 99.08% | 89.63% | 99.02% |
| 10 | 5h | 99.13% | 88.55% | 99.43% |
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明；
图1是本发明的工艺流程简图；
图2是鸟氨酸与精氨酸对照品高效液相图谱；
图3是实施例1步骤（2）酶解反应中L-精氨酸转化率达99%时的高效液相图谱。
具体实施方式
本发明的实施例仅用来说明实现本发明的技术方案，这些实施方式并不对本发明构成进一步限定。本领域技术人员根据现有知识对本发明等同替换或相应的逻辑改进，均属于本发明的范围。以下实施例中，采用的高效液相色谱条件：色谱柱为氨基柱，5μm4.6×250mm；流动相：乙腈-0.1mol/L磷酸二氢钾缓冲液（60∶40）；流速：1.0ml/min；进样体积为20μl；检测波长：205nm；柱温：室温。
实施例1
（1）固定化酶的制备：超大孔聚苯乙烯微球，加去离子水洗涤后过滤作为载体；取L-精氨酸酶0.08g，加去离子水溶解至40ml，加入Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液20ml，搅拌升温至36℃±1℃，加入5.0g载体，搅拌18小时，过滤并用去离子水洗涤，即得固定化酶，4℃～8℃冷藏保存；超大孔聚苯乙烯微球平均粒径为100微米，孔隙率60%，比表面积34m2/g，交联度12%；Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液的浓度为0.1mol/L，pH9.0。
（2）配料、酶解反应：
配料：将L-精氨酸20g、硫酸锰40mg加入到60ml去离子水中，搅拌溶解，加6M盐酸调节pH值至8.5，补加去离子水使溶液体积为100ml，然后加入固定化酶4g。
酶解反应：控制酶解反应温度在30℃，及一定的搅拌，开始酶解反应，将L-精氨酸水溶液转化成L-鸟氨酸和尿素，2h取样检测，此后每1h取样检测L-精氨酸的残留，至L-精氨酸转化率大于99%时停止反应。转化率的检测按上述的高效液相色谱法进行，图2为鸟氨酸与精氨酸对照品高效液相图谱，图2中3.794min为鸟氨酸的峰，5.545min为精氨酸的峰；L-精氨酸转化率达99%时的高效液相图谱见图3所示，图3中3.818min为鸟氨酸的峰，5.519min为精氨酸的峰。反应结束后，过滤去除固定化酶（回收的固定化酶用去离子水洗涤过滤后可直接投入下一个批次的酶解反应中使用，或在4℃～8℃冷藏保存、备用），得到转化液。
（3）纯化：转化液分别通过732型强酸性阳离子交换树脂、717型强碱性阴离子交换树脂吸附、洗脱，去除杂离子和尿素，得到游离L-鸟氨酸溶液。
（4）成盐反应：游离L-鸟氨酸溶液中加入15gL-天门冬氨酸加热至40℃反应3h，真空浓缩至浓缩液中L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸含量300mg/ml时，加入767型活性炭2g在45℃下脱色30min，过滤后滤液保持40℃滴加甲醇进行结晶，析晶完全后冷至室温，过滤并回收母液得湿品，在60℃干燥5-8h得产品。
实施例2
（1）固定化酶的制备：超大孔聚苯乙烯微球，加去离子水洗涤后过滤作为载体；取L-精氨酸酶0.05g，加去离子水溶解至40ml，加入Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液20ml，搅拌升温至36℃±1℃，加入5.0g载体，搅拌20小时，过滤并用去离子水洗涤，即得固定化酶，4℃～8℃冷藏保存；超大孔聚苯乙烯微球平均粒径为200微米，孔隙率50%，比表面积40m2/g，交联度15%；Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液的浓度为0.05mol/L，pH8.5。
（2）配料、酶解反应：
配料：将L-精氨酸15g、硫酸锰22.5mg加入到60ml去离子水中，搅拌溶解，加6M盐酸调节pH值至8.5，补加去离子水使溶液体积为100ml，然后加入固定化酶4g。
酶解反应：控制酶解反应温度在30℃，及一定的搅拌，开始酶解反应，将L-精氨酸水溶液转化成L-鸟氨酸和尿素，2h取样检测，此后每1h取样检测L-精氨酸的残留，至L-精氨酸转化率大于99%时停止反应。转化率的检测按上述的高效液相色谱法进行。反应结束后，过滤去除固定化酶，得到转化液。
