CN105147964A - 一种含玫瑰花的治疗阿尔茨海默症的中药组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药技术领域,具体提供一种含玫瑰花的治疗阿尔茨海默症的中药组合物及其应用。所述中药组合物包括玫瑰花、黄芪、山药、知母、葛根、五味子、天花粉、鸡内金。该中药组合物对秀丽隐杆线虫阿尔茨海默症病理模型具有显著的治疗作用,可在制备治疗阿尔茨海默症的药物中应用。
Description
技术领域
本发明属中药技术领域,具体涉及一种中药组合物及其制备方法和应用。
背景技术
阿尔茨海默症(Alzheimer'sdisease,AD),是一种以进行性认知障碍和记忆损伤为主的神经系统退行性疾病,是老年痴呆症最常见的一种形式。临床上以记忆障碍、失语、失认、视空间技能损害、执行功能障碍以及人格和行为改变等全面性痴呆表现为特征。随着我国老龄化程度的加剧,AD会成为影响老年人健康的主要疾病之一,有效预防和治疗AD成为摆在我们面前的又一重大课题。
现代医学对AD的发病机制进行了多年的研究,但是由于其病因复杂,该病的发病机制至今仍不明确,“Aβ级联假说”是当前被科学界广为接受的机制之一。该学说认为患者大脑中异常沉积的Aβ通过自由基反应、线粒体氧化损伤和炎症反应等一系列级联反应,直接或者间接作用于神经元和神经胶质细胞,最终导致神经元功能异常或者死亡,引发认知损伤及记忆衰退,最终引起痴呆。在家族性阿尔茨海默病症患者中发现淀粉样前体蛋白(APP)基因和早老素基因发生突变,导致Aβ在大脑的过度表达成为该学说最为有力的证据。因此β淀粉样蛋白已成为公认的筛选抗AD药物靶标。
目前主要的抗阿尔茨海默病药物乙酰胆碱酯酶抑制剂(如加兰他敏)和N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA受体)拮抗剂(如美金刚),但上述药物价格昂贵,服药后幻觉、意识混沌、头晕、头痛和疲倦等副作用显著,且只能控制却不能逆转患者病情。
目前西药针对AD的某一特定病理环节进行干预往往会出现耐药及严重不良反应。而中药组合物具有多种活性组分、多靶点的特征,使得从中药组合物宝库中筛选用于治疗AD的药物候选物前景广阔。
秀丽隐杆线虫(Caenorhabditiselegans)是一个非常有用的多功能药物筛选和药物作用机制的研究平台。它廉价、易培养;世代周期短、后代数目多,同时可获得大量背景一致的个体,保证实验重复性和采用大样本量进行实验,从而排除个体差异的影响;与高等生物在基因和分子通路方面高度保守(KalettaandHengartner,2006)。它作为一个从细胞体外水平药物初筛到小鼠体内水平药物复筛的一个桥梁,越来越受到药学家的青睐。美国devGen公司利用人源化线虫筛选的抗心律不齐药物已被FDA批准进入临床研究。
人源化秀丽隐杆线虫AD病理模型的建立是将人源Aβ1-42基因转入肌球蛋白启动子下游并受温度控制表达,该线虫株系可在15℃正常生长,当转移至25℃条件下Aβ1-42表达并在其肌肉内累积,导致线虫失去运动能力而麻痹。加入受试药物可延缓肌肉麻痹表型,其结果以肌肉麻痹线虫数量占受试线虫群体数量的百分比表示。未麻痹线虫比率越高,药物抗AD效果越显著。这一模型早已被用于抗AD疾病发生机制和抗AD药物及候选物作用机制研究(Link,1995;2001)。
因此,本发明现提供一种中药组合物,该中药组合物可显著延缓秀丽隐杆线虫AD病理模型的麻痹表型,提示本发明所述中药组合物具有治疗阿尔茨海默症的潜力,可在制备治疗阿尔茨海默症的药物中应用。
参考文献
KalettaT,HengartnerMO.Findingfunctioninnoveltargets:C.elegansasamodelorganism.NatRevDrugDiscov2006,5:387e398.
LinkCD.Expressionofhumanbeta-amyloidpeptideintransgenicCaenorhabditiselegans.ProcNatlAcadSciUSA1995,92:9368e9372.
LinkCD.Transgenicinvertebratemodelsofage-associatedneurodegenerativediseases.MechAgeingDev2001,122:1639e1649.
