CN105087621A - 一种海参组织蛋白酶的原核表达方法 - Google Patents
一种海参组织蛋白酶的原核表达方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105087621A CN105087621A CN201510238673.5A CN201510238673A CN105087621A CN 105087621 A CN105087621 A CN 105087621A CN 201510238673 A CN201510238673 A CN 201510238673A CN 105087621 A CN105087621 A CN 105087621A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sea cucumber
- kethepsin
- cathepsin
- gene sequence
- prokaryotic expression
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种海参组织蛋白酶的原核表达方法,包括,其中:包括对海参组织蛋白酶基因序列克隆;在获得海参组织蛋白酶基因序列克隆的基础上构建具有海参组织蛋白酶基因序列的融合表达载体,然后将融合表达载体转化到表达宿主菌进行诱导表达目标蛋白。因而本发明有采用大肠杆菌低成本表达海参组织蛋白酶、表达产物品质容易控制的优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种生物技术领域,尤其涉及一种海参组织蛋白酶的原核表达方法。
背景技术
原胶蛋白是机体组织的结构蛋白,其诸多生理功能已被系统研究和广泛认可。随着胶原蛋白产业的快速发展,胶原蛋白酶解工艺中的关键生产要素—蛋白酶的需求也不断增长。目前较为常用的各类酶普遍存在胶原蛋白酶解效率不高的缺点,而运用基因工程技术开发新型胶原蛋白酶可以弥补这一致命缺陷,且采用生物工程技术生产的胶原蛋白酶产品品质易控、生产成本低廉。刺参具有极强的自溶能力究其本质即是组织细胞内蛋白酶对体壁组织蛋白(主要为胶原蛋白)的高效酶解作用。然而,有关刺参组织蛋白酶基因的筛选、功能研究及相关蛋白酶产品开发却尚未系统开展。本发明针对现有技术的不足,提供一种海参组织蛋白酶的原核表达方法。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术提供一种采用大肠杆菌低成本表达海参组织蛋白酶、表达产物品质容易控制的一种海参组织蛋白酶的原核表达方法。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为:一种海参组织蛋白酶的原核表达方法,包括,其中:包括对海参组织蛋白酶基因序列克隆;在获得海参组织蛋白酶基因序列克隆的基础上构建具有海参组织蛋白酶基因序列的融合表达载体,然后将融合表达载体转化到表达宿主菌进行诱导表达目标蛋白;海参组织蛋白酶基因序列含有SEQ1序列。
为优化上述技术方案,采取的措施还包括:表达宿主菌为大肠杆菌。海参组织蛋白酶基因序列克隆所使用的扩增目标蛋白DNA片段的引物为增加EcoRI和NotI识别位点的
引物1:F:5’-CCGGAATTCATGCCAGACACTGTTGATT-3’;(SEQ3)
引物2:R:5’-ATAGTTTAGCGGCCGCTTAGACAGTTGGGTAACTG-3’。(SEQ4)
构建融合表达载体所使用的限制性内切酶为EcoRI和NotI,双酶切所获得的DNA序列片段长度约660bp,通过DNA连接酶作用,连接至pET32a,完成表达载体构建。宿主菌的诱导表达步骤如下:将构建完成的融合表达质粒转化到大肠杆菌,利用IPTG进行诱导表达目标蛋白。融合表达载体选自pET32a载体。pET32a载体的构建步骤如下:以添加限制性内切酶识别位点序列的引物,克隆制备海参组织蛋白酶成熟肽区域基因序列。使用内切酶,对PCR产物以及空载pET32a载体分别进行双酶切,通过电泳及胶回收纯化酶切产物。混合经过双酶切处理的组织蛋白酶基因片段及载体片段,使用DNA快速连接酶连接构建表达载体。IPTG诱导表达组织蛋白酶的温度低于30℃,IPTG浓度小于3mM,诱导表达的组织蛋白酶以非包涵体形式表达于大肠杆菌胞内。
本方法步骤如下:
1)预测蛋白结构分析
查找确定刺参组织蛋白酶基因全长序列的开放阅读框,确定编码序列并推测编码蛋白的氨基酸序列,采用生物信息学的方法进行蛋白质结构功能域分析并确定基因编码蛋白结构特征,明确结构域位置和所需表达的蛋白序列。
2)pET32a融合表达载体构建
以添加限制性内切酶识别位点序列的引物,克隆制备海参组织蛋白酶成熟肽区域基因序列。使用内切酶,对PCR产物以及空载pET32a载体分别进行双酶切,通过电泳及胶回收纯化酶切产物。混合经过双酶切处理的组织蛋白酶基因片段及载体片段,使用DNA快速连接酶连接构建表达载体。
3)大肠杆菌原核表达
将构建完成的融合表达质粒转化到表达宿主菌—BL21(DE3)大肠杆菌,利用IPTG进行诱导表达目标蛋白。通过诱导表达温度及时间双因素分析,优化组织蛋白酶原核表达的培养条件及诱导效果。
