CN105007940B

CN105007940B - 与癌症治疗相关的方法和组合物

Info

Publication number: CN105007940B
Application number: CN201380073538.9A
Authority: CN
Inventors: J·E·艾伦; W·S·艾尔-戴利; A·K·沙玛; S·G·阿敏; R·厄比
Original assignee: Penn State Research Foundation
Current assignee: Penn State Research Foundation
Priority date: 2012-12-20
Filing date: 2013-12-20
Publication date: 2017-08-25
Anticipated expiration: 2033-12-20
Also published as: KR20150099588A; CN105007940A; AU2013361164A1; WO2014100565A1; EP2934583A1; CA2894547A1; RU2015129366A; US20150328310A1; JP2016503063A; SG11201504779YA

Abstract

根据本公开内容的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的组合物和方法，其包括作为组合制剂或作为单独制剂的西妥昔单抗和ISC‑4。根据本公开内容的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其中所述受试者具有以野生型KRAS为表征的癌症，其中所述方法包括将西妥昔单抗和ISC‑4的结合物作为组合制剂给予，或单独给予，其中所述西妥昔单抗和ISC‑4的结合物的给予提供了协同抗癌效应治疗癌症。

Description

与癌症治疗相关的方法和组合物

相关申请的引用

本申请要求于2012年12月20日提交的美国临时专利申请No.61/740,126的优先权，所述临时申请的全部内容以引用的方式纳入本文。

政府资助

该发明是在国立卫生研究院授予的基金No.CA143999的政府支持下完成的。政府对本发明享有某些权利。

发明领域

根据本发明的一般方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法和组合物。根据本发明的具体方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法和组合物，其包括将西妥昔单抗和ISC-4作为组合制剂或作为单独制剂给予。

发明的背景技术

持续需要在需要其的受试者中治疗癌症的方法和组合物。本发明提供了这样的方法和组合物。

发明内容

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括将西妥昔单抗和ISC-4作为组合制剂或作为单独制剂给予。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括将西妥昔单抗和ISC-4的结合物作为组合制剂给予，或单独给予，其中所述癌症以野生型KRAS为表征。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括将西妥昔单抗和ISC-4的结合物作为组合制剂给予，或单独给予，其中所述癌症以野生型KRAS为表征，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括将西妥昔单抗和ISC-4的结合物作为组合制剂给予，或单独给予，其中所述癌症以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS在密码子12、13或61中不具有激活的KRAS突变。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括将西妥昔单抗和ISC-4的结合物作为组合制剂给予，或单独给予，其中所述癌症以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变Q61H、G12S、G12V、G12A或G13D。

本发明提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括将西妥昔单抗和ISC-4的结合物作为组合制剂给予，或单独给予，其中所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗结直肠癌的方法，其包括将西妥昔单抗和ISC-4的结合物作为组合制剂给予，或单独给予，其中所述结直肠癌以野生型KRAS为表征，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括将西妥昔单抗和ISC-4的结合物作为组合制剂给予，或单独给予，其中所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS在密码子12、13或61中不具有激活的KRAS突变。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括将西妥昔单抗和ISC-4的结合物作为组合制剂给予，或单独给予，其中所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变Q61H、G12S、G12V、G12A或G13D。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括在给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物之前，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第一样本；将西妥昔单抗和ISC-4的结合物作为组合制剂给予或单独给予，在给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物之后，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第二样本；分析所述第一和第二样本的一个或多个细胞凋亡的标记物，其中，与所述第一样本相比，所述第二样本中增加的细胞凋亡表明所给予的西妥昔单抗和ISC-4的治疗活性，从而监测了给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物的功效。根据这种方法的方面，所述癌症以野生型KRAS为表征，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS在密码子12、13或61中不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变Q61H、G12S、G12V、G12A或G13D。根据这种方法的方面，所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS在密码子12、13或61中不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变Q61H、G12S、G12V、G12A或G13D。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括在给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物之前，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第一样本；将西妥昔单抗和ISC-4的结合物作为组合制剂给予或单独给予；在给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物之后，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第二样本；分析所述第一和第二样本的磷酸-Akt，其中，与所述第一样本相比，所述第二样本中降低的磷酸-Akt表明所给予的西妥昔单抗和ISC-4的治疗活性，从而监测给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物的功效。根据这种方法的方面，所述癌症以野生型KRAS为表征，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS在密码子12、13或61中不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变Q61H、G12S、G12V、G12A或G13D。根据这种方法的方面，所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS在密码子12、13或61中不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变Q61H、G12S、G12V、G12A或G13D。

根据本发明的治疗癌症的方法的方面，同时或按顺序给予西妥昔单抗和ISC-4。在一个非限制性实例中，在选自如下的时间段内按顺序给予西妥昔单抗和ISC-4：一小时、两小时、四小时、八小时、十二小时和二十四小时。

根据本发明的方面，提供了包含西妥昔单抗和ISC-4的药物组合物。

根据本发明的方面，提供了包含西妥昔单抗和ISC-4的商业包装物(package)，其中西妥昔单抗和ISC-4作为单一(single)药物制剂或单独(separate)药物制剂提供。

