CN105153091B - 提高显齿蛇葡萄中二氢杨梅素得率的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种提高显齿蛇葡萄中二氢杨梅素得率的方法，该方法首先将显齿蛇葡萄药材在温度为80～120℃条件下烘烤1～2h；粉碎得到显齿蛇葡萄粉末；再将显齿蛇葡萄粉末与乙醇混合均匀，超声提取，滤过得到二氢杨梅素提取液；最后将二氢杨梅素提取液置于减压浓缩，并置于低温环境下放冷析晶，滤过干燥，滤饼即为二氢杨梅素提取物。本发明采用高温烘干处理所得样品的二氢杨梅素的得率显著高于阴干样品和普通烘干样品，既避免了二氢杨梅素的代谢减失，又大大降低了提取成本，且操作简便、可行性强，是一种高效、经济提取二氢杨梅素的方法，能显著提高二氢杨梅素的生产效率，降低生产成本，促进中药资源的合理利用。

Description

提高显齿蛇葡萄中二氢杨梅素得率的方法

技术领域

本发明涉及中药有效成分提取技术领域，具体地指一种提高显齿蛇葡萄中二氢杨梅素得率的方法。

背景技术

显齿蛇葡萄(Ampelopsisgrossedentata)(Hand-Mazz)W.T.wang)为葡萄科蛇葡萄属多年生木质藤本植物，广泛分布于我国长江以南的湖南、湖北、贵州、广西、福建等地(中国高等植物图鉴(二册)补编,科学出版社,1983)。民间多采其幼嫩茎叶加工成类茶产品，俗称藤茶、茅岩莓茶、端午茶等。其味微甘、苦，性凉，具有清热解毒、利湿消肿、平肝降压、活血通络的功效，泡服用于治疗感冒发热、咽喉肿痛、小便淋痛等症(《全国中草药汇编》,第3版,王国强)。目前显齿蛇葡萄在福建、广西、湖南等地方中药材标准中均有收载。

二氢杨梅素(dihydromyricelin，DMY)是显齿蛇葡萄中最主要的功效成分，又名蛇葡萄素、白蔹素、福建茶素等，化学结构为3,5,7,3',4',5'-六羟基-2,3-双氢黄酮醇。现代药理研究表明，二氢杨梅素在抗肿瘤、抗炎、抗氧化、解酒护肝、抗病原微生物、降血糖、抗疲劳和调血脂等方面均表现出了良好的药理活性(中草药,2015,04:603-609；中国药理学通报,2008,05:626-630；梁婷,沈阳药科大学,2007；王江南,南昌大学,2014；张志坚,湖南师范大学,2006；中药药理与临床,2011,04:15-17；陈永畅,广西医科大学,2014；中药材,2014,06:1014-1020；山地农业生物学报,2012,03:247-249)，在医药、保健行业具有重要的应用价值，如：公开号为CN103269699A的中国发明专利公开了一种包括给予二氢杨梅素的治疗酒精中毒、酒精使用障碍以及酒精滥用的方法；公开号CN102775455A的中国发明专利公开了为一种治疗急慢性支气管炎的二氢杨梅素药物及其制备方法；公开号为CN102772398A的中国发明专利公开了一种二氢杨梅素在制备防治流感药物中的应用；公开号为CN103751173A的中国发明专利公开了一种二氢杨梅素在制备肝再生药物中的应用；公开号为CN103271901A的中国发明专利公开了一种二氢杨梅素在制备抗肝癌药物中的应用；公开号为CN1481790的中国发明专利公开了一种含有二氢杨梅素和杨梅素的组合物在制备降血脂的药物中的用途；公开号为CN101023942的中国发明专利公开了一种二氢杨梅素治疗心血管疾病的用途；公开号为CN103271901A的中国发明专利公开了一种含有二氢杨梅素和杨梅素的组合物在制备降血糖的药物中的用途。另外，二氢杨梅素作为一种天然防腐剂和免疫增强剂，在食品、畜牧、饲料等领域也有广阔的应用前景，如：公开号为CN104542940A的中国发明专利公开了一种鲜切根茎类蔬菜的保鲜方法；公开号为CN104585837A的中国发明专利公开了一种保护鱼油的天然复合抗氧化剂及其使用方法；公开号为CN103859000A的中国发明专利公开了一种天然生物复合防腐抗氧化剂及其制备和应用；公开号为CN103859000A的中国发明专利公开了一种饲料添加剂及其制备方法和应用。随着开发、应用研究的逐步推进，天然产物二氢杨梅素的市场需求量将会日益增大，甚至可能出现供不应求的局面。