所述步骤1)中,使用NCBI网站BLASTX软件进行基因保守域分析(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/),使用ClustalW2对预测氨基酸序列进行特征分析(http://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalw2/),利用signalP4.1在线软件,分析序列蛋白信号肽区域特征(http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/),利用PROSITE在线软件分析活性功能位点及结构域(http://prosite.expasy.org/scanprosite/),采用PDBSUM数据库预测分析蛋白二级结构、二硫键、配体结合位点等结构信息,PROCAT数据库预测分析活性位点三维结构,NRL-3D数据库相似蛋白结构分析。通过软件分析,明确具有蛋白酶解功能的目标序列,确定扩增序列所使用的引物序列。
所述步骤1)中,所使用的扩增目标蛋白DNA片段的引物为增加EcoRI和NotI识别位点的
引物1:F:5’-CCGGAATTCATGCCAGACACTGTTGATT-3’;
引物2:R:5’-ATAGTTTAGCGGCCGCTTAGACAGTTGGGTAACTG-3’。
所述步骤2)中,所使用的限制性内切酶为EcoRI和NotI,双酶切所获得的DNA序列片段长度约660bp,通过DNA连接酶作用,连接至pET32a,完成表达载体构建。
所述步骤3)中,IPTG诱导表达组织蛋白酶的温度低于30℃,所用IPTG浓度小于3mM,诱导表达的组织蛋白酶以非包涵体形式表达于大肠杆菌胞内。
由于本发明采用了包括对海参组织蛋白酶基因序列克隆;在获得海参组织蛋白酶基因序列克隆的基础上构建具有海参组织蛋白酶基因序列的融合表达载体,然后将融合表达载体转化到表达宿主菌进行诱导表达目标蛋白;海参组织蛋白酶基因序列含有SEQ1序列。因而本发明具有采用大肠杆菌低成本表达海参组织蛋白酶、表达产物品质容易控制的优点。
具体实施方式
以下结合附实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例:一种海参组织蛋白酶的原核表达方法,包括,其中:包括对海参组织蛋白酶基因序列克隆;在获得海参组织蛋白酶基因序列克隆的基础上构建具有海参组织蛋白酶基因序列的融合表达载体,然后将融合表达载体转化到表达宿主菌进行诱导表达目标蛋白;海参组织蛋白酶基因序列含有SEQ1序列。表达宿主菌为大肠杆菌。海参组织蛋白酶基因序列克隆所使用的扩增目标蛋白DNA片段的引物为增加EcoRI和NotI识别位点的
引物1:F:5’-CCGGAATTCATGCCAGACACTGTTGATT-3’;(SEQ3)
引物2:R:5’-ATAGTTTAGCGGCCGCTTAGACAGTTGGGTAACTG-3’。(SEQ4)
构建融合表达载体所使用的限制性内切酶为EcoRI和NotI,双酶切所获得的DNA序列片段长度约660bp,通过DNA连接酶作用,连接至pET32a,完成表达载体构建。宿主菌的诱导表达步骤如下:将构建完成的融合表达质粒转化到大肠杆菌,利用IPTG进行诱导表达目标蛋白。融合表达载体选自pET32a载体。pET32a载体的构建步骤如下:以添加限制性内切酶识别位点序列的引物,克隆制备海参组织蛋白酶成熟肽区域基因序列。使用内切酶,对PCR产物以及空载pET32a载体分别进行双酶切,通过电泳及胶回收纯化酶切产物。混合经过双酶切处理的组织蛋白酶基因片段及载体片段,使用DNA快速连接酶连接构建表达载体。IPTG诱导表达组织蛋白酶的温度低于30℃,IPTG浓度小于3mM,诱导表达的组织蛋白酶以非包涵体形式表达于大肠杆菌胞内。
本发明采用的刺参的拉丁命名为Apostichopusjaponicus。
海参组织蛋白酶基因序列为SEQ1:CCAGACACTGTTGATTGGAGACCAAAGGGTTACGTCACTGGGGTCAAAGATCAGAAACAATGCGGATCCTGCTGGGCATTCAGCACCACTGGGTCACTTGAAGGTCAGATGTTCAACAAGACTGGTATGCTGGTCAGCTTGAGCGAACAGAATCTCGTCGACTGCTCTCGTAAGGAGGGTAACATGGGTTGCCAAGGGGGGCTTATGGACGACGCCTTTCAATATGTCATTGATAACGGAGGTCTTGACACCGAGGATTGTTACCCGTACAAAGCCGTGCAAGGAACTTGCATGTACAAGTCGAGCTGCAACTCTGCTGATGTTGTCAAGTTCAACGATATTCCAACTGGTAACGAGATGGCACTTCAACAAGCTGTGGCTACCGTAGGACCTGTTTCTGTCGCCATAGACGCTGCTCTCAGTTCGTTCCATATGTACCATAGCGGTGTTTACGATGACTCAATGTGCCGCAGCGACAGACAGCACTTGGATCACGGTGTGCTGGCGGTAGGTTACGGAACCATGGACGGGAAAGATTACTGGCTCGTTAAGAACAGCTGGGGCATGAGCTGGGGTGACCAGGGGTACATCATGATGTCTCGTAACAAGAACAACCAGTGTGGTATTGCAACTGCCGCCAGTTACCCAACTGTC。