本发明提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括组合或单独给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括组合或单独给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物，其中所述癌症以野生型KRAS为表征。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括将西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物作为组合制剂给予或单独给予，其中所述癌症以野生型KRAS为表征，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括将西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物作为组合制剂给予或单独给予，其中所述癌症以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS在密码子12、13或61中不具有激活的KRAS突变。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括将西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物作为组合制剂给予或单独给予，其中所述癌症以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变Q61H、G12S、G12V、G12A或G13D。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗结直肠癌的方法，其包括组合或单独给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物，其中所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗结直肠癌的方法，其包括将西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物作为组合制剂给予或单独给予，其中所述结直肠癌是以野生型KRAS为表征，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括将西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物作为组合制剂给予或单独给予，其中所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS在密码子12、13或61中不具有激活的KRAS突变。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括将西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物作为组合制剂给予或单独给予，其中所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变Q61H、G12S、G12V、G12A或G13D。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括在给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物之前，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第一样本；组合或单独给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物；在给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物之后，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第二样本；分析所述第一和第二样本的一个或多个细胞凋亡的标记物，其中，与所述第一样本相比，所述第二样本中增加的细胞凋亡表明所给予的西妥昔单抗和ISC-4前药的治疗活性，从而监测给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物的功效。根据这种方法的方面，所述癌症以野生型KRAS为表征，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS在密码子12、13或61中不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变Q61H、G12S、G12V、G12A或G13D。根据这种方法的方面，所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS在密码子12、13或61中不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变Q61H、G12S、G12V、G12A或G13D。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括在给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物之前，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第一样本；组合或单独给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物；在给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物之后，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第二样本；分析所述第一和第二样本的磷酸-Akt，其中，与所述第一样本相比，所述第二样本中减少的磷酸-Akt表明所给予的西妥昔单抗和ISC-4前药的治疗活性，从而监测给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物的功效。根据这种方法的方面，所述癌症以野生型KRAS为表征，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS在密码子12、13或61中不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变Q61H、G12S、G12V、G12A或G13D。根据这种方法的方面，所述结直肠癌以野生型KRAS为表征，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述结直肠癌以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS在密码子12、13或61中不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述结直肠癌以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变Q61H、G12S、G12V、G12A或G13D。

根据本发明的治疗癌症的方法的方面，同时或按顺序给予西妥昔单抗和ISC-4前药。在一个非限制性实例中，在选自如下的时间段内按顺序给予西妥昔单抗和ISC-4前药：一小时、两小时、四小时、八小时、十二小时和二十四小时。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括组合或单独给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物，其中所述ISC-4前药是ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐。所述ISC-4硫代葡糖酸盐前药具有如下的结构式：

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括组合或单独给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物，其中所述癌症以野生型KRAS为表征，并且其中所述ISC-4前药是ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐。根据这种方法的方面，所述癌症以野生型KRAS为表征，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS在密码子12、13或61中不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变Q61H、G12S、G12V、G12A或G13D。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括组合或单独给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物，其中所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌，并且其中所述ISC-4前药是ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐。根据这种方法的方面，所述结直肠癌以野生型KRAS为表征，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述结直肠癌以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS在密码子12、13或61中不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述结直肠癌以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变Q61H、G12S、G12V、G12A或G13D。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括在给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物之前，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第一样本，其中所述ISC-4前药是ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐；组合或单独给予西妥昔单抗和ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐的结合物；在给予西妥昔单抗和ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐的结合物之后，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第二样本；分析所述第一和第二样本的一个或多个细胞凋亡的标记物，从而监测给予西妥昔单抗和ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐的结合物的功效。根据这种方法的方面，所述癌症以野生型KRAS为表征，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS在密码子12、13或61中不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变Q61H、G12S、G12V、G12A或G13D。根据这种方法的方面，所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS在密码子12、13或61中不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变Q61H、G12S、G12V、G12A或G13D。

根据本发明的方面，提供了在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括在给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物之前，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第一样本，其中所述ISC-4前药是ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐；组合或单独给予西妥昔单抗和ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐的结合物；在给予西妥昔单抗和ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐的结合物之后，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第二样本；分析所述第一和第二样本的磷酸-Akt，从而监测给予西妥昔单抗和ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐的结合物的功效。根据这种方法的方面，所述癌症以野生型KRAS为表征，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS在密码子12、13或61中不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变Q61H、G12S、G12V、G12A或G13D。根据这种方法的方面，所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS在密码子12、13或61中不具有激活的KRAS突变。根据这种方法的方面，所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变Q61H、G12S、G12V、G12A或G13D。

根据本发明的治疗癌症的方法的方面，同时或按顺序给予西妥昔单抗和ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐。

在一个非限制性实例中，在选自如下的时间段内按顺序给予西妥昔单抗和ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐：一小时、两小时、四小时、八小时、十二小时和二十四小时。

根据本发明的方面的药物组合物包括西妥昔单抗和ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐。

根据本发明的方面的商业包装物包括西妥昔单抗和ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐。

根据本发明的方面的商业包装物包括包含西妥昔单抗和ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐的单一的药物制剂。

根据本发明的方面的商业包装物包括西妥昔单抗和ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐，其中，在所述商业包装物中，西妥昔单抗作为第一药物制剂提供，ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐作为单独的第二药物制剂提供。

根据本发明的方面的组合物包括ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐，所述ISC-4硫代葡糖酸盐前药具有如下的结构式：

根据本发明的方面，提供了评估治疗癌症的功效的方法，其包括：在一起或单独给予西妥昔单抗和ISC-4之前，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第一样本；在给予西妥昔单抗和ISC-4之后，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第二样本；分析所述第一和第二样本的一个或多个细胞凋亡的标记物和/或分析所述第一和第二样本的磷酸-Akt，其中所述一个或多个细胞凋亡的标记物的增加和所述磷酸-Akt的减少表明组合、一起或单独给予西妥昔单抗和ISC-4的治疗活性，从而监测给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物的功效。

根据本发明的方面，提供了评估治疗癌症的功效的方法，其包括：在一起或单独给予西妥昔单抗和ISC-4之前，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第一样本；在给予西妥昔单抗和ISC-4前药之后，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第二样本；分析所述第一和第二样本的一个或多个细胞凋亡的标记物和/或分析所述第一和第二样本的磷酸-Akt，其中所述一个或多个细胞凋亡的标记物的增加和所述磷酸-Akt的减表明组合、一起或单独给予西妥昔单抗和ISC-4前药的治疗活性，从而监测给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物的功效。

