CN105052752A - 一种用于白芨组培的培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种用于白芨组培的培养基。其包括改良型MS培养基：硝酸钾1890-1900mg/L，硝酸铵1650-1660mg/L，CaCl2·2H2O440-445mg/L，七水硫酸镁370-375mg/L，磷酸二氢钾165-170mg/L，KI0.75-0.83mg/L，氯化钴0.025-0.03mg/L，硫酸亚铁27.8-30mg/L，乙二胺四乙酸24.3-26mg/L，肌醇95-100mg/L，烟酸0.8-1mg/L，盐酸吡哆醇0.8-1mg/L，盐酸硫胺素0.8-1mg/L，甘氨酸3-4mg/L。本发明培育出的白芨苗根健壮，球茎大，变异现象少，移栽成活率高，生长快。
Description
技术领域
本发明涉及白芨组培领域，具体而言，涉及一种用于白芨组培的培养基。
背景技术
白芨是多年生草本球根植物，植株高18-60厘米，主要分布在中国、日本以及缅甸北部，主要花期在春季，但因各地气候而不同，晚冬至夏初都可能开花。白芨有广泛的药用价值及园林价值。白芨主要用于收敛止血，消肿生肌，可盆栽室内观赏，亦可点缀于较为荫蔽的花台、花境或庭院一角。
利用组织培养技术快速培育白芨苗是目前人工繁育白芨苗的最有力手段，主要包括三个阶段：(1)萌发培养，(2)分化培养，(3)生根培养。传统培养基的培育存在易产生变异苗、球茎弱小、生长缓慢、驯化时间长、移栽成活率低等问题。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于白芨组培的培养基，所述的培养基培育出的白芨苗根健壮，球茎大，变异现象少，移栽成活率高，生长快。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种用于白芨组培的培养基，包括改良型MS培养基，所述改良型MS培养基的配方为：硝酸钾1890-1900mg/L，硝酸铵1650-1660mg/L，二水氯化钙440-445mg/L，七水硫酸镁370-375mg/L，磷酸二氢钾165-170mg/L，碘化钾0.75-0.83mg/L，硼酸5-6.2mg/L，四水硫酸锰22.3-24mg/L，七水硫酸锌8.6-10mg/L，钼酸钠0.2-0.25mg/L，五水硫酸铜0.025-0.03mg/L，氯化钴0.025-0.03mg/L，硫酸亚铁27.8-30mg/L，乙二胺四乙酸24.3-26mg/L，肌醇95-100mg/L，烟酸0.8-1mg/L，盐酸吡哆醇0.8-1mg/L，盐酸硫胺素0.8-1mg/L和甘氨酸3-4mg/L，pH为5.8-6.0。
上述用于白芨组培的培养基主要是在传统MS培养基上进行了额改良，主要优化了乙二胺四乙酸、烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素和甘氨酸的浓度，使其更适宜白芨的组培。与现有的培养基相比，本发明的培养基培育出的白芨苗根健壮，球茎大，变异现象少，移栽成活率高，生长快。
在实际应用中，可以根据白芨的不同组培阶段调整上述改良型MS培养基的浓度，也可以按需添加激素等营养物质。以三级组培为例，在种子萌发阶段，可以采用1/2改良型MS培养基，再加上萘乙酸；在分化阶段，可以采用原始的改良型MS培养基，再加上细胞分裂素(例如，6-BA)和萘乙酸等；在生根阶段，可以采用1/2改良型MS培养基，再加上萘乙酸。使用上述培养基时，可以采用以下培养条件：温度24-26℃，光照强度1500-2000lx,光照时间10-12h/d。
