CN105125510A - 一种抗体偶联的介孔二氧化硅/米非司酮纳米制剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种抗体偶联的介孔二氧化硅/米非司酮纳米制剂及其制备方法和应用。该制剂包含介孔二氧化硅纳米粒子（MSN）、米非司酮（MIF）和上皮细胞粘附分子抗体（anti-EpCAM，aE），所述MSN负载MIF，所述aE共价修饰于MSN的表面。本发明的抗体偶联的介孔二氧化硅/米非司酮纳米制剂，不仅可靶向识别并遏制循环肿瘤细胞（CTCs）的活性，还能抑制CTCs与血管内膜间的粘附，干扰肿瘤转移进程，显著遏制肿瘤转移。

Description

一种抗体偶联的介孔二氧化硅/米非司酮纳米制剂

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种抗体偶联的介孔二氧化硅/米非司酮纳米制剂及其制备方法和应用。

背景技术

肿瘤转移是肿瘤难以治愈和复发的主要原因之一。原发肿瘤可通过手术切除、放射治疗或其他局部治疗加以有效控制甚至治愈，但已播散的肿瘤用上述手段治疗往往难以控制病情的进一步发展。肿瘤转移是由一系列级联步骤组成：（1）原发性肿瘤细胞侵袭邻近的细胞外基质和间质细胞层；（2）侵及血管壁；（3）穿入脉管系统；（4）在远端组织粘附和着床；（5）离开循环到周围间质组织；（6）适应新环境形成微转移灶；（7）增殖为肉眼可见的继发性肿瘤。

由原发性肿瘤所释放进入外周血循环的肿瘤细胞，即所谓的循环肿瘤细胞（CirculatingTumorCells,CTCs）在恶性肿瘤转移过程中的作用日益受到关注。CTCs可在循环系统中（包括骨髓和淋巴系统）长期以低活性或休眠状态存在。由于其低活性（或休眠），所以化疗药物对其不敏感，也由于其在手术后的亚健康人体内含量很低，所以化疗药物对其都不起作用。与正常血液细胞相比，循环肿瘤细胞具有抗原特性，其表面存在丰富的生物标记物如EpCAM、SialyLewis、Ki-67、CD44+、HER2、和FolateReceptor等，这些物质可在肿瘤细胞表面高度表达，而在正常细胞表面低量表达或不表达。

米非司酮（mifepristone，MIF）临床上广泛用于紧急避孕，终止早期妊娠和引产。其作用过程为：在蜕膜中竞争性结合孕激素受体使蜕膜细胞坏死，蜕膜，子宫肌收缩，绒毛组织剥离，分宫颈扩张，导致流产，从而达到终止妊娠的目的。由于肿瘤的发生和生长过程在很多方面和胚胎的早期发育过程具有相似性，因此早期的研究者推测MIF可能也具有抗肿瘤的作用。近年来越来越多的研究表明，MIF已经证明在多种癌细胞中具有抑制细胞增殖的作用，如乳腺癌，子宫内膜癌，宫颈癌，前列腺癌，胃癌，脑癌，骨癌，卵巢癌，以及多种动物模型中发挥抑制肿瘤细胞生长和抗肿瘤的作用，且可以作为一种温和的抗肿瘤药物应用在临床实验中。

介孔二氧化硅纳米颗粒（MSN）以其独特的优势在药物递送等领域得到广泛应用。作为药物输送载体在肿瘤治疗中的应用。MSN具有较高的表面积和孔体积，因此药物负载量较大，甚至可超过35wt.％，大大超越现有的绝大多数载药纳米粒。此外，MSN可作为肿瘤靶向纳米药物输送载体。利用渗透新生血管和滞留增强效应（EPR效应，EnhancedPermeabilityandRetentionEffect），通过改变MSN外形尺寸，使MSN载药系统易于从高通透性且不完整的肿瘤毛细血管网中渗出，进入肿瘤组织间隙，而难于透过正常血管，从而实现药物输送，增加了高毒性药物在肿瘤组织中的蓄积量，增长滞留时间。因此，调节MSN颗粒直径大小，利用EPR效应，可实现MSN载药系统被动靶向肿瘤组织释放药物的目的。MSN载药系统还可通过修饰靶向分子实现对肿瘤的主动靶向。将对肿瘤细胞有特异性识别作用的配体连接在MSN外壳上，可将药物准确、有效地输送到靶细胞或病变部位，从而实现MSN载药系统主动靶向的目的。