根据本发明的方面，提供了评估治疗癌症的功效的方法，其包括：在一起或单独给予西妥昔单抗和ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐之前，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第一样本；在给予西妥昔单抗和ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐之后，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第二样本；分析所述第一和第二样本的一个或多个细胞凋亡的标记物和/或分析所述第一和第二样本的磷酸-Akt，其中所述一个或多个细胞凋亡的标记物的增加和所述磷酸-Akt的减少表明组合、一起或单独给予西妥昔单抗和ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐的治疗活性，从而监测给予西妥昔单抗和ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐的结合物的功效。

附图说明

图1A是示出了用ISC-4或DMSO处理的所示细胞系的细胞活力测定的结果和经计算的EC50值的图；

图1B是示出了ISC-4处理对同步和异步的HCT116细胞的细胞周期特征的影响的图；

图1C是示出了ISC-4处理对同步和异步的HT-29细胞的细胞周期特征的影响的图

图1D是示出了用0、1、2、4、8或16μM ISC-4进行ISC-4处理之后所示的结直肠癌细胞系的亚G1含量；

图2示出了单独或组合使用ISC-4(1、2或4μM)以及所示治疗剂以推定的EC12.5、EC25和EC50处理的SW480和RKO结直肠癌细胞系的细胞活力测定的结果；

图3A示出了用ISC-4和西妥昔单抗以所示剂量处理72小时的人结肠癌细胞系HT-29的细胞活力测定的结果；

图3B示出了用ISC-4和西妥昔单抗以所示剂量处理72小时的人结肠癌细胞系RKO的细胞活力测定的结果；

图3C示出了用ISC-4和西妥昔单抗以所示剂量处理72小时的人结肠癌细胞系HCT116的细胞活力测定的结果；

图3D示出了用ISC-4和西妥昔单抗以所示剂量处理72小时的人结肠癌细胞系DLD-1的细胞活力测定的结果；

图3E是示出了用5-FU如所示处理24小时的野生型和具有5-FU-抗性的RKO细胞的细胞活力测定结果的图；

图3F是示出了用ISC-4(2μM)和西妥昔单抗(1μg/mL)处理24小时的具有5-FU-抗性的RKO细胞的结果的图；

图4A示出了单独或组合使用ISC-4(2μM)和西妥昔单抗(1μg/mL)处理所示时间段的RKO细胞的细胞活力测定的结果；

图4B示出了如图4A中处理12小时的RKO细胞的DAPI染色的结果；

图4C示出了单独或组合使用ISC-4(2μM)和西妥昔单抗(1μg/mL)处理12小时的RKO细胞的亚G1含量。

图4D示出了用ISC-4(2μM)与西妥昔单抗(0、0.25、0.5或1μg/mL)组合处理的RKO细胞在处理后24小时时的Caspase-Glo测定的结果(上图)，以及对ISC-4(2μM)和西妥昔单抗(1μg/mL)的定量(下图)；

图5A示出了单独或组合使用ISC-4(2μM)和西妥昔单抗(1μg/mL)处理24小时的RKO细胞的蛋白质印迹分析结果；

图5B示出了单独或组合使用ISC-4(2μM)和西妥昔单抗(1μg/mL)处理所示时间段的RKO细胞的蛋白质印迹分析结果；

图5C示出了用ISC-4(2μM)与西妥昔单抗(1μg/mL)的结合物(Rx)处理8小时之后所示的人结肠癌细胞系的蛋白质印迹分析结果，与对照相比，*P<0.05；

图6A是示出了在用单一剂量的ISC-4(3mg/kg，腹腔注射)、西妥昔单抗(10mg/kg，静脉注射)或其结合物(“组合”(“combo”))处理后4天后具有5-FU-抗性的RKO异种移植物的相对肿瘤大小的图；

图6B示出了处理后24小时收集的异种移植肿瘤的苏木精和伊红(H&E)染色以及TUNEL染色的结果；

图6C示出了使用ISC-4(3mg/kg，静脉注射)、西妥昔单抗(10mg/kg，静脉注射)、其结合物、或西妥昔单抗和5-FU(25mg/kg，静脉注射)从第0天开始每周一次处理包含所建立的HT-29异种移植肿瘤的无胸腺的雌性裸鼠的结果；

