CN107884250A - 一种基于细胞计数板的染脱色方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种生物医学领域常用的染脱色方法，尤其涉及一种用于细胞或细菌的染色及脱色方法，采用标本在离心管(可根据标本体积选择合适容量的离心管)中染脱色，每次离心去除废液，废液收集消毒后弃去，染色后样品定量加入一次性细胞计数板中，树脂密封进样孔，镜检。该方法考虑到标本定量、结果重复性、生物安全性，同时具有操作简便、易行。本发明的染脱色方法能广泛的应用于病理分析、临床细胞学检验、癌症筛查、细菌镜检等生命科学研究和临床应用领域。
Description
技术领域
本发明涉及一种生物医学领域常用的染脱色方法，具体涉及一种基于细胞计数板的染脱色方法。
背景技术
如图1所示，目前，为了更好的识别细胞或细菌，实验人员会对细胞或细菌进行染色和脱色处理(以下简称染脱色)。实验室常用的染脱色步骤如下：
1、涂片：
1)涂片目的：
a)将标本摊成极薄的液膜，增大与载玻片的接触面积，防止标本脱落；
b)增大染料的接触面积，便于染色；
c)方便显微镜观察。
2)涂片方法：
a)细菌涂片：用灼烧灭菌冷却后的接种环挑取少量菌体与水充分混匀,滴到载玻片上，涂成极薄的菌膜。或直接将标本涂敷到载玻片上；
b)细胞涂片：将细胞悬液滴到载玻片上，离心摊片或涂成极薄的液膜；
2、干燥：可自然晾干,或将涂片置于火焰高处微热烘干,但不能直接在火焰上烘烤；
3、固定：手执玻片一端,有液膜的一面朝上,迅速通过火焰2-3次(用手指触涂片反面,以不烫手为宜)；
4、染色：加适量(以盖满液膜为度)染色液A,染N分钟；
5、清洗：用水冲洗至流下的水中无染色液的颜色时为止；
如需复染，重复染色和清洗步骤；
6、干燥：可自然晾干,或将涂片置于火焰高处微热烘干；
7、盖片：加盖玻片(防止镜检时污染显微镜物镜)或树脂密封；
8、镜检：显微镜观察。
此染脱色方法的优点：
1、不依赖实验设备，只需要酒精灯，无需借助其他仪器设备可完全手工操作；
2、方便快捷：
此染脱色方法存在的问题：
1、标本存在固定不牢固而脱落的风险；
2、标本存在被清洗时清洗脱落的风险；
3、涂片的厚度不均匀，造成镜检时图像明暗不均匀，图像模糊；
4、废液收集难度大，高传染性标本不易控制生物安全性；
5、高度依赖实验人员的经验；
6、实验的重复性不高，从标本的取样、染液和洗脱液的用量、涂片的面积及厚度，到实验人员的经验，均对结果造成影响；
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种基于细胞计数板的染脱色方法，采用标本在离心管(可根据标本体积选择合适容量的离心管)中染脱色，每次离心去除废液，废液收集消毒后弃去，染色后样品定量加入一次性细胞计数板中，树脂密封进样孔，镜检。
该方法考虑到标本定量、结果重复性、生物安全性，同时具有操作简便、易行。增加了定量移液器和离心机的使用。
本发明是通过以下技术方案来实现的：一种基于细胞计数板的染脱色方法，具体操作步骤如下：
步骤一、标本收集：可根据标本体积选择合适容量的离心管收集标本；
步骤二、染色：用移液器定量加染色液A，X ul到离心管中，染N分钟；
步骤三、一次离心：根据标本种类选择合适的离心力和离心时间；
步骤四、清洗：弃染色液上清，用移液器定量加清洗液到离心管中，混匀；
步骤五、二次离心：根据标本种类选择合适的离心力和离心时间；
步骤六、待检标本：弃清洗液上清，用移液器定量加水，根据标本不同，选择合适的缓冲液，混匀，悬浮待检标本；
步骤七、如需复染，重复染色、一次离心以及清洗步骤；
步骤八、制片：将染色后的待检标本用移液器定量加入到一次性细胞计数板；染脱色后的标本是以悬浮状态被密封到0.1mm高度的一次性计数板腔体窄缝中，样品的面积和体积固定，便于浓度定量；
步骤九、封口：使用树脂将一次性细胞计数板的进出样品口密封；
步骤十、镜检：标本进入一次性计数板腔体后，在重力作用下，标本经过静置，能很好的沉降到一次性细胞计数板的底部，镜检时，标本的焦平面固定，便于观察；
步骤十一、销毁：使用后的一次性细胞计数板可存放一定时间，最终按生物安全标准焚烧彻底销毁；
作为优选的技术方案，一次性细胞计数板有单孔、双孔、十孔，样品腔高度0.1mm，样品腔两端有进样孔和出样孔，或者使用玻璃的血细胞计数板、尿沉渣计数板。
