CN105092752B - 一种用液相色谱法分离盐酸洛拉曲克及有关物质的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种用液相色谱法分离盐酸洛拉曲克及有关物质的方法,该方法为高效液相色谱法。本发明提供的方法,可以完成针对盐酸洛拉曲克及其12个有关物质的有效分离,可以对盐酸洛拉曲克可能存在的有关物质杂质进行全面的检测及控制,也可用于盐酸洛拉曲克及其有关物质的准确定量。
Description
技术领域
本发明属于药物分析技术领域,具体涉及盐酸洛拉曲克及其有关物质的分离方法。
背景技术
盐酸洛拉曲克是一种新的胸苷酸合成酶抑制剂(thymidylate synthaseInhibitor,TSI),又名盐酸诺拉曲塞,最早由美国的Agouron制药公司开发,是全新的非经典型的胸苷酸合成酶抑制剂。国外尚未上市。
作为国家一类抗癌新药——注射用盐酸洛拉曲克,是新一代抗肿瘤药物,为非经典型结构叶酸类胸苷酸合成酶抑制剂,属于细胞毒类抗肿瘤药,能够干扰肿瘤细胞DNA合成,阻止细胞分裂增殖而发挥抗癌作用。该药具有水溶性好,在体内不易蓄积,不易导致肾毒性,毒副反应轻且恢复快,不易产生耐药性等优点。
盐酸洛拉曲克的化学名称为:2-氨基-3,4-二氢-6-甲基-4-酮-5-(4-吡啶巯基)-喹唑啉二盐酸盐;分子式为:C14H12N4OS·2HCl;结构式为:
在药物的制备和贮存过程中,需要对合成工艺中可能产生的杂质和降解杂质进行监测。由于这类杂质的化学结构一般与活性成分类似或具渊源关系,故又称为有关物质。因此,实现盐酸洛拉曲克及其有关物质的分离,在盐酸洛拉曲克的合成和制剂过程的质量控制方面具有重要的现实意义。
专利文献CN200510084232.0公开了盐酸洛拉曲克的合成工艺。通过对盐酸洛拉曲克的合成路线进行分析可知,需控制的杂质体系包括:合成路线的起始物料、中间体、原料药生产过程中可能产生的工艺副产物杂质及其降解杂质,共计12个杂质。相应杂质命名为杂质Ⅰ-杂质Ⅻ,结构式分别为:
盐酸洛拉曲克及其制剂目前暂无国家标准,通过文献检索,对于盐酸洛拉曲克有关物质检测的药物分析方法目前也暂无报道,仅有一篇文献(Shihong Li等,Journal ofPharmaceutical Science&Technology,1997)中,提及了检测盐酸洛拉曲克降解产物的一个液相色谱分析方法,但是对该方法进行检测,发现无法将盐酸洛拉曲克与杂质有效分离,导致最终产品纯度低。
而有关物质是药品质量控制的重要指标,关系到药物可能产生的不良反应。因此,发明一种科学、有效的盐酸洛拉曲克及其制剂的检测方法势在必行。
发明内容
本发明的目的在于提供一种盐酸洛拉曲克及其有关物质的分离方法。
本发明的另一目的在于提供一种盐酸洛拉曲克原料药或其制剂的纯度鉴定方法,以实现盐酸洛拉曲克原料药或其制剂的质量控制。
本发明提供了一种用液相色谱法分离盐酸洛拉曲克及有关物质的方法,所述液相色谱法为高效液相色谱法。
所述高效液相色谱法包括以下色谱条件:色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶;流动相为酸性水相-有机相;流动相洗脱方式为线性梯度洗脱;检测方法为紫外分光光度法;检测器为紫外检测器。
具体的,所述高效液相色谱法包括以下色谱条件:色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶;流动相为酸性水相-有机相;流动相洗脱方式为线性洗脱;流动相流速为1.0ml/min;进样体积为20μl;柱温为30℃;检测方法为紫外分光光度法;检测器为紫外检测器。
上述方法中:
所述盐酸洛拉曲克为洛拉曲克碱、盐酸洛拉曲克、盐酸洛拉曲克水合物、盐酸洛拉曲克中间体、原料药或制剂;所述有关物质为杂质Ⅰ~杂质Ⅻ。
所述酸性水相中的酸选用磷酸、甲酸、乙酸或三氟乙酸,优选为甲酸或三氟乙酸,浓度为0.05~0.5%,优选为0.1%。
所述有机相选用甲醇、异丙醇或乙腈,优选为乙腈。