参照如下方式可进行本方法的再现:
1)刺参组织蛋白酶基因全长克隆
根据已获得的刺参组织蛋白酶基因EST序列片段,设计特异性全长克隆引物,采用RACE技术扩增基因片段获得功能基因的全长cDNA序列,通过NCBI网站及蛋白翻译软件等初步分析cDNA序列的正确性。
2)预测蛋白结构分析并确定原核表达的基因片段
查找确定刺参组织蛋白酶基因全长序列的开放阅读框,确定编码序列并推测编码蛋白的氨基酸序列,采用PDBSUM数据库预测分析蛋白二级结构、二硫键、配体结合位点等结构信息,PROCAT数据库预测分析活性位点三维结构,NRL-3D数据库相似蛋白结构分析,SMART蛋白质结构功能域分析等,初步阐述基因编码蛋白结构特征,明确结构域位置。
所确定的目标基因片段序列为成熟肽区域DNA序列,通过引物序列调整改造后连接至pET32a多克隆位点的序列为:
ATGCCAGACACTGTTGATTGGAGACCAAAGGGTTACGTCACTGGGGTCAAAGATCAGAAACAATGCGGATCCTGCTGGGCATTCAGCACCACTGGGTCACTTGAAGGTCAGATGTTCAACAAGACTGGTATGCTGGTCAGCTTGAGCGAACAGAATCTCGTCGACTGCTCTCGTAAGGAGGGTAACATGGGTTGCCAAGGGGGGCTTATGGACGACGCCTTTCAATATGTCATTGATAACGGAGGTCTTGACACCGAGGATTGTTACCCGTACAAAGCCGTGCAAGGAACTTGCATGTACAAGTCGAGCTGCAACTCTGCTGATGTTGTCAAGTTCAACGATATTCCAACTGGTAACGAGATGGCACTTCAACAAGCTGTGGCTACCGTAGGACCTGTTTCTGTCGCCATAGACGCTGCTCTCAGTTCGTTCCATATGTACCATAGCGGTGTTTACGATGACTCAATGTGCCGCAGCGACAGACAGCACTTGGATCACGGTGTGCTGGCGGTAGGTTACGGAACCATGGACGGGAAAGATTACTGGCTCGTTAAGAACAGCTGGGGCATGAGCTGGGGTGACCAGGGGTACATCATGATGTCTCGTAACAAGAACAACCAGTGTGGTATTGCAACTGCCGCCAGTTACCCAACTGTCTAA。(SEQ2)
3)pET32a载体构建
根据已获得的全长基因序列开放阅读框信息序列信息,设计带有EcoRI和NotI酶切位点的特异性引物,以刺参消化道cDNA为模版,扩增获得目标序列;DNA电泳并回收获得纯化的目标DNA序列,采用EcoRI和NotI双酶切处理产物DNA和pET32a空载载体,DNA电泳并纯化酶切产物(组织蛋白酶编码DNA产物和空载pET32a),使用T4DNA快速连接酶连接构建pET32a表达载体。
4)载体的转化和融合蛋白酶表达
将连接产物载体全量(10微升)与50微升感受态BL21(DE3)细胞进行混合,冰浴30分钟后42℃加热60秒,再冰浴1分钟后,加入800微升不带抗生素的LB液体培养基,复苏培养1小时。取100微升复苏菌液,均匀涂于带有Amp的L-琼脂平板培养基上过夜培养(37℃),之后挑菌斑并进行扩增培养(37℃,500ml烧瓶摇菌)。
扩增培养至菌液OD600达到0.7时,加入IPTG并调整浓度至1mM,菌液培养温度调整至25℃,进行诱导表达,4小时候停止培养并开展表达蛋白收集和检测分析。
本发明以前期采用RACE全长克隆方法获取基因全长序列信息为基础,通过全长序列信息预测分析编码蛋白结构特征及功能活性,查找确定关键结构域。根据预测分析结果,确定接入表达系统的基因序列片段;构建大肠杆菌原核表达系统,体外表达目标蛋白;检测并阐明表达获得的蛋白酶活性功能特征。通过该方法表达的海参蛋白酶具有生产成本低、品质易控等特点,将增加胶原蛋白酶解蛋白酶可选种类,提高酶解生产效益,具有重要的经济和社会价值。
尽管已结合优选的实施例描述了本发明,然其并非用以限定本发明,任何本领域技术人员,在不脱离本发明的精神和范围的情况下,能够对在这里列出的主题实施各种改变、同等物的置换和修改,因此本发明的保护范围当视所提出的权利要求限定的范围为准。
SEQUENCELISTING
<110>浙江大学舟山海洋研究中心
<120>一种海参组织蛋白酶的原核表达方法
<130>wtm-2015-01
<160>4
<170>PatentInversion3.5
<210>1
<211>654
<212>DNA
<213>Apostichopusjaponicus
<400>1
ccagacactgttgattggagaccaaagggttacgtcactggggtcaaagatcagaaacaa60