二氢杨梅素结构式见结构式1。

目前二氢杨梅素人工合成的报道很少，申请号为201410071142.7的中国发明专利公开了一种天然活性产物二氢杨梅素的合成工艺，该方法以3,4,5-三羟基-苯丙烯酸酰氯和间苯三酚为原料，经过一系列化学反应得到二氢杨梅素全合成产品，所用原料多为有毒试剂，且反应步骤多，反应条件苛刻，距离环保、经济的合成路线仍有一定的差距，因此二氢杨梅素的市场供应仍以天然提取物为主。提取原料主要来自于葡萄科蛇葡萄属植物，如显齿蛇葡萄、大叶蛇葡萄、粤蛇葡萄等。其中显齿蛇葡萄分布最为广泛，分别收录入广西、福建和湖南等省的地方药材标准，是二氢杨梅素最重要的提取原料。

二氢杨梅素在显齿蛇葡萄鲜采样品中含量最高(曾维超,华中农业大学,2005；易海燕,湖南中医药大学,2011)，但鲜品水分多、体积大，为便于提取，鲜品常常需要干燥、粉碎处理。如：申请号为201010612340.1的中国发明专利公开了一种莓茶多种提取物的生产方法是将显齿蛇葡萄嫩茎藤叶干燥、粉碎；申请号为201010149014.1的中国发明专利公开了一种从藤茶中提取二氢杨梅素的方法是称取藤茶干叶，微波幅照处理后，粉碎；申请号为201310391546.X的中国发明专利公开了一种低温下综合提取藤茶中二氢杨梅素和多糖的方法，该方法将显齿蛇葡萄新鲜茎叶干燥粉碎后，以水为溶剂，采用超声法提取，二氢杨梅素粗产品得率为19％～23％；申请号为201010284838.X的中国发明专利公开了一种从藤茶中提取二氢杨梅素、藤茶多糖和藤茶多酚的方法，该方法是将新鲜藤茶茎叶干燥、粉碎，采用水浴浸提法提取，二氢杨梅素得率在11％左右。但上述提取专利并未对干燥工艺进行深入的研究，没有提及具体的干燥方式、干燥温度、干燥时间等。《中国药典》2010年版一部中“项目与要求”项下药材产地加工及炮制规定的干燥方法中规定，烘干、晒干、阴干均可的，用“干燥”。因此不排除上述提取原料自然阴干、晒干的可能性。光照可加速二氢杨梅素氧化(中国新药杂志,2007,16(22):1888-1890)，显齿蛇葡萄新鲜茎叶直接晒干可能会降低其二氢杨梅素含量；另外，低温烘干样品中二氢杨梅素的得率不高，苏素娇等将显齿蛇葡萄药材于40℃下干燥至恒重，粉碎后采用超声提取法，经星点设计-效应面法优化，二氢杨梅素的最大得率仅为10.80％(福建中医药大学学报,2013,01:28-30)。