优选地，所述改良型MS培养基的配方为：硝酸钾1895-1900mg/L，硝酸铵1650-1655mg/L，二水氯化钙440-442mg/L，七水硫酸镁370-373mg/L，磷酸二氢钾165-170mg/L，碘化钾0.8-0.83mg/L，硼酸5.5-6.2mg/L，四水硫酸锰22.3-23.6mg/L，七水硫酸锌8.6-10mg/L，钼酸钠0.2-0.25mg/L，五水硫酸铜0.025-0.03mg/L，氯化钴0.028-0.03mg/L，硫酸亚铁27.8-29mg/L，乙二胺四乙酸24.3-25mg/L，肌醇98-100mg/L，烟酸0.8-0.9mg/L，盐酸吡哆醇0.8-0.9mg/L，盐酸硫胺素0.8-0.9mg/L和甘氨酸3-3.5mg/L，pH为5.8-6.0。
以上改良型MS培养基更适宜白芨的萌发及成苗。
优选地，按浓度计，包括：1/2浓度的所述改良型MS培养基，萘乙酸0.2-0.5mg/L。该培养基主要适用于种子萌发阶段。
优选地，按浓度计，包括：改良型MS培养基，萘乙酸0.2-0.5mg/L，6-苄氨基腺嘌呤1.5-2.0mg/L。该培养基主要适用于分化阶段。
在种子萌发和分化两个阶段的培养基中，可以添加：土豆汁30-40g/L，蔗糖30-40g/L，琼脂粉4.3-4.5g/L，以提高萌发成功率，和分化速率。具体地，土豆汁中含有淀粉和其他未知生长因子，有助于白芨种子的萌发和原球茎的增殖。白芨种子萌发阶段不能进行光合作用，缺乏自养能力，需要外源碳源提供能量，蔗糖分子可以进出植物细胞，可提供碳源，使种子萌发和原球茎增值。琼脂粉，高温溶解，常温凝固为固体胶，与其他营养物质混合凝固便于白芨种子或原球茎更好的吸收养分。
优选地，按浓度计，包括：1/2浓度的所述改良型MS培养基，萘乙酸1.0-2.0mg/L。该培养基主要适用于生根阶段。
优选地，还包括：土豆汁30-40g/L，蔗糖30-40g/L，琼脂粉4.3-4.5g/L，香蕉汁60-70g/L。在生根阶段添加这些营养物质，能提高成苗的成功率及速度。土豆汁起到提供营养物质和促生长的作用。香蕉汁，利于白芨苗生根壮根，提高白芨在室外炼苗的成活率。蔗糖，提供碳源，使白芨苗生长健壮，并在一定程度上减少微生物的污染。
优选地，所述香蕉汁浓度为60-65g/L，优化生根阶段香蕉汁的浓度，以增大白芨苗的球茎，同时减少变异现象。
优选地，萘乙酸浓度为1-1.5mg/L，优化生根阶段萘乙酸的浓度，以减少变异现象，提高移栽成活率。
优选地，蔗糖浓度为35-40g/L，优化种子萌发和分化阶段蔗糖的浓度，以提高萌发和分化速率。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)改良传统的MS培养基，使其更适宜白芨的组培，培育出的白芨苗根健壮，球茎大，变异现象少，移栽成活率高，生长快。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1
一种用于白芨组培的改良型MS培养基：配方如表1所示。
表1实施例1的改良型MS培养基
| 名称 | 用量mg/L |
| 硝酸钾 | 1900 |
| 硝酸铵 | 1650 |
| 二水氯化钙 | 440 |
| 七水硫酸镁 | 370 |
| 磷酸二氢钾 | 170 |
| 碘化钾 | 0.083 |
| 硼酸 | 6.2 |
| 四水硫酸锰 | 22.3 |
| 七水硫酸锌 | 8.6 |
| 钼酸钠 | 0.25 |
| 五水硫酸铜 | 0.025 |
| 氯化钴 | 0.025 |
| 硫酸亚铁 | 27.8 |
| 乙二胺四乙酸 | 24.3 |
| 肌醇 | 100 |
| 烟酸 | 0.8 |
| 盐酸吡哆醇 | 0.8 |
| 盐酸硫胺素 | 0.8 |
| 甘氨酸 | 3 |
| pH | 5.8 |
实施例2
一种用于白芨组培的改良型MS培养基：配方如表2所示。
表2实施例2的改良型MS培养基
| 名称 | 用量mg/L |
| 硝酸钾 | 1890 |
| 硝酸铵 | 1660 |
| 二水氯化钙 | 445 |
| 七水硫酸镁 | 375 |
| 磷酸二氢钾 | 160 |
| 碘化钾 | 0.75 |
| 硼酸 | 5 |