tgcggatcctgctgggcattcagcaccactgggtcacttgaaggtcagatgttcaacaag120
actggtatgctggtcagcttgagcgaacagaatctcgtcgactgctctcgtaaggagggt180
aacatgggttgccaaggggggcttatggacgacgcctttcaatatgtcattgataacgga240
ggtcttgacaccgaggattgttacccgtacaaagccgtgcaaggaacttgcatgtacaag300
tcgagctgcaactctgctgatgttgtcaagttcaacgatattccaactggtaacgagatg360
gcacttcaacaagctgtggctaccgtaggacctgtttctgtcgccatagacgctgctctc420
agttcgttccatatgtaccatagcggtgtttacgatgactcaatgtgccgcagcgacaga480
cagcacttggatcacggtgtgctggcggtaggttacggaaccatggacgggaaagattac540
tggctcgttaagaacagctggggcatgagctggggtgaccaggggtacatcatgatgtct600
cgtaacaagaacaaccagtgtggtattgcaactgccgccagttacccaactgtc654
<210>2
<211>660
<212>DNA
<213>人工合成
<400>2
atgccagacactgttgattggagaccaaagggttacgtcactggggtcaaagatcagaaa60
caatgcggatcctgctgggcattcagcaccactgggtcacttgaaggtcagatgttcaac120
aagactggtatgctggtcagcttgagcgaacagaatctcgtcgactgctctcgtaaggag180
ggtaacatgggttgccaaggggggcttatggacgacgcctttcaatatgtcattgataac240
ggaggtcttgacaccgaggattgttacccgtacaaagccgtgcaaggaacttgcatgtac300
aagtcgagctgcaactctgctgatgttgtcaagttcaacgatattccaactggtaacgag360
atggcacttcaacaagctgtggctaccgtaggacctgtttctgtcgccatagacgctgct420
ctcagttcgttccatatgtaccatagcggtgtttacgatgactcaatgtgccgcagcgac480
agacagcacttggatcacggtgtgctggcggtaggttacggaaccatggacgggaaagat540
tactggctcgttaagaacagctggggcatgagctggggtgaccaggggtacatcatgatg600
tctcgtaacaagaacaaccagtgtggtattgcaactgccgccagttacccaactgtctaa660
<210>3
<211>28
<212>DNA
<213>人工合成
<400>3
ccggaattcatgccagacactgttgatt28
<210>4
<211>35
<212>DNA
<213>人工合成
<400>4
atagtttagcggccgcttagacagttgggtaactg35
Claims (8)
1.一种海参组织蛋白酶的原核表达方法,其特征是:包括对海参组织蛋白酶基因序列克隆;在获得海参组织蛋白酶基因序列克隆的基础上构建具有所述的海参组织蛋白酶基因序列的融合表达载体,然后将所述的融合表达载体转化到表达宿主菌进行诱导表达目标蛋白;所述的海参组织蛋白酶基因序列含有SEQ1序列。
2.根据权利要求1所述的一种海参组织蛋白酶的原核表达方法,其特征是:所述的表达宿主菌为大肠杆菌。
3.根据权利要求1所述的一种海参组织蛋白酶的原核表达方法,其特征是:所述的海参组织蛋白酶基因序列克隆所使用的扩增目标蛋白DNA片段的引物为增加EcoRI和NotI识别位点的
引物1:F:5’-CCGGAATTCATGCCAGACACTGTTGATT-3’;
引物2:R:5’-ATAGTTTAGCGGCCGCTTAGACAGTTGGGTAACTG-3’。
4.根据权利要求1所述的一种海参组织蛋白酶的原核表达方法,其特征是:构建所述的融合表达载体所使用的限制性内切酶为EcoRI和NotI,双酶切所获得的DNA序列片段长度约660bp,通过DNA连接酶作用,连接至pET32a,完成表达载体构建。
5.根据权利要求1所述的一种海参组织蛋白酶的原核表达方法,其特征是:所述的宿主菌的诱导表达步骤如下:将构建完成的融合表达质粒转化到大肠杆菌,利用IPTG进行诱导表达目标蛋白。
6.根据权利要求1所述的一种海参组织蛋白酶的原核表达方法,其特征是:所述的融合表达载体选自pET32a载体。