所述流动相线性梯度洗脱条件为:洗脱时间为25-50min,酸性水相与有机相的起始体积比为90:10-97:3,酸性水相与有机相的终止体积比为20:80-50:50。
优选地,流动相线性梯度洗脱条件为:洗脱时间为30min,酸性水相与有机相的起始体积比为95:5,酸性水相与有机相的终止体积比为40:60。
所述紫外检测器的检测波长为220-270nm,优选为254nm。
上述高效液相色谱法还包括空白对照溶液、定位对照溶液、混合样品溶液以及供试品溶液的配制方法,其中:
空白对照溶液的配制方法为:将流动相A与流动相B按照流动相线性洗脱的起始体积组成混合物,作为空白对照溶液;
定位对照溶液的配制方法为:称取盐酸洛拉曲克标准品20mg及各相关物质标准品各5mg,分别置于50ml容量瓶中,加溶剂溶解并稀释至刻度,摇匀,作为定位对照溶液;
混合样品溶液的配制方法为:量取各定位对照溶液1ml,混合,摇匀,作为混合样品溶液;
供试品溶液的配制方法为:取样品适量,精密称定,加溶剂溶解并稀释制成含盐酸洛拉曲克0.5mg/ml的溶液,摇匀,作为供试品溶液;
上述溶液配制中所用溶剂为流动相A与流动相B按照高效液相色谱法检测时流动相线性洗脱的起始体积比配制的混合液。
本发明提供的用液相色谱法分离盐酸洛拉曲克及有关物质的方法,具体地,包括以下步骤:
1)按照以下参数设置色谱条件:
色谱柱:色谱柱填料为粒径5μm的十八烷基硅烷键合硅胶,色谱柱规格为150mm×4.6mm;
流动相:流动相A为0.1%三氟乙酸水溶液,流动相B为乙腈,按以下梯度进行线性洗脱:
时间(min) | 0 | 30 | 30.5 | 35 |
A% | 95 | 40 | 95 | 95 |
B% | 5 | 60 | 5 | 5 |
流动相流速:1.0ml/min;
进样体积:20μl;
柱温:30℃;
检测器:紫外检测器;
检测波长:254nm。
2)各种溶液的配制:
按照流动相A:流动相B的体积比为95:5组成的混合物,制备成溶剂,备用;
空白对照溶液的配制:量取上述溶剂,作为空白对照溶液;
标准品溶液的配制:称取盐酸洛拉曲克标准品20mg及各相关物质标准品各5mg,分别置于50ml容量瓶中,加溶剂溶解并稀释至刻度,摇匀,作为定位对照溶液;
供试品溶液的配制:取样品适量,精密称定,加溶剂溶解并稀释制成含盐酸洛拉曲克0.5mg/ml的溶液,摇匀,作为供试品溶液,所述样品为原料或制剂;
3)检测:将上述空白对照溶液、标准品溶液以及供试品溶液,分别注入液相色谱仪,按步骤1)设置的色谱条件进行分离,记录色谱图,读取各组分保留时间,并计算各相关参数。
盐酸洛拉曲克及有关物质的分离效果判定标准为:各有关物质与盐酸洛拉曲克的分离度应不低于1.5,盐酸洛拉曲克峰拖尾因子应不大于2.5,理论板数按盐酸洛拉曲克峰计算应不小于3000。
盐酸洛拉曲克供试品的质量控制标准为:已知单杂质含量不得大于0.1%,未知单杂质含量不得大于0.1%,杂质总含量不得大于0.5%。
本发明提供的盐酸洛拉曲克及其有关物质的分离方法具有以下优点:
1、本发明提供的方法可应用于盐酸洛拉曲克各有关物质个体纯度的检测。由于盐酸洛拉曲克的各有关物质具有与盐酸洛拉曲克相同的化学结构母核,结构非常相似,各有关物质的检测方法与酸洛拉曲克的检测方法相同。
2、本发明提供的方法,可以完成针对盐酸洛拉曲克及其12个有关物质的有效分离,可以对盐酸洛拉曲克可能存在的有关物质杂质进行全面的检测及控制,也可用于盐酸洛拉曲克及其有关物质的准确定量。采用现有技术的方法,盐酸洛拉曲克的共12个有关物质中仅有6个可以出峰,且杂质VIII的色谱峰与盐酸洛拉曲克的色谱峰重合,无法分离,即在现有技术的方法下,无法实现对盐酸洛拉曲克及其有关物质的全面检测,并且对盐酸洛拉曲克的定量也将是不准确的。
3、本发明所述的分离方法,采用通用型色谱柱,方法简单,准确,方便操作。
附图说明
图1为实验例1所得盐酸洛拉曲克及其有关物质混合溶液的高效液相色谱图;
图2为实施例1所得空白溶剂的高效液相色谱图;
图3为实施例1所得盐酸洛拉曲克及其有关物质混合溶液的高效液相色谱图;