二氢杨梅素除了从显齿蛇葡萄鲜品中提取外，也可以从显齿蛇葡萄的类茶加工产品—藤茶中提取。藤茶是显齿蛇葡萄茎叶经摊晾、杀青、揉捻、渥堆等一系列工序制备而成的，因加工步骤较多导致成品藤茶价格高于显齿蛇葡萄药材价格10倍以上，同时藤茶的加工水平不一、质量参差不齐，造成从成品藤茶中提取二氢杨梅素成本较高且无法保证其得率。申请号为201110093346.7的中国发明专利公开了一种藤茶中二氢杨梅素的制备方法，该方法以藤茶表面白霜的多少来挑选提取原料，但由于藤茶加工方法的不同，用白霜的多少来衡量二氢杨梅素含量的高低是有误差的。

从显齿蛇葡萄中提取二氢杨梅素常用的方法除了传统的浸泡、煎煮、回流提取外，也有微波提取、超声波提取和超临界流体萃取(广东农业科学,2013,19:90-93)。采用传统提取方法可以节省成本，也易于工业化大生产，但普遍存在提取时间长，提取效率不高的弊端。谢郁峰采用回流法提取二氢杨梅素时间达95min，得率只有9.85％(中国实验方剂学杂志,2012,17:46-49)。微波穿透力强，能够破碎细胞壁，杨玲等发现采用微波提取，提取效率可提高至直接热提法的1.5倍(杨玲,华南理工大学,2005)，但微波提取不方便控制如温度、功率等参数，从而可能影响有效成分的保护，已有试验证明微波提取温度过高时会导致二氢杨梅素的分解(广州化工,2007,01:21-23)。超临界流体萃取法选择性好，可在接近室温下完成整个分离操作，能最大限度地保持活性成分，采用该方法单次萃取可达样品中二氢杨梅素理论含量的84.3％(沈露,天津科技大学,2006)，但该方法设备投入大、运行成本高、规模化困难，目前多用于实验室研究，工业化生产较少使用。超声波具有增溶和细胞破碎作用，能在低温条件下实现快速、高效的提取，适用范围广，易实现自动控制。在40℃下超声波辅助65％乙醇溶剂提取40min，二氢杨梅素的首次得率可达理论含量的93.1％，优于常规的热提取法(食品与生物技术学报,2007,03:20-23)。申请号为201310391546.X的中国发明专利公开了一种低温下综合提取藤茶中二氢杨梅素和多糖的方法，该方法在60℃条件下用水超声提取20min，可以得到20％左右的二氢杨梅素粗品。

因此，提取二氢杨梅素既要考虑到提取原料来源(显齿蛇葡萄加工品藤茶或显齿蛇葡萄药材)的成本、质量，又要兼顾到提取方法的简便、高效。只有将两者有机的结合处理，才能从根本上降低二氢杨梅素的生产成本，提高生产效率，促进中药资源的合理利用。

发明内容

本发明针对目前显齿蛇葡萄中二氢杨梅素提取成本高、效率低的问题，提供一种提高显齿蛇葡萄中二氢杨梅素得率的方法，该方法以未加工的显齿蛇葡萄茎叶为原料，采用该方法提取二氢杨梅素，其效率较自然阴干、普通烘干样品高出许多，避免了二氢杨梅素的代谢减失，并大大降低了提取成本，做到了二氢杨梅素的高效、经济提取，将对满足二氢杨梅素的市场供应和降低二氢杨梅素的原料价格产生深远的影响，具有重要的现实意义。

为解决上述技术问题，本发明提供的一种提高显齿蛇葡萄中二氢杨梅素得率的方法，包括以下步骤：

1)将显齿蛇葡萄药材在温度为80～120℃条件下烘烤1～2h；

2)将烘干处理的显齿蛇葡萄粉碎，过30～50目筛，得到显齿蛇葡萄粉末；

3)按重量体积比为1︰10～50g/mL将显齿蛇葡萄粉末与乙醇溶液混合均匀，超声提取20～60min，滤过得到二氢杨梅素提取液；

4)将步骤3)制备得到二氢杨梅素提取液置于温度为40～60℃下减压浓缩，回收乙醇至无醇味，用沸水溶解，置于4℃低温环境下放冷析晶，滤过干燥，滤饼即为二氢杨梅素提取物，其纯度大于80％。