| 四水硫酸锰 | 24 |
| 七水硫酸锌 | 10 |
| 钼酸钠 | 0.2 |
| 五水硫酸铜 | 0.03 |
| 氯化钴 | 0.03 |
| 硫酸亚铁 | 30 |
| 乙二胺四乙酸 | 26 |
| 肌醇 | 95 |
| 烟酸 | 1 |
| 盐酸吡哆醇 | 1 |
| 盐酸硫胺素 | 1 |
| 甘氨酸 | 4 |
| pH | 6.0 |
实施例3
一种用于白芨组培的改良型MS培养基：配方如表3所示。
表3实施例3的改良型MS培养基
| 名称 | 用量mg/L |
| 硝酸钾 | 1895 |
| 硝酸铵 | 1655 |
| 二水氯化钙 | 442 |
| 七水硫酸镁 | 373 |
| 磷酸二氢钾 | 165 |
| 碘化钾 | 0.8 |
| 硼酸 | 5.5 |
| 四水硫酸锰 | 23.6 |
| 七水硫酸锌 | 10 |
| 钼酸钠 | 0.2 |
| 五水硫酸铜 | 0.03 |
| 氯化钴 | 0.028 |
| 硫酸亚铁 | 29 |
| 乙二胺四乙酸 | 25 |
| 肌醇 | 98 |
| 烟酸 | 0.9 |
| 盐酸吡哆醇 | 0.9 |
| 盐酸硫胺素 | 0.9 |
| 甘氨酸 | 3.5 |
| pH | 5.9 |
实施例4
一种用于白芨组培种子萌发阶段的培养基：1/2改良型MS培养基(实施例1)，萘乙酸0.2mg/L，土豆汁40g/L，蔗糖30g/L，琼脂粉4.3g/L。
实施例5
一种用于白芨组培种子萌发阶段的培养基：1/2改良型MS培养基(实施例2)，萘乙酸0.5mg/L。
实施例6
一种用于白芨组培种子萌发阶段的培养基：1/2改良型MS培养基(实施例3)，萘乙酸0.5mg/L，土豆汁40g/L，蔗糖35g/L，琼脂粉4.5g/L。
实施例7
一种用于白芨组培分化阶段的培养基：改良型MS培养基(实施例1)，萘乙酸0.2mg/L，6-苄氨基腺嘌呤2.0mg/L，土豆汁40g/L，蔗糖30g/L，琼脂粉4.5g/L。
实施例8
一种用于白芨组培分化阶段的培养基：改良型MS培养基(实施例2)，萘乙酸0.5mg/L，6-苄氨基腺嘌呤1.5mg/L。
实施例9
一种用于白芨组培分化阶段的培养基：改良型MS培养基(实施例3)，萘乙酸0.2mg/L，6-苄氨基腺嘌呤2.0mg/L，土豆汁40g/L，蔗糖35g/L，琼脂粉4.5g/L。
实施例10
一种用于白芨组培生根阶段的培养基：1/2改良型MS培养基(实施例1)，萘乙酸2.0mg/L，土豆汁40g/L，蔗糖30g/L，琼脂粉4.5g/L，香蕉汁60g/L。
实施例11
一种用于白芨组培生根阶段的培养基：1/2改良型MS培养基(实施例2)，萘乙酸2.0mg/L。
实施例12
一种用于白芨组培生根阶段的培养基：1/2改良型MS培养基(实施例3)，萘乙酸1.5mg/L，土豆汁30g/L，蔗糖40g/L，琼脂粉4.5g/L，香蕉汁60g/L。
实施例13
一种用于白芨组培生根阶段的培养基：1/2改良型MS培养基(实施例1)，萘乙酸2.0mg/L，土豆汁30g/L，蔗糖40g/L，琼脂粉4.5g/L，香蕉汁65g/L。
实验例
实验组：
将实施例4、7、10结合起来培育白芨苗，作为样品1；将实施例5、8、11结合起来培育白芨苗，作为样品2；将实施例6、9、12结合起来培育白芨苗，作为样品3；将实施例4、7、13结合起来培育白芨苗，作为样品4。
对照组：三个阶段(萌发、分化、生根)所用的培养基相同，如表4所示。
表4对照组所用的培养基
| 名称 | 用量mg/L |
| 硝酸钾 | 1900 |
| 硝酸铵 | 1650 |
| 二水氯化钙 | 440 |
| 七水硫酸镁 | 370 |
| 磷酸二氢钾 | 170 |
| 碘化钾 | 0.83 |
| 硼酸 | 6.2 |
| 四水硫酸锰 | 22.3 |
| 七水硫酸锌 | 8.6 |
| 钼酸钠 | 0.25 |
| 五水硫酸铜 | 0.025 |
