CN105010136A - 青钱柳非试管快繁方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种青钱柳非试管快繁方法，该方法利用植物组培原理，通过对青钱柳母本园小苗的修枝促萌、轻基质无纺布营养袋的使用、生根激素及灭菌处理、全日光智能繁育大棚的应用以及间歇式喷雾的精准控制，不仅缩短了青钱柳的育苗周期，而且提高了青钱柳的育苗成活率及产量，较好的解决了青钱柳因含单宁成分较高而抑制愈伤组织形成进而导致扦插处理率低的问题，有效解决了青钱柳种质资源稀缺的问题。

Description

青钱柳非试管快繁方法

技术领域

本发明涉及青钱柳的繁殖方法，具体涉及青钱柳非试管快速繁殖方法，属于植物无性繁殖技术领域。

背景技术

青钱柳(拉丁文名：Cyclocarya paliurus)属胡桃科、青钱柳属植物，我国南方多省均有发现，多以零星分布。青钱柳乃冰川四纪幸存下来的珍稀树种，仅存于中国。青钱柳被誉为植物界的大熊猫，医学界的第三棵树。

由于青钱柳种子资源稀少，且多处在深度休眠状态，播种两年后才萌发，种子出苗率极差，所以无法满足青钱柳人工栽植需要。

另外，由于青钱柳硬枝、老枝含单宁成分高，所以目前青钱柳硬枝扦插尚无成功案例。组培技术由于对设施设备及技术要求较高，目前青钱柳组培技术研究只停留在愈伤组织发育阶段，也无生根成苗案例。

发明内容

为解决现有的青钱柳人工繁殖技术的不足，本发明的目的在于提供一种既对技术及设施要求不高，又简单易行便于使用推广的青钱柳非试管快速繁殖方法，该方法能够有效提高青钱柳繁殖育苗能力。

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

一种青钱柳非试管快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

Step1：3月初将青钱柳母本园2-3年小苗从80cm高处修剪，6月上旬将半木质化青钱柳小枝剪下；

Step2：将带叶芽青钱柳枝剪成12-18cm长度，顶部未形成半木质化的嫩枝不要，取带3-5片叶的枝，顶部从叶芽上1cm处修剪，底部剪双斜面，斜面长度不超过1.5cm；

Step3：将修剪后的枝放入200ppm的高锰酸钾溶液中全浸5分钟，然后放至清水池中浸泡20分钟，最后按每把20枝包扎成把；

Step4：塑料或木制容器内加入生根液，生根液深度3-4cm，将青钱柳嫩枝根部放至生根液中浸5秒，浸泡深度为3cm；

Step5：将经生根处理后的青钱柳叶芽枝扦插到全日光快繁大棚内轻基质无纺布营养袋里，扦插深度3-4cm，扦插后直开浇水1小时，使枝与轻基质紧密结合；

Step6：扦插次日开启间歇式喷雾设备，扦插次日至扦插第一个10天8:30开始喷15秒停10分钟，循环至18:00，18:00开始喷10秒停30分钟，循环至次日8:30；扦插后的第二个10天，白天喷15秒停20分钟，晚上喷15秒停40分钟；此后的30天内早8点、晚19点各喷1分钟；

Step7：扦插后的第40天开始，早10点打开日光大棚两头敞棚，通风换气至下午19时闭棚；扦插后的第50天开始，打开大棚两头及两侧，使棚内与棚外环境统一；

Step8：扦插后每隔7-10天喷150mg/L的多菌灵溶液，每隔10-13天喷2％的尿素或者磷酸二氢钾溶液，每隔5天中午12时打开大棚两头1小时，形成空气对流，通风换气1小时。

前述的青钱柳非试管快繁方法，其特征在于，在Step1中，剪青钱柳半木质化枝的时间为日出前。

前述的青钱柳非试管快繁方法，其特征在于，在Step2中，将大叶片剪成半片叶。

前述的青钱柳非试管快繁方法，其特征在于，在Step4中，生根液的配制方法为：将吲哚丁酸钾、萘乙酸钠按照重量比2:1的比例配置成复合型生根粉，用适量酒精稀释后加水配制成浓度为300ppm的生根液。