检索国内外相关文献和专利结果表明，到目前为止，还没有一个药物能特异性靶向CTCs并调控CTCs的活性，以达到预防并抑制微转移的目的。面对这个科技空白，本发明人利用MSN为药物载体，包载低毒性抗肿瘤药物米非司酮，并在其表面修饰上能特异性识别CTCs的上皮细胞粘附分子抗体（anti-EpCAM，aE），制备一种能特异性识别并调控CTCs活性的纳米制剂（aE-MSN-M）用于防治肿瘤转移。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种能特异性识别并调控CTCs活性的纳米制剂（aE-MSN-M）用于防治肿瘤转移。

为达到上述目的，本发明采取了如下技术方案：

一种抗体偶联的介孔二氧化硅/米非司酮纳米制剂包含介孔二氧化硅纳米粒（MSN）、米非司酮（MIF）和上皮细胞粘附分子抗体（anti-EpCAM，aE）（购自Abcam公司，单克隆抗体，IgG型），所述MSN负载MIF，所述aE共价修饰于MSN的表面。

一种制备如上所述的抗体偶联的介孔二氧化硅/米非司酮纳米制剂的方法为：先制备空白MSN，将MSN表面羟基基团进行羧基化处理后，再将米非司酮物理吸附于其孔道结构中，然后再将aE共价偶联到MSN表面，得aE-MSN-M纳米制剂。

所述的抗体偶联的介孔二氧化硅/米非司酮纳米制剂的制备方法包括以下步骤：

（1）将三乙醇胺（TEA）溶液加入到十六烷基三甲基氯化铵（CTAC）水溶液中，加入四乙基硅烷（TEOS），得空白MSN。

（2）将3-氨丙基三乙氧基硅烷（APTES）和丁二酸酐于乙醇溶液中反应24h后，加入空白MSN，继续搅拌24h。离心，所得沉淀用无水乙醇和二次水反复高速离心洗涤数次，冷冻干燥，即得羧基化修饰的MSN。

（3）将羧基化MSN加入米非司酮的乙醇溶液，搅拌48h后离心，得载米非司酮的介孔二氧化硅纳米粒（MSN-M）。

（4）将MSN-M分散于2-（N-吗啉）乙磺酸（MES）缓冲液中，磁力搅拌至分散均匀，加入1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）常温搅拌2h后，加入抗体aE继续常温搅拌2h。高速离心，所得沉淀用PBS缓冲液洗涤2-3次，冷冻干燥即得aE-MSN-M固体粉末。

步骤（1）中得到的空白MSN的粒径为100~500nm，孔径为2.5~8nm。

步骤（3）中米非司酮和MSN的投料质量比为1:10~5:1，得到的MSN-M的载药量为100~400mg米非司酮/gMSN。

步骤（4）中抗体aE和MSN-M的投料质量比为1:1000~1:50，得到的aE-MSN-M的粒径为100~800nm。

本发明的作用原理是：第一，采用羧基化的MSN作为米非司酮的载体材料，通过物理吸附及电荷相互作用的方式使米非司酮负载到MSN的孔道结构中，并分散在水溶液中，解决米非司酮水溶性差的问题；第二，通过共价偶联的方式将aE修饰于MSN表面，可主动靶向识别过表达有上皮细胞粘附分子的肿瘤细胞特别是血液中的CTCs，使该纳米制剂能选择性作用于CTCs；第三，该纳米制剂中的aE能抑制CTCs的活性，且纳米制剂中的米非司酮可跟aE协同抑制CTCs粘附到血管内膜，阻止微转移灶的形成，防治肿瘤转移。

本发明的有益效果是：

（1）本发明选用MSN作为药物载体，负载能干扰肿瘤细胞粘附于血管内膜的药物MIF，并与能特异性识别CTCs的aE共价偶联，形成的aE-MSN-M具有纳米尺度，可携带药物高度分散在水相中，不仅能主动靶向识别CTCs，还能抑制CTCs的活性，且有效阻止CTCs粘附到血管内膜，阻断微转移灶的形成，防治肿瘤转移；

