CN105010730A - 一种蛋鸡用益生菌发酵中草药饲料添加剂的制备方法 - Google Patents
一种蛋鸡用益生菌发酵中草药饲料添加剂的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
一种蛋鸡用益生菌发酵中草药饲料添加剂的制备方法，所用益生菌为乳酸菌和枯草芽孢杆菌，所用的中草药为女贞子，通过益生菌的种子培养、发酵用益生菌种子液的制备、制作发酵物料、添加益生菌发酵以及发酵后物料的处理最终制得益生菌发酵中草药饲料添加剂。本发明所述的方法提高了女贞子中的活性成分在饲料添加剂中的有效浓度，进而在保证女贞子在促进蛋鸡生产性能和提高免疫机能作用的同时，能够起到降低女贞子的添加量的作用，从而减少饲料的成本与女贞子的添加难度。
Description
技术领域
本发明专利属于饲料生产加工领域，具体涉及一种蛋鸡用饲料添加剂的制备方法，特别涉及一种蛋鸡用益生菌发酵中草药饲料添加剂的制备方法。
背景技术
抗生素在畜禽生产过程中长期使用所带来的负面效应备受关注，开发绿色、安全、高效的新型饲料添加剂来替代抗生素势在必行。中草药作为植物性资源，既具有药理作用，又有营养功能，同时具有毒副作用小、无残留、无耐药性的优点，一直以来受到了畜牧业工作者的青睐。
中草药作为植物性资源，既具有药理作用，又有营养功能，同时具有毒副作用小、无残留、无耐药性的优点，一直以来受到了畜牧业工作者的青睐。女贞子作为中草药的一种，具有保肝护肝、增强免疫、抗菌抗病毒、抗氧化、降血糖血脂等功效。在蛋鸡的研究中表明，添加女贞子粉有促进生产性能和提高免疫机能的作用。但是，目前来看要达到女贞子的作用效果需要在日粮中添加不低于1.0%的量，这无形中增加了饲料成本和添加难度。因此，通过一系列方式来提高女贞子中活性成分在饲料中的浓度是降低女贞子添加量的重要措施。
发明内容
本发明的目的是提供一种蛋鸡用益生菌发酵中草药饲料添加剂的制备方法，从而提高女贞子中的活性成分在饲料添加剂中的有效浓度，进而在保证女贞子在促进蛋鸡生产性能和提高免疫机能作用的同时，能够起到降低女贞子的添加量的作用，从而减少饲料的成本与女贞子的添加难度。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种蛋鸡用益生菌发酵中草药饲料添加剂的制备方法，所用益生菌为乳酸菌和枯草芽孢杆菌，所用的中草药为女贞子，包括如下步骤：
（1）益生菌的种子培养
将乳酸菌培养于MRS液体培养基上，培养至对数生长中后期，待检测活菌数不低于1×108 cfu/mL时，停止培养，备用；
将枯草芽孢杆菌培养于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，培养至稳定生产期，待检测活菌数不低于1×109 cfu/mL时，停止培养，备用；
（2）发酵用益生菌种子液的制备
a. 培养液制备
收取啤酒生产过程中产生的啤酒糖化液，按照1L啤酒糖化液中添加尿素2.5g、葡萄糖5.0g、吐温80mL的比例，向所收取的啤酒糖化液中添加尿素、葡萄糖与吐温，搅拌均匀即制成培养液备用；
b. 乳酸菌种子液制备
按照5%的接种比例将经步骤（1）培养后的乳酸菌接种于所制备的培养液中，调整pH为6.3~6.5后，进行培养18~24h，以获取乳酸菌种子液；
c. 枯草芽孢杆菌种子液制备
按照5%的接种比例将经步骤（1）培养后的枯草芽孢杆菌接种于所制备的培养液中，调整pH至7.2~7.5后，进行培养18~24h，以获取枯草芽孢杆菌种子液；
（3）制作发酵物料
将女贞子表面消毒后，制成女贞子粉，然后取80份女贞子粉、10份麸皮、5份玉米面、4.5份豆粕粉、0.5份蔗糖混合均匀制成100份固体发酵物料，然后将所制得固体发酵物料与灭菌蒸馏水混合，调整pH至7.2，制得发酵物料；
（4）添加益生菌发酵
分两步先后向步骤（3）所制得的发酵物料中加入步骤（2）所制备的益生菌种子液，具体的加入方法为：首先将枯草芽孢杆菌种子液按照5%的比例加入发酵物料中，调整pH为7.2~7.5，然后在发酵罐中进行密封发酵；当发酵至5~6h时，再将乳酸菌种子液按照10%的比例加入发酵罐中的发酵物料中，搅拌均匀，并再次调整pH至6.3~6.5，继续进行密封发酵，整个发酵过程的时间为36~48h，发酵的温度为37.0~37.5 ℃；
（5）发酵后物料的处理
将步骤（4）发酵完成后所得的物料于65℃~70℃温度下烘干，烘干后进行粉碎，过60目筛，然后以500g为单位，用复合薄膜进行真空包装，即得到用于蛋鸡的发酵中草药饲料添加剂。
所述MRS液体培养基的制作方法为：取牛肉蛋白粉10g、牛肉浸膏10g、酵母浸膏5g、葡萄糖20g 、醋酸钠5g、柠檬酸二铵2g、吐温80 0.1mL、硫酸镁0.58g、硫酸锰0. 28g、蒸溜水1000mL混合均匀，用高压灭菌锅在121℃灭菌20min-30min，然后调节pH至6.3，即可制得MRS液体培养基。
所述的牛肉膏蛋白胨液体培养基的制作方法为：取牛肉膏5g、蛋白胨10g与氯化钠5g加入1000mL蒸馏水中，搅拌均匀，然后调整pH至7.2~7.5，即可制得牛肉膏蛋白胨液体培养基。
本发明具有以下有益效果：
第一，本发明所述的方法提高了女贞子中的活性成分在饲料添加剂中的有效浓度，进而在保证女贞子在促进蛋鸡生产性能和提高免疫机能作用的同时，能够起到降低女贞子的添加量的作用，从而减少饲料的成本与女贞子的添加难度；
第二，本发明所采用益生菌进行中草药发酵，既提高了中草药的有效成分，又增加了添加剂中益生菌的菌体蛋白及其有益代谢产物，如酶类等；
第三，在添加益生菌进行发酵时，采用分步进行，先添加枯草芽孢杆菌，发酵一段时间后，再添加乳酸菌发酵，这样做的目的是在发酵前期物料中存在空气，而枯草芽孢杆菌是好氧菌，这样有利于枯草芽孢杆菌的充分繁殖，随后进入厌氧环境，乳酸菌为厌氧菌，更有利于乳酸菌的生长繁殖。
具体实施方式
下面通过具体实施例以及试验例对本发明所述的方法作进一步的说明。
实施例1：
一种蛋鸡用益生菌发酵中草药饲料添加剂的制备方法，所用益生菌为乳酸菌和枯草芽孢杆菌，所用的中草药为女贞子，包括如下步骤：
1、益生菌的种子培养
将乳酸菌培养于MRS液体培养基上，培养至对数生长中后期，待检测活菌数不低于1×108 cfu/mL时，停止培养，备用；将枯草芽孢杆菌培养于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，培养至稳定生产期，待检测活菌数不低于1×109 cfu/mL时，停止培养，备用；
其中，所述的MRS液体培养基的制作方法为：取牛肉蛋白粉10g、牛肉浸膏10g、酵母浸膏5g、葡萄糖20g 、醋酸钠5g、柠檬酸二铵2g、吐温80 0.1mL、硫酸镁0.58g、硫酸锰0. 28g、蒸溜水1000mL混合均匀，用高压灭菌锅在121℃灭菌20min-30min，然后调节pH至6.5即可；
所述的牛肉膏蛋白胨液体培养基的制作方法为：取牛肉膏5g、蛋白胨10g与氯化钠5g加入1000mL蒸馏水中，搅拌均匀，然后调整pH至7.2即可；
2、发酵用益生菌种子液的制备
2.1、培养液制备
收取啤酒生产过程中产生的啤酒糖化液，按照1L啤酒糖化液中添加尿素2.5g、葡萄糖5.0g、吐温80mL的比例，向所收取的啤酒糖化液中添加尿素、葡萄糖与吐温，搅拌均匀即制成培养液备用；
2.2、乳酸菌种子液制备
按照5%的接种比例将经步骤1培养后的乳酸菌接种于所制备的培养液中，调整pH为6.3后，进行培养18h，以获取乳酸菌种子液；
2.3、枯草芽孢杆菌种子液制备
按照5%的接种比例将经步骤（1）培养后的枯草芽孢杆菌接种于所制备的培养液中，调整pH至7.2后，进行培养18h，以获取枯草芽孢杆菌种子液；
3、制作发酵物料
将女贞子表面消毒后，制成女贞子粉，然后取80份女贞子粉、10份麸皮、5份玉米面、4.5份豆粕粉、0.5份蔗糖混合均匀制成100份固体发酵物料，然后将所制得固体发酵物料与灭菌蒸馏水混合，调整pH至7.2，制得发酵物料；
4、添加益生菌发酵
分两步先后向步骤3所制得的发酵物料中加入步骤2所制备的益生菌种子液，具体的加入方法为：首先将枯草芽孢杆菌种子液按照5%的比例加入发酵物料中，调整pH为7.2，然后在发酵罐中进行密封发酵；当发酵至5~6h时，再将乳酸菌种子液按照10%的比例加入发酵罐中的发酵物料中，搅拌均匀，并再次调整pH至6.3，继续进行密封发酵，整个发酵过程的时间为36h，发酵的温度为37.0 ℃；
5、发酵物料的处理
将步骤4发酵完成后所得的物料于65℃温度下烘干，待物料含水量降至10%时即为烘干，然后对烘干物料进行粉碎，并过60目筛，然后以500g为单位，用复合薄膜进行真空包装，即得到用于蛋鸡的女贞子发酵饲料添加剂。
实施例2：
一种蛋鸡用益生菌发酵中草药饲料添加剂的制备方法，所用益生菌为乳酸菌和枯草芽孢杆菌，所用的中草药为女贞子，包括如下步骤：
1、益生菌的种子培养
将乳酸菌培养于MRS液体培养基上，培养至对数生长中后期，待检测活菌数不低于1×108 cfu/mL时，停止培养，备用；将枯草芽孢杆菌培养于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，培养至稳定生产期，待检测活菌数不低于1×109 cfu/mL时，停止培养，备用；
其中，所述的MRS液体培养基的制作方法为：取牛肉蛋白粉10g、牛肉浸膏10g、酵母浸膏5g、葡萄糖20g 、醋酸钠5g、柠檬酸二铵2g、吐温80 0.1mL、硫酸镁0.58g、硫酸锰0. 28g、蒸溜水1000mL混合均匀，用高压灭菌锅在121℃灭菌20min-30min，然后调节pH至6.3即可；
所述的牛肉膏蛋白胨液体培养基的制作方法为：取牛肉膏5g、蛋白胨10g与氯化钠5g加入1000mL蒸馏水中，搅拌均匀，然后调整pH至7.5即可；
2、发酵用益生菌种子液的制备
2.1、培养液制备
收取啤酒生产过程中产生的啤酒糖化液，按照1L啤酒糖化液中添加尿素2.5g、葡萄糖5.0g、吐温80mL的比例，向所收取的啤酒糖化液中添加尿素、葡萄糖与吐温，搅拌均匀即制成培养液备用；
2.2、乳酸菌种子液制备
按照5%的接种比例将经步骤1培养后的乳酸菌接种于所制备的培养液中，调整pH为6.5后，进行培养24h，以获取乳酸菌种子液；
2.3、枯草芽孢杆菌种子液制备
按照5%的接种比例将经步骤1培养后的枯草芽孢杆菌接种于所制备的培养液中，调整pH至7.5后，进行培养24h，以获取枯草芽孢杆菌种子液；
3、制作发酵物料
将女贞子表面消毒后，制成女贞子粉，然后取80份女贞子粉、10份麸皮、5份玉米面、4.5份豆粕粉、0.5份蔗糖混合均匀制成100份固体发酵物料，然后将所制得固体发酵物料与灭菌蒸馏水混合，调整pH至7.2，制得发酵物料；
4、添加益生菌发酵
分两步先后向步骤3所制得的发酵物料中加入步骤2所制备的益生菌种子液，具体的加入方法为：首先将枯草芽孢杆菌种子液按照5%的比例加入发酵物料中，调整pH为7.5，然后在发酵罐中进行密封发酵；当发酵至5~6h时，再将乳酸菌种子液按照10%的比例加入发酵罐中的发酵物料中，搅拌均匀，并再次调整pH至6.5，继续进行密封发酵，整个发酵过程的时间为48h，发酵的温度为37.5 ℃；
5、发酵物料的处理
将步骤（4）发酵完成后所得的物料于70℃温度下烘干，待物料含水量降至10%时即为烘干，然后对烘干物料进行粉碎，并过60目筛，然后以500g为单位，用复合薄膜进行真空包装，即得到用于蛋鸡的女贞子发酵饲料添加剂。
实施例3：
一种蛋鸡用益生菌发酵中草药饲料添加剂的制备方法，所用益生菌为乳酸菌和枯草芽孢杆菌，所用的中草药为女贞子，包括如下步骤：
1、益生菌的种子培养
将乳酸菌培养于MRS液体培养基上，培养至对数生长中后期，待检测活菌数不低于1×108 cfu/mL时，停止培养，备用；将枯草芽孢杆菌培养于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，培养至稳定生产期，待检测活菌数不低于1×109 cfu/mL时，停止培养，备用；
其中，所述的MRS液体培养基的制作方法为：取牛肉蛋白粉10g、牛肉浸膏10g、酵母浸膏5g、葡萄糖20g 、醋酸钠5g、柠檬酸二铵2g、吐温80 0.1mL、硫酸镁0.58g、硫酸锰0. 28g、蒸溜水1000mL混合均匀，用高压灭菌锅在121℃灭菌20min-30min，然后调节pH至6.4即可；
所述的牛肉膏蛋白胨液体培养基的制作方法为：取牛肉膏5g、蛋白胨10g与氯化钠5g加入1000mL蒸馏水中，搅拌均匀，然后调整pH至7.3即可；
2、发酵用益生菌种子液的制备
2.1、培养液制备
收取啤酒生产过程中产生的啤酒糖化液，按照1L啤酒糖化液中添加尿素2.5g、葡萄糖5.0g、吐温80mL的比例，向所收取的啤酒糖化液中添加尿素、葡萄糖与吐温，搅拌均匀即制成培养液备用；
2.2、乳酸菌种子液制备
按照5%的接种比例将经步骤1培养后的乳酸菌接种于所制备的培养液中，调整pH为6.4后，进行培养21h，以获取乳酸菌种子液；
2.3、枯草芽孢杆菌种子液制备
按照5%的接种比例将经步骤（1）培养后的枯草芽孢杆菌接种于所制备的培养液中，调整pH至7.3后，进行培养21h，以获取枯草芽孢杆菌种子液；
3、制作发酵物料
将女贞子表面消毒后，制成女贞子粉，然后取80份女贞子粉、10份麸皮、5份玉米面、4.5份豆粕粉、0.5份蔗糖混合均匀制成100份固体发酵物料，然后将所制得固体发酵物料与灭菌蒸馏水混合，调整pH至7.2，制得发酵物料；
4、添加益生菌发酵
分两步先后向步骤（3）所制得的发酵物料中加入步骤（2）所制备的益生菌种子液，具体的加入方法为：首先将枯草芽孢杆菌种子液按照5%的比例加入发酵物料中，调整pH为7.3，然后在发酵罐中进行密封发酵；当发酵至5~6h时，再将乳酸菌种子液按照10%的比例加入发酵罐中的发酵物料中，搅拌均匀，并再次调整pH至6.4，继续进行密封发酵，整个发酵过程的时间为42h，发酵的温度为37.2 ℃；
5、发酵物料的处理
将步骤（4）发酵完成后所得的物料于65℃温度下烘干，待物料含水量降至10%时即为烘干，然后对烘干物料进行粉碎，并过60目筛，然后以500g为单位，用复合薄膜进行真空包装，即得到用于蛋鸡的女贞子发酵饲料添加剂。
进一步的，女贞子再进行粉碎之前需要对其表面进行灭菌消毒，其方法为：将成熟的女贞子表面用流水清洗干净，再用去离子水冲洗，然后置于干燥器内干燥，干燥后将其摊开并使用紫外线对其进行照射，照射的时间为5~10min即可。
进一步的，由固体发酵物料制备发酵物料时，需要将固体发酵物料和灭菌蒸馏水混合，灭菌蒸馏水的添加量为固体发酵物料重量的1.5倍。
试验案例
试验例1：女贞子发酵饲料添加剂中活性成分测定
1、活性成分提取方法
采用75%的乙醇溶液，通过索氏提取法对未发酵的女贞子粉和本发明提供的发酵女贞子饲料添加剂中活性成分进行提取。
2、活性成分获得
将上述提取液置于100℃恒温水浴锅中，使乙醇溶剂蒸发，浓缩至浸膏，再用3倍的去离子水稀释溶解浸膏后，加入浸膏量1/10的活性炭，在60~70℃水浴中加热搅拌30min，抽滤，获得滤液，冷却后滤液析出黄色粉末，再将黄色粉末用少量去离子水洗涤2-3次，进行过滤，获得白色沉淀，即为活性成分。
3、 活性成分鉴定
经红外光谱法测定，该活性成分主要为齐墩果酸。
4、活性成分含量测定
采用紫外-可见分光光度计法测定齐墩果酸活性成分的含量。发现，发酵女贞子饲料添加剂中的齐墩果酸含量比女贞子粉中的含量提高了22.6%。
试验例2：蛋鸡饲养试验
1、试验材料与方法
选取430日龄海兰褐壳蛋鸡2100只，随机分为7组，每组3个重复，每重复100只蛋鸡。具体分组为：对照组、女贞子组（分别设0.5%、1.0%、1.5%三个添加水平）和益生菌发酵中草药组（分别设0.5%、1.0%、1.5%三个添加水平），对照组饲喂基础饲粮，女贞子组在基础饲粮的基础上添加女贞子粉，益生菌发酵中草药组在基础饲粮的基础上添加由本发明所制备的益生菌发酵中草药饲料添剂。
基础饲粮的组成及营养水平见表1，并且其中的预混料为每千克饲粮提供：VA 7500 IU，VD3 2500 IU，VE 35mg，VK3 1mg，VB1 1.5mg，VB2 4mg，VB6 2mg，VB12 0.02mg，烟酸30mg，叶酸0.55mg，泛酸10mg，生物素0.16mg，氯化胆碱420mg，Fe 64mg，Zn 72mg，Cu 15mg，Mn 85mg，I 0.4mg。
蛋鸡采用3层阶梯笼养，自由采食，自由饮水，定期清粪、消毒，试验期40天。
每天记录各重复产蛋数量，每10 d对数据进行统计一次，包括产蛋率、日均采食量、料蛋比和死淘率。
采用SPSS13.0中的单因素方差分析(ONE-WAY ANOVA)进行统计分析，均值的多重比较采用Duncan’s法进行，以P<0.05作为差异显著性判断标准，结果以平均值±标准差(X士SD)表示。
2.试验结果
2.1益生菌发酵中草药对蛋鸡生产性能的影响
由表2的结果进行以下分析：
平均采食量方面：添加女贞子粉和益生菌发酵中草药饲料添加剂均使蛋鸡平均采食量有所增加，尤其是女贞子粉组增加幅度较大，而益生菌发酵中草药组增加幅度小，尤其是相同添加水平时，益生菌发酵中草药组采食量较女贞子组略有降低，这可能是因为益生菌发酵中草药组中有益生菌的存在，导致肠道营养物质消化率增加所致；
料蛋比方面：女贞子粉和益生菌发酵中草药均不同程度地降低了料蛋比，且益生菌发酵中草药组效果优于女贞子组；
产蛋率方面：产蛋率分析表明，两种添加剂均能提高蛋鸡产蛋率，其中女贞子粉在1.0%添加水平时，产蛋率较对照组显著提高了6.53%（p<0.05）；益生菌发酵中草药在添加水平为0.5%和1.0%时，较对照组显著提高了6.18%（p<0.05）和8.91%（p<0.05）；因此，在提高产蛋率方面益生菌发酵中草药效果优于女贞子粉；
死淘率：两种添加剂均能降低蛋鸡死淘率，其中益生菌发酵中草药效果普遍好于女贞子粉。
2.2益生菌发酵中草药对蛋鸡免疫机能的影响
表3结果表明，添加女贞子粉和益生菌发酵中草药可使新城疫抗体效价在免疫后14d、28d内显著升高；两种添加剂比较发现，益生菌发酵中草药在0.5%和1.0%两个添加水平新城疫抗体效价均高于女贞子粉1.0%添加水平，免疫后7d、14d、28d新城疫抗体效价分别提高了3.61%和3.13%、0.67%和2.69%、1.06%和6.77%。淋巴细胞转化率分析表明，两种添加剂均显著高于对照组（p<0.05），益生菌发酵中草药0.5%和1.0%添加水平又较女贞子粉1.0%添加水平分别提高了3.66%和6.51%。
3.小结
以上结果表明，本发明提供的益生菌发酵中草药可使女贞子中活性成分齐墩果酸含量提高22.6%，经过益生菌发酵的女贞子可显著提高蛋鸡产蛋率，降低死淘率，显著提高淋巴细胞转化率和免疫后14d和28d新城疫抗体效价，且益生菌发酵女贞子效果优于未发酵的女贞子粉。
通过以上试验结果分析，并考虑减少饲料成本的情况下，建议益生菌发酵中草药饲料添加剂适宜添加量为0.5%。
Claims (3)
1.一种蛋鸡用益生菌发酵中草药饲料添加剂的制备方法，所用益生菌为乳酸菌和枯草芽孢杆菌，所用的中草药为女贞子，其特征在于：其制备方法包括如下步骤：
（1）益生菌的种子培养
将乳酸菌培养于MRS液体培养基上，培养至对数生长中后期，待检测活菌数不低于1×108 cfu/mL时，停止培养，备用；
将枯草芽孢杆菌培养于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，培养至稳定生产期，待检测活菌数不低于1×109 cfu/mL时，停止培养，备用；
（2）发酵用益生菌种子液的制备
a. 培养液制备
收取啤酒生产过程中产生的啤酒糖化液，按照1L啤酒糖化液中添加尿素2.5g、葡萄糖5.0g、吐温80mL的比例，向所收取的啤酒糖化液中添加尿素、葡萄糖与吐温，搅拌均匀即制成培养液备用；
b. 乳酸菌种子液制备
按照5%的接种比例将经步骤（1）培养后的乳酸菌接种于所制备的培养液中，调整pH为6.3~6.5后，进行培养18~24h，以获取乳酸菌种子液；
c. 枯草芽孢杆菌种子液制备
按照5%的接种比例将经步骤（1）培养后的枯草芽孢杆菌接种于所制备的培养液中，调整pH至7.2~7.5后，进行培养18~24h，以获取枯草芽孢杆菌种子液；
（3）制作发酵物料
将女贞子表面消毒后，制成女贞子粉，然后取80份女贞子粉、10份麸皮、5份玉米面、4.5份豆粕粉、0.5份蔗糖混合均匀制成100份固体发酵物料，然后将所制得固体发酵物料与灭菌蒸馏水混合，调整pH至7.2，制得发酵物料；
（4）添加益生菌发酵
分两步先后向步骤（3）所制得的发酵物料中加入步骤（2）所制备的益生菌种子液，具体的加入方法为：首先将枯草芽孢杆菌种子液按照5%的比例加入发酵物料中，调整pH为7.2~7.5，然后在发酵罐中进行密封发酵；当发酵至5~6h时，再将乳酸菌种子液按照10%的比例加入发酵罐中的发酵物料中，搅拌均匀，并再次调整pH至6.3~6.5，继续进行密封发酵，整个发酵过程的时间为36~48h，发酵的温度为37.0~37.5 ℃；
（5）发酵物料的处理
将步骤（4）发酵完成后所得的物料于65℃~70℃温度下烘干，烘干后进行粉碎，过60目筛，然后以500g为单位，用复合薄膜进行真空包装，即得到用于蛋鸡的发酵中草药饲料添加剂。
2.根据权利要求1所述的一种蛋鸡用益生菌发酵中草药饲料添加剂的制备方法，其特征在于：所述MRS液体培养基的制作方法为：取牛肉蛋白粉10g、牛肉浸膏10g、酵母浸膏5g、葡萄糖20g 、醋酸钠5g、柠檬酸二铵2g、吐温80 0.1mL、硫酸镁0.58g、硫酸锰0. 28g、蒸溜水1000mL混合均匀，用高压灭菌锅在121℃灭菌20min-30min，然后调节pH至6.3~6.5，即可制得MRS液体培养基。
3.根据权利要求1所述的一种蛋鸡用益生菌发酵中草药饲料添加剂的制备方法，其特征在于：所述的牛肉膏蛋白胨液体培养基的制作方法为：取牛肉膏5g、蛋白胨10g与氯化钠5g加入1000mL蒸馏水中，搅拌均匀，然后调整pH至7.2~7.5，即可制得牛肉膏蛋白胨液体培养基。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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2015
- 2015-08-21 CN CN201510516532.5A patent/CN105010730A/zh active Pending
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