前述的青钱柳非试管快繁方法，其特征在于，在Step5中，轻基质无纺布营养袋在扦插前三天每天喷多菌灵溶液2小时，扦插当天将喷雾设备的喷雾直开4小时，将轻基质无纺布营养袋浇透水。

前述的青钱柳非试管快繁方法，其特征在于，在Step5中，棚内育苗池底部覆10cm厚干净河沙，河沙上面平放托盘，托盘内摆放无纺布轻基质营养袋，在6月上旬至8月上旬扦插的青钱柳枝用密度为80％的遮阳网进行遮阳，在8月中旬扦插的青钱柳枝用密度为40％的遮阳网进行遮阳。

本发明的有益之处在于：

(1)嫩枝快繁是介于扦插繁殖与植物组培之间的一种技术，属于植物的无性繁殖范畴，本发明的方法利用植物组培技术原理，对嫩枝进行繁育，不仅培养出了与母本遗传基因一致的优良无性系苗木，而且还实现了一年多次快速提高单位面积青钱柳苗木产量；

(2)植物有性繁殖的后代具备双亲的遗传特性容易发生变异(如播种繁殖)，而无性繁殖则是通过母体细胞分裂产生子代新个体，后代一般不发生遗传重组，在遗传组成上和亲本(母本)是完全一致的(如组培、扦插等)，秦巴山区的青钱柳野生种群是迄今为止发现的中国分布最北缘的青钱柳，其种质资源优良，通过嫩枝快繁技术培育的可确保繁殖青钱柳苗与野生青钱柳种质品系一致；

(3)通过青钱柳小苗的嫩枝促萌、生根激素处理、智能温室的温湿度控制及灭菌处理，扦插后45天左右即生根，并且生根率高达90％以上。

具体实施方式

本发明的青钱柳快速繁殖方法利用植物克隆技术原理，既能够培养与母本遗传基因一致的优良无性系苗木，又能够一年多次快速提高单位面积产量。

以下结合具体实施例对本发明作具体的介绍。

Step1：3月初将青钱柳母本园2-3年小苗(营养充分，生长健壮，无病虫害)从80cm高处修剪促萌，以培育较大量的优质的嫩枝母本树资源。6月上旬将半木质化青钱柳小枝剪下，剪枝最好在日出前结束。

修剪促萌可增加青钱柳嫩枝数量，并使其生长健壮，产生的嫩枝可以达到每株十余枝以上，为快繁原料提供充足的来源。

母本园(采穗圃)到育苗大棚的距离不能太远，若区间距离太远，则运输时间过长，会造成嫩枝失水。

Step2：将带叶芽青钱柳枝剪成12-18cm长度，顶部未形成半木质化的嫩枝不要，取带3-5片叶的枝，顶部从叶芽上1cm处修剪，底部剪双斜面，斜面长度不超过1.5cm。

将青钱柳小枝的下部剪成双斜面，一方面可增加扦插枝皮下组织接触基质面积，另一方面可便于扦插，防止嫩枝损伤。

对于较大的叶片，可以剪成半片叶，以减少水分流失。

Step3：将修剪后的枝放入浓度为200ppm的高锰酸钾溶液中全浸5分钟，以防止细菌感染。然后取出放至清水池中浸泡20分钟，使嫩枝在扦插前吸收足够的水分。最后按每把20枝包扎成把，枝条下端对齐。

Step4：塑料或木制容器内加入生根液，生根液深度3-4cm，将青钱柳嫩枝根部放至生根液中浸5秒左右，浸泡深度为3cm左右。

在本发明中，生根液使用的是吲哚丁酸钾与萘乙酸钠的混合物，具体的配制过程为：将吲哚丁酸钾、萘乙酸钠按照重量比2:1的比例配置成复合型生根粉，用适量酒精稀释后加水配制成浓度为300ppm的生根液。

