CN105076109A

CN105076109A - 一种粘液处理液及用途

Info

Publication number: CN105076109A
Application number: CN201510489177.7A
Authority: CN
Inventors: 张国锋; 颜珊; 张恩思
Original assignee: XIAMEN BAOTAI BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Current assignee: XIAMEN BAOTAI BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Priority date: 2015-08-12
Filing date: 2015-08-12
Publication date: 2015-11-25

Abstract

本发明公开了一种粘液处理液及用途。其由5-9g/L氯化钠、0.01-0.1M？Tris缓冲液、0.1-3g/L分散剂、体积分数0.1%-0.3%表面活性剂、1-5g/L粘液分解试剂和双蒸水组成。本发明所述粘液处理液常温下可放置贮存，不易变质；在溶液里能兼容于酸性或碱溶液，无毒，专一，高效，对粘液裂解迅速，对细胞则比较温和，不会因为粘液降解过程而损害细胞。

Description

一种粘液处理液及用途

技术领域

本发明涉及细胞生物技术领域，尤其涉及一种粘液处理液及用途。

背景技术

临床上取宫颈细胞样品或者痰液细胞时，样品上常携带有大量的粘液，粘液会包裹细胞，影响细胞在玻片上的平铺效果，粘液附着在玻片上，造成背景复杂，可判读的细胞有限，影响结果的准确性。针对此问题，目前临床采用的解决方法有四种：1、采用过滤网过滤，将大块粘液挡在过滤网上，减少粘液附着在玻片上的面积，该方法主要缺点在于大粘液去除了，小的粘液依然会影响制片，而且会将粘液块直接过滤掉，包裹的大量细胞也随之被过滤掉。在痰液液基中，主要细胞都包裹在粘液中，无法过滤，因此本方法比较粗糙，而且不适用于痰液液基；2、采用梯度离心将大部分粘液分离掉。该方法比过滤法更彻底，能非常有效的去除粘液和杂质，但是缺点也跟第一种一样，包裹在粘液中的细胞无法分离出来，且不适用于痰液液基；3、采用二硫苏糖醇裂解，在保存液中直接加入或在细胞制片前加入二硫苏糖醇以达到裂解粘液的效果。该方法的缺点是二硫苏糖醇不稳定，易分解，需要避光，在溶液中也不稳定，容易失效，同时二硫苏糖醇有毒，会影响操作者的健康；4、采用分解肽裂解。比如采用一些动物中提取的肽蛋白，酶之类，分解效果很好，但同样有保存的局限性，而且肽和酶的反应都有温度限制，不能控制分解进度，分解过久，细胞膜也随之被分解；同时酶在含有醇类的保存液液中容易变性也是一大难题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高效、无毒、专一且成本低的粘液处理液。

为实现上述目的，本发明提供一种粘液处理液，其特征在于：由氯化钠、Tris缓冲液、分散剂、表面活性剂、粘液分解试剂和双蒸水组成。

进一步，所述氯化钠含量为5-9g/L、Tris缓冲液0.01-0.1M，分散剂含量为0.1-3g/L，表面活性剂含量为体积分数0.1%-0.3%，粘液分解试剂1-5g/L，其余为双蒸水。

进一步，所述氯化钠含量为8-9g/L、Tris缓冲液0.01-0.05M，分散剂含量为1-3g/L，表面活性剂含量为0.5-2g/L，粘液分解试剂3-5g/L，其余为双蒸水。

进一步，所述分散剂为乙二胺四乙酸二钠。

进一步，所述表面活性剂为tritonX-100。

进一步，所述粘液分解试剂为甲基半胱氨酸。

本发明还保护所述粘液处理液用于含有大量粘液的样品预处理的用途。

进一步，所述粘液处理液的加量为10mL细胞样品添加200ul权利要求1-5任一项所述粘液处理液。

本发明还保护所述粘液处理液来处理含有大量粘液的样品的方法，其特征在于，其步骤为：向含有粘液的细胞保存液10mL里加入200ul权利要求1-5任一项所述处理液，混匀静置5分钟后即可将细胞样品过滤，然后制片染色，镜检观察。

本发明所述表面活性剂为TritonX-100，合适的表面活性剂量能起到溶解粘液的作用，又能清除污垢，增加溶液的溶解度。低于下限，效果不佳；高于上限会导致正常细胞的裂解。

所述缓冲体系为Tris，能溶解部分粘液，且处理液整体呈弱碱性，缓冲范围广，能维持多个取材部位的细胞正常形状。

所述分散剂为乙二胺四乙酸二钠，能分散细胞之间的粘连。低于下限，效果不佳；高于上限会导致细胞破裂。

所述粘液分解剂选用甲基半胱氨酸，该化学试剂在酸碱条件下均有效，高效，短时间内裂解粘液，对细胞损伤小。低于下限，效果不佳；高于上限会导致细胞膜破裂。

本发明的粘液处理液的有益效果是：

1，所述配方提供了一种稳定的粘液处理液，常温下可放置贮存，不易变质，而酶类则要求比较严格，一般要在冷藏环境下贮存，二硫苏糖醇及其衍生物在溶液中则易降解，不适合长期保存；

2，本发明在溶液里能兼容于酸性或碱溶液，酶类则要求特定PH下方可发挥活性；

3，所述配方提供了一种无毒，专一，高效的粘液处理液，所述配方的原料无毒，对粘液裂解迅速，对细胞则比较温和，因此不会因为粘液降解过程而损害细胞。二硫苏糖醇刺激性大，对操作者是个不利的因素，酶类反应迅速，不易控制，很容易将细胞也裂解，导致损失细胞。

附图说明

图1是本发明实施例6的样品处理，没有用粘液处理情况下的镜检图片，10X；

图2是本发明实施例6的样品处理，用本发明处理液处理后的镜检图片，10X；

图3是本发明实施例6的样品处理，用市售的含有酶的保存液处理后的镜检图片，10X；

图4是本发明实施例6的样品处理，用市售的含有二硫苏糖醇试剂的保存液处理后的镜检图片，10X。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1：粘液处理液的制备

原料：

氯化钠9.0g；

Tris缓冲液0.1M；

乙二胺四乙酸二钠3.0g；

Triton-1003.0g；

甲基半胱氨酸5.0g；

双蒸水定容至1000ml。

制备方法：

按上述成分称量和量取后，搅拌溶解即可。

用本实施例所制备得到的粘液处理液处理带有粘液的胸腹水细胞标本，纸片后观察到粘液很少，基本不覆盖细胞和影响判读,可以将所有细胞清晰的展现在显微镜下。

实施例2：：粘液处理液的制备

原料：

氯化钠5.0g；

Tris缓冲液0.01M；

乙二胺四乙酸二钠1.0g；

Triton-1001.0g；

甲基半胱氨酸1.0g；

双蒸水定容至1000ml。

制备方法：同实施例1。

实施例3：粘液处理液的制备

原料：

氯化钠7.0g；

Tris缓冲液0.05M；

乙二胺四乙酸二钠2.0g；

Triton-1000.5g；

甲基半胱氨酸4.0g；

双蒸水定容至1000ml。

制备方法：同实施例1。

用本实施例所制备得到的粘液处理液处理带有粘液的宫颈细胞标本，纸片后观察到粘液很少，基本不覆盖细胞和影响判读,可以将所有细胞清晰的展现在显微镜下。

实施例4：粘液处理液的制备

原料：

氯化钠8.0g；

Tris缓冲液0.05M；

乙二胺四乙酸二钠2.5g；

Triton-1002.0g；

甲基半胱氨酸3.0g；

双蒸水定容至1000ml。

制备方法：同实施例1。

实施例5：粘液处理液的制备

原料：

氯化钠9.0g；

Tris缓冲液0.05M；

乙二胺四乙酸二钠3.0g；

Triton-1000.1g；

甲基半胱氨酸3.0g；

双蒸水定容至1000ml。

制备方法：同实施例1。

用本实施例所制备得到的粘液处理液处理带有粘液的呼吸道灌洗液标本，纸片后观察到粘液很少，基本不覆盖细胞和影响判读,可以将所有细胞清晰的展现在显微镜下。

实施例6：粘液处理液的制备

原料：

氯化钠8.5g；

Tris缓冲液0.03M；

乙二胺四乙酸二钠0.1g；

Triton-1002.0g；

甲基半胱氨酸3.0g；

双蒸水定容至1000ml。

用实施例6所述配方配制成粘液处理液，优选地，本示例采用痰液标本，但不限于此，可以用带有粘液的宫颈细胞标本，胸腹水细胞标本及呼吸道灌洗液标本以及其他带有粘液的脱落细胞样品，离心浓缩痰液标本。分为4份，标为①，②，③，④。

1.向①样品加入保存液10mL（含有0.05MPh4.5醋酸缓冲液，KCl质量体积比0.85%，乙醇20体积%），并过滤去掉杂质，然后正常制片，优选地，本发明涉及制片方法为自然沉降法。制片完成后染色镜检，10X镜检得图片如附图1所示；

2.向②的样品加入保存液10mL（含有0.05MPh4.5醋酸缓冲液，KCl质量体积比0.85%，乙醇20体积%），同时加入本发明处理液200ul，反应5分钟后，即可把细胞样品拿去过滤网滤去杂质，然后正常制片，优选地，本发明涉及制片方法为自然沉降法。制片完成后染色镜检，10X镜检随机图片得到图2所示；

3.向③加入市售的含有酶的保存液10mL（含0.05MpH7.0PB，NaCl0.85重量体积%,冰醋酸0.5体积体积%，乙二胺四乙酸二钠0.02重量体积%，胰蛋白酶0.1重量体积%），按说明书操作，制片染色同2。10X镜检得图片如附图3所示；

4.向④加入市售的含有二硫苏糖醇试剂的保存液（含0.05MpH7.0PB，NaCl0.85重量体积%,冰醋酸0.3体积体积%，乙二胺四乙酸二钠0.05重量体积%，二硫苏糖醇0.3重量体积%）10mL，按说明书操作，制片染色同2，10X镜检得图片4所示。

效果对比，在没有用粘液处理情况下，结果见图1，a表示可见性的粘液丝；b表示覆盖细胞表面的粘液，影响判断。从图1可以看出：尽管经过过滤，但是仍有较多粘液粘附在细胞表面和玻片上，导致背景复杂，覆盖在细胞上的粘液则会影响对该细胞是否正常的判断。而图2所示图片则是经过本发明的处理液处理后的制片图。c表示处理比较完全，背景中无粘液残留，细胞表面无细胞覆盖。从图2可以看出，粘液很少，基本不覆盖细胞和影响判读。可以将所有细胞清晰的展现在显微镜下。图3加入了含有酶的保存液，d表示处理的效果良好，背景清晰，细胞完整。从图3可以看出：所示酶类分解效果良好，但是酶类不稳定，不易控制，对PH要求严格，需要对应的保存液才可以维持酶的最佳PH。图4加入了含有二硫苏糖醇试剂的保存液，e表示效果良好，背景清晰，但是细胞偏少。从图4可以看出：所示二硫苏糖醇分解效果良好，但是不稳定，容易降解，而且发明人在试验过程中闻到有明显的刺激性气味。

综合以上，本发明的粘液处理液效果好，同时本发明的粘液处理液具有稳定性良好，贮存和溶液条件不受限制，安全的优势。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims

1.一种粘液处理液，其特征在于：由氯化钠、Tris缓冲液、分散剂、表面活性剂、粘液分解试剂和双蒸水组成。

2.权利要求1所述粘液处理液，其特征在于：所述氯化钠含量为5-9g/L、Tris缓冲液0.01-0.1M，分散剂含量为0.1-3g/L，表面活性剂含量为体积分数0.1%-0.3%，粘液分解试剂1-5g/L，其余为双蒸水。

3.权利要求2所述粘液处理液，其特征在于：所述氯化钠含量为8-9g/L、Tris缓冲液0.01-0.05M，分散剂含量为1-3g/L，表面活性剂含量为0.5-2g/L，粘液分解试剂3-5g/L，其余为双蒸水。

4.权利要求1-3任一项所述所述粘液处理液，其特征在于：所述分散剂为乙二胺四乙酸二钠。

5.权利要求1-3任一项所述粘液处理液，其特征在于：所述表面活性剂为tritonX-100。

6.权利要求1或2所述粘液处理液，其特征在于：所述粘液分解试剂为甲基半胱氨酸。

7.权利要求1-6任一项所述粘液处理液用于含有大量粘液的样品预处理的用途。

8.权利要求7所述用于含有大量粘液的样品预处理的用途，其特征在于，所述粘液处理液的加量为10mL细胞样品添加200ul权利要求1-6任一项所述粘液处理液。

9.一种用权利要求1-6任一项所述粘液处理液来处理含有大量粘液的样品的方法，其特征在于，其步骤为：向含有粘液的细胞保存液10mL里加入200ul权利要求1-6任一项所述处理液，混匀静置5分钟后即可将细胞样品过滤，然后制片染色，镜检观察。