7.根据权利要求5所述的一种海参组织蛋白酶的原核表达方法,其特征是:所述的IPTG诱导表达组织蛋白酶的温度低于30℃,IPTG浓度小于3mM,诱导表达的组织蛋白酶以非包涵体形式表达于大肠杆菌胞内。
8.根据权利要求6所述的一种海参组织蛋白酶的原核表达方法,其特征是:所述的pET32a载体的构建步骤如下:以添加限制性内切酶识别位点序列的引物,克隆制备海参组织蛋白酶成熟肽区域基因序列,使用内切酶,对PCR产物以及空载pET32a载体分别进行双酶切,通过电泳及胶回收纯化酶切产物,混合经过双酶切处理的组织蛋白酶基因片段及载体片段,使用DNA快速连接酶连接构建表达载体。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510238673.5A CN105087621A (zh) | 2015-05-12 | 2015-05-12 | 一种海参组织蛋白酶的原核表达方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510238673.5A CN105087621A (zh) | 2015-05-12 | 2015-05-12 | 一种海参组织蛋白酶的原核表达方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN105087621A true CN105087621A (zh) | 2015-11-25 |
Family
ID=54568953
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510238673.5A Pending CN105087621A (zh) | 2015-05-12 | 2015-05-12 | 一种海参组织蛋白酶的原核表达方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN105087621A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110791513A (zh) * | 2019-11-15 | 2020-02-14 | 中国科学院南海海洋研究所 | 一种密码子优化的玉足海参α-淀粉酶基因及其重组表达载体与应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1373223A (zh) * | 2001-09-30 | 2002-10-09 | 山东大学 | 棉铃虫组织蛋白酶b基因及其克隆、重组表达技术 |
CN101294154A (zh) * | 2007-04-25 | 2008-10-29 | 中国农业科学院上海兽医研究所 | 一种生产大片吸虫组织蛋白酶l1的方法 |
CN104845957A (zh) * | 2015-05-11 | 2015-08-19 | 浙江海洋学院 | 一种海参组织蛋白酶的原核表达方法 |
-
2015
- 2015-05-12 CN CN201510238673.5A patent/CN105087621A/zh active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1373223A (zh) * | 2001-09-30 | 2002-10-09 | 山东大学 | 棉铃虫组织蛋白酶b基因及其克隆、重组表达技术 |
CN101294154A (zh) * | 2007-04-25 | 2008-10-29 | 中国农业科学院上海兽医研究所 | 一种生产大片吸虫组织蛋白酶l1的方法 |
CN104845957A (zh) * | 2015-05-11 | 2015-08-19 | 浙江海洋学院 | 一种海参组织蛋白酶的原核表达方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
鄢荣歆等: "海刺参组织蛋白酶L基因的克隆、重组表达及活性鉴定", 《大连工业大学学报》 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110791513A (zh) * | 2019-11-15 | 2020-02-14 | 中国科学院南海海洋研究所 | 一种密码子优化的玉足海参α-淀粉酶基因及其重组表达载体与应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI4186920T3 (fi) | Ultrapitkävaikutteisia insuliini-Fc-fuusioproteiineja ja käyttömenetelmiä | |
Su et al. | Combining pro-peptide engineering and multisite saturation mutagenesis to improve the catalytic potential of keratinase | |