进一步地，所述步骤1)中，烘烤温度为100～120℃，烘烤时间为1～1.5h。

再进一步地，所述步骤3)中，乙醇溶液的体积分数为75～95％。

再进一步地，所述步骤3)中，显齿蛇葡萄粉末与乙醇溶液的重量体积比为1︰20～40g/mL。

本发明的理论基础

1、显齿蛇葡萄鲜品不同处理后二氢杨梅素的提取研究

6月中旬于显齿蛇葡萄园实验园地里采摘鲜叶，平均分成4份，一份自然阴干，其余3份分别经80、100、120℃烘干，其中80℃烘干时间为2h，100烘干时间为1.5h，120℃烘干时间为1h。取上述不同处理显齿蛇葡萄干品粉碎，过40目筛，各取100g，加入2000mL75％乙醇溶液，超声提取30min，滤过，将滤液转移到旋转蒸发仪，于50℃水浴中减压浓缩，回收乙醇至无醇味，加1000mL沸水分次振荡溶解，溶液置4℃环境下至黄绿色晶体不再析出，滤过，60℃烘干滤饼，得二氢杨梅素提取物，经HPLC测定提取物中二氢杨梅素的纯度，计算出二氢杨梅素的含量，除以提取所用的显齿蛇葡萄重量即得到二氢杨梅素的得率(得率＝(提取物的量×纯度)/原料量)。具体数据见表1。

表1显齿蛇葡萄鲜叶处理后提取实验数据

注：DMY含量＝提取物量×提取物纯度；DMY得率＝(提取物量×提取物纯度)/原料量×100％。

从表1数据可以看出，显齿蛇葡萄鲜叶经阴干、加工、烘干处理后二氢杨梅素的得率差别较大，由高到低顺序依次为：120℃烘干品＞100℃烘干品＞80℃烘干品＞阴干品，80～120℃烘干样品中二氢杨梅素得率高出阴干样品2.7～4.3倍。说明高温烘干对显齿蛇葡萄鲜品中二氢杨梅素能够起到保护和提升的作用，而长时间的自然阴干过程则会使二氢杨梅素持续地减损。推测可能是因为高温破坏了药材中二氢杨梅素相关代谢酶的活性，阻止了二氢杨梅素的代谢损失。

2、显齿蛇葡萄阴干样品高温烘干后提取研究

取6、7月间从重庆酉阳、湖南衡阳、广西柳州采收的显齿蛇葡萄部分阴干叶，置100℃烘箱中烘烤干燥1h。将3个产地的显齿蛇葡萄阴干叶、100℃烘干叶粉碎，过40目筛，各称取100g，加入2000mL95％的乙醇溶液，超声提取30min，滤过，将滤液转移到旋转蒸发仪，50℃水浴中减压浓缩，回收乙醇至无醇味，加沸水溶解，置于4℃环境下放冷，至黄绿色晶体不再析出，滤过，取滤饼60℃烘干，得二氢杨梅素粗提取物。经HPLC测定提取物中二氢杨梅素的纯度，计算出二氢杨梅素的得率。具体实验数据见表2。

表2多个产地显齿蛇葡萄阴干叶高温烘烤后提取实验数据

注：*原料中DMY测定量是指采用统一提取方法和统一测定方法得到的各个产地显齿蛇葡萄中DMY的含量，以方便比较。

**DMY含量＝提取物量×提取物纯度；DMY得率＝(提取物量×提取物纯度)/原料量×100％。

从结果中可以看成重庆、衡阳、柳州3个多个产地的显齿蛇葡萄阴干叶中二氢杨梅素含量高低不一，但经100℃烘烤干燥后其含量均有了不同幅度的提升，进而使提取得率增加，最高者得率从6.97％增加至12.04％，增幅达72.74％。说明高温烘干处理对显齿蛇葡萄阴干品中二氢杨梅素的得率仍具有一定的提升作用。