（3）纯化：转化液分别通过732型强酸性阳离子交换树脂、717型强碱性阴离子交换树脂吸附、洗脱，去除杂离子和尿素，得到游离L-鸟氨酸溶液。
（4）成盐反应：游离L-鸟氨酸溶液中加入11.5gL-天门冬氨酸加热至40℃反应3h，真空浓缩至浓缩液中L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸含量300mg/ml时，加入767型活性炭2g在35℃下脱色30min，过滤后滤液保持40℃滴加甲醇进行结晶，析晶完全后冷至室温，过滤并回收母液得湿品，在60℃干燥5-8h得产品。
实施例3
（1）固定化酶的制备：超大孔聚苯乙烯微球，加去离子水洗涤后过滤作为载体；取L-精氨酸酶0.06g，加去离子水溶解至40ml，加入Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液20ml，搅拌升温至36℃±1℃，加入5.0g载体，搅拌22小时，过滤并用去离子水洗涤，即得固定化酶，4℃～8℃冷藏保存；超大孔聚苯乙烯微球平均粒径为100微米，孔隙率60%，比表面积34m2/g，交联度12%；Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液的浓度为0.2mol/L，pH8.8。
（2）配料、酶解反应：
配料：将L-精氨酸10g、硫酸锰30mg加入到60ml去离子水中，搅拌溶解，加6M盐酸调节pH值至8.5，补加去离子水使溶液体积为100ml，然后加入固定化酶4g。
酶解反应：控制酶解反应温度在30℃，及一定的搅拌，开始酶解反应，将L-精氨酸水溶液转化成L-鸟氨酸和尿素，2h取样检测，此后每1h取样检测L-精氨酸的残留，至L-精氨酸转化率大于99%时停止反应。转化率的检测按上述的高效液相色谱法进行。反应结束后，过滤去除固定化酶，得到转化液。
（3）纯化：转化液分别通过732型强酸性阳离子交换树脂、717型强碱性阴离子交换树脂吸附、洗脱，去除杂离子和尿素，得到游离L-鸟氨酸溶液。
（4）成盐反应：游离L-鸟氨酸溶液中加入7.6gL-天门冬氨酸加热至40℃反应3h，真空浓缩至浓缩液中L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸含量300mg/ml时，加入767型活性炭2g在40℃下脱色30min，过滤后滤液保持40℃滴加甲醇进行结晶，析晶完全后冷至室温，过滤并回收母液得湿品，在60℃干燥5-8h得产品。
实施例4
（1）固定化酶的制备：超大孔聚苯乙烯微球，加去离子水洗涤后过滤作为载体；取L-精氨酸酶0.07g，加去离子水溶解至40ml，加入Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液20ml，搅拌升温至36℃±1℃，加入5.0g载体，搅拌19小时，过滤并用去离子水洗涤，即得固定化酶，4℃～8℃冷藏保存；超大孔聚苯乙烯微球平均粒径为100微米，孔隙率60%，比表面积34m2/g，交联度12%；Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液的浓度为0.15mol/L，pH9.0。
（2）配料、酶解反应：
配料：将L-精氨酸20g、醋酸锰60mg加入到60ml去离子水中，搅拌溶解，加2M硫酸调节pH值至8.3，补加去离子水使溶液体积为100ml，然后加入固定化酶4g。
酶解反应：控制酶解反应温度在35℃，及一定的搅拌，开始酶解反应，将L-精氨酸水溶液转化成L-鸟氨酸和尿素，2h取样检测，此后每1h取样检测L-精氨酸的残留，至L-精氨酸转化率大于99%时停止反应。转化率的检测按上述的高效液相色谱法进行。反应结束后，过滤去除固定化酶，得到转化液。
（3）纯化：转化液分别通过001×7型强酸性阳离子交换树脂、201×7型强碱性阴离子交换树脂吸附、洗脱，去除杂离子和尿素，得到游离L-鸟氨酸溶液。
（4）成盐反应：游离L-鸟氨酸溶液中加入15gL-天门冬氨酸加热至30℃反应4h，真空浓缩至浓缩液中L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸含量300mg/ml时，加入302型活性炭2g在45℃下脱色60min，过滤后滤液保持45℃滴加体积浓度95%乙醇进行结晶，析晶完全后冷至室温，过滤并回收母液得湿品，在60℃干燥5-8h得产品。
实施例5
（1）固定化酶的制备：超大孔聚苯乙烯微球，加去离子水洗涤后过滤作为载体；取L-精氨酸酶0.09g，加去离子水溶解至40ml，加入Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液20ml，搅拌升温至36℃±1℃，加入5.0g载体，搅拌24小时，过滤并用去离子水洗涤，即得固定化酶，4℃～8℃冷藏保存；超大孔聚苯乙烯微球平均粒径为100微米，孔隙率60%，比表面积34m2/g，交联度12%；Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液的浓度为0.1mol/L，pH8.9。
（2）配料、酶解反应：
配料：将L-精氨酸20g、醋酸锰30mg加入到60ml去离子水中，搅拌溶解，加6M盐酸调节pH值至8.7，补加去离子水使溶液体积为100ml，然后加入固定化酶4g。
酶解反应：控制酶解反应温度在25℃，及一定的搅拌，开始酶解反应，将L-精氨酸水溶液转化成L-鸟氨酸和尿素，2h取样检测，此后每1h取样检测L-精氨酸的残留，至L-精氨酸转化率大于99%时停止反应。转化率的检测按上述的高效液相色谱法进行。反应结束后，过滤去除固定化酶，得到转化液。
（3）纯化：转化液分别通过D001型强酸性阳离子交换树脂、D201型强碱性阴离子交换树脂吸附、洗脱，去除杂离子和尿素，得到游离L-鸟氨酸溶液。
（4）成盐反应：游离L-鸟氨酸溶液中加入15gL-天门冬氨酸加热至40℃反应2h，真空浓缩至浓缩液中L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸含量300mg/ml时，加入772型活性炭2g在35℃下脱色40min，过滤后滤液保持40℃滴加甲醇进行结晶，析晶完全后冷至室温，过滤并回收母液得湿品，在70℃干燥5-8h得产品。
实施例6
（1）固定化酶的制备：超大孔聚苯乙烯微球，加去离子水洗涤后过滤作为载体；取L-精氨酸酶0.1g，加去离子水溶解至40ml，加入Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液20ml，搅拌升温至36℃±1℃，加入5.0g载体，搅拌21小时，过滤并用去离子水洗涤，即得固定化酶，4℃～8℃冷藏保存；超大孔聚苯乙烯微球平均粒径为150微米，孔隙率70%，比表面积30m2/g，交联度10%；Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液的浓度为0.15mol/L，pH8.8。
（2）配料、酶解反应：
配料：将L-精氨酸20g、硫酸锰60mg加入到60ml去离子水中，搅拌溶解，加2M硫酸调节pH值至8.4，补加去离子水使溶液体积为100ml，然后加入固定化酶4g。
酶解反应：控制酶解反应温度在35℃，及一定的搅拌，开始酶解反应，将L-精氨酸水溶液转化成L-鸟氨酸和尿素，2h取样检测，此后每1h取样检测L-精氨酸的残留，至L-精氨酸转化率大于99%时停止反应。转化率的检测按上述的高效液相色谱法进行。反应结束后，过滤去除固定化酶，得到转化液。
（3）纯化：转化液分别通过732型强酸性阳离子交换树脂、717型强碱性阴离子交换树脂吸附、洗脱，去除杂离子和尿素，得到游离L-鸟氨酸溶液。
（4）成盐反应：游离L-鸟氨酸溶液中加入15gL-天门冬氨酸加热至35℃反应3h，真空浓缩至浓缩液中L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸含量300mg/ml时，加入767型活性炭2g在40℃下脱色50min，过滤后滤液保持35℃滴加丙酮进行结晶，析晶完全后冷至室温，过滤并回收母液得湿品，在50℃干燥5-8h得产品。
实施例1-6结果见下表：
| 编号 | 总收率（%） | 终产品含量（%，液相外标法） | 比旋光度[α]D 20 |
| 实施例1 | 86.9% | 99.0 | +27.1 |
| 实施例2 | 86.3% | 98.7 | +27.8 |
| 实施例3 | 86.7% | 98.8 | +27.9 |
| 实施例4 | 83.2% | 98.3 | +26.8 |
| 实施例5 | 81.8% | 97.9 | +26.3 |
| 实施例6 | 80.5% | 98.1 | +26.5 |
本发明方法反应条件温和，L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸收率高，且产品成本低、纯度高，易于实现工业化生产。
Claims (10)