经观察：

(1)嫩枝扦插后10-15天即出现点状愈伤组织，25天即可形成完整的愈伤组织；

(2)愈伤组织完成后一周左右即可见1毫米左右的根芽出现；

(3)最初的生根数量一般可达3-5根，生根时间提前了8-15天，这样就有效的降低了愈伤组织发生与生根阶段在高温高湿环境里的霉变风险。

在本发明的生根液中，吲哚丁酸钾能够促进细胞分裂，诱导形成不定根，表现为根多、根直、根粗、根毛多，侧重于侧根的诱导生长。萘乙酸钠活性低，侧重于主根的诱导生长。二者的复合配方可有效的诱导青钱柳嫩枝愈伤组织的形成和发育，加速愈伤组织向生根阶段的迅速过度，从而可缩短生根时间、增加生根数量。

Step5：将经生根处理后的青钱柳叶芽枝扦插到全日光快繁大棚内的轻基质无纺布营养袋里，扦插深度3-4cm，扦插时注意插直插稳，扦插后将喷雾装置直开浇水1小时，使枝与轻基质紧密结合。

全日光快繁大棚内的育苗池底部覆盖有10cm厚干净河沙，以便于排除多余的根部积水，河沙上面平放托盘，然后将规格为5cm×10cm的轻基质无纺布营养袋摆放在托盘内。

全日光快繁大棚的顶部设置有遮阳网，6月上旬至8月上旬光照强度较强，而青钱柳嫩枝正在愈伤组织形成及生根阶段，对光照强度敏感，故在6月上旬至8月上旬扦插的青钱柳枝用密度为80％的遮阳网进行遮阳；由于8月中旬后光照强度逐步减少，而青钱柳嫩枝生根阶段已经完成，对光照要求增强，所以需要调整遮阳网密度，故在8月中旬扦插的青钱柳枝调整为40％的遮阳网进行遮阳，使光照强度与青钱柳嫩枝发育过程所需光照相匹配。

此外，全日光快繁大棚内还配备有喷雾设备、水帘、换气风机等常用设施，最好还具有智能控制、自动调节功能。

轻基质无纺布营养袋在扦插前三天每天喷浓度为350mg/L的多菌灵2小时，一是消除轻基质无纺布营养袋的细菌残留，二是提前三天减少农药残留对嫩枝生根的影响。扦插当天将喷雾设备的喷雾直开4小时，将轻基质无纺布营养袋浇透水，因为扦插后间歇式喷雾无法确保轻基质营养袋湿透，所以扦插前将喷雾装置不间断直开，直至轻基质营养袋湿透为止，注意不要喷雾过度，因为喷雾过度会造成嫩枝损伤。

采用轻基质无纺布营养袋来扦插青钱柳，因营养袋在出厂前已经过灭菌处理，所以减少了嫩枝扦插期间细菌感染的机率。此外，使用营养袋使得青钱柳在成苗后容易移植，避免了伤根。

Step6：因为白天温度高水分蒸发快，晚上温度较低水分蒸发较慢，所以将插穗的培育工作放置于全日光智能控制快繁大棚内进行，并且在扦插次日开启间歇式喷雾设备，对青钱柳进行间歇式喷雾。具体的喷雾过程是：

(1)扦插次日至扦插第一个10天8:30开始喷15秒停10分钟，循环至18:00，18:00开始喷10秒停30分钟，循环至次日8:30；

(2)扦插后的第二个10天，白天喷15秒停20分钟，晚上喷15秒停40分钟；

(3)此后的30天内早8点、晚19点各喷1分钟。

经过大约15天的培育后，青钱柳基本上全部产生了愈伤组织。

扦插后的第40天开始，早10点打开日光大棚两头敞棚，通风换气至下午19时闭棚；扦插后的第50天开始，打开大棚两头及两侧，使棚内与棚外环境统一，进而使青钱柳嫩枝逐步适应棚外自然温湿度。

全日光智能控制快繁大棚及间歇式喷雾为插穗提供了适度的温度和适度，使棚内相对湿度保持在80％至90％之间，温度控制在23℃至28℃之间，是植物快速发育和生长的温湿度，是确保青钱柳扦插穗在45天左右快速生根成苗的中心环节。

此外，还可在扦插后每隔7-10天喷150mg/L的多菌灵溶液，每隔10-13天喷2％的尿素或者磷酸二氢钾溶液，每隔5天中午12时打开大棚两头1小时，形成空气对流，通风换气1小时。

多菌灵和尿素(或磷酸二氢钾)交替使用，可保证育苗棚及轻基质无纺布营养袋在高温高湿环境里无细菌的产生和蔓延，从而促进插穗在无菌环境下15天内快速产生愈伤组织。

经观察，青钱柳最快的生根时间是扦插后的第38天，最慢的生根时间是扦插后的第58天。

经统计，青钱柳的平均生根时间是扦插后的第45天，并且生根率高达90％以上。与硬枝扦插相比，不仅生根时间缩短了15-25天，而且生根率得到了明显的提高。

由此可见，本发明的青钱柳非试管快繁方法，利用植物组培原理，通过对青钱柳母本园实生小苗的修枝促萌、轻基质无纺布营养袋的使用、生根激素及灭菌处理、全日光智能繁育大棚的应用以及间歇式喷雾的精准控制，不仅缩短了青钱柳的育苗周期，而且提高了青钱柳的育苗成活率及产量，较好的解决了青钱柳因含单宁成分较高而扦插处理率低的问题，进而有效解决了青钱柳种质资源稀缺的问题。

需要说明的是，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。

Claims (6)

1.青钱柳非试管快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

Step1：3月初将青钱柳母本园2-3年小苗从80cm高处修剪，6月上旬将半木质化青钱柳小枝剪下；

Step2：将带叶芽青钱柳枝剪成12-18cm长度，顶部未形成半木质化的嫩枝不要，取带3-5片叶的枝，顶部从叶芽上1cm处修剪，底部剪双斜面，斜面长度不超过1.5cm；

Step3：将修剪后的枝放入200ppm的高锰酸钾溶液中全浸5分钟，然后放至清水池中浸泡20分钟，最后按每把20枝包扎成把；

Step4：塑料或木制容器内加入生根液，生根液深度3-4cm，将青钱柳嫩枝根部放至生根液中浸5秒，浸泡深度为3cm；

Step5：将经生根处理后的青钱柳叶芽枝扦插到全日光快繁大棚内轻基质无纺布营养袋里，扦插深度3-4cm，扦插后直开浇水1小时，使枝与轻基质紧密结合；

Step6：扦插次日开启间歇式喷雾设备，扦插次日至扦插第一个10天8:30开始喷15秒停10分钟，循环至18:00，18:00开始喷10秒停30分钟，循环至次日8:30；扦插后的第二个10天，白天喷15秒停20分钟，晚上喷15秒停40分钟；此后的30天内早8点、晚19点各喷1分钟；

Step7：扦插后的第40天开始，早10点打开日光大棚两头敞棚，通风换气至下午19时闭棚；扦插后的第50天开始，打开大棚两头及两侧，使棚内与棚外环境统一；

Step8：扦插后每隔7-10天喷150mg/L的多菌灵溶液，每隔10-13天喷2％的尿素或者磷酸二氢钾溶液，每隔5天中午12时打开大棚两头1小时，形成空气对流，通风换气1小时。

2.根据权利要求1所述的青钱柳非试管快繁方法，其特征在于，在Step1中，剪青钱柳半木质化枝的时间为日出前。

3.根据权利要求1所述的青钱柳非试管快繁方法，其特征在于，在Step2中，将大叶片剪成半片叶。

4.根据权利要求1所述的青钱柳非试管快繁方法，其特征在于，在Step4中，生根液的配制方法为：将吲哚丁酸钾、萘乙酸钠按照重量比2:1的比例配置成复合型生根粉，用适量酒精稀释后加水配制成浓度为300ppm的生根液。

5.根据权利要求1所述的青钱柳非试管快繁方法，其特征在于，在Step5中，轻基质无纺布营养袋在扦插前三天每天喷多菌灵溶液2小时，扦插当天将喷雾设备的喷雾直开4小时，将轻基质无纺布营养袋浇透水。

6.根据权利要求1所述的青钱柳非试管快繁方法，其特征在于，在Step5中，棚内育苗池底部覆10cm厚干净河沙，河沙上面平放托盘，托盘内摆放无纺布轻基质营养袋，在6月上旬至8月上旬扦插的青钱柳枝用密度为80％的遮阳网进行遮阳，在8月中旬扦插的青钱柳枝用密度为40％的遮阳网进行遮阳。