图7A示出了单独或组合使用ISC-4(2μM)和西妥昔单抗(1μg/mL)处理12小时的RKO细胞的相差显微镜图；

图7B是示出了单独或组合使用ISC-4(2μM)和西妥昔单抗(1μg/mL)处理的RKO细胞中Ki-67表达的流式细胞术分析结果的图；

图7C示出了单独或组合使用ISC-4(2μM)和西妥昔单抗(1μg/mL)处理的RKO细胞中Ki-67表达的蛋白质印迹分析；

图7D示出了单独或组合用ISC-4(2μM)和西妥昔单抗(1μg/mL)处理24小时的RKO细胞的蛋白质印迹分析结果；

图8A是示出了每周两次，持续2周接受ISC-4(3mg/kg，腹腔注射)、西妥昔单抗(10mg/kg，静脉注射)、或其结合物的小鼠的体重变化(n≥5)的图；

图8B示出了在用ISC-4(3mg/kg，腹腔注射)、西妥昔单抗(10mg/kg，静脉注射)、或其结合物处理24小时后从小鼠中收集的肝组织的H&E染色结果；

图8C是示出了图6C中描述的HT-29异种移植物的最终肿瘤体积和肿瘤重量的图表；以及

图8D是示出了终点(其为最后一次剂量后3天)的小鼠体重(n≥8)的图，误差线是重复测试的SEM。

具体实施方式

本文使用的科技术语意在具有本领域普通技术人员所通常理解的含义。发现这些术语在多篇标准参考文献的上下文中被定义和使用，所述参考文献示例性地包括：J.Sambrook和D.W.Russell,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold SpringHarbor Laboratory Press；第3版,2001；F.M.Ausubel,Ed.,Short Protocols inMolecular Biology,Current Protocols；第5版,2002；B.Alberts et al.,MolecularBiology of the Cell,第4版,Garland,2002；D.L.Nelson and M.M.Cox,LehningerPrinciples of Biochemistry,第4版,W.H.Freeman&Company,2004；Engelke,D.R.,RNAInterference(RNAi):Nuts and Bolts of RNAi Technology,DNA Press LLC,Eagleville,PA,2003；Herdewijn,P.(Ed.),Oligonucleotide Synthesis:Methods andApplications,Methods in Molecular Biology,Humana Press,2004；A.Nagy,M.Gertsenstein,K.Vintersten,R.Behringer,Manipulating the Mouse Embryo:ALaboratory Manual,3rd edition,Cold Spring Harbor Laboratory Press；December15,2002,ISBN-10:0879695919；Kursad Turksen(Ed.),Embryonic stem cells:methodsand protocols in Methods Mol Biol.2002；185,Humana Press；Current Protocols inStem Cell Biology,ISBN:9780470151808。

除非上下文中另有明确说明，单数术语“一”、“一个”和“所述”不意在为限制性的，并包括复数指代对象。

如本文所述，出人意料地发现包括给予ISC-4和西妥昔单抗的组合治疗的协同效应。

本发明提供了用于在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括将西妥昔单抗和ISC-4的结合物作为组合制剂给予，或单独给予，其中所述结合物的给予提供了协同效应。

术语“ISC-4”是指具有如下结构式的化合物：

化合物ISC-4可使用标准化学合成方法合成，例如，如Sharma,A.K.,et al.,J.ofMed.Chem.,2008,51(24):7820-7826中所述。

使用本文所述的方法和组合物治疗的癌症以异常的细胞增殖为表征，包括但不限于肿瘤前过度增殖、原位癌、瘤和转移。

根据本发明的方面，提供了治疗患有或具有患以野生型KRAS为表征的癌症的风险的受试者的方法，其包括将西妥昔单抗和ISC-4的结合物作为组合制剂给予，或单独给予，其中所述结合物的给予提供了协同效应。

KRAS(也称为GTPase KRas和V-Ki-ras2柯尔斯顿大鼠肉瘤病毒致癌基因同源物)，以及与过度激活的KRAS和癌症相关的KRAS突变，是本领域熟知的，参见S.M.Anderson,Expert Review of Molecular Diagnostics,2011,11(6):635-642；Schimanski et al.,Cancer Res,1999,59:5169-5175；Chang et al.,BMC Cancer 9:179,2009；以及etal.,Clinical Relevance of KRAS in Human Cancers,Journal of Biomedicine andBiotechnology,2010,Article ID 150960,Epub Jun 7,2010。

激活的KRAS突变是熟知的，参照人类KRAS，其包括但不限于密码子12和13以及密码子61中的那些突变。参照人类KRAS，熟知的激活的KRAS突变的实例包括但不限于Q61H、G12S、G12V、G12A和G13D。这些以及其他熟知的激活的KRAS突变记载于S.M.Anderson,Expert Review of Molecular Diagnostics,2011,11(6):635-642；Schimanski et al.,Cancer Res,1999,59:5169-5175；Chang et al.,BMC Cancer 9:179,2009；以及et al.,Clinical Relevance of KRAS in Human Cancers,Journal of Biomedicine andBiotechnology,2010,Article ID 150960,Epub Jun 7,2010中。

可在获自受试者的测试样本中测定KRAS的突变状态。

测试样本可以是受试者的包括或疑似包括癌细胞或衍生自癌细胞的循环DNA的任何生物学体液、细胞或组织，其示例性地包括血液、血浆、血清、尿液、唾液、腹水、脑脊液、脑室液、胸膜液、肺和支气管灌洗样本、黏液、汗液、泪液、精液、膀胱洗涤样本、羊水、淋巴液、腹膜液、滑液、骨髓穿刺液、肿瘤细胞或组织、器官细胞或组织，例如活检组织材料。

KRAS的突变状态可通过多种方法中的任何一种来测定，所述方法包括但不限于蛋白质或多肽测序、核酸测定和免疫测定。测定KRAS的突变状态的示例性方法记载于S.M.Anderson,Expert Review of Molecular Diagnostics,2011,11(6):635-642；Schimanski et al.,Cancer Res,1999,59:5169-5175；Chang et al.,BMC Cancer 9:179,2009；以及et al.,Clinical Relevance of KRAS in Human Cancers,Journal ofBiomedicine and Biotechnology,2010,Article ID 150960,Epub Jun 7,2010中。

检测KRAS核酸、特别是mRNA或cDNA的测定，包括但不限于测序；聚合酶链式反应(PCR)，例如RT-PCR；斑点印迹；原位杂交；RNA印迹(Northern blot)；和RNA酶保护。

免疫测定方法可用于测定样本中的KRAS突变状态，其包括但不限于，酶联免疫吸附试验(ELISA)、酶联免疫渗滤试验(ELIFA)、流式细胞术、免疫印迹、免疫沉淀反应、免疫组织化学、免疫细胞化学、发光免疫测定(LIA)、荧光免疫测定(FIA)和放射免疫测定。

根据本发明的方面，提供了治疗患有或具有患以对5-氟尿嘧啶的抗性为表征的癌症的风险的受试者的方法，其包括将西妥昔单抗和ISC-4的结合物作为组合制剂给予，或单独给予，其中所述结合物的给予提供了协同效应。

根据本发明的方面，提供了治疗患有或具有患以野生型KRAS为表征的结直肠癌的风险的受试者的方法，其包括将西妥昔单抗和ISC-4的结合物作为组合制剂给予，或单独给予，其中所述结合物的给予提供了协同效应。

本发明的方法和组合物可用于预防和改善癌症的指征和/或症状。用于指在受试者中治疗癌症的术语“治疗”包括：在受试者中预防、抑制或改善癌症，例如，减慢癌症的进程和/或减少或改善癌症的指征或症状。

作为本发明的组合治疗而给予的西妥昔单抗和ISC-4的治疗有效量是在被治疗的受试者中具有有益效果的量。在患有癌症或具有患癌症的风险的受试者中，例如以异常的细胞增殖为表征的病症——包括但不限于肿瘤前过度增殖、原位癌、瘤、转移、肿瘤，良性生长或对本发明的组合物响应的其他病症，本发明的组合物的治疗有效量对于改善或预防所述病症的一种或多种指征和/或症状是有效的。

作为本发明的组合治疗而给予的西妥昔单抗和ISC-4的治疗有效量对于可检测地增加细胞凋亡和/或降低癌细胞的增殖是有效的。作为本发明的组合治疗而给予的西妥昔单抗和ISC-4的治疗有效量对于可检测地降低癌细胞中的磷酸-Akt是有效的。

根据本发明的方法和使用本发明的组合物治疗的受试者可以是哺乳类动物或非哺乳类动物。哺乳类受试者可以是任何哺乳动物，其包括但不限于，人类、非人灵长类动物；啮齿类动物如小鼠、大鼠或豚鼠；家养的宠物如猫或狗；马、牛、猪、绵羊、山羊或兔。非哺乳类受试者可以是任何非哺乳动物，其包括但不限于：鸟类例如鸭、鹅、鸡或火鸡。受试者可以是任意性别，可以是任何年龄。在包括将发明的药物组合物给予受试者的方法的方面中，所述受试者是人类。术语“受试者”和“患者”在本文中可交换使用。

根据本发明的方面，给予西妥昔单抗、ISC-4以及一种或多种额外的治疗剂的结合物。

本文使用的术语“额外的治疗剂”是指化合物、化合物的混合物、生物大分子(如核酸、抗体、蛋白质或其部分，例如多肽)、或从生物材料如细菌、植物、真菌或动物(特别是哺乳类动物)细胞或组织制备的提取物，所述提取物是在受试者中局部或全身起作用的一种或多种生物学、生理学或药理学活性物质。

根据本发明的方法和组合物的方面所包括的额外的治疗剂包括，但不限于抗生素、抗病毒剂、抗肿瘤剂、止痛剂、退热剂、抗抑郁剂、抗精神病药物、抗癌剂、抗组胺剂、抗骨质疏松剂、抗骨坏死剂、抗炎剂、抗焦虑剂、化疗剂、利尿剂、生长因子、激素、非甾族类抗炎剂、类固醇和血管活性剂。

包括给予ISC-4和西妥昔单抗的组合疗法显示出协同效应。

根据本发明的方面，组合疗法包括：(1)包括包含一起配制于单一药物组合物中的ISC-4和西妥昔单抗的药物组合组合物的药物组合物；和/或(2)共给予ISC-4和西妥昔单抗，其中ISC-4和西妥昔单抗未被配制于同一组合物中。当使用单独的制剂时，相对于西妥昔单抗，ISC-4可同时、在间歇的时间、在错开的时间、之前、之后或其组合给予。

根据本发明的方面，组合疗法包括：(1)包括包含在单一药物组合物中一起配制的ISC-4和西妥昔单抗以及一种或多种额外的治疗剂的药物组合组合物的药物组合物；(2)共给予ISC-4、西妥昔单抗和一种或多种额外的药剂，其中ISC-4、西妥昔单抗和一种或多种额外的药剂未被配制于同一组合物中；和/或(3)共给予ISC-4、西妥昔单抗和一种或多种额外的药剂，其中ISC-4、西妥昔单抗和一种或多种额外的药剂中的两种或更多种，但并非全部被配制于同一组合物中。当使用单独的制剂时，相对于每一种其他组分，ISC-4、西妥昔单抗和一种或多种额外的药剂中的每一种可同时、在间歇的时间、在错开的时间，之前、之后或其组合给予。

组合治疗可使得降低包括ISC-4和西妥昔单抗的药物组合物的有效剂量并增加其治疗指数。

额外的药剂是根据本发明的方面的抗癌剂。

抗癌剂记载于例如Goodman et al.,Goodman and Gilman's ThePharmacological Basis of Therapeutics,第8版,Macmillan Publishing Co.,1990中。

抗癌剂示例性地包括：异恶唑乙酸(acivicin)、阿柔比星(aclarubicin)、阿考达唑(acodazole)、阿克罗宁(acronine)、阿多来新(adozelesin)、阿地白介素(aldesleukin)、阿利维A酸(alitretinoin)、别嘌醇(allopurinol)、六甲蜜胺(altretamine)、安波霉素(ambomycin)、阿美蒽醌(ametantrone)、氨磷汀(amifostine)、氨鲁米特(aminoglutethimide)、安吖啶(amsacrine)、阿那曲唑(anastrozole)、氨茴霉素(anthramycin)、白砒(arsenic trioxide)、门冬酰胺酶(asparaginase)、曲林菌素(asperlin)、阿扎胞苷(azacitidine)、阿扎替派(azetepa)、阿佐霉素(azotomycin)、巴马司他(batimastat)、苯佐替派(benzodepa)、贝伐单抗(bevacizumab)、比卡鲁胺(bicalutamide)、比生群(bisantrene)、双奈法德(bisnafide dimesylate)、比折来新(bizelesin)、博莱霉素(bleomycin)、布喹那(brequinar)、溴匹立明(bropirimine)、马利兰(busulfan)、放线菌素(cactinomycin)、卡普睾酮(calusterone)、卡培他滨(capecitabine)、卡醋胺(caracemide)、卡贝替姆(carbetimer)、卡铂(carboplatin)、卡莫司汀(carmustine)、卡柔比星(carubicin)、卡折来新(carzelesin)、西地芬戈(cedefingol)、塞来昔布(celecoxib)、苯丁酸氮齐(chlorambucil)、西罗霉素(cirolemycin)、顺铂(cisplatin)、克拉屈滨(cladribine)、克立那托(crisnatolmesylate)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、阿糖胞苷(cytarabine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、更生霉素(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地西他滨(decitabine)、右奥马铂(dexormaplatin)、地扎胍宁(dezaguanine)、甲磺酸地扎胍宁(dezaguanine mesylate)、地吖醌(diaziquone)、多西他赛(docetaxel)、多柔比星(doxorubicin)、屈洛昔芬(droloxifene)、屈他雄酮(dromostanolone)、达佐霉素(duazomycin)、依达曲沙(edatrexate)、依氟鸟氨酸(eflomithine)、依沙芦星(elsamitrucin)、恩洛铂(enloplatin)、恩普氨酯(enpromate)、依匹哌啶(epipropidine)、表柔比星(epirubicin)、厄布洛唑(erbulozole)、依索比星(esorubicin)、雌氮芥(estramustine)、依他硝唑(etanidazole)、依托泊苷(etoposide)、氯苯乙嘧胺(etoprine)、法倔唑(fadrozole)、法扎拉滨(fazarabine)、芬维A胺(fenretinide)、氟尿苷(floxuridine)、氟达拉滨(fludarabine)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、氟西他滨(flurocitabine)、磷喹酮(fosquidone)、福司曲星(fostriecin)、氟维司群(fulvestrant)、吉西他滨(gemcitabine)、羟基脲(hydroxyurea)、伊达比星(idarubicin)、异环磷酰胺(ifosfamide)、伊莫福新(ilmofosine)、白细胞介素II(interleukin II；IL-2；包括重组白细胞介素II或rIL2)、干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素α-n1、干扰素β-n3、干扰素β-Ia、干扰素γ-Ib、异丙铂(iproplatin)、伊立替康(irinotecan)、兰瑞肽(lanreotide)、来曲唑(letrozole)、亮丙瑞林(leuprolide)、利阿唑(liarozole)、洛美曲索(lometrexol)、洛莫司汀(lomustine)、洛索蒽酿(losoxantrone)、马索罗酚(masoprocol)、美登素(maytansine)、盐酸氮芥(mechlorethamine hydrochloride)、甲地孕酮(megestrol)、美仑孕酮乙酸盐(melengestrol acetate)、马法兰(melphalan)、美诺立尔(menogaril)、巯基嘌吟(mercaptopurine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、氯苯氨啶(metoprine)、美妥替哌(meturedepa)、米丁度胺(mitindomide)、米托卡星(mitocarcin)、丝裂红素(mitocromin)、米托洁林(mitogillin)、米托马星(mitomalcin)、丝裂霉素(mitomycin)、米托司培(mitosper)、米托坦(mitotane)、米托蒽醌(mitoxantrone)、霉酚酸(mycophenolic acid)、奈拉滨(nelarabine)、诺考达唑(nocodazole)、诺拉霉素(nogalamycin)、奥马铂(ormnaplatin)、奥昔舒仑(oxisuran)、紫杉醇(paclitaxel)、培门冬酶(pegaspargase)、培利霉素(peliomycin)、戊氮芥(pentamustine)、培洛霉素(peplomycin)、培磷酰胺(perfosfamide)、哌泊溴烷(pipobroman)、嗪消安(piposulfan)、盐酸吡罗蒽醌(piroxantrone hydrochloride)、普卡霉素(plicamycin)、普洛美坦(plomestane)、卟吩姆钠(porfimer)、泊非霉素(porfiromycin)、泼尼莫司汀(prednimustine)、甲基苄肼(procarbazine)、嘌呤霉素(puromycin)、吡唑呋喃菌素(pyrazofurin)、利波腺苷(riboprine)、罗谷亚胺(rogletimide)、沙芬戈(safingol)、司莫司汀(semustine)、辛曲秦(simtrazene)、磷乙酰天冬氨酸(sparfosate)、稀疏霉素(sparsomycin)、锗螺胺(spirogermanium)、螺莫司汀(spiromustine)、螺铂(spiroplatin)、链黑菌素(streptonigrin)、链脲佐菌素(streptozocin)、磺氯苯脲(sulofenur)、他利霉素(talisomycin)、他莫昔芬(tamoxifen)、替可加兰(tecogalan)、替加氟(tegafur)、替洛蒽醌(teloxantrone)、替莫泊芬(temoporfin)、替尼泊苷(teniposide)、替罗昔隆(teroxirone)、睾内醋(testolactone)、硫味嘌吟(thiamiprine)、硫鸟嘌吟(thioguanine)、塞替派(thiotepa)、噻唑羧胺核苷(tiazofurin)、替拉扎明(tirapazamine)、拓扑替康(topotecan)、托瑞米芬(toremifene)、曲托龙(trestolone)、曲西立滨(triciribine)、三甲曲沙(trimetrexate)、曲普瑞林(triptorelin)、妥布氯唑(tubulozole)、尿嘧啶齐末(uracil mustard)、乌瑞替派(uredepa)、伐普肽(vapreotide)、维替泊芬(verteporfin)、长春碱(vinblastine)、硫酸长春新碱(vincristine sulfate)、长春地辛(vindesine)、长春匹定(vinepidine)、长春甘醋(vinglycinate)、长春罗新(vinleurosine)、长春瑞滨(vinorelbine)、长春罗定(vinrosidine)、长春利定(vinzolidine)、伏氯唑(vorozole)、折尼铂(zeniplatin)、净司他丁(zinostatin)、唑来膦酸(zoledronate)和佐柔比星(zorubicin)。

