CN105055504A - 一种用于预防肉鸽腹泻的饲料添加剂复方精油及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于预防肉鸽腹泻的饲料添加剂复方精油，是由按照重量份计的以下原料制备得到的：青蒿油5-50份、苦豆子油2-20份、百里香酚5-50份、腐殖酸2000份；并提供了其制备方法和应用。本发明的有益效果为：本发明是针对在肉鸽饲养过程中使用抗生素的鸽场的用户日益下降的局面，抗生素曾经为鸽场解决众多的疾病问题，同时产生了对抗生素产品的耐药性和药物残留等问题的情况下，根据中药配方规律，科学组方，通过腐殖酸吸附精油后，制备的稳定新制剂，其组方合理，安全有效，原料易得，制备工艺简单，易于操作，且生产成本低。

Description

一种用于预防肉鸽腹泻的饲料添加剂复方精油及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及兽用药物领域，具体涉及一种用于预防肉鸽腹泻的饲料添加剂复方精油及其制备方法和应用。

背景技术

沙门氏菌(Salmonella)属肠杆菌科,沙门氏菌属,是一大群寄生于人和动物肠道中形态培养特性反应和抗原结构相似的革兰氏阴性杆菌沙门氏菌病是一种常见的人畜共患肠道疾病,在世界各地的细菌性食物中毒中,沙门氏菌引起的中毒病例占第1或第2位沙门氏菌活力和抗性都很强，对鸽子威胁普遍且大，是一种极为顽固的病菌，一旦污染便不容易将其彻底根除7沙门氏菌病菌可由鸽子的唾液8粪便8产蛋等将沙门氏菌排出体外，也可由污染的饲料8饮水等传染其他鸽子7沙门氏菌同样对人类的健康有极大危害7人感染后会引起伤寒副伤寒和急性肠胃炎。

青蒿的化学成分可分为挥发性和非挥发性两大类,前一类主要是挥发油,得率为0.2%～0.25%,含蒿酮、异蒿酮、茨烯、旅烯、丁香烯、左旋樟脑、旅烯、月桂烯、柠檬烯等多种单菇倍半菇类化合物。青蒿油有较强的抗浅部致病性真菌的作用,其抗真菌作用的有效成分为挥发油及挥发油成分的中性和酸性部分。

苦豆子油是由苦豆子植物的种子经水蒸汽蒸馏所得的挥发油。具有抗菌之功效,治皮肤炎症等。

百里香酚（5-甲基-2-异丙基酚），又名麝香草酚，存在于多种植物的精油中。百里香酚多用于制作香料、防腐剂、医用杀菌剂和驱蛔虫剂，近年来研究表明百里香酚具有杀螨抑菌等多种生物活性。

以上三种精油，被欧盟批准为植保产品，具有抗菌和抗氧化的功效，可用作香精和防腐剂等。由于以上精油化学成分不稳定,也不溶于水,因此在制剂过程中容易被破坏或丢失。采用与腐殖酸结合技术,将其制成精油结合物,可提高精油的稳定性和可用性,虽然提高精油制剂的质量，但是生产实践中的广泛使用，稳定性不够，效果也不理想。

目前我国正在倾力建设“畜产品安全”工程，要对畜产品中沙门氏菌污染的危害探讨并对其进行准确、快速检测和实施有效控制的办法，以保障畜产品的安全。随着现代科学技术的不断发展，特别是生物化学、分子生物学、免疫学的不断发展，迫切需要提出一种更快捷、简便、特异、敏感、低耗且实用的可以预防致病沙门氏菌的兽用药。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种疗效确切、治疗效率高、安全有效、天然、无刺激的用于预防肉鸽腹泻的饲料添加剂复方精油。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：一种用于预防肉鸽腹泻的饲料添加剂复方精油，是由按照重量份计的以下原料制备得到的：青蒿油5-50份、苦豆子油2-20份、百里香酚5-50份、腐殖酸2000份。

进一步的，上述的一种用于预防肉鸽腹泻的饲料添加剂复方精油，是由按照重量份计的以下原料制备得到的：青蒿油25份、苦豆子油16份、百里香酚25份、腐殖酸2000份。

本发明的第二个目的是提供了上述一种用于预防肉鸽腹泻的饲料添加剂复方精油的制备方法，按照重量配比称取青蒿油、苦豆子油和百里香酚，加入50ml乙醇，在室温下加入至配比量的腐殖酸中，振荡18h，减压蒸出乙醇后,40℃干燥即可。

本发明的第三个目的是提供了上述一种用于预防肉鸽腹泻的饲料添加剂复方精油在制备预防肉鸽腹泻的饲料中的应用。

进一步的，上述的应用，每公斤肉鸽饲料中添加100g所述的用于预防肉鸽腹泻的饲料添加剂复方精油。

本发明所提供的用于预防肉鸽腹泻的饲料添加剂复方精油，是活性腐殖酸与精油结合成稳定的制剂，稳定精油主要成分为青蒿油、苦豆子油、百里香酚，吸附剂为腐殖酸，是活化处理后的产品，通过吸附精油后形成稳定的兽用药物。