| 氯化钴 | 0.025 |
| 硫酸亚铁 | 28.7 |
| 乙二胺四乙酸 | 37.3 |
| 肌醇 | 100 |
| 烟酸 | 0.5 |
| 盐酸吡哆醇 | 0.5 |
| 盐酸硫胺素 | 0.1 |
| 甘氨酸 | 2 |
| pH | 6.0 |
实验组和对照组的培育均在以下条件培育：温度25℃，光照强度1500lx，光照时间10h/d，且种子萌发周期为30天，分化周期为30天，生根周期为60天。
评价上述所有组别得到的白芨苗的生长情况，结果如下表5所示。
表5白芨苗的生长情况
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。
Claims (10)
1.一种用于白芨组培的培养基，其特征在于，包括改良型MS培养基，所述改良型MS培养基的配方为：硝酸钾1890-1900mg/L，硝酸铵1650-1660mg/L，二水氯化钙440-445mg/L，七水硫酸镁370-375mg/L，磷酸二氢钾165-170mg/L，碘化钾0.75-0.83mg/L，硼酸5-6.2mg/L，四水硫酸锰22.3-24mg/L，七水硫酸锌8.6-10mg/L，钼酸钠0.2-0.25mg/L，五水硫酸铜0.025-0.03mg/L，氯化钴0.025-0.03mg/L，硫酸亚铁27.8-30mg/L，乙二胺四乙酸24.3-26mg/L，肌醇95-100mg/L，烟酸0.8-1mg/L，盐酸吡哆醇0.8-1mg/L，盐酸硫胺素0.8-1mg/L和甘氨酸3-4mg/L；pH为5.8-6.0。
2.根据权利要求1所述的用于白芨组培的培养基，其特征在于，所述改良型MS培养基的配方为：硝酸钾1895-1900mg/L，硝酸铵1650-1655mg/L，二水氯化钙440-442mg/L，七水硫酸镁370-373mg/L，磷酸二氢钾165-170mg/L，碘化钾0.8-0.83mg/L，硼酸5.5-6.2mg/L，四水硫酸锰22.3-23.6mg/L，七水硫酸锌8.6-10mg/L，钼酸钠0.2-0.25mg/L，五水硫酸铜0.025-0.03mg/L，氯化钴0.028-0.03mg/L，硫酸亚铁27.8-29mg/L，乙二胺四乙酸24.3-25mg/L，肌醇98-100mg/L，烟酸0.8-0.9mg/L，盐酸吡哆醇0.8-0.9mg/L，盐酸硫胺素0.8-0.9mg/L和甘氨酸3-3.5mg/L；pH为5.8-6.0。
3.根据权利要求1所述的用于白芨组培的培养基，其特征在于，按浓度计，包括：1/2浓度的所述改良型MS培养基和萘乙酸0.2-0.5mg/L。
4.根据权利要求1所述的用于白芨组培的培养基，其特征在于，按浓度计，包括：改良型MS培养基，萘乙酸0.2-0.5mg/L和6-苄氨基腺嘌呤1.5-2.0mg/L。
5.根据权利要求3或4所述的用于白芨组培的培养基，其特征在于，还包括：土豆汁30-40g/L，蔗糖30-40g/L，琼脂粉4.3-4.5g/L。
6.根据权利要求1所述的用于白芨组培的培养基，其特征在于，按浓度计，包括：1/2浓度的所述改良型MS培养基和萘乙酸1.0-2.0mg/L。
7.根据权利要求6所述的用于白芨组培的培养基，其特征在于，还包括：土豆汁30-40g/L，蔗糖30-40g/L，琼脂粉4.3-4.5g/L，香蕉汁60-70g/L。
8.根据权利要求7所述的用于白芨组培的培养基，其特征在于，所述香蕉汁浓度为60-65g/L。
9.根据权利要求6所述的用于白芨组培的培养基，其特征在于，萘乙酸浓度为1-1.5mg/L。
10.根据权利要求5所述的用于白芨组培的培养基，其特征在于，蔗糖浓度为35-40g/L。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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