图4为实施例2所得盐酸洛拉曲克及其有关物质混合溶液的高效液相色谱图;
图5为实施例3所得盐酸洛拉曲克及其有关物质混合溶液的高效液相色谱图;
图6为实施例4所得盐酸洛拉曲克及其有关物质混合溶液的高效液相色谱图;
图7为实施例5所得盐酸洛拉曲克及其有关物质混合溶液的高效液相色谱图;
图8为实施例6所得盐酸洛拉曲克及其有关物质混合溶液的高效液相色谱图;
图9-1、9-2、9-3为实施例7所得三个批次的盐酸洛拉曲克原料药的高效液相色谱图;
图10-1、10-2、10-3为实施例8所得三个批次的注射用盐酸洛拉曲克的高效液相色谱图;
上述图中,所述横坐标的单位为min,纵坐标的单位为mV。
具体实施方式
通过如下试验例和实施例对本发明的技术方法作进一步的描述,但不作为本发明的限制。
本发明如无特殊说明,浓度一般指的是溶质与溶液的重量体积比g/ml。如果溶质是液体,则浓度是体积比,如0.1%三氟乙酸水溶液是指0.1ml的三氟乙酸溶于100ml的水中。
所述盐酸洛拉曲克及其有关物质的标准品纯度均为99%以上,由北京康辰药业股份有限公司提供;
所述化学试剂纯度均为色谱纯级别,分别购自Merk公司;
所述高效液相色谱仪型号为:岛津,LC-20A,SPD-20A。
实验例1:文献方法的验证
对参考文献(Shihong Li等,“Preformulation Studies for the Developmentof a Parenteral Liquid Formulation of an Antitumor Agent,AG337”,Journal ofPharmaceutical Science&Technology,Vol.51,No.5,181-186,1997)中所述检测盐酸洛拉曲克降解产物的液相色谱分析方法进行验证。
1)色谱条件:
色谱柱:色谱柱填料为粒径5μm的十八烷基硅烷键合硅胶,色谱柱规格为250mm×4.6mm,购自Sigma公司;
流动相:流动相A为pH6.5、浓度0.02mol/L的磷酸盐缓冲溶液,流动相B为甲醇,按照下表进行梯度洗脱:
时间(min) | 0 | 30 | 30.5 | 35 |
流动相A% | 60 | 30 | 60 | 60 |
流动相B% | 40 | 70 | 40 | 40 |
流动相流速:1.0ml/min;
进样体积:20μl;
柱温:30℃;
检测波长:254nm。
2)实验步骤:
溶剂的配制:流动相A与流动相B按照体积比为60:40组成混合液作为溶剂;
空白对照溶液的配制:取溶剂作为空白对照溶液;
标准品溶液的配制:称取盐酸洛拉曲克标准品20mg及各相关物质标准品各5mg,分别置于50ml容量瓶中,加溶剂溶解并稀释至50ml,摇匀,作为标准品溶液;
混合样品溶液配置:量取各标准品溶液0.1ml,加溶剂稀释至10ml,摇匀,作为混合样品溶液;
检测:将上述空白对照溶液、标准品溶液以及混合样品溶液分别注入液相色谱仪,按步骤1)所述实验条件进行检测,记录色谱图。
3)检测结果如图1所示,各组分保留时间见下表:
表1:保留时间
组分 | 保留时间(min) |
盐酸洛拉曲克 | 18.688 |
杂质Ⅰ | -- |
杂质Ⅱ | 3.062 |
杂质Ⅲ | 10.818 |
杂质Ⅳ | -- |
杂质Ⅴ | -- |
杂质Ⅵ | -- |
杂质Ⅶ | -- |
杂质Ⅷ | 18.688 |
杂质Ⅸ | 17.796 |
杂质Ⅹ | 22.456 |
杂质Ⅺ | -- |
杂质Ⅻ | 27.896 |
由表1实验结果可知,盐酸洛拉曲克的共12个有关物质中仅有6个可以在本方法中出峰,且杂质VIII的色谱峰与盐酸洛拉曲克的色谱峰重合,无法分离。
因此,该文献所述液相分析方法,无法实现盐酸洛拉曲克及其有关物质的全面分离,亦无法应用于盐酸洛拉曲克的质量控制。
实验例2:检测波长的确定
1)实验步骤:
以甲醇为溶剂,分别配制含盐酸洛拉曲克及其12个杂质(杂质Ⅰ-杂质Ⅻ)的合计13个溶液,各溶液浓度均约为20μg/ml。
以溶剂甲醇为空白,将盐酸洛拉曲克及各有关物质的溶液进行紫外检测扫描,扫描波长范围为200-400nm。