WO2016199898A1 (ja) | 活性型変異酵素の製造方法および新規活性型変異酵素、並びに可溶性化変異タンパク質の製造方法 | |
CN104845957A (zh) | 一种海参组织蛋白酶的原核表达方法 | |
ATE426674T1 (de) | Stoffwechselanderungen in garungen zur produktion rekombinanter proteine | |
CN105087621A (zh) | 一种海参组织蛋白酶的原核表达方法 | |
Garrigue-Antar et al. | Identification of amino acid residues in bone morphogenetic protein-1 important for procollagen C-proteinase activity | |
CN104480125A (zh) | 一种卵形鲳鲹硫氧还蛋白基因 | |
Ke et al. | A novel PCR-based method for high throughput prokaryotic expression of antimicrobial peptide genes | |
Wang et al. | A novel strategy for the preparation of codon-optimized truncated Ulp1 and its simplified application to cleavage the SUMO fusion protein | |
Zhang et al. | Proteomics‐driven identification of short open reading frame‐encoded peptides | |
DE60026733D1 (de) | Histone-deacetylase-8 proteine, nukleinsäuren und methoden zur verwendung | |
Khalili et al. | High‐level expression and purification of soluble bioactive recombinant human heparin‐binding epidermal growth factor in Escherichia coli | |
Da Silva et al. | Milk clotting and storage-tolerant peptidase from Aureobasidium leucospermi LB86 | |
CN105385706A (zh) | 一种海参组织蛋白酶的真核表达方法 | |
Huang et al. | Engineering Pichia pastoris for efficient production of a novel bifunctional Strongylocentrotus purpuratus invertebrate-type lysozyme | |
CN111057692A (zh) | 一种酯酶、编码基因、载体、重组细胞及其应用 | |
Liu et al. | Efficient coexpression of recombinant human fusion collagen with prolyl 4‐hydroxylase from Bacillus anthracis in Escherichia coli | |
CN115896072A (zh) | 一种氨肽酶BmAp、突变体BmApM及其应用 | |
MA | High expression level of human epidermal growth factor (hEGF) using a well-designed fusion protein-tagged construct in E. coli. | |
Rezaei et al. | Enhancement of extracellular bispecific anti‐MUC1 nanobody expression in E. coli BL21 (DE3) by optimization of temperature and carbon sources through an autoinduction condition | |
WO2022007145A1 (zh) | 一种高效降解羽毛并合成人工血红素蛋白的基因模块及应用 | |
CN111117980B (zh) | 一种南极土壤来源的酯酶及其编码基因和应用 | |
CN102911955B (zh) | 人工合成人肠激酶基因及其表达纯化方法 | |
CN103849624B (zh) | 文蛤DNA结合抑制因子mmID2基因及其编码蛋白和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20151125 |
|
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |