CN105031041A - 植物萃取组成物及其医药组合物与用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种植物萃取组成物及其医药组合物与用途，该植物萃取组成物包含1.5wt％至40wt％的白藜芦醇及10wt％至85wt％的绿茶萃取物。相较于市售的化学合成的减肥药，本发明所述的植物萃取组成物不但具有高度的安全性，且可有效地抑制脂肪前驱细胞、分化中脂肪细胞、分化后成熟的脂肪细胞、增加肉碱酰基转移酶-1活性，亦可调节瘦素基因或阻抗素基因表现量，以达到降低体脂肪与减少体重的效果。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物萃取组成物，尤指可抑制脂肪细胞、降低体脂肪、减少体重或促进脂肪代谢的植物萃取组成物；本发明另关于一种前述组成物的应用，尤指用于抑制脂肪细胞、降低体脂肪、减少体重或促进脂肪代谢的应用；本发明另关于一种医药组合物，尤指一种包含前述植物萃取组成物的医药组合物。
背景技术
根据世界卫生组织(worldhealthorganization，WHO)的资料指出，肥胖扮演一个全球性的流行性疾病，其中超过十四亿的成人体重过重(BMI>25)，在这些过重者中至少有五亿人在临床上被诊断为肥胖(BMI>30)，而这些肥胖的人罹患高血压、血脂異常、糖尿病、痛风等和代谢相关疾病的机率都比一般人大幅增高。根据美国约翰霍普金斯大学彭博公共卫生学院(JohnsHopkinsBloombergSchoolofPublicHealth)在2007年报告指出，估计到2015年全美将有75％成人体重过重，41％的人口属于肥胖。另外，根据世界卫生组织的数据，中国成年人过重和肥胖比率从2002年25％大幅上升到2010年38.5％。预测到2015年，中国将会有50％至57％的人口体重过重。
肥胖的原因是非常复杂的，且有多重因子牵涉其中。越来越多的证据显示肥胖并非自我控制的简单问题，而是涉及食欲调节与能量代谢的复杂失调症。此外，研究显示肥胖症与高血压、血脂異常、糖尿病、心血管疾病、恶性肿瘤、脂肪肝、代谢症候群等疾病密切相关，肥胖不仅造成死亡率提高及庞大医疗负担，也影响了人类的生活质量。虽然肥胖的病因并未完全被确立，但认为与遗传、代谢、生化、文化与精神社会的因子有关。一般而言，肥胖已被认为是过多的体脂肪将人体健康置于危险的一种疾病。
研究显示，有高达八项死因与肥胖有关，包括恶性肿瘤、心脏疾病、脑血管疾病、糖尿病、慢性下呼吸道疾病、慢性肝病及肝硬化、高血压性疾病、肾脏疾病。显示肥胖问题已成为全球皆极须重视的问题。近年来肥胖的盛行率愈来愈高，而伴随肥胖通常会逐渐出现高血压、血糖和胰岛素阻抗及血脂异常等代谢异常现象而导致代谢症候群，很容易发展演变成糖尿病、肾脏疾病、动脉粥状硬化及产生血栓等脑心血管疾病，而造成中风或心肌梗塞，甚至死亡。世界卫生组织的研究报告也指出，肥胖是全球造成死亡的第五大风险因子，每年至少有280万成人死于超重或肥胖，其中有44％的糖尿病及23％的缺血性心脏病医疗负担可归因于肥胖。
市面上减肥的产品众多，但成分良莠不齐，且价格悬殊。目前合法的减肥药品成份是运用阻断肠道对于部份脂肪的吸收，以减少来自食物当中一部份脂肪的热量，对于体内已囤积的脂肪或是脂肪代谢，则完全没有帮助，因此很难从根本改善肥胖或其衍生的相关问题，且有极大的副作用，包含干扰脂溶性维生素吸收、油便、胃胀气、亦可能造成胆结石与肝肾损伤等，因此不适合长期使用。有鉴于美国肥胖问题越来越严重，美国于2012年核准上市两项减肥新药，分别为芬他命(phentermine)-妥泰(topiramate)复方及氯卡色林(lorcaserin)，其作用机转主要都在于增加饱足感，以抑制食欲，来达到减重的目的，虽然相较于不会有其油便及肠胃不适的副作用，但仍有头晕、恶心或失眠、便秘等其它副作用，长期使用的减重效果也并不明显，且这两项减重药品对于心血管疾病产生的风险仍须更长时间监测，故不适合原本有心血管疾病的患者服用，尤其芬他命因为过去曾导致严重的心血管疾病，因此在许多国家仍然禁用。因此，业界仍极需一种安全性更高、副作用低、且可减轻体重及调节体内脂肪代谢(包含减少内脏脂肪及皮下脂肪堆积)，从根本解决肥胖问题的药物。
虽然已有文献揭露绿茶、桑叶、白藜芦醇或苦瓜等植物或其萃取物具有抗氧化、抗发炎、降低胆固醇、降低血糖，以及预防心血管及脑血管疾病等多种功效。然而并未有文献揭露这些植物或其萃取物可增加动物体内肉碱酰基转移酶-1(carnitinepalmitoyltransferase-1，CPT-1)的活性。粒线体是细胞中的代谢工厂，而长链脂肪酸需要肉碱酰基转移酶-1酵素的协助才能和肉碱(carnitine)结合，进入粒线体内进行脂肪代谢并产生能量，当体内肉碱酰基转移酶-1酵素的活性增加可促进体内脂肪的消耗，降低已囤积的体脂肪。
白藜芦醇(resveratrol)为一种多酚类化合物，主要存在于红葡萄皮、虎杖或是红酒中，目前研究指出白藜芦醇有助于抵抗自由基伤害、减缓发炎反应、改善心血管疾病、糖尿病及代谢症候群等相关疾病。
过去虽已有文献说明在脂肪细胞的实验中，白藜芦醇可以有效地抑制成熟脂肪细胞内的脂肪堆积或是调控前驱脂肪细胞的生长，但同时亦有多篇文献证明于小鼠实验中以高热量饮食诱导小鼠增胖并以高热量饮食诱导增胖的过程中持续以白藜芦醇喂食，实验结果却显示，动物实验中喂食白藜芦醇对于减少小鼠的体重或体脂肪(包含内脏脂肪及皮下脂肪)并无显著改善效果。
发明内容
本发明的目的在于提供一种植物萃取组成物及其医药组合物与用途，使其可以达到较好的降低体内体脂肪及减少体重的效果。
为实现上述目的，本发明提供一种植物萃取组成物，用于抑制脂肪细胞、降低体脂肪、减少体重或促进脂肪代谢，该植物萃取组成物以总重量(wt)为基准，包含有1.5wt％至40wt％的白藜芦醇及10wt％至85wt％的绿茶萃取物。
其中，该植物萃取组成物更可包括选自于由绿咖啡豆萃取物，桑叶萃取物及苦瓜萃取物所组成的群组。本发明所述的植物萃取组成物可有效的抑制脂肪前驱细胞、分化中脂肪细胞及分化后成熟的脂肪细胞，增加肉碱酰基转移酶-1的活性，并调节体内脂肪组织所分泌的脂肪素(adipokine)诸如瘦素(leptin)或阻抗素(resistin)的表现，以达到降低体内体脂肪及减少体重的效果。
较佳的，所述的植物萃取组成物包含10wt％至30wt％白藜芦醇。
较佳的，所述的植物萃取组成物包含40wt％至80wt％绿茶萃取物。
较佳的，所述的植物萃取组成物更包括选自于由0wt％至40wt％绿咖啡豆萃取物、0wt％至40wt％桑叶萃取物及0wt％至65wt％苦瓜萃取物所组成的群组。
较佳的，所述的植物萃取组成物包含20wt％至40wt％绿咖啡豆萃取物。
较佳的，所述的植物萃取组成物包含10wt％至40wt％桑叶萃取物。
较佳的，所述的植物萃取组成物包含17wt％至50wt％苦瓜萃取物。
依据本发明，所述的“抑制脂肪细胞”于此处指抑制脂肪前驱细胞、抑制分化中脂肪细胞以及抑制分化后成熟的脂肪细胞；如本发明所例示，抑制脂肪前驱细胞可借由特定时间内以不同浓度的植物萃取组成物抑制脂肪前驱细胞增生试验而得；如本发明所例示，抑制分化中脂肪细胞可借由试剂诱导脂肪细胞分化，再以不同浓度的植物萃取组成物抑制分化中脂肪细胞试验而得；如本发明所例示，抑制分化后成熟的脂肪细胞可借由试剂诱导脂肪细胞分化并成为成熟脂肪细胞后，再以不同浓度的植物萃取组成物抑制分化后成熟的脂肪细胞试验而得。
依据本发明，所述的“降低体脂肪、减少体重”于此处指借由动物试验施予本发明所述的植物萃取组成物后，经测量体重、总脂肪量、脂肪干重比率、皮下脂肪以及内脏脂肪而得。较佳的，本发明所述的植物萃取组成物可抑制4％以上的体重增加；更佳的，本发明所述的植物萃取组成物可抑制10％至60％的体重增加。较佳的，本发明所述的植物萃取组成物可降低7％以上的体脂肪量；更佳的，本发明所述的植物萃取组成物可降低15％至70％的体脂肪量。
依据本发明，所述的“促进脂肪代谢”于此处指增加肉碱酰基转移酶-1的活性以使肉碱(carnitine)与脂肪酸结合，进而使脂肪酸进入粒线体以进行氧化作用，并达到促进脂肪代谢的效果；如本发明所例示，借由动物试验中检测肉碱酰基转移酶-1的活性而得，且本发明所述的植物萃取组成物可增加3倍至4倍CPT-1的活性。此外，亦可借由降低肥胖基因的表现量，以改善因肥胖所导致的瘦体素阻抗(leptinresistance)以及抑制脂肪细胞新生的效果，其中肥胖基因包括，但不限于瘦素基因(leptingene)或阻抗素基因(resistingene)；如本发明所例示，借由动物试验施予本发明所述的植物萃取组成物，经检测瘦素基因或阻抗素基因表现量而得，且本发明所述的植物萃取组成物可降低25％至50％的瘦素基因表现量以及减少15％至80％的阻抗素基因表现量。
本发明提供一种如前述的植物萃取组成物用于制备抑制脂肪细胞的医药组合物的用途，其中植物萃取组成物可抑制脂肪前驱细胞增生、抑制分化中脂肪细胞增生或抑制分化后成熟的脂肪细胞增生，其中植物萃取组成物的有效剂量为每公斤体重10毫克至每公斤体重160毫克(10mg/kgB.W.-160mg/kgB.W.)。
较佳的，所述的植物萃取组成物的有效剂量为26mg/kgB.W.至120mg/kgB.W.。
依据本发明，“有效剂量”于此处所述为根据美国食品药物管理局(foodanddrugadministration，FDA)所公告的“于初期临床试验估算成人最大安全起始剂量(estimatingthemaximumsafestartingdoseininitialclinicaltrialsfortherapeuticsinadulthealthyvolunteers)”的Table1并结合本案实施例的动物试验推得。
本发明另提供一种如前述的植物萃取组成物用于制备降低体脂肪及减少体重的医药组合物的用途，其中该植物萃取组成物可抑制4％以上的体重增加以及降低7％以上的体脂肪量，其中植物萃取组成物的有效剂量为10mg/kgB.W.至160mg/kgB.W.。
较佳的，所述的植物萃取组成物的有效剂量为26mg/kgB.W.至120mg/kgB.W.。
本发明另提供一种如前述的植物萃取组成物用于制备促进脂肪代谢的医药组合物之用途，其中植物萃取组成物可增加及/或活化肉碱酰基转移酶-1活性、降低瘦素基因(leptingene)或减少阻抗素基因(resistingene)的表现量，其中植物萃取组成物的有效剂量为10mg/kgB.W.至160mg/kgB.W.。
较佳的，所述的植物萃取组成物的有效剂量为26mg/kgB.W.至120mg/kgB.W.。
较佳的，所述的该植物萃取组成物可增加3倍至4倍CPT-1的活性。
较佳的，所述的该植物萃取组成物可降低25％至50％的瘦素基因表现量。
较佳的，所述的该植物萃取组成物可减少15％至80％的阻抗素基因表现量。
本发明另提供一种医药组合物，用于抑制脂肪细胞、降低脂肪囤积、减少体重或促进脂肪代谢，其包含如前述的有效剂量的植物萃取组成物及医药上可接受的载体或赋型剂。
较佳的，所述的医药组合物的给予方式包括口服、非肠胃式、吸入式、肛门塞剂、阴道塞剂、经皮吸收或局部。此药剂包含传统无毒性的药学上可接受的载体、佐剂及载具。局部给予则包括使用经皮吸收的给予方式，例如，皮肤贴片或离子电渗透元件等。非肠胃式给予则包括皮下注射、静脉注射、肌肉注射或胸骨注射，或注入技术等。
在较佳的实施例中，本发明所述的医药组合物为一口服固状制品，其中包括赋型剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、调味剂。所形成的混合物可借由现有技术形成锭剂、颗粒、粉末、胶囊等类似物。添加剂可包括，乳糖、氯化钠、葡萄糖、淀粉、碳酸钙、高岭土、微晶纤维素或硅酸。黏合剂可包括水、乙醇、丙醇、蔗糖溶液、葡萄糖溶液、淀粉溶液、明胶溶液或磷酸碳。崩解剂可包括干淀粉、藻酸钠、琼脂、碳母氢钠、碳酸钙、硫酸月桂脂钠、硬脂酸单甘油脂与乳糖。润滑剂可包括滑石、硬脂酸盐类、硼砂与聚乙二醇。
在较佳的实施例中，本发明所述的医学组合物为一口服液体制品，其中包括调味剂、缓冲剂、安定剂及类似物。缓冲剂可为柠檬酸钠。安定剂可为黄着胶(tragacanth)、阿拉伯胶或明胶。
本发明所述的医药组合物的含量可依照不同参数做适当的调整。上述参数包括，但不限于个体的种类、个体的大小、疾病的严重性。本发明的医药组合物可一次给予，24小时内多次给予或连续给予。当注射的方式为连续给予时，可选用适合的现有方式，包括，但不限于静脉注射点滴、静脉注射帮浦、埋植式注射泵或局部给予。
本发明所述的医药组合物可单独给药，或是合并其它减肥方法或减肥药物。
本发明所述的植物萃取组成物可有效地抑制脂肪前驱细胞、分化中脂肪细胞、分化后成熟的脂肪细胞、增加肉碱酰基转移酶-1活性以及降低体脂肪与抑制体重增加。此外，本发明所述的植物萃取组成物更可明显增加体内肉碱酰基转移酶-1活性，并有效地抑制脂肪新生、促进脂肪分解减少以及减少已存在的脂肪以达到减轻体重及降低体脂肪的目的，且该植物萃取组成物可抑制4％以上的体重并可降低7％以上的体脂肪量。本发明的植物萃取组成物在抑制脂肪细胞、减轻体重及降低体脂肪的效果优于市售减肥药(诸如)，且本发明的植物萃取组成物具有高度的安全性，不会对正常人体造成影响，且无副作用，因此本发明的植物萃取组成物可作为一辅助食品或保健食品。
以下结合附图和具体实施例对本发明进行详细描述，但不作为对本发明的限定。
附图说明
图1显示本发明实施例1所述的试验组分别抑制前驱脂肪细胞的柱状图。
图2显示本发明实施例2所述的试验组分别抑制分化中脂肪细胞的柱状图。
图3显示本发明实施例3所述的试验组分别抑制分化后成熟的脂肪细胞的柱状图。
图4显示本发明实施例4所述的正常对照组、肥胖对照组、本发明的组成物LB004于低剂量、中剂量以及高剂量分别对于大鼠的CPT-1酵素活性的柱状图。
图5显示本发明实施例5所述的正常对照组、肥胖对照组、本发明的组成物LB004于低剂量、中剂量以及高剂量分别对于大鼠的瘦素基因表现的柱状图。
图6显示本发明实施例5所述的正常对照组、肥胖对照组、本发明的组成物LB004于低剂量、中剂量以及高剂量分别对于大鼠的阻抗素基因表现的柱状图。
图7显示本发明实施例6所述的正常对照组、肥胖对照组、本发明的组成物LB004分别抑制小鼠体重的柱状图。
图8显示本发明实施例6所述的正常对照组、肥胖对照组、本发明的组成物LB004分别抑制小鼠内脏脂肪的柱状图。
图9显示本发明实施例7所述的肥胖对照组、本发明的组成物LB001、组成物LB008、白藜芦醇以及绿茶萃取物分别抑制小鼠体重的柱状图。
图10显示本发明实施例7所述的肥胖对照组、本发明的组成物LB001、组成物LB008、白藜芦醇以及绿茶萃取物分别抑制小鼠内脏脂肪、皮下脂肪以及总脂肪量的柱状图。
具体实施方式
以下配合图式及本发明的较佳实施例，进一步阐述本发明为达成预定发明目的所采取的技术手段。
本发明所述的桑叶萃取物、苦瓜萃取物、绿茶萃取物及由葡萄皮获得白藜芦醇的萃取方式已为现有技术，例如，可将桑叶、苦瓜、绿茶、葡萄皮及绿咖啡豆置于水或有机溶剂中，利用研磨、加热、过滤、离心、冷冻干燥等步骤进行萃取。有机溶剂较佳为醇类，包括，但不限于乙醇、甲醇、丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇或其上述的组合。本发明技术领域人士自可依照不同的情况对萃取步骤做适当的调整。
另一方面，本发明所述的桑叶萃取物、苦瓜萃取物、绿茶萃取物或白藜芦醇也可为一市售产品。因此，本技术领域人士可购买市售桑叶、苦瓜、绿茶或白藜芦醇后，再配制成本发明所述的植物萃取组成物。
制备例1.植物萃取组成物的配方组合
表1植物萃取组成物的配方组合(wt％)
| 组成物 | 白藜芦醇 | 绿茶萃取物 | 绿咖啡豆萃取物 | 桑叶萃取物 | 苦瓜萃取物 |
| LB001 | 29 | 71 | 0 | 0 | 0 |
| LB004 | 20.7 | 43.1 | 0 | 10.3 | 25.9 |
| LB005 | 17.2 | 17.2 | 0 | 34.5 | 46.6 |
| LB006 | 3.4 | 62.1 | 0 | 17.2 | 17.2 |
| LB007 | 20.7 | 10.3 | 0 | 8.6 | 60.3 |
| LB008 | 20 | 55 | 25 | 0 | 0 |
| LB008A | 25 | 50 | 25 | 0 | 0 |
实施例1.前驱脂肪细胞抑制实验
本实施例为将前驱脂肪细胞3T3-L1(购自于台湾食品工业研究所，FIRDI)以1x104cells/well培养于96孔盘，并于不同孔中分别加入控制组(1％DMSO)以及浓度为50ppm的各试验组别，其中试验组分别为绿茶萃取物、白藜芦醇、绿咖啡豆萃取物以及本发明组成物LB001、LB004、LB005、LB006、LB007、LB008、LB008A，且每组实验进行3重复。48小时后，以MTT细胞存活率试验分析各试验组别对于3T3-L1前驱脂肪细胞的抑制效果。
结果如图1所示，单独施予绿茶萃取物或绿咖啡豆萃取物对前驱脂肪细胞的抑制效果并不佳，各组成物中以LB001、LB004、LB005、LB006、及LB007抑制前驱脂肪细胞生长的效果较佳，其中又以LB005抑制前驱脂肪细胞生长的效果最佳。所有数据均以Mean±SD表示。英文字母a、b、c、d、e表示统计的结果，相同字母表示组间不具统计上差异(p>0.05)。
实施例2分化中脂肪细胞抑制试验
本实施例为将3T3-L1细胞以3x104cells/well培养于12孔盘，培养至第四天改用含有5μg/ml胰岛素、1μM地塞米松(dexmethasone)、0.5mM的3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine)的培养液进行分化，并同时在各孔中加入50ppm的试验组别，其中试验组分别为绿茶萃取物、白藜芦醇、绿咖啡豆萃取物以及本发明组成物LB001、LB004、LB005、LB006、LB007、LB008、LB008A。48小时后，以MTT细胞存活率试验分析各试验组别对于分化中3T3-L1脂肪细胞的抑制效果。
结果如图2所示，单独施予绿茶萃取物或绿咖啡豆萃取物对分化中脂肪细胞的抑制效果并不佳，各发明组成物中以LB001、LB004、LB006、LB007及LB008抑制分化中脂肪细胞生长的效果较佳，其中又以LB001及LB004抑制分化中脂肪细胞生长的效果最佳。所有数据均以Mean±SD表示。英文字母a、b、c、d、e、f表示统计的结果，相同字母表示组间不具统计上差异(p>0.05)。
实施例3分化后成熟的脂肪细胞抑制试验
本实施例为将3T3-L1细胞以3x104cells/well培养于12孔盘培养至第四天改用含有5μg/ml胰岛素、1μM地塞米松、0.5mM的3-异丁基-1-甲基黄嘌呤的培养液，两天后换成含有5μg/ml胰岛素的培养液持续培养四天，待3T3-L1细胞分化成熟后，在不同孔中加入50ppm的各试验组别，其中试验组分别为绿茶萃取物、白藜芦醇、绿咖啡豆萃取物以及本发明组成物LB001、LB004、LB006、LB007、LB008、LB008A。48小时后，以MTT细胞存活率试验分析各试验组别对于成熟3T3-L1脂肪细胞的抑制效果。
结果如图3所示，单独施予绿茶萃取物或绿咖啡豆萃取物对成熟脂肪细胞的抑制效果并不佳，各发明组成物中以LB001、LB004、LB006、LB007及LB008抑制成熟脂肪细胞生长的效果较佳，其中又以LB001抑制成熟脂肪细胞生长的效果最佳。所有数据均以Mean±SD表示。英文字母a、b、c、d表示统计的结果，相同字母表示组间不具统计上差异(p>0.05)。
实施例4动物试验(I)
本实施例使用Sprague-Dawley(SD)品系雄性大鼠，共设置6组试验组，分别为正常对照组、肥胖对照组、正对照药品组(，18.6mg/kgB.W.)、低剂量实验组(组成物LB004223.2mg/kgB.W.)、中剂量实验组(组成物LB004446.4mg/kgB.W.)、高剂量实验组(组成物LB004892.8mg/kgB.W.)，每组各使用10只雄性动物进行试验。除正常对照组给予一般饲料外，试验期间皆连续8周以高热量饲料喂食肥胖对照组、正对照药品组及三组实验组，以诱发肥胖症状，并同时每日以管喂方式投予试验物质，评估各组抑制体重与降低体脂肪的功效。实验过程中记录每只动物的体重改变与平均每日饲料摄取量，试验完成后，取其副睪外围脂肪、肾脏外围脂肪、肠系膜外围脂肪秤重并计算其内脏脂肪量。此外，取鼠蹊部及腹膜腔外的脂肪进行秤重以计算皮下脂肪量。另外，秤取大鼠尸体的湿重。然后放入温度设定为105℃烘箱中干燥至恒重以测定大鼠尸体的干重。将干燥后的大鼠尸体以均质机加以粉碎均匀，在2个至3个不同点取样，以乙醚萃取法测其粗脂肪量，并计算整只动物的粗脂肪量与干体重的百分比。
表2体重总增重量、总脂肪量及脂肪干重比率
如表2所示，肥胖对照组大鼠的体重增加量与体脂肪量(内脏脂肪量及皮下脂肪量的加总)均明显高于正常对照组(p<0.05)。与肥胖对照组比较，低、中、高三组剂量的实验组体重总增重均显著减少(p<0.05)。相较于肥胖对照组，正对照药品组()、低剂量、中剂量、高剂量实验组抑制体重的幅度分别达12.0％、12.8％、14.1％、17.5％，可看出组成物LB004抑制体重增加的效果优于正对照药品组()。相较于肥胖对照组，低、中、高三组剂量的实验组体脂肪均显著下降(p<0.05)。与肥胖对照组相比，正对照药品组()、低剂量、中剂量、高剂量实验组的体脂肪量下降幅度分别达23.9％、25.1％、25.9％、26.7％，显示组成物LB004降低体脂肪的效果优于正对照药品组()。相较于肥胖对照组，正对照药品组()及三组本发明配方LB004实验组的脂肪干重比率均呈现显著下降的情形(p<0.05)，降低幅度分别达17.4％、19.6％、19.7％、19.0％。实验结果可以看出本发明所述的组成物的效果有优于正对照药品组()的趋势。
实施例5动物试验(II)
同实施例4的方法，比较正常对照组、肥胖对照组、低剂量实验组(组成物LB004：223.2mg/kgB.W.)、中剂量实验组(组成物LB004：446.4mg/kgB.W.)、高剂量实验组(组成物LB004：892.8mg/kgB.W.)大鼠肝脏中CPT-1酵素活性、瘦素基因(leptin)及阻抗素基因(resistin)的表现量。
1.肝脏中CPT-1酵素活性分析：
取大鼠的肝脏组织并以均质缓冲液I(homogenizationbufferI)，包含250mM蔗糖(sucrose)、1mM乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid，EDTA)、10mMpH为7.4的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐[tri(hydroxymethyl)aminomethanehydrochloride，Tris-HCl]进行均质，离心10分钟后，去除上清液，再溶于均质缓冲液II(homogenizationbufferII)，其均质缓冲液II包含70mMsucrose、220mM甘露醇(mannitol)、1mMEDTA、2mMpH为7.4的4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸[4-(2-Hydroxyethy1)-1-piperazineethanesulfonicacid，HEPES]，萃取出粒线体蛋白质。
大鼠肝脏粒线体中的肉碱酰基转移酶可将肉碱与棕榈酰-辅酶A(palmitoyl-coenzymeA，palmitoyl-CoA)结合，并生成带有硫基的CoA(CoA-SH)的特性，以波长412nm侦测5,5'二硫代双(2-硝基苯甲酸)[5,5’-dithio-bis(2-nitrobenzoicacid)，DTNB]与CoA-SH中的氢硫基(sulfhydrylgroup)(诸如-C-SH或R-SH)结合形成的黄色产物5-硫代-2-硝基苯(5-thio-2-nitrobenzoate，TNB)，以得知CPT的活性，并以每毫克蛋白质中每分钟CoA-SH纳摩尔[(nmole)/min/mgprotein]表示。CPT-2活性侦测方法相同，于实验最后步骤加入CPT-1抑制剂(inhibitor)即可。
CPT-1的活性为测得的totalCPT活性扣除CPT-2活性。利用比尔定律(Beer’sLaw)换算出CPT浓度。比尔定律公式如下：
A＝εbc(式I)
其中A代表光的吸收度(M-1cm-1)；ε代表摩尔吸收系数；b代表光径长(cm)；c代表体积摩尔浓度(M)。
如图4所示，与正常对照组相比，肥胖对照组的CPT-1酵素活性明显下降；相较于肥胖对照组，本发明的组成物LB004在低、中、高剂量的CPT-1酵素活性皆明显上升(p<0.05)，实验结果可以看出LB004能有效增加CPT-1的活性，达到促进脂肪代谢的效果；相较于肥胖组对照组，本发明的组成物LB004可增加CPT-1活性3倍至4倍。
2.大鼠瘦素基因表现量分析：
同上述共5组试验组，分别为正常对照组、肥胖对照组、低剂量实验组(组成物LB004：223.2mg/kgB.W.)、中剂量实验组(组成物LB004：446.4mg/kgB.W.)、高剂量实验组(组成物LB004：892.8mg/kgB.W.)，比较各组瘦素基因表现量。
如图5所示，与正常对照组相比瘦素基因表现量在肥胖对照组中明显增加；相较于肥胖对照组，本发明组成物LB004实验组在低剂量、中剂量以及高剂量的瘦素基因表现量皆明显下降，相较于肥胖对照组，组成物LB004可减少25％至50％的leptin基因表现。实验结果可以看出使用本发明组成物能有效减少瘦素基因表现量，达到有效改善因肥胖所导致的瘦体素阻抗问题。
3.大鼠阻抗素基因表现量分析：
同上述共5组试验组，分别为正常对照组、肥胖对照组、低剂量实验组(组成物LB004：223.2mg/kgB.W.)、中剂量实验组(组成物LB004：446.4mg/kgB.W.)、高剂量实验组(组成物LB004：892.8mg/kgB.W.)。实验比较各组阻抗素基因表现量。
阻抗素是一种由脂肪细胞所分泌的细胞激素，本身会造成胰岛素阻抗(insulinresistance)，而被认为是肥胖的危险因子。实验结果如图6所示，与正常对照组相比，阻抗素基因表现量在肥胖对照组中明显上升；而相较于肥胖对照组，本发明的组成物LB004在低、中、高剂量的阻抗素基因表现量皆明显下降(p<0.05)，相较于肥胖对照组，LB004可减少15％至80％的resistin基因表现量。实验结果可以看出使用本发明的组成物LB004能有效减少阻抗素基因表现量，达到有效降低胰岛素阻抗及抑制脂肪细胞新生的效果。
实施例6动物试验(III)
本实施例使用B6品系雄性小鼠，共设置3组试验组，分别为正常对照组、肥胖对照组、实验组(组成物LB004：442.8mg/kgB.W.)，每组各使用8只雄性动物进行试验。试验期间，除正常对照组之外，肥胖对照组及实验组小鼠皆连续16周以高热量饲料喂食，用以诱发肥胖症状，实验组同时每日管喂投予本发明组成物LB004，以评估组成物LB004抑制体重增加与体脂肪生成的功效。正常对照组则给予一般正常饲料。实验过程中记录每只动物的体重改变与平均每日饲料摄取量，试验结束时，将小鼠牺牲，取其副睪外围脂肪、肾脏外围脂肪、肠系膜外围脂肪秤重并计算其内脏脂肪总脂肪量。
如图7所示，肥胖对照组小鼠的体重在第8、12、16周均明显高于正常对照组(p<0.05)，确定诱导肥胖成功，而在给予本发明的组成物LB004的实验组中，体重总增重相较于肥胖对照组在各周均呈现显著下降的情形(p<0.05)。且从本实验中观察到，施予本发明组成物LB004的小鼠，虽持续给予长达16周的高脂饲料，其体重总增重可始终维持与正常对照组的体重无显著差异，显示组成物LB004达到有效抑制体重增加的效果。
如图8所示，肥胖对照组小鼠内脏脂肪重量在16周后明显高于正常对照组(p<0.05)，而在本发明组成物LB004实验组的小鼠内脏脂肪重量相较于肥胖对照组呈现显著下降的情形(p<0.05)，且施予本发明组成物LB004的小鼠的内脏脂肪重量更可维持与正常对照组无显著差异，显示组成物LB004达到有效抑制内脏脂肪生成的效果。
实施例7动物试验(IV)
本实施例使用B6雄性小鼠，共设置5组试验组，分别为肥胖对照组、白藜芦醇组(61.5mg/kgB.W.)、绿茶萃取物组(123mg/kgB.W.)、组成物LB001(338.25mg/kgB.W.)、组成物LB008(326mg/kgB.W.)。每组各使用5只雄性动物进行试验，试验期间，各组连续8周以高脂饲料喂食，用以诱发肥胖症状，并同时每日管喂投予试验物质，评估各组抑制体重增加与体脂肪生成的功效。实验过程中记录每只动物的体重改变与平均每日饲料摄取量。试验完成后，将小鼠牺牲，取其副睪外围脂肪、肾脏外围脂肪、肠系膜外围脂肪秤重并计算其内脏脂肪量；取其鼠蹊部及腹膜腔外的脂肪进行秤重以计算皮下脂肪量。
如图9所示，结果显示单独使用白藜芦醇组对抑制小鼠体重增加的效果并不佳，与肥胖对照组并无统计上差异。而本发明的组成物LB001与LB008相较于肥胖对照组体重增加量皆明显减少(p<0.05)，LB001抑制体重增加可达47.2％；LB008抑制体重增加可达59.2％，而单独使用绿茶萃取物有减少体重增加的趋势，但效果并不如组成物LB001与LB008。所有数据均以Mean±SD(n＝5)表示，英文字母a、b、c表示统计的结果，相同字母表示组间不具统计上差异(p>0.05)。
如图10所示，单独使用白藜芦醇的小鼠内脏、皮下脂肪与总脂肪重量(其为皮下脂肪与内脏脂肪的总和)与肥胖对照组相比并没有差异。本发明的组成物LB001与LB008相较于肥胖对照组，内脏、皮下脂肪与总脂肪重量皆明显减少(p<0.05)，组成物LB001可减少54.8％的皮下脂肪、52.3％的内脏脂肪及53.4％总脂肪量；组成物LB008则可减少68.1％皮下脂肪、61.6％内脏脂肪及64.7％总脂肪量。另与单独使用白藜芦醇组相比，组成物LB008与LB001无论在内脏脂肪重量、皮下脂肪重量与总脂肪重量皆显著下降(p<0.05)。结果显示组成物LB001与LB008可有效抑制脂肪生成，且其效果显著优于单独使用白藜芦醇。
当然，本发明还可有其它多种实施例，在不背离本发明精神及其实质的情况下，熟悉本领域的技术人员可根据本发明作出各种相应的改变和变形，但这些相应的改变和变形都应属于本发明权利要求的保护范围。
Claims (14)
1.一种植物萃取组成物，其特征在于，其以总重量为基准，该植物萃取组成物包含1.5wt％至40wt％的白藜芦醇及10wt％至85wt％的绿茶萃取物。
2.根据权利要求1所述的植物萃取组成物，其特征在于，植物萃取组成物包含10wt％至30wt％白藜芦醇。
3.根据权利要求1所述的植物萃取组成物，其特征在于，植物萃取组成物包含40wt％至80wt％绿茶萃取物。
4.根据权利要求1所述的植物萃取组成物，其特征在于，植物萃取组成物更包括选自于由绿咖啡豆萃取物、桑叶萃取物及苦瓜萃取物所组成的群组，其中绿咖啡豆萃取物为0wt％至40wt％，桑叶萃取物为0wt％至40wt％以及苦瓜萃取物为0wt％至65wt％。
5.根据权利要求4所述的植物萃取组成物，其特征在于，植物萃取组成物包含20wt％至40wt％绿咖啡豆萃取物。
6.根据权利要求4所述的植物萃取组成物，其特征在于，植物萃取组成物包含10wt％至40wt％桑叶萃取物。
7.根据权利要求4所述的植物萃取组成物，其特征在于，植物萃取组成物包含17wt％至50wt％苦瓜萃取物。
8.一种权利要求1至7任一项所述的植物萃取组成物用于制备抑制脂肪细胞的医药组合物的用途，其特征在于，植物萃取组成物抑制脂肪前驱细胞增生、抑制分化中脂肪细胞增生或抑制分化后成熟的脂肪细胞增生，其中植物萃取组成物的有效剂量为每公斤体重10毫克至每公斤体重160毫克。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，植物萃取组成物的有效剂量为26mg/kgB.W.至120mg/kgB.W.。
10.一种权利要求1至7中任一项所述的植物萃取组成物用于制备降低体脂肪、减少体重的医药组合物的用途，其特征在于，植物萃取组成物的有效剂量为10mg/kgB.W.至160mg/kgB.W.。
11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，植物萃取组成物的有效剂量为26mg/kgB.W.至120mg/kgB.W.。
12.一种权利要求1至7任一项所述的植物萃取组成物用于制备促进脂肪代谢的医药组合物的用途，其特征在于，植物萃取组成物增加肉碱酰基转移酶-1的活性、降低瘦素基因或阻抗素基因的表现量，其中植物萃取组成物的有效剂量为10mg/kgB.W.至160mg/kgB.W.。
13.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，植物萃取组成物的有效剂量为26mg/kgB.W.至120mg/kgB.W.。
14.一种医药组合物，其特征在于，其包含权利要求1至7任一项所述的有效剂量的植物萃取组成物及医药上可接受的载体或赋型剂。
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