（2）本发明的aE-MSN-M纳米制剂的粒径小于800nm，不会形成给药栓塞，可用于患者的静脉给药，能够在血液循环中特异性识别并抑制肿瘤细胞，从而达到防治肿瘤转移的目的。

附图说明

图1是本发明所制备的抗体偶联的介孔二氧化硅/米非司酮纳米制剂的TEM图（A），粒径分布图（B），氮气吸附-解吸等温线及孔径分布图（C），和药物释放图（D）；

图2是本发明所制备的抗体偶联的介孔二氧化硅/米非司酮纳米制剂对循环肿瘤细胞的特异性识别情况。

图3是本发明所制备的抗体偶联的介孔二氧化硅/米非司酮纳米制剂对循环肿瘤细胞的特异性抑制情况，**P＜0.01。

图4是本发明所制备的抗体偶联的介孔二氧化硅/米非司酮纳米制剂干扰循环肿瘤细胞粘附于血管内膜情况，*P＜0.05，**P＜0.01，##P＜0.01。

图5是本发明所制备的抗体偶联的介孔二氧化硅/米非司酮纳米制剂抑制模型动物肿瘤转移效果图，**P＜0.01。

具体实施方式

下面，将通过实施例，对本发明进行进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例，在本发明权利要求所阐明的范围内，可进行各种改变或等同替换。

实施例1

（1）量取20mL超纯水于50mL圆底烧瓶中，加入2.0g十六烷基三甲基氯化铵（CTAC），室温搅拌至完全溶解，加入0.02mg三乙醇胺（TEA），于95℃油浴恒温加热冷凝搅拌1h。随后逐滴滴加1.5mL四乙基硅烷（TEOS），继续于95℃油浴恒温加热冷凝搅拌1h。将样品冷却至室温，用无水乙醇高速离心洗涤3-4次以除去残留的反应试剂。然后收集样品于20mL的洗涤溶剂中（0.2g氯化钠溶于20mL甲醇）室温搅拌3h，用甲醇高速离心洗涤。重复上述洗涤步骤3-4次以除去模板剂CTAC。冷冻干燥，即得白色MSN固体粉末。

（2）量取2.5mL3-氨丙基三乙氧基硅烷（APTES）和75mg丁二酸酐于20mL无水乙醇中，常温搅拌24h。随后加入100mgMSN继续常温搅拌24h，将高速离心所得沉淀依次用无水乙醇和二次水反复高速离心洗涤数次，冷冻干燥，即得白色羧基化修饰的MSN-COOH固体粉末。

（3）称取MIF12mg溶于无水乙醇中，配制成浓度为1mg/mL。取上述MIF溶液于25mL的圆底烧瓶中，加入20mgMSN-COOH，常温搅拌48h。12000rpm离心5min收集上清液，PBS缓冲液洗涤2-3遍，冷冻干燥即得MSN-M固体粉末。

（4）称取2mgMSN-M于1mLMES缓冲液中，磁力搅拌至分散均匀，配制成1mg/mL的分散液。取上述MSN-M分散液100μL和500μLMES于5mL圆底烧瓶中，加入10mgEDC，5mgNHS常温搅拌2h，加入10μLaEpCAM继续常温搅拌2h，将高速离心所得沉淀PBS缓冲液洗涤2-3次，冷冻干燥即得aE-MSN-M固体粉末。对其进行透射电镜（TEM）和动态光散射（DLS）表征，结果见图1（A）和（B）。图1（C）为氮气吸附-解吸等温线及孔径分布图，由图可知，MSN表现出介孔二氧化硅纳米粒典型的Ⅳ型等温吸附-解吸曲线，在低相对分压区间P/P₀=0.2-0.4范围内出现毛细凝聚现象，说明MSN具有孔径结构并且孔径分布较均一。