2)实验结果:盐酸洛拉曲克及各有关物质在220-270nm的波长范围内均有较强吸收,各样品在254nm波长处均有较强吸收。
因此,本发明选择254nm作为检测波长。
另外,本检测波长同时经过破坏实验样品的验证。
实验例3:流动相的筛选
1)色谱条件
色谱柱:色谱柱填料为粒径5μm的十八烷基硅烷键合硅胶,色谱柱规格为150mm×4.6mm,购自Sigma公司;
流动相流速:1.0ml/min;
进样体积:20μl;
柱温:30℃;
检测波长:254nm。
2)供试品溶液的配制:分别称取盐酸洛拉曲克20mg及其各有关物质各5mg,混合置于50ml容量瓶中,加溶剂(纯水与乙腈按照体积比为95:5配制的混合液)溶解并稀释至刻度,摇匀,供试品溶液即得。
3)水相的筛选
流动相A为水,流动相B为乙腈,按以下梯度进行洗脱:
时间(min) | 0 | 30 | 30.5 | 35 |
A% | 95 | 40 | 95 | 95 |
B% | 5 | 60 | 5 | 5 |
对流动相A即水相种类的筛选结果,见表2
表2:水相的筛选
水相溶质 | 溶液浓度 | 杂质与盐酸洛拉曲克分离度 | 盐酸洛拉曲克峰形 |
磷酸氢二钠 | 2mmol | 与杂质VIII完全重合 | 拖尾 |
磷酸氢二钾 | 2mmol | 与杂质VIII完全重合 | 拖尾 |
甲酸 | 0.1% | 与各杂质分离度大于1.5 | 对称 |
三氟乙酸 | 0.1% | 与各杂质分离度大于1.5 | 对称 |
磷酸 | 0.1% | 与各杂质分离度大于1.5 | 对称 |
三乙胺 | 0.1%磷酸调节pH至6.5 | 与杂质VIII无法实现基线分离 | 拖尾 |
三乙胺 | 0.1%磷酸调节pH至3.0 | 与杂质X无法实现基线分离 | 略有拖尾 |
由实验结果可知,甲酸和三氯乙酸为溶质时,各杂质与盐酸洛拉曲克的分离度和盐酸洛拉曲克峰形均优于其它组。
因此,本发明所述酸性水相溶质优选为甲酸或三氯乙酸。
4)有机相的筛选
流动相A为0.1%三氟乙酸水溶液,流动相B为有机相,按以下梯度进行洗脱:
时间(min) | 0 | 30 | 30.5 | 35 |
A% | 95 | 40 | 95 | 95 |
B% | 5 | 60 | 5 | 5 |
对流动相B即有机相种类的筛选结果,见表3:
表3:有机相的筛选结果
有机相 | 盐酸洛拉曲克保留时间 | 峰形 | 基线噪音 |
甲醇 | 20.03min | 对称 | 噪音大,基线相对不平稳 |
乙腈 | 12.47min | 对称 | 噪音小,基线平衡 |
由上述实验结果可知:有机相选用甲醇时,基线噪音大且相对不平稳,有机相选用乙腈时,基线噪音小且平稳。
因此,有机相优选为乙腈。
5)洗脱时间和流动相比例的筛选
采用线性梯度洗脱方法对洗脱时间以及流动相中水相A与有机相B的比例进行筛选。
变更的条件为:梯度洗脱时间、起始流动相体积比和终止流动相体积比。
实验结果表明:在梯度洗脱时间为25-50min、起始流动相体积比为90:10-97:3、终止流动相体积比为20:80-50:50的条件下,盐酸洛拉曲克及各有关物质杂质可以全部被分离,同时,盐酸洛拉曲克与各有关物质可以达到基线分离。
因此,本发明优选梯度洗脱条件为:梯度洗脱时间30min,起始流动相体积比95:5,终止流动相体积比40:60。
实验例4:检测限和定量限的确定
1)色谱条件
色谱柱:色谱柱填料为粒径5μm的十八烷基硅烷键合硅胶,色谱柱规格为150mm×4.6mm,购自Sigma公司;
流动相:流动相A为浓度为0.1%三氟乙酸水溶液,流动相B为乙腈,按以下梯度进行洗脱:
时间(min) | 0 | 30 | 30.5 | 35 |
A% | 95 | 40 | 5 | 5 |
B% | 5 | 60 | 95 | 95 |
流动相流速:1.0ml/min;
进样体积:20μl;
柱温:30℃;
检测波长为254nm。