本发明采用将青蒿油、苦豆子油和百里香酚精油通过多年生产实际总结，进行科学组方，通过广泛的市场应用所确定，并通过活性腐殖酸进行吸附，获得稳定的鸽子防治药物。对3种沙门氏致病菌的MIC较小，并与单方精油的抗菌效果进行比较，其抗菌效果优于单方精油，为一种优良的天然抗菌剂。本发明的原理：本发明配方中的精油为饲料添加的抗菌植物药，对细菌、酵母和霉菌的生长有较强的抑制作用。该配方其对仔猪腹泻等细菌性感染有较好的效果。

本发明的有益效果为：本发明是针对在肉鸽饲养过程中使用抗生素的鸽场的用户日益下降的局面，抗生素曾经为鸽场解决众多的疾病问题，同时产生了对抗生素产品的耐药性和药物残留等问题的情况下，根据中药配方规律，科学组方，通过腐殖酸吸附精油后，制备的稳定新制剂，其组方合理，安全有效，原料易得，制备工艺简单，易于操作，且生产成本低。

附图说明

图1为由兰州市鸽养殖场提供的致病鸽中分离的致病沙门氏菌（P3）的分离过程示意图。

具体实施方式

实施例1：

本发明的原理：本发明配方中的精油为饲料添加的抗菌植物药，对细菌、酵母和霉菌的生长有较强的抑制作用。

组方分别为：

实验组1：

青蒿油0.25g，苦豆子油0.5g，百里香酚2.5g，腐殖酸100g。

实验组2：

青蒿油1.25g，苦豆子油0.8g，百里香酚1.25g，腐殖酸100g。

实验组3：

青蒿油2.5g，苦豆子油1g，百里香酚0.25g，腐殖酸100g。

对照组1：

青蒿油4g，腐殖酸100g。

对照组2：

苦豆子油4g，腐殖酸100g。

对照组3：

百里香酚4g，腐殖酸100g。

具体制备过程：

按照重量配比称取青蒿油、苦豆子油和百里香酚，加入50ml乙醇，在室温下加入至配比量的腐殖酸中，振荡18h，减压蒸出乙醇后,40℃干燥即可。

实施例2：

肉鸽致病沙门氏菌的药敏试验：

沙门氏菌(Salmonella)属肠杆菌科,沙门氏菌属,是一大群寄生于人和动物肠道中形态、培养特性、反应和抗原结构相似的革兰氏阴性杆菌。沙门氏菌病是一种常见的人畜共患肠道疾病,在世界各地的细菌性食物中毒中,沙门氏菌引起的中毒病例占第1或第2位。沙门氏菌活力和抗性都很强，对鸽子威胁普遍且大，是一种极为顽固的病菌，一旦污染便不容易将其彻底根除。沙门氏菌病菌可由鸽子的唾液、粪便、产蛋等将沙门氏菌排出体外，也可由污染的饲料、饮水等传染其他鸽子。沙门氏菌同样对人类的健康有极大危害。人感染后会引起伤寒。副伤寒和急性肠胃炎。

目前我国正在倾力建设“畜产品安全”工程，要对畜产品中沙门氏菌污染的危害探讨并对其进行准确、快速检测和实施有效控制的办法，以保障畜产品的安全。随着现代科学技术的不断发展，特别是生物化学、分子生物学、免疫学的不断发展，人们发明出更快捷、简便、特异、敏感、低耗且实用的沙门氏菌的检测方法。本试验选取3种复方精油中药与3种对照，进行了对沙门氏菌的抑菌活性研究对鸽子养殖业的生产，预防治疗和有效控制致病菌的相互传染有积极指导作用，为今后进一步研究提供宝贵的资料。

1材料与方法：

1.1材料与仪器：

致病沙门氏菌（P3）：由兰州市鸽养殖场提供的致病鸽中分离，分离过程如图1所示；BS琼脂培养基：购于甘肃凯悦生物科技有限公司；药物试剂：购于各医药公司；青蒿油：蒿酮40%(g/g)、苦豆子油30%(g/ml生物碱)、百里香酚99%(g/g)均购自广东云花实业有限公司；腐殖酸：购于山西侯马市新佳友腐植酸公司；SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵由上海亚荣仪器有限公司提供；电热恒温干燥箱，8打孔器8无菌操作台8抑菌药物纸片等。