根据本发明的方面，测定作为在需要其的受试者中治疗癌症的本发明的组合治疗给予的西妥昔单抗和ISC-4的治疗活性的一种或多种相关的生物标记物，以评估受试者中的癌症的治疗。因此，例如，磷酸-Akt的水平是作为在需要其的受试者中治疗癌症的本发明的组合治疗给予的西妥昔单抗和ISC-4的治疗活性的相关生物标记物，并且癌细胞中磷酸-Akt的减少表明作为在需要其的受试者中治疗癌症的本发明的组合治疗给予的西妥昔单抗和ISC-4的功效。根据标准方法测量磷酸-Akt的水平，例如如本文所述。细胞凋亡的生物标记物是作为在需要其的受试者中治疗癌症的本发明的组合治疗给予的西妥昔单抗和ISC-4的治疗活性的相关生物标记物，并且癌细胞中细胞凋亡的一种或多种生物标记物的增加表明作为在需要其的受试者中治疗癌症的本发明的组合治疗给予的西妥昔单抗和ISC-4的功效。细胞凋亡的生物标记物包括但不限于，DNA片段的检测、不同于坏死的特有的形态学变化以及细胞凋亡蛋白酶-3的激活。根据标准方法测量细胞凋亡的生物标记物，例如如本文所述。

根据本发明的方面，使用西妥昔单抗和ISC-4的组合治疗的效果的测定用于监测受试者。因此，例如，在根据本发明的方法的治疗前，和在治疗过程中一次或多次和/或在治疗后，从受试者中获得测试样本，以评估治疗的功效。在另一实例中，在不同时间从受试者中获得测试样本，以评估疾病或愈合的进程或进展。

在具体的方面，在获自受试者的测试样本中测定一种或多种额外的生物标记物，以帮助监测使用本发明的药物组合物的治疗。例如，在获自受试者的测试样本中测定一种或多种磷酸-Akt和/或癌细胞的细胞凋亡的检测，以帮助监测使用本发明的药物组合物的治疗。

任选地，在需要其的受试者中治疗癌症的方法还包括辅助的抗癌治疗。辅助的抗癌治疗可以是受试者或受试者身体的患病区域的放射治疗。

西妥昔单抗、ISC-4和任何任选的额外治疗剂的剂量会基于因素变化，所述因素例如但不限于，给药途径；待给予所述组合物的受试者的年龄、健康状况、性别和体重；受试者症状的性质和程度，如果有的话，以及所需的效果。可根据治疗是否会是急性的或持续的来调整剂量。本领域技术人员可基于医疗实践中典型的这些和其他考虑事项来确定药学有效量。

通常预期西妥昔单抗、ISC-4和任何任选的额外治疗剂的每日剂量在约0.001至100毫克/千克受试者体重的范围内。每日剂量可作为两次或更多次分剂量给予以获得所需效果。包括西妥昔单抗、ISC-4和任何任选的额外治疗剂中的一种或多种的药物组合物也可被配制用于缓释，以获得所需效果。

在发明的方法的具体方面，所给予的辅助的抗癌治疗和/或抗癌剂的量小于如果没有包括给予ISC-4和西妥昔单抗的本发明的组合治疗而被给予时要达到治疗效果所必须的辅助的抗癌治疗和/或抗癌剂的量。因此，在本发明的具体方面，所给予的抗癌治疗和/或抗癌剂的量小于在没有包括给予ISC-4和西妥昔单抗的本发明的组合治疗而被给予时要达到治疗效果所必须的辅助的抗癌治疗和/或抗癌剂的量的至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、或至少90％。

本发明的方法包括通过给药途径给予本发明的药物组合物，所述给药途径包括但不限于口腔、直肠、鼻、肺、硬膜外、眼、耳、动脉内、心脏内、脑室内、皮肤内、静脉内、肌肉内、腹腔内、骨内、鞘膜内、膀胱内、皮下、局部、经皮和经黏膜，例如通过舌下、口腔、阴道和吸入给药途径。

前药

根据本发明的方面，将一种或多种ISC-4的前药与西妥昔单抗组合给药，以实现ISC-4与西妥昔单抗组合给药的益处。ISC-4前药任选与ISC-4和西妥昔单抗组合给药。ISC-4前药代替本文所述的治疗方法或组合物中的ISC-4，或者除ISC-4之外，ISC-4前药也可被用于本文所述的治疗方法或组合物中。

ISC-4前药是与从产生ISC-4的ISC-4前药中释放的一个或多个部分共价结合的ISC-4的形式。前药形式的实例记载于Sloan,K.B.,Prodrugs,M.Dekker,New York,1992；和Testa,B.and Mayer,J.M.,Hydrolysis in drug and prodrug metabolism:chemistry,biochemistry,and enzymology,Wiley-VCH,Zurich,2003中。

一种具体的ISC-4前药是ISC-4的硫代葡糖酸盐前药。所述ISC-4硫代葡糖酸盐前药将按照下列方案所概述的来合成。此ISC-4的硫代葡糖酸盐前药，一旦与体外或体内的黑芥子酶相互作用，将释放活性ISC-4。预期所述ISC-4的硫代葡糖酸盐前药是水溶性的。

根据本发明的方面，将ISC-4硫代葡糖酸盐前药(I)与西妥昔单抗组合给药，以实现ISC-4与西妥昔单抗组合给药的益处。ISC-4硫代葡糖酸盐前药(I)任选与ISC-4和西妥昔单抗组合给药。

根据(I)的ISC-4硫代葡糖酸盐前药任选作为可药用盐提供。

结构(I)的ISC-4前药的可药用盐制剂可以是结构(I)的ISC-4前药的任何盐形式——其对预期接收者通常是无毒的，并且不会显著抑制结构(I)的ISC-4前药或包括在组合物中的其他活性剂的活性。例如，以上合成方案中示出了结构(I)的ISC-4前药的钾盐形式。