发明内容
本发明目的是提供一种中药组合物,该中药组合物具有治疗阿尔茨海默症的潜力。
本发明的另一个目的是提供上述中药组合物的应用。
本发明所述的上述目的是通过以下技术方案实现的:
一种中药组合物,所述中药组合物含有玫瑰花、黄芪、山药、知母、葛根、五味子、天花粉、鸡内金。
上述中药组合物含有下述重量比的原料药:玫瑰花4-15份、黄芪1.9-15份、山药3.7-30份、知母2.2-18份、葛根0.6-5份、五味子1.1-9份、天花粉1.1-9份、鸡内金0.8-6份。
该中药组合物作为药效成分的药物制剂为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液、丸剂。
上述中药组合物可在制备治疗阿尔茨海默症的药物中应用。
上述中药组合物可在制备预防阿尔茨海默症的保健品中应用。
加上保健品
本发明的有益效果是:
本发明以秀丽隐杆线虫AD病理模型进行实验,结果表明:该中药组合物对秀丽隐杆线虫AD病理模型具有显著的治疗作用。可以显著延缓秀丽隐杆线虫AD病理模型的麻痹表型,提示该中药组合物具有治疗阿尔茨海默症的潜力,可在制备治疗阿尔茨海默症的药物中应用。
下面结合具体实施例进一步详细描述本发明的技术方案,但本发明的保护范围不局限于以下所述。
附图说明
图1中药组合物延缓AD秀丽隐杆线虫麻痹的作用优于单用玫瑰花
Control-空白对照组,RoseL-低浓度玫瑰花组,RoseM-中浓度玫瑰花组,RoseH-高浓度玫瑰花组,M-中浓度玉液汤组,ZHW-中药组合物组(为M引入RoseL)
图2中药组合物延缓AD秀丽隐杆线虫麻痹的作用优于单用玉液汤
L-低浓度玉液汤组,M-中浓度玉液汤组,H-高浓度玉液汤组,ZHW-中药组合物组(为M引入RoseH)
图3中药组合物延缓AD秀丽隐杆线虫麻痹的作用优于单用五味子
WWZ-L-低浓度五味子组,WWZ-H-高浓度五味子组,M-中浓度玉液汤组,ZHW-中药组合物组(为M引入RoseL)。
具体实施方式
实施例1中药组合物的制备方法
中药组合物含有下述重量比的原料药:玫瑰花2g,黄芪30g、山药60g、知母36g、葛根10g、五味子18g、天花粉18g、鸡内金12g,加水3000mL,加热至沸腾并保持30分钟,定容至1000mL,过滤除菌,滤液备用。
中药组合物含有下述重量比的原料药:玫瑰花8g、黄芪30g、山药60g、知母36g、葛根10g、五味子18g、天花粉18g、鸡内金12g,水3000mL,加热至沸腾并保持30分钟,定容至1000mL,过滤除菌,滤液备用。
实施例2中药组合物对AD秀丽隐杆线虫的治疗作用
1.生物材料
(1)秀丽隐杆线虫CL4176购自CaenorhabditisGeneticsCenter(CGC);为转基因品系,在25℃温度诱导下肌肉特异性表达人类Aβ1-42,Aβ1-42在肌肉组织聚集,最终导致线虫麻痹,本实施例采用秀丽线虫品系CL4176作为筛选抗AD药物的病理模型。
(2)大肠杆菌OP50(尿嘧啶渗漏突变株),购自CaenorhabditisGeneticsCenter(CGC),作为秀丽隐杆线虫的食物。
2.试剂
(1)固体NGM(NematodeGrowthMedium)培养基成分与制作(以1升为例):
固体NGM培养基配制好后,121℃下高压恒温灭菌20min,在无菌操作台下加入5mg/mL胆固醇1mL,1MMgSO41mL,1MCaCl21mL摇匀,趁热倒入已灭菌的9cm培养板,约20mL/板。静置等待培养基凝固,备用。
(2)M9液配方
(3)裂解液的配制:6.4%NaClO溶液和1MNaOH溶液按体积比1:1混合。
3.配制含有中药组合物的NGM平板
取中药组合物,加入NGM培养基中,静置等待培养基凝固。在培养基上均匀涂布大肠杆菌OP50作为线虫的食物。
4.实施步骤
(1)线虫的培养:
将线虫接在涂有大肠杆菌OP50的固体NGM板上,然后置于16℃的培养箱中培养,当线虫长到成虫时进行同步化处理。
(2)线虫同步化:
挑选含有大量成虫并且有部分线虫卵已经孵出的NGM培养基,用M9液将线虫从培养基上冲下,转移到离心管中,静置使线虫自由沉降至管底,弃上清。视线虫量多少向离心管中加入线虫碱裂解液,在漩祸搅拌器上振荡5-7分钟待线虫全部断裂时停止涡旋,并分装于1.5mL离心管中,用M9溶液洗线虫卵三次。
(3)实验组设置
空白对照组(Control):无菌水。
中药组合物组(ZHW):玫瑰花8g、黄芪30g、山药60g、知母36g、葛根10g、五味子18g、天花粉18g、鸡内金12g,水3000mL,加热至沸腾并保持30分钟,定容至1000mL,过滤除菌,滤液备用。
高浓度玉液汤组(H):黄芪60g、山药120g、知母72g、葛根20g、五味子36g、天花粉36g、鸡内金24g,水3000mL,加热至沸腾并保持30分钟,定容至1000mL,过滤除菌,滤液备用。
中浓度玉液汤组(M):黄芪30g、山药60g、知母36g、葛根10g、五味子18g、天花粉18g、鸡内金12g,水3000mL,加热至沸腾并保持30分钟,定容至1000mL,过滤除菌,滤液备用。
低浓度玉液汤组(L):黄芪15g、山药30g、知母18g、葛根5g、五味子9g、天花粉9g、鸡内金6g,水3000mL,加热至沸腾并保持30分钟,定容至1000mL,过滤除菌,滤液备用。
高浓度玫瑰花组(RoseH):玫瑰花8g,水3000mL,加热至沸腾并保持30分钟,定容至1000mL,过滤除菌,滤液备用。
中浓度玫瑰花组(RoseM):玫瑰花4g,水3000mL,加热至沸腾并保持30分钟,定容至1000mL,过滤除菌,滤液备用。
低浓度玫瑰花组(RoseL):玫瑰花2g,水3000mL,加热至沸腾并保持30分钟,定容至1000mL,过滤除菌,滤液备用。
低浓度五味子组(WWZ-L):五味子9g,水3000mL,加热至沸腾并保持30分钟,定容至1000mL,过滤除菌,滤液备用。
高浓度五味子组(WWZ-H):五味子36g,水3000mL,加热至沸腾并保持30分钟,定容至1000mL,过滤除菌,滤液备用。
(4)实验步骤
1.取20μl上述不同浓度的中药组合物加入180μl无菌水,得到稀释后的中药组合物,将稀释后的中药组合物与1.8mL的NGM培养基混合,倒NGM平板一个(直径=3.5cm),空白组用无菌水替代中药组合物。在上述培养基上涂布OP50,再取同步化的线虫卵分别转移到上述培养基上,每个培养皿60条线虫,每个药物浓度设置三个平行,16℃培养3天至L3期。
为了使线虫表达Aβ,将L3期线虫放置在25℃下进行诱导,34h后开始计数线虫麻痹条数。每两小时计数一次,直至所有线虫都麻痹(麻痹是指机械刺激线虫身体时,线虫不能运动或者只有头部运动)。
(5)实验结果
图中纵坐标表示没有麻痹的秀丽隐杆线虫占的百分比,在同一个时间点,此值越大,表明该处理组中没有麻痹的秀丽隐杆线虫比例越大,即药物延缓麻痹的作用越强。
玫瑰花剂量依赖地对AD线虫具有治疗作用,但是高浓度显示对线虫生长具有抑制作用,其他浓度对线虫生长无影响。本发明提供的中药组合物抗AD效果显著优于玫瑰花。(图1)
玉液汤组依赖地对AD线虫具有治疗作用,本发明提供的中药组合物抗AD效果显著优于玉液汤。(图2)
五味子对AD线虫也具有显著的治疗作用,但是当浓度增加一倍,其作用效果反而下降,本发明提供的中药组合物抗AD效果显著优于五味子。(图3)
通过以上实施例证明,本发明提供的中药组合物对AD秀丽隐杆线虫具有显著的治疗作用,提示本发明提供的中药组合物具有治疗阿尔茨海默症潜力,可在制备治疗阿尔茨海默症的药物中应用。该中药组合物可以制备成胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液、丸剂任一剂型,这是本领域研究人员可以理解的。
Claims (5)
1.一种中药组合物,其特征在于,所述中药组合物含有玫瑰花、黄芪、山药、知母、葛根、五味子、天花粉、鸡内金。
2.如权利要求1所述的一种中药组合物,其特征在于,所述中药组物含有下述重量比的原料药:玫瑰花4-15份、黄芪1.9-15份、山药3.7-30份、知母2.2-18份、葛根0.6-5份、五味子1.1-9份、天花粉1.1-9份、鸡内金0.8-6份。
3.如权利要求1-2任意一项所述的一种中药组合物,其特征在于,该中药组合物作为药效成分的药物制剂为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液、丸剂。
4.如权利要求1-2任意一项所述的中药组合物在制备治疗阿尔茨海默症的药物中的应用。
5.如权利要求1-2任意一项所述的中药组合物在制备预防阿尔茨海默症的保健品中的应用。
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