1.2试验方法：

1.2.1药液的制备：

中药药液的制备：将实验组三种复方精油及对照组三种单方精油各称取烘干后的药粉50g，加水500mL,浸泡30min后煎煮,煮沸后文火煎30min用四层纱布过滤药液，药渣加水250mL煮沸后煎30min，过滤药液合并两次药液，用旋转挥发仪将药液浓缩至2g/mL,高压蒸气灭菌冷却后保存于40℃冰箱保存待用。

1.2.2菌悬液的制备：

无菌操作用烧红冷却的接种环挑取培养16-24h的沙门氏菌，置于无菌生理盐水中，摇匀制得沙门氏菌混悬液，并按照平板菌落计数法校正得出该混悬液的CFU。

1.2.3培养基平板的制备与接种（细菌涂布法）：

无菌操作制得BS培养基平板，并用记号笔在平板的底部标明药物名称和药物浓度。无菌操作用无菌吸取105-106CFU/ml沙门氏菌0.2ml于培养基平板表面上，用无菌T型涂布棒均匀涂布，晾干1min。

1.2.4抑菌测试：

琼脂扩散法：用灭菌的不锈钢打孔器小管（外径为0.7mm)，放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合；再加入不同浓度不同的药液并标记，样品加至满而不溢为止3每组做3个平行试验,另外做3组对照，在一个平板中加入无菌蒸馏水作为空白对照。

1.2.5最小抑菌浓度（MIC）的测定：

选择较小药物浓度，并且对比前后2倍稀释浓度的药物抑菌圈大小，肉眼观察是否有细菌生长，以不出现肉眼可见生长的最低药物浓度为该药对沙门氏菌的最小抑菌浓度（MIC）。在MIC测定的基础上，继续培养24h，以完全无菌生长的最低药物浓度为最小杀菌浓度（MBC）

2结果与分析：

2.1不同浓度提取物的抑菌效果：

以沙门氏菌为试验细菌，以3种复方中药精油及单方对照为供试药剂，测定不同药物的抑菌活性与效果，沙门氏菌中药药敏试验抑菌结果如表1所示。

表1

由表1可知，从的抑菌作用是第2个中药复方效果最好，其次复方3和复方1，复方的抑菌作用均强于单方。

3结论：

试验结果表明,3种复方及3个对照药物均对鸽沙门氏菌有抑制作用,且复方2抑菌作用最好，其次是复方3，表明复方精油在较低的浓度下就能抑制和杀死供试细菌,显示了较好的抑菌和杀菌活性。

实施例3：

鸽沙门氏菌病病原特性的研究：

鸽沙门氏菌病又名鸽副伤寒、翅麻痹、腿麻痹和眩晕病。国外科技工作者对本病及其病原特性已进行过不少研究工作。概括如下:(1)沙门氏菌可导致幼鸽下痢、关节炎和运动神经障碍。(2)病原菌的血清型绝大多数为鼠伤寒沙门氏菌哥本哈根变种。这个变种与典型的鼠伤寒沙门氏菌略有不同,它缺少菌体抗原,该菌极少能感染人类。是副伤寒型特异性感染鸽的唯一例子。(3)多侵犯1岁以下的幼鸽,感染率通常为10-25%,耐过的成鸽常成为带菌者,从粪便中持续排菌。(4)本病病原在自然界中广泛分布,主要通过蛋及消化道传染。蛋的传染包括由带菌鸽所产的带菌蛋和本菌污染蛋壳后侵入蛋内而引起。消化道感染主要是食进受病原菌污染的饲料和饮水所致,也可通过接吻以及亲鸽哺喂鸽乳而发生。

为探讨防治鸽的沙门氏菌的感染的临床效果，申请人先后在甘肃4个不同类型的鸽场进行了防治试验和研究，结果如下。

材料与方法

一、采样：

在兰州市郊、河西地区的4个大、中、小型鸽场的鸽群中,选取拉黄绿色或灰白色稀粪、翅关节和腿关节麻痹或运动神经障碍的病鸽或死鸽,以无菌操作采取心、肝和肿胀关节的内容物作病料,或用经灭菌的棉签擦拭直肠粘膜取样。

二、病原菌分离：

取上述病料和直肠拭子样本作细菌培养后,进行形态特征、培养特性和生化特性检查。

三、菌株的分型鉴定：

经上述检查后,定为沙门氏菌属者,再用沙门氏菌因子血清作玻片凝集反应,结合生化反应特点最后定型。

四、对鸽和实验动物的人工感染试验：

实验1：取分离的鼠伤寒沙门氏菌哥本哈根变种菌株P3。制备感染液各自接种健康肉用幼鸽。观察14天,若发生死亡,除进行剖检观察病变外,还采取心血和肝组织分离细菌并鉴定其是否为接种的沙门氏菌，并用3个复方3个单方进行预防（每公斤饲料添加100g所制备的样品）。