中药的主要药效成分多为次生代谢产物，其生成和累积常受到环境胁迫的影响，环境胁迫因素主要有干旱、水涝、热害、冻害、风害、重金属毒害、盐碱、病虫害、有害微生物等(中国中药杂志,2007,04:277-280)。胁迫环境除了伴随在药材的生长期中，也出现在采收后的炮制加工环节里，进行炮制时干燥过程尤为关键。周铜水课题组已证实丹参中丹酚酸类活性成分是采后干燥胁迫诱导的产物(安徽医药,2013,11:1863-1866)。显齿蛇葡萄鲜品中二氢杨梅素含量最高，在采收后的自然放置过程中其含量会持续下降，而适时的中高温处理会阻止这种现象的发生与发展；对阴干样品进一步中高温处理后，二氢杨梅素的含量也会有所增加。理论推测，温度因素会影响显齿蛇葡萄植株中相关代谢酶的活性，从而对二氢杨梅素的生成、代谢起到胁迫作用。

显齿蛇葡萄主要生长在海拔300-1500米的山区，除遗传因素外，显齿蛇葡萄中DMY的含有量与海拔高度呈正相关，即海拔越高DMY含有量越高(中成药,2014,36(1):145-147)。因此，本发明中来自不同产地显齿蛇葡萄中DMY含有量存在高低不同的差异，本发明为方便比较研究，采用同一提取和测定方法测定了不同产地显齿蛇葡萄中DMY的相对含量(无法保证100％提取)。结果表明本发明所述方法的提取效率均在83％以上，与文献报道相似，但显齿蛇葡萄鲜品或阴干品采用本发明所述的80～120℃烘干处理后，不同产地显齿蛇葡萄中DMY的相对含量均有一定程度的提升，在提取效率与文献报道相似情况下，DMY得率自然会比未经高温烘干直接提取的得率高，总之，本发明利用胁迫原理，有效避免了样品采收后在放置过程中二氢杨梅素的代谢损失，显齿蛇葡萄药材的产地或DMY含量高低都不会影响到本发明所述方法提高DMY得率的作用。

综上所述，本发明所述方法简便易行，无论提取用显齿蛇葡萄药材是何产地、DMY含量高低不一，采用提取前高温烘干后进行提取的方法，二氢杨梅素的得率都较同法但未采用高温烘干的DMY得率要高出数个百分点，是一种高效、经济提取显齿蛇葡萄中二氢杨梅素的新方法。采用该方法提取二氢杨梅素，将大大降低提取成本，提高提取得率，既能提升二氢杨梅素的市场供应量，又能充分促进中药资源的合理利用，具有重要的现实意义。

本发明的有益效果在于：

本发明采用高温烘干处理所得样品的二氢杨梅素的得率显著高于阴干样品和普通烘干样品，既避免了二氢杨梅素的代谢减失，又大大降低了提取成本，且操作简便、可行性强，是一种高效、经济提取二氢杨梅素的方法，能显著提高二氢杨梅素的生产效率，降低生产成本，促进中药资源的合理利用。

具体实施方式

为了更好地解释本发明，以下结合具体实施例进一步阐明本发明的主要内容，但本发明的内容不仅仅局限于以下实施例。

实施例1

提高显齿蛇葡萄中二氢杨梅素得率的方法，包括以下步骤：

1)采摘湖北武汉显齿蛇葡萄实验园地里的鲜叶，并将显齿蛇葡萄叶子在温度为80℃条件下烘烤2h；

2)将烘干处理的显齿蛇葡萄粉碎，过40目筛，得到显齿蛇葡萄粉末，备用；

3)称取100g的显齿蛇葡萄粉末加入到2000mL体积分数为75％的乙醇溶液中，超声提取30min，滤过得到二氢杨梅素提取液；

4)将步骤3)制备得到二氢杨梅素提取液置于旋转蒸发仪中，温度为50℃水浴中减压浓缩，回收乙醇至无醇味，加1000mL沸水溶解，置于4℃低温环境下放冷析晶，滤过，60℃烘干滤饼即为二氢杨梅素提取物1，质量为13.44g，二氢杨梅素纯度为84.17％，得率为11.31％。

实施例2

提高显齿蛇葡萄中二氢杨梅素得率的方法，包括以下步骤：

1)采摘湖北武汉显齿蛇葡萄实验园地里的鲜叶，并将显齿蛇葡萄叶子在温度为100℃条件下烘烤1.5h；

2)将烘干处理的显齿蛇葡萄粉碎，过40目筛，得到显齿蛇葡萄粉末，备用；

3)称取100g的显齿蛇葡萄粉末加入到2000mL体积分数为75％的乙醇溶液中，超声提取30min，滤过得到二氢杨梅素提取液；

4)将步骤3)制备得到二氢杨梅素提取液置于旋转蒸发仪中，温度为50℃水浴中减压浓缩，回收乙醇至无醇味，加1000mL沸水溶解，置于4℃低温环境下放冷析晶，滤过，60℃烘干滤饼即为二氢杨梅素提取物2，质量为18.27g，二氢杨梅素纯度为85.82％，得率为15.68％。

实施例3

提高显齿蛇葡萄中二氢杨梅素得率的方法，包括以下步骤：

1)采摘湖北武汉显齿蛇葡萄园实验地里的鲜叶，并将显齿蛇葡萄叶子在温度为120℃条件下烘烤1h；

2)将烘干处理的显齿蛇葡萄粉碎，过40目筛，得到显齿蛇葡萄粉末，备用；

3)称取100g的显齿蛇葡萄粉末加入到2000mL体积分数为75％的乙醇溶液中，超声提取30min，滤过得到二氢杨梅素提取液；

4)将步骤3)制备得到二氢杨梅素提取液置于旋转蒸发仪中，温度为50℃水浴中减压浓缩，回收乙醇至无醇味，加1000mL沸水溶解，置于4℃低温环境下放冷析晶，滤过，60℃烘干滤饼即为二氢杨梅素提取物3，质量为19.53g，二氢杨梅素纯度为83.51％，得率为16.31％。

实施例4

提高显齿蛇葡萄中二氢杨梅素得率的方法，包括以下步骤：

1)采摘重庆酉阳显齿蛇葡萄鲜叶，并将显齿蛇葡萄叶在温度为80℃条件下烘烤1h；

2)将烘干处理的显齿蛇葡萄粉碎，过40目筛，得到显齿蛇葡萄粉末，备用；

3)称取100g的显齿蛇葡萄粉末加入到2000mL体积分数为95％的乙醇溶液中，超声提取30min，滤过得到二氢杨梅素提取液；

4)将步骤3)制备得到二氢杨梅素提取液置于旋转蒸发仪中，温度为50℃水浴中减压浓缩，回收乙醇至无醇味，加1000mL沸水溶解，置于4℃低温环境下放冷析晶，滤过，60℃烘干滤饼即为二氢杨梅素提取物4，质量为29.63g，二氢杨梅素纯度为87.27％，得率为25.86％。

实施例5

提高显齿蛇葡萄中二氢杨梅素得率的方法，包括以下步骤：

1)采摘重庆酉阳显齿蛇葡萄鲜叶，并将显齿蛇葡萄叶在温度为100℃条件下烘烤1h；

2)将取烘干处理的显齿蛇葡萄粉碎，过40目筛，得到显齿蛇葡萄粉末，备用；

3)称取100g的显齿蛇葡萄粉末加入到2000mL体积分数为95％的乙醇溶液中，超声提取30min，滤过得到二氢杨梅素提取液；

4)将步骤3)制备得到二氢杨梅素提取液置于旋转蒸发仪中，温度为50℃水浴中减压浓缩，回收乙醇至无醇味，加1000mL沸水溶解，置于4℃低温环境下放冷析晶，滤过，60℃烘干滤饼即为二氢杨梅素提取物5，质量为29.81g，二氢杨梅素纯度为87.16％，得率为25.98％。

实施例6

提高显齿蛇葡萄中二氢杨梅素得率的方法，包括以下步骤：

1)采摘广西柳州显齿蛇葡萄鲜叶，并将显齿蛇葡萄叶子在温度为80℃条件下烘烤为1h；

2)将烘干处理的显齿蛇葡萄粉碎，过40目筛，得到显齿蛇葡萄粉末，备用；

3)称取100g的显齿蛇葡萄粉末加入到2000mL体积分数为95％的乙醇溶液中，超声提取30min，滤过得到二氢杨梅素提取液；

4)将步骤3)制备得到二氢杨梅素提取液置于旋转蒸发仪中，温度为50℃水浴中减压浓缩，回收乙醇至无醇味，加1000mL沸水溶解，置于4℃低温环境下放冷析晶，滤过，60℃烘干滤饼即为二氢杨梅素提取物6，质量为19.10g，二氢杨梅素纯度为82.17％，得率为15.69％。

实施例7

提高显齿蛇葡萄中二氢杨梅素得率的方法，包括以下步骤：

1)采摘广西柳州显齿蛇葡萄鲜叶，并将显齿蛇葡萄叶子在温度为100℃条件下烘烤为2h；

2)将烘干处理的显齿蛇葡萄粉碎，过50目筛，得到显齿蛇葡萄粉末，备用；

3)称取100g的显齿蛇葡萄粉末加入到5000mL体积分数为95％的乙醇溶液中，超声提取50min，滤过得到二氢杨梅素提取液；

4)将步骤3)制备得到二氢杨梅素提取液置于旋转蒸发仪中，温度为60℃水浴中减压浓缩，回收乙醇至无醇味，加1000mL沸水溶解，置于4℃低温环境下放冷析晶，滤过，60℃烘干滤饼即为二氢杨梅素提取物7，质量为19.84g，二氢杨梅素纯度为83.64％，得率为16.59％。

实施例8

提高显齿蛇葡萄中二氢杨梅素得率的方法，包括以下步骤：

1)采摘广西柳州显齿蛇葡萄鲜叶，并将显齿蛇葡萄叶子在温度为120℃条件下烘烤为2h；

2)将取烘干处理的显齿蛇葡萄粉碎，过30目筛，得到显齿蛇葡萄粉末，备用；

3)称取100g的显齿蛇葡萄粉末加入到1000mL体积分数为80％的乙醇溶液中，超声提取20min，滤过得到二氢杨梅素提取液；

4)将步骤3)制备得到二氢杨梅素提取液置于旋转蒸发仪中，温度为40℃水浴中减压浓缩，回收乙醇至无醇味，加1000mL沸水溶解，置于4℃低温环境下放冷析晶，滤过，60℃烘干滤饼即为二氢杨梅素提取物8，质量为19.96g，二氢杨梅素纯度为83.20％，得率为16.61％。

其它未详细说明的部分均为现有技术。尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

Claims (1)

1.一种提高显齿蛇葡萄中二氢杨梅素得率的方法，其特征在于：由以下步骤组成：1)采摘重庆酉阳显齿蛇葡萄鲜叶，并将显齿蛇葡萄叶在温度为100℃条件下烘烤1h；

2)将取烘干处理的显齿蛇葡萄粉碎，过40目筛，得到显齿蛇葡萄粉末，备用；

3)称取100g的显齿蛇葡萄粉末加入到2000mL体积分数为95％的乙醇溶液中，超声提取30min，滤过得到二氢杨梅素提取液；

4)将步骤3)制备得到二氢杨梅素提取液置于旋转蒸发仪中，温度为50℃水浴中减压浓缩，回收乙醇至无醇味，加1000mL沸水溶解，置于4℃低温环境下放冷析晶，滤过，60℃烘干滤饼即为二氢杨梅素提取物。