（5）体外释放实验：分别选取不同pH值（5.5，7.4）的含1%乙醇的PBS缓冲液作为释放溶剂，考察MSN-M的体外释放行为。使用pH7.4的PBS缓冲液将MSN-M配制成终浓度为1mg/mL的分散液。然后取上述分散液1mL于透析袋（MWCO=14000）中，并将透析袋置于装有100mLPBS缓冲液（pH值分别为5.5和7.4）的烧杯中，于37℃恒温搅拌，每间隔一定时间进行取样，采用高效液相色谱法测定和通过差减法计算出MIF的各个时间点的累积释放量。两组各去三个平行样本，取平均值。图1（D）为不同的pH值条件下，MSN-M载药纳米粒释放MIF的曲线。pH值对药物的释放有很大影响，在pH7.4的生理条件下药物释放量较低，释放速度快，在8h达到65%左右，这是因为在生理环境中，MSN-COOH的羧基与MIF分子存在静电吸附，使得MIF不易从MSN-COOH孔道中释放出来；而在pH5.5的酸性环境中，药物的释放量在5h即能释放85%，释放速度快，释放量多，这主要是因为在酸性环境中存在较多的带有正电荷的氢离子，氢离子于MSN-COOH上的羧基结合，使羧基质子化，从而与MIF的吸附能力减弱，促进MIF的释放。

（6）为进行肿瘤细胞特异性识别实验，需对MSN进行荧光标记。量取5μLAPTES和100μL（1mg/mL）异硫氰酸荧光素（FITC）于5mL圆底烧瓶中，常温避光搅拌24h。随后加入5mgMSN-COOH继续常温避光搅拌24h，将高速离心所得沉淀依次用无水乙醇和二次水反复高速离心洗涤数次，冷冻干燥，即得黄色F-MSN固体粉末。称取2mgF-MSN于1mLMES缓冲液中，磁力搅拌至分散均匀，配制成1mg/mL的分散液。取上述MSN-COOH分散液100μL和500μLMES于5mL圆底烧瓶中，加入5mg1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC），10mgN-羟基琥珀酰亚胺（NHS）常温搅拌2h，加入10μLaEpCAM继续常温搅拌2h，将高速离心所得沉淀PBS缓冲液洗涤2-3次，冷冻干燥即得aE-F-MSN固体粉末。

（7）CTCs特异性识别实验：采用模拟CTCs的模型和流式细胞术考察F-MSN和aE-F-MSN的细胞摄取情况。取志愿者新鲜全血1mL装与抗凝管中，加入10mL生理盐水，稀释后备用。选取对数期生长且状态良好的HT-29和SW620结肠癌细胞，经胰蛋白酶消化后，使用Hoechst荧光染料常温避光染色30min。充分染色后将细胞悬液于离心机中1500rpm离心5min，吸弃上清液，用PBS缓冲液洗涤2次，加入培养基将细胞吹打均匀，配制成细胞悬液备用。将上述血液和结肠癌细胞悬液共2mL接种到6孔板中，使每孔中含有3×10⁵个结肠癌细胞。加入预先配制好的F-MSN和aE-F-MSN，终浓度为100μg/mL。在培养箱中振荡孵育2h，以免结肠癌细胞贴壁。取出培养板，将培养孔中的细胞液转移到离心管中，用Hank’s缓冲液洗涤3次，2000rpm离心5min，去除上清液，再次加入1mLPBS缓冲液，吹打均匀，在1500rpm，5min的条件下离心，吸除上清液，用400μLPBS缓冲液重新悬浮细胞。用流式细胞仪在激发波长488nm和663nm波长处检测，每个样品的细胞计数为10⁴个，利用流式软件分析平均荧光强度。结果见图2。结果显示，在体外模拟悬浮CTCs模型中，结肠癌细胞对aE-F-MSN的摄取量高于对F-MSN的摄取量，说明F-MSN能被体外模拟CTCs模型中的结肠癌细胞摄取，同时aE-F-MSN能够在血液环境中，依靠偶联的aEpCAM介导靶向到循环的结肠癌细胞中。