作为优选的技术方案，染色剂和脱色剂可以多次更换。
本发明的有益效果是：
1、标本不需要固定到载玻片上；
2、染脱色过程不是在载玻片上完成，而是在闭合的离心管中进行；
3、制片后的标本是以悬浮状态被密封到0.1mm高度的窄缝中，样品的面积和体积固定，便于浓度定量。在重力作用下，标本(不论是细胞还是细菌)经过静置，能很好的沉降到一次性细胞计数板的底部，镜检时，标本的焦平面固定，便于观察；
4、操作过程中使用移液器定量，实验结果可重复性提高；
5、减少对实验人员经验的依赖；
6、提高生物安全的防护，对实验人员及实验室安全是有利的；
7、减少环境污染，使用塑料的一次性细胞计数板可以彻底的焚烧销毁，不留下固形物，而玻璃的载玻片在使用后不能彻底销毁，作为实验室使用后的医疗垃圾，玻璃载玻片不能被重新利用，造成环境污染；
8、本发明的染脱色方法能广泛的应用于病理分析、临床细胞学检验、癌症筛查、细菌镜检等生命科学研究和临床应用领域。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实验室常用的染脱色步骤示意图；
图2为基于细胞计数板的染脱色方法示意图。
具体实施方式
本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
本说明书(包括任何附加权利要求、摘要和附图)中公开的任一特征，除非特别叙述，均可被其他等效或具有类似目的的替代特征加以替换。即，除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子而已。
如图2所示，实施例一(革兰氏染色)：
1、标本：50ul菌悬液加入到0.5ml离心管中；
2、初染：
1)用移液器取50ul结晶紫染液加入到离心管中；
2)混匀，染1min；
3)离心；
4)弃上清:用移液器移去上清；
3、媒染:
1)用移液器取50ul碘染液加入到离心管中；
2)混匀，染1min；
3)离心；
4)弃上清:用移液器移去上清；
4、脱色：
1)用移液器取50ul 95％乙醇加入到离心管中；
2)混匀，脱色1min；
3)离心；
4)弃上清:用移液器移去上清；
5、复染：
1)用移液器取50ul番红复染液加入到离心管中；
2)混匀，染1min；
3)离心；
4)弃上清:用移液器移去上清；
6、待测标本：
1)用移液器取50ul水加入到离心管中；
2)混匀，待用；
7、制片：
用移液器取50ul待测标本加入到一次性细胞计数板中；
8、封片：用树脂将一次性细胞计数片的进样口和出样口密封；
镜检：观察结果。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书所限定的保护范围为准。
Claims (3)
1.一种基于细胞计数板的染脱色方法，其特征在于，具体操作步骤如下：
步骤一、标本收集：可根据标本体积选择合适容量的离心管收集标本；
步骤二、染色：用移液器定量加染色液A，X ul到离心管中，染N分钟；
步骤三、一次离心：根据标本种类选择合适的离心力和离心时间；
步骤四、清洗：弃染色液上清，用移液器定量加清洗液到离心管中，混匀；
步骤五、二次离心：根据标本种类选择合适的离心力和离心时间；
步骤六、待检标本：弃清洗液上清，用移液器定量加水，根据标本不同，选择合适的缓冲液，混匀，悬浮待检标本；
步骤七、如需复染，重复染色、一次离心以及清洗步骤；
步骤八、制片：将染色后的待检标本用移液器定量加入到一次性细胞计数板；染脱色后的标本是以悬浮状态被密封到0.1mm高度的一次性计数板腔体窄缝中，样品的面积和体积固定，便于浓度定量；
步骤九、封口：使用树脂将一次性细胞计数板的进出样品口密封；
步骤十、镜检：标本进入一次性计数板腔体后，在重力作用下，标本经过静置，能很好的沉降到一次性细胞计数板的底部，镜检时，标本的焦平面固定，便于观察；
步骤十一、销毁：使用后的一次性细胞计数板可存放一定时间，最终按生物安全标准焚烧彻底销毁。
2.如权利要求1所述的基于细胞计数板的染脱色方法，其特征在于：一次性细胞计数板有单孔、双孔、十孔，样品腔高度0.1mm，样品腔两端有进样孔和出样孔，或者使用玻璃的血细胞计数板、尿沉渣计数板。
3.如权利要求1所述的基于细胞计数板的染脱色方法，其特征在于：染色剂和脱色剂可以多次更换。
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