组合药物组合物

包括本发明的ISC-4和西妥昔单抗的组合药物组合物通常包括约0.1-99％的ISC-4，约0.1-99％的西妥昔单抗；以及可药用的载体。

本发明的包括西妥昔单抗和ISC-4和/或ISC-4前药的组合药物组合物通常包括约0.1-99％的ISC-4和/或ISC-4前药，约0.1-99％的西妥昔单抗；以及可药用的载体。

本发明的包括西妥昔单抗和ISC-4和/或ISC-4硫代葡糖酸盐前药(I)的组合药物组合物通常包括约0.1-99％的ISC-4和/或ISC-4硫代葡糖酸盐前药(I)，约0.1-99％的西妥昔单抗；以及可药用的载体。

本发明的药物组合物可以是适于给予受试者的任何剂型，示例性地包括固体、半固体和液体剂型，例如片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、栓剂、丸剂、溶液剂、悬浮剂、软膏剂、洗剂、霜剂、凝胶剂、糊剂、喷雾剂和气雾剂。脂质体和乳剂是药物制剂的熟知类型，其可用于递送药剂，特别是疏水性药剂。本发明的药物组合物通常包括可药用的载体，例如赋形剂、稀释剂和/或媒介物。可使用组合物的缓释制剂和缓释系统，例如固体疏水聚合物的半渗透性基质。

本发明的组合物的药物制剂可包括可药用的载体。术语“可药用的载体”是指这样的载体，其适用于受试者而对所述受试者没有异常毒性或刺激，并且其与包括在药物组合物中的其他成分兼容。

可药用的载体、用于制备药物组合物和各种剂型的方法、以及给药方式都是本领域熟知的，例如如Pharmaceutical Dosage Forms:Tablets,eds.H.A.Lieberman et al.,New York:Marcel Dekker,Inc.,1989；和L.V.Allen,Jr.et al.,Ansel’s PharmaceuticalDosage Forms and Drug Delivery Systems,第8版,Philadelphia,PA:Lippincott,Williams&Wilkins,2004；A.R.Gennaro,Remington:The Science and Practice ofPharmacy,Lippincott Williams&Wilkins,第21版,2005,特别是第89章；和J.G.Hardmanet al.,Goodman&Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics,McGraw-HillProfessional,第10版,2001中详述的。

用于给药或在给药之前悬浮于液体的固体剂型示例性地包括胶囊剂、片剂、粉剂和颗粒剂。在这样的固体剂型中，将一种或多种活性剂与至少一种载体混合，所述载体示例性地包括缓冲液，例如柠檬酸钠或碱金属磷酸盐(示例性地包括磷酸钠、磷酸钾和磷酸钙)；填充剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶；湿润剂，例如甘油；崩解剂，例如琼脂-琼脂、碳酸钙、植物淀粉如马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、一些复杂的硅酸盐和碳酸钠；溶液缓凝剂，例如石蜡；吸收加速剂，例如季铵化合物；润湿剂，例如鲸蜡醇、单硬脂酸甘油酯和二醇；吸附剂，例如高岭土和膨润土；润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇或十二醇硫酸钠；防腐剂，例如抗细菌剂和抗真菌剂，其包括例如山梨酸、庆大霉素和苯酚；稳定剂，例如蔗糖、EDTA、EGTA，和抗氧化剂。

固体剂型任选包括包衣，例如肠溶衣。所述肠溶衣通常为聚合材料。优选的肠溶衣材料具有生物可侵蚀、逐渐可水解和/或逐渐可溶于水的聚合物的特征。应用于固体剂型的包衣材料的量通常决定了摄取和药物释放之间的时间间隔。应用这样的包衣——其具有这样的厚度以使整个包衣在与胃酸相关的低于3的pH下的胃肠液中不溶解，而在小肠环境中在pH为3以上时溶解。期望任何表现出pH依赖性的溶解特征的阴离子聚合物在本发明的实践中都可容易地用作肠溶衣，以实现活性剂到下部胃肠道的递送。具体的肠溶衣材料的选择取决于如下的特性：例如对在胃中崩解的抗性；在胃中时，对胃液的不渗透性以及活性剂扩散；在目标肠部位消散的能力；储存期间的物理和化学稳定性；无毒性；以及应用的简便性。

合适的肠溶衣材料示例性地包括纤维质聚合物例如羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、醋酸纤维素、邻苯二甲酸乙酸纤维素、偏苯三酸乙酸纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯和羧甲基纤维素钠；丙烯酸聚合物和共聚物，优选由丙烯酸、甲基丙烯酸、丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸铵、丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸甲酯和/或乙基形成；乙烯基聚合物和共聚物，例如聚乙烯吡咯烷酮、聚乙酸乙烯酯、聚乙酸乙烯邻苯二甲酸酯、乙酸乙烯-丁烯酸共聚物和乙烯-乙酸乙烯酯共聚物；虫胶；及其组合。具体的肠溶衣材料包括记载于例如美国专利No.6,136,345中的丙烯酸聚合物和共聚物。

肠溶衣任选包含增塑剂，以避免允许胃液渗透进入固体剂型的孔和裂缝的形成。合适的增塑剂示例性地包括：柠檬酸三乙酯(Citroflex 2)、三醋精(甘油三乙酸酯)、乙酰基柠檬酸三乙酯(Citroflec A2)、Carbowax400(聚乙二醇400)、邻苯二甲酸二乙酯、柠檬酸三丁酯、乙酰化单甘油酯、甘油、脂肪酸酯、丙二醇和邻苯二甲酸二丁酯。具体地，由阴离子羧基丙烯酸类聚合物组成的包衣通常包含约10％至25％重量的增塑剂，特别是邻