2)样品溶液的制备:称取标准品盐酸洛拉曲克及各有关物质20mg,分别置100ml量瓶中,用溶剂(流动相A与流动相B按照体积比为95:5的比例配制的混合液)溶解并稀释至刻度,摇匀作为储备液。精密量取上述储备液适量,分别配制成不同浓度的样品溶液,逐步稀释,注入色谱仪,记录色谱图,当稀释至各组分峰S/N≈3时为检测限;稀释至各组分峰S/N≈10时为定量限。
3)样品检测
按上述条件进行高效液相色谱分析,记录色谱图;并根据各自样品稀释过程计算检测限及定量限样品量。
4)实验结果,见表4:
表4:盐酸洛拉曲克的检测结果
物质名称 | 检测限(ng) | 定量限(ng) |
盐酸洛拉曲克 | 0.16 | 0.32 |
杂质I | 0.16 | 0.32 |
杂质II | 0.10 | 0.20 |
杂质III | 0.16 | 0.32 |
杂质IV | 0.88 | 1.75 |
杂质V | 0.16 | 0.31 |
杂质VI | 0.12 | 0.24 |
杂质VII | 0.11 | 0.21 |
杂质VIII | 0.16 | 0.33 |
杂质IX | 0.16 | 0.33 |
杂质X | 0.10 | 0.20 |
杂质XI | 0.12 | 0.25 |
杂质XII | 0.22 | 0.43 |
表4结果表明,本发明可以准确的对盐酸洛拉曲克及各有关物质进行检测及定量,可以用于盐酸洛拉曲克及其制剂的质控检测,灵敏度高,准确度高。
实施例1:盐酸洛拉曲克及各有关物质的分离
1)色谱条件
色谱柱:色谱柱填料为粒径5μm的十八烷基硅烷键合硅胶,色谱柱规格为150mm×4.6mm,购自Sigma公司;
流动相:流动相A为0.1%三氟乙酸水溶液,流动相B为乙腈,按以下梯度进行线性洗脱:
时间(min) | 0 | 30 | 30.5 | 35 |
A% | 95 | 40 | 95 | 95 |
B% | 5 | 60 | 5 | 5 |
流动相流速:1.0ml/min;
进样体积:20μl;
柱温:30℃;
检测波长:254nm。
2)溶剂的配制:将流动相A与流动相B按照体积比为95:5组成混合液作为溶剂,备用;
空白对照溶液的配制:取溶剂作为空白对照溶液;
标准品溶液的配制:称取盐酸洛拉曲克标准品20mg及各相关物质标准品各5mg,分别置于50ml容量瓶中,加溶剂溶解并稀释至刻度,摇匀,作为标准品溶液;
混合样品溶液的配制:量取各标准品溶液0.1ml,混合,摇匀,作为混合样品溶液;
3)检测:将上述空白对照溶液、标准品溶液以及混合样品溶液分别注入液相色谱仪,按步骤1)所述实验条件进行分离,记录色谱图,读取各组分保留时间等参数;
4)实验结果:结果如图2、图3所示,各参数见表5:
表5:分离结果
表5结果表明,盐酸洛拉曲克与其有关物质各物质的分离度均不小于1.5,分离度良好,并且符合中国药典的要求,实现了有效分离。
实施例2:盐酸洛拉曲克及各有关物质的分离
按照实施例1的实验条件和步骤进行盐酸洛拉曲克及各有关物质的分离,其中,流动相A为0.1%甲酸水溶液,流动相B为乙腈,流动相按照以下梯度进行洗脱:
时间(min) | 0 | 30 | 30.5 | 35 |
流动相A% | 95 | 20 | 95 | 95 |
流动相B% | 5 | 80 | 5 | 5 |
实验结果如图4所示,各组分的保留时间见表6:
表6:保留时间
组分 | 保留时间(min) |
盐酸洛拉曲克 | 13.926 |
杂质Ⅰ | 35.827 |
杂质Ⅱ | 3.842 |
杂质Ⅲ | 3.842 |
杂质Ⅳ | 32.738 |
杂质Ⅴ | 33.312 |
杂质Ⅵ | 32.738 |
杂质Ⅶ | 30.624 |
杂质Ⅷ | 12.064 |
杂质Ⅸ | 8.978 |
杂质Ⅹ | 17.215 |
杂质Ⅺ | 31.193 |
杂质Ⅻ | 28.880 |
表6结果显示,盐酸洛拉曲克与其有关物质各物质的色谱峰不重合,分离度良好,并且符合中国药典的要求,实现了有效分离。
实施例3:盐酸洛拉曲克及各有关物质的分离
按照实施例1的实验条件和步骤进行盐酸洛拉曲克及各有关物质的分离,其中,流动相A为0.1%甲酸水溶液,流动相B为乙腈,流动相按照以下梯度进行洗脱:
时间(min) | 0 | 30 | 30.5 | 35 |
流动相A% | 97 | 30 | 97 | 97 |
流动相B% | 3 | 70 | 3 | 3 |
实验结果如图5所示,各组分的保留时间见表7:
表7:保留时间
组分 | 保留时间(min) |
盐酸洛拉曲克 | 10.807 |
杂质Ⅰ | 20.896 |
杂质Ⅱ | 3.422 |
杂质Ⅲ | 5.568 |
杂质Ⅳ | 14.785 |
杂质Ⅴ | 17.559 |
杂质Ⅵ | 14.979 |
杂质Ⅶ | 14.359 |
杂质Ⅷ | 9.971 |
杂质Ⅸ | 6.220 |
杂质Ⅹ | 11.757 |
杂质Ⅺ | 14.279 |
杂质Ⅻ | 12.096 |
表7结果显示,盐酸洛拉曲克与其有关物质各物质的色谱峰不重合,分离度良好。符合中国药典的要求,实现了有效分离。
实施例4:盐酸洛拉曲克及各有关物质的分离
按照实施例1的实验条件和步骤进行盐酸洛拉曲克及各有关物质的分离,其中,流动相A为0.1%三氟乙酸水溶液;流动相B为乙腈;流动相按照以下梯度进行洗脱:
时间(min) | 0 | 30 | 30.5 | 35 |
流动相A% | 92 | 50 | 92 | 92 |
流动相B% | 8 | 50 | 8 | 8 |
实验结果如图6所示,各组分的保留时间见表8:
表8:保留时间
组分 | 保留时间(min) |
盐酸洛拉曲克 | 10.575 |
杂质Ⅰ | 20.486 |
杂质Ⅱ | 3.308 |
杂质Ⅲ | 5.194 |
杂质Ⅳ | 14.473 |
杂质Ⅴ | 17.186 |
杂质Ⅵ | 14.728 |
杂质Ⅶ | 14.085 |
杂质Ⅷ | 9.752 |
杂质Ⅸ | 6.084 |
杂质Ⅹ | 11.523 |
杂质Ⅺ | 14.892 |
杂质Ⅻ | 11.845 |
表8结果显示,盐酸洛拉曲克与其有关物质各物质的色谱峰不重合,分离度良好,并且符合中国药典的要求,实现了有效分离。
实施例5:盐酸洛拉曲克及各有关物质的分离
按照实施例1的实验条件和步骤进行盐酸洛拉曲克及各有关物质的分离,其中,流动相A为0.1%三氟乙酸水溶液;流动相B为乙腈;流动相按照以下梯度进行洗脱:
时间(min) | 0 | 50 | 50.5 | 60 |
流动相A% | 94 | 40 | 94 | 94 |
流动相B% | 6 | 60 | 6 | 6 |
实验结果如图7所示,各组分的保留时间见表9:
表9:保留时间
组分 | 保留时间(min) |
盐酸洛拉曲克 | 13.181 |
杂质Ⅰ | 30.152 |
杂质Ⅱ | 4.683 |
杂质Ⅲ | 5.719 |
杂质Ⅳ | 22.225 |
杂质Ⅴ | 24.905 |
杂质Ⅵ | 20.470 |
杂质Ⅶ | 18.475 |
杂质Ⅷ | 11.509 |
杂质Ⅸ | 6.553 |
杂质Ⅹ | 15.269 |
杂质Ⅺ | 18.984 |
杂质Ⅻ | 16.166 |
表9结果显示,盐酸洛拉曲克与其有关物质各物质的色谱峰不重合,分离度良好,并且符合中国药典的要求,实现了有效分离。
实验例6:盐酸洛拉曲克及各有关物质的分离
按照实施例1的实验条件和步骤进行盐酸洛拉曲克及各有关物质的分离,其中,流动相A为0.1%三氟乙酸水溶液;流动相B为乙腈;流动相按照以下梯度进行洗脱:
时间(min) | 0 | 45 | 45.5 | 50 |
流动相A% | 95 | 40 | 95 | 95 |
流动相B% | 5 | 60 | 5 | 5 |
实验结果如图8所示,各组分的保留时间见表10:
表10:保留时间
组分 | 保留时间(min) |
盐酸洛拉曲克 | 12.530 |
杂质I | 27.970 |
杂质II | 4.799 |
杂质III | 5.838 |
杂质Ⅳ | 20.757 |
杂质V | 23.031 |
杂质Ⅵ | 19.127 |
杂质Ⅶ | 17.833 |
杂质Ⅷ | 11.100 |
杂质Ⅸ | 6.617 |
杂质Ⅹ | 14.399 |
杂质Ⅺ | 18.226 |
杂质Ⅻ | 17.372 |
表10结果显示,盐酸洛拉曲克与其有关物质各物质的色谱峰不重合,分离度良好,并且符合中国药典的要求,实现了有效分离。
实施例7:盐酸洛拉曲克原料药的质量检测
待测样品为北京康辰药业股份有限公司生产的三批盐酸洛拉曲克原料药,批号分别为20130301、20130302和20130401。
检测步骤如下:
1)供试品溶液的制备:分别精密称定各批次盐酸洛拉曲克20mg,加溶剂(流动相A和流动相B按照体积比为95:5配制的混合液,流动相A和B参考实施例1中的流动相A和流动相B)溶解并稀释制成浓度为0.5mg/ml的盐酸洛拉曲克溶液,摇匀,供试品溶液即得;
2)对照溶液的制备:精密量取步骤1)所得供试品溶液1ml,加溶剂稀释制备成盐酸洛拉曲克浓度为2.5μg/ml的溶液,摇匀,对照溶液即得;
3)仪器灵敏度的调节:精密量取对照溶液20μl,注入液相色谱仪,调节仪器灵敏度,使主峰的峰高约为满量程的10%-20%;
4)分离与检测:精密量取空白溶剂、对照溶液和供试品溶液,按照实验例5所述实验条件进行检测。
检测结果如图9-1、9-2、9-3所示,其中图9-1为批号20130301的原料、9-2为批号20130302的原料、9-3为批号20130401的原料,经计算结果见表11。
表11:有关物含量
表11结果显示:三批盐酸洛拉曲克样品的纯度分别为99.96%、99.95%、99.96%,检测结果均符合质量标准要求。本方法可有效应用于盐酸洛拉曲克原料药的质量控制。
实施例8:注射用盐酸洛拉曲克的纯度检测
待测样品为北京康辰药业股份有限公司生产的三批注射用盐酸洛拉曲克,批号分别为20130401、20130402和20130403。
检测条件和步骤同实施例7。
检测结果如图10-1、10-2、10-3所示,其中图10-1为批号20130401的制剂、图10-2为批号20130402的制剂、图10-3为批号20130403的制剂,经计算结果见表12。
表12:有关物的检测结果
表12结果显示:三批盐酸洛拉曲克样品的纯度分别为99.94%、99.94%、99.94%,检测结果均符合质量标准要求。本方法可用于注射用盐酸洛拉曲克的质量控制。
虽然,上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验,对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。
Claims (9)
1.一种用液相色谱法分离盐酸洛拉曲克、盐酸洛拉曲克碱或盐酸洛拉曲克水合物及有关物质的方法,其特征在于,所述液相色谱法为高效液相色谱法;包括以下色谱条件:色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶;流动相为酸性水相-有机相;流动相洗脱方式为线性梯度洗脱;所述酸性水相中的酸为甲酸或三氟乙酸,所述酸性水相中的酸的浓度为0.05-0.5%;所述有机相为乙腈;
所述流动相线性梯度洗脱条件为:洗脱时间为25-50min,酸性水相与有机相的起始体积比为90:10-97:3,酸性水相与有机相的终止体积比为20:80-50:50;
所述有关物质为杂质Ⅰ~杂质Ⅻ:
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述酸性水相中的酸的浓度为0.1%。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述流动相线性梯度洗脱条件为:流动相流速为1.0ml/min,洗脱时间为30min,酸性水相与有机相的起始体积比为95:5,酸性水相与有机相的终止体积比为40:60。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,采用紫外检测器进行检测。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述紫外检测器的检测波长为220-270nm。
6.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述紫外检测器的检测波长为254nm。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述盐酸洛拉曲克为盐酸洛拉曲克原料药或盐酸洛拉曲克制剂。
8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述高效液相色谱法包括以下步骤:
1)色谱条件:
色谱柱:色谱柱填料为粒径5μm的十八烷基硅烷键合硅胶,色谱柱规格为150mm×4.6mm;
流动相:流动相A为0.1%三氟乙酸水溶液,流动相B为乙腈,按以下梯度进行线性洗脱:
流动相流速:1.0ml/min;
进样体积:20μl;
柱温:30℃;
检测器:紫外检测器;
检测波长:254nm;
2)溶剂的配制:按照流动相A:流动相B的体积比为95:5组成的混合物,制备成溶剂,备用;
空白对照溶液的配制:取溶剂作为空白对照溶液;
标准品溶液的配制:称取盐酸洛拉曲克标准品20mg及各相关物质标准品各5mg,分别置于50ml容量瓶中,加溶剂溶解并稀释至刻度,摇匀,作为定位对照溶液;
供试品溶液的配制:取样品适量,精密称定,加溶剂溶解并稀释制成含盐酸洛拉曲克0.5mg/ml的溶液,摇匀,作为供试品溶液,所述样品为盐酸洛拉曲克原料或盐酸洛拉曲克制剂;
3)将空白对照溶液、标准品溶液以及供试品溶液分别注入液相色谱仪,记录色谱图,读取各组分保留时间。
9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法适用于盐酸洛拉曲克原料药,盐酸洛拉曲克制剂,以及所述盐酸洛拉曲克有关物质杂质Ⅰ-杂质Ⅻ个体的检测。
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CN1765895A (zh) * | 2005-07-18 | 2006-05-03 | 康辰医药发展有限公司 | 盐酸洛拉曲克的合成工艺 |
CN104140416A (zh) * | 2013-05-10 | 2014-11-12 | 北京康辰药业有限公司 | 一种盐酸洛拉曲克晶型及其制备方法与应用 |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
A Large Scale Process for the Preparation of Thymitaq;Håkan Malmgren 等;《Org. Process Res. Dev.》;20081025;第12卷(第6期);1195-1200 * |
A New Method for Synthesis of Nolatrexed Dihydrochloride;Xueqing Zhao 等;《Org. Process Res. Dev.》;20100105;第14卷(第2期);第349页:Experimental Section * |
AG337, a novel lipophilic thymidylate synthase inhibitor: in vitro and in vivo preclinical studies;S.Webber 等;《Cancer Chemotherapy and Pharmacology》;19961231;第37卷(第6期);509-517 * |
反相高效液相色谱法测定人血浆洛拉曲克浓度;王广发 等;《医药导报》;20100531;第29卷(第5期);594-596 * |
洛拉曲克在肿瘤细胞中的药代动力学研究;李亦蕾 等;《第一军医大学学报》;20031231;第23卷(第1期);43-45 * |
盐酸洛拉曲克在小鼠体内的血药浓度和生物利用度测定;王广发 等;《南方医科大学学报》;20081231;第28卷(第11期);1993-1995 * |
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