实验2：不同血清型的沙门氏菌菌株对幼鸽致病试验。取分离的鼠伤寒沙门氏菌哥本哈根变种菌株平P109，制备感染液各自接种健康肉用幼鸽。观察14天,若发生死亡,除进行剖检观察病变外,还采取心血和肝组织分离细菌并鉴定其是否为接种的沙门氏菌，并用3个复方3个单方（每公斤饲料添加100g所制备的样品）。

实验3：不同血清型的沙门氏菌菌株对幼鸽致病试验。取分离的鼠伤寒沙门氏菌菌株P203，制备感染液各自接种健康肉用幼鸽。观察14天,若发生死亡,除进行剖检观察病变外,还采取心血和肝组织分离细菌并鉴定其是否为接种的沙门氏菌，并用3个复方3个单方（每公斤饲料添加100g所制备的样品）。

实验4：不同血清型的沙门氏菌菌株对幼鸽致病试验。取分离的鼠伤寒沙门氏菌菌株P206，制备感染液各自接种健康肉用幼鸽。观察14天,若发生死亡,除进行剖检观察病变外,还采取心血和肝组织分离细菌并鉴定其是否为接种的沙门氏菌，并用3个复方3个单方（每公斤饲料添加100g所制备的样品）。

试验结果：

1.从兰州市郊、河西地区的4个大、中、小型鸽场的鸽群中分离出24个沙门氏菌菌株中，有20个属于鼠伤寒沙门氏菌哥本哈根变种，占85%。

2.I、、、组鸽在注射P3、P109、P203和P206。菌株的肉汤培养物后,各组分别死亡见表1。对照组5只皆健康。

感染组大部分在4-8天死亡,少数于24-48小时死亡,2只分别于感染后l0和12天死亡。感染后48小时内死亡的鸽,口、鼻粘液增多,泄殖腔周围的羽毛有绿色或灰白色稀粪。剖检可见心外膜血管扩张充血,心冠沟有少最针头大小出血点,肝脏呈不同程度郁血、肿大、肠粘膜充血出血,直肠和泄殖腔处尤为严重,肠道内含有较多量的黄绿或灰黄色内容物。在感染4天后死亡的鸽,剖检有时可见心、肝、脾、肾和肺有数量不等的针尖至大头针大的灰白色病灶。病理组织学检查,可见肝组织有多量单核样细胞浸润,在肝实质细胞中有许多局灶性坏死区,坏死区中肝细胞的结构完全消失,仅见多量的大小不匀的蓝色核碎屑。在肺组织中有灶性坏死,坏死灶中间成均质红染,周围有多核巨细胞和单核样细胞分布,最外围有纤维细胞增生和多量淋巴细胞包裹。24个沙门氏菌菌株药敏试验结果如表2所示。

表2

结论：

1．从兰州4个鸽场分离出的24个沙门氏菌菌株中,有20个属于鼠伤寒沙门氏菌哥本哈根变种,占84%；4个为鼠伤寒沙门氏菌,占15%。这与前人所报道的鸽副伤寒的病原绝大多数为鼠伤寒沙门氏菌哥本哈根变种的结论是一致的。

2．分离到的鼠伤寒沙门氏菌哥本哈根变种菌菌株和鼠伤寒沙门氏菌菌株均对该发明的复方及单方制剂敏感，因此，在疫场用药时可供参考。

3.发病鸽群中外表健康鸽的直肠拭子可分离出本菌,这与资料中报道的患过此病的鸽常可成为带菌者并在粪便中间歇排菌的情况是一致的。

本试验选取3种复方精油中药与3种对照，进行了对沙门氏菌的抑菌活性研究对鸽子养殖业的生产，预防治疗和有效控制致病菌的相互传染有积极指导作用，为今后进一步研究提供宝贵的资料。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种用于预防肉鸽腹泻的饲料添加剂复方精油，其特征在于，是由按照重量份计的以下原料制备得到的：青蒿油5-50份、苦豆子油2-20份、百里香酚5-50份、腐殖酸2000份。

2.根据权利要求1所述的一种用于预防肉鸽腹泻的饲料添加剂复方精油，其特征在于，是由按照重量份计的以下原料制备得到的：青蒿油25份、苦豆子油16份、百里香酚25份、腐殖酸2000份。

3.根据权利要求1或2所述的一种用于预防肉鸽腹泻的饲料添加剂复方精油的制备方法，其特征在于，按照重量配比称取青蒿油、苦豆子油和百里香酚，加入50ml乙醇，在室温下加入至配比量的腐殖酸中，振荡18h，减压蒸出乙醇后，40℃干燥即可。

4.根据权利要求1或2所述的一种用于预防肉鸽腹泻的饲料添加剂复方精油在制备预防肉鸽腹泻的饲料中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，每公斤肉鸽饲料中添加100g所述的用于预防肉鸽腹泻的饲料添加剂复方精油。