（8）CTCs特异性抑制实验：建立一种模拟悬浮CTCs模型，并采用MTT法测试多功能MSN对结肠癌细胞活性的调控。取志愿者新鲜全血1mL装与抗凝管中，加入10mL生理盐水，稀释后备用。选取对数期生长且状态良好的HT-29和SW620结肠癌细胞，经胰蛋白酶消化后，配制成结肠癌细胞悬液备用。将上述血液样本和结肠癌细胞转移到多个离心管中，使红细胞与结肠癌细胞的比例约为1000:1。加入预先配置好的不同浓度梯度纳米粒子（MSN-COOH、MSN-M、aE-MSN和aE-MSN-M），终浓度分别为25μg/mL，50μg/mL，100μg/mL，150μg/mL，200μg/mL，在震荡培养箱中孵育2h。取出离心管，用Hank’s缓冲液洗涤3次，2000rpm离心5min，去除上清液，再次加入1mLPBS缓冲液，吹打均匀，在1500rpm，5min的条件下离心，吸除上清液，用400μL培养基重新悬浮细胞。将上述细胞接种到96孔板中，使每孔中约含有10³个结肠癌细胞，设置5个复孔，另设溶剂对照组和空白对照组，在培养箱中孵育2h。取出培养板，小心吸弃旧培养基及未贴壁血细胞，并于每孔中加入100μL新培养基，在培养箱中孵育48h。小心吸弃旧培养基，并于每孔中加入100μL无血清、无酚红的1640培养基和10μLMTT溶液（已稀释），继续培养箱中孵育4h。小心吸弃各孔中的培养基，并加入溶液150μL于各孔中，常温低速振荡摇匀10min，使蓝紫色结晶全部溶解，用多功能酶标仪于570nm波长处测定各孔的OD值，计算细胞的存活率。结果见图3。结果显示，MSN-COOH和MSN-M对体外模拟悬浮CTCs模型中结肠癌细胞均无明显的毒性，细胞存活率在90%以上。说明该浓度梯度的空白载体和MIF对结肠癌细胞无毒性；aE-MSN和aE-MSN-M在低浓度（小于100μg/mL）时对结肠癌细胞无明显毒性，在高浓度时（大于100μg/mL）对结肠癌细胞有显著的调控作用，且在整体的浓度梯度下随着浓度的增大对细胞的毒性也越大。说明在模拟血液环境中，aE-MSN和aE-MSN-M仍能调控血液中结肠癌细胞的活性。

（9）抑制CTCs粘附于血管内膜实验：选用IL-1β刺激HUVECs中细胞粘附分子的表达，以增加其粘附癌细胞的能力。用荧光显微镜法考察MSN-COOH、MSN-M、aE-MSN和aE-MSN-M对结肠癌细胞与HUVECs间粘附的影响。选取对数期生长且状态良好的HUVECs，经胰蛋白酶消化后，配成细胞悬液。于每孔500μL接种到24孔板，置于37℃，5%CO2培养箱中培养，使其生长到覆盖率达到80%-90%时，吸弃旧培养基，用PBS缓冲液洗涤一次，再于每孔加入500μLM199培养基（含刺激因子IL-1β，浓度为1ng/mL），另设空白对照组和阴性对照组，置于37℃，5%CO2培养箱中继续孵育4h，以激活HUVECs。在此期间将对数期生长且状态良好的结肠癌细胞用胰酶溶液消化后，配成细胞悬液。于离心机中1500rpm离心5min，吸弃上清液，加入1mLPBS缓冲液吹打均匀，加入10μL罗丹明123溶液并充分混匀，室温下避光染色20min。充分染色后将细胞悬液于离心机中1500rpm离心5min，吸弃上清液，用PBS缓冲液洗涤2次，加入1mL无酚红RPMI1640培养基将细胞吹打均匀，用血球计数板计数，配成浓度为3×106个/mL的细胞悬液。用无酚红RPMI1640培养基配制不同纳米粒子的分散液，吸弃旧培养基，于每孔450μL上述纳米粒子的分散液和50μL结肠癌细胞悬液加入到24孔板内，纳米粒子的终浓度为100μg/mL，结肠癌细胞个数为15000个/孔。设置阴性对照组和空白对照组，培养箱内继续孵育1h，整个过程均避光操作。小心吸弃旧培养基，用PBS缓冲液轻轻洗涤2次以去除未粘附的结肠癌细胞，加入500μL无酚红的1640培养基至每孔中，使用荧光倒置显微镜拍照，每孔随机选取10个视野，统计平均粘附细胞数。结果见图4。结果表明，MSN-COOH空白载体对结肠癌细胞粘附于HUVECs的几乎没有作用；MSN-M和aE-MSN中的MIF和aEpCAM均有一定的抑制作用；当二者同时存在时，即当aE-MSN-M作用时，对结肠癌粘附于HUVECs具有明显的抑制效果。

（10）动物体内抑制肿瘤转移活性实验：选取对数期生长且状态良好的结肠癌细胞SW620，经胰蛋白酶消化后，生理盐水洗涤3次，用血球计数板计数，并加入生理盐水配制成细胞悬液，使得细胞浓度为1.5×107个/mL。常温无菌环境放置备用。用生理盐水将现合成的纳米药物MSN-COOH和aE-MSN-M配制成浓度为8mg/mL的分散液，室温环境保存备用。

将实验用裸小鼠每组5只，随机分成三组：空白对照组、MSN-COOH实验组和aE-MSN-M实验组。将上述配制的SW620细胞悬液经尾静脉注射，每组裸小鼠注射200μL约含3×10⁶个SW620细胞。1h后在MSN-COOH实验组和aE-MSN-M实验组分别根据裸鼠体重按40mg/kg的剂量经尾静脉注射MSN-COOH和aE-MSN-M分散液至裸鼠体内，在空白组中注射相当体积的生理盐水作为对照。各组实验裸鼠在给药22天后，处死，取出完整的肺肝组织，经布氏液染色后观察肺内转移结节数。并将肺组织在福尔马林溶液中保存进行石蜡包埋和切片，并按下式计算肿瘤负荷。结果见图5。结果显示，空白组裸鼠肺部出现微小的转移结节，说明裸鼠体内已出现SW620肺转移；MSN-COOH实验组裸鼠也能观察到肿瘤转移的结节，证明本实验组裸鼠也出现SW620肺转移，同时也说明MSN-COOH不能抑制肿瘤的肺转移；aE-MSN-M实验组的裸鼠肺部组织表面观察不到肿瘤的结节，则说明该纳米粒可能具有抑制SW620肺转移的作用。根据肺组织切片中肿瘤所占整个切片的面积比例，发现空白对照组和MSN-COOH实验组中肿瘤所占整个肺切片面积比例分别在8.5±0.8%和8.2±1.1%，二者相差无几，在aE-MSN-M实验组肿瘤所占比例为0.5±0.1%，通过与空白实验组相比，具有显著性差异。因此我们从病理切片的结果也能进一步的证实aE-MSN-M具有抑制肿瘤肺转移的作用。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (9)

1.一种抗体偶联的介孔二氧化硅/米非司酮纳米制剂，其特征在于：包含介孔二氧化硅纳米粒子MSN、米非司酮MIF和上皮细胞粘附分子抗体aE；所述MSN负载MIF，所述aE共价修饰于MSN的表面。

2.一种制备如权利要求1所述的抗体偶联的介孔二氧化硅/米非司酮纳米制剂的方法，其特征在于：先制备空白MSN，将MSN表面羟基基团进行羧基化处理后，再将MIF包埋于其孔道结构中，然后再将aE共价偶联到MSN表面，制得aE-MSN-M纳米制剂。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）在十六烷基三甲基氯化铵溶液中加入三乙醇胺和四乙基硅烷，得空白MSN；

（2）在乙醇中加入3-氨丙基三乙氧基硅烷和丁二酸酐，反应24h，加入空白MSN，继续搅拌24h；离心，所得沉淀用无水乙醇和二次水反复高速离心洗涤，冷冻干燥，得羧基化MSN；

（3）将羧基化MSN加入米非司酮的乙醇溶液中，搅拌48h，离心，得载米非司酮的介孔二氧化硅纳米粒子MSN-M；

（4）将MSN-M分散于2-（N-吗啉）乙磺酸缓冲液中，磁力搅拌使之分散均匀，加入1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，常温搅拌2h，加入抗体aE，继续常温搅拌2h，高速离心，所得沉淀用PBS缓冲液洗涤2-3次，冷冻干燥，得aE-MSN-M纳米制剂。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤（1）中得到的空白MSN的粒径为100~500nm，孔径为2.5~8nm。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤（3）中米非司酮和MSN的投料质量比为1:10~5:1。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤（3）中得到的MSN-M的载药量为100~400mg米非司酮/gMSN。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤（4）中抗体aE和MSN-M的投料质量比为1:1000~1:50。

8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤（4）中得到的aE-MSN-M的粒径为100~800nm。

9.如权利要求1所述的抗体偶联的介孔二氧化硅/米非司酮纳米制剂在制备预防和治疗肿瘤转移药物中的应用。