1.一种L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）固定化酶的制备：用超大孔聚苯乙烯微球，加去离子水洗涤后过滤作为载体；将L-精氨酸酶固定于该载体上，得到固定化酶；
（2）配料、酶解反应：将L-精氨酸加入去离子水中，加入硫酸锰或醋酸锰作为催化剂，搅拌使溶解，再用盐酸或硫酸调节pH值至8.3-8.7，得到L-精氨酸溶液，然后加入步骤（1）中制得的固定化酶；进行酶解反应，将L-精氨酸水溶液转化成L-鸟氨酸和尿素，反应结束后过滤得到转化液；
（3）纯化：转化液分别通过强酸性阳离子交换树脂、强碱性阴离子交换树脂吸附、洗脱，去除杂离子和尿素，得到游离L-鸟氨酸溶液；
（4）成盐反应：游离L-鸟氨酸溶液中加入L-天门冬氨酸，成盐反应得到L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸溶液；
（5）脱色、结晶，制得产品。
2.根据权利要求１所述的L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸的制备方法，其特征在于所述步骤（1）中超大孔聚苯乙烯微球平均粒径为100～200微米，孔隙率50～70%，比表面积30～40m2/g，交联度10～15%。
3.根据权利要求１或2所述的L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸的制备方法，其特征在于，步骤（1）固定化酶的制备方法为：超大孔聚苯乙烯微球，加去离子水洗涤后过滤作为载体；取L-精氨酸酶0.05～0.1g，加去离子水溶解至40ml，加入Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液20ml，搅拌升温至36℃±1℃，加入5.0g载体，搅拌18～24小时，过滤并用去离子水洗涤，即得固定化酶，4℃～8℃冷藏保存；所述Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液的浓度为0.05～0.2mol/L，pH8.5～9.0。
4.根据权利要求１所述的L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸的制备方法，其特征在于，步骤（2）配料：得到的L-精氨酸溶液质量浓度为10～20%；催化剂的用量为L-精氨酸质量的0.15%-0.30%；固定化酶的用量为L-精氨酸质量的20-40%；酶解反应：控制酶解反应温度在25-35℃，搅拌2-10小时，将L-精氨酸水溶液转化成L-鸟氨酸和尿素，反应结束后过滤得到转化液。
5.根据权利要求１或4所述的L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸的制备方法，其特征在于，步骤（2）中催化剂为硫酸锰。
6.根据权利要求１或4所述的L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸的制备方法，其特征在于，步骤（2）中用盐酸调节溶液的pH值至8.5。
7.根据权利要求１或4所述的L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸的制备方法，其特征在于，步骤（2）中酶解反应温度为30℃。
8.根据权利要求１所述的L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸的制备方法，其特征在于，步骤（4）成盐反应：游离L-鸟氨酸溶液中加入L-天门冬氨酸，成盐反应得到L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸溶液；L-天门冬氨酸与L-精氨酸的摩尔比为1∶1；成盐反应温度30-40℃，成盐反应时间2–4h。
9.根据权利要求１所述的L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸的制备方法，其特征在于，步骤（3）中强酸性阳离子交换树脂的型号为001×7型、732型或D001型；强碱性阴离子交换树脂的型号为201×7型、717型或D201型。
10.根据权利要求9所述的L-天门冬氨酸-L-鸟氨酸的制备方法，其特征在于，步骤（3）中强酸性阳离子交换树脂的型号为732型；强碱性阴离子交换树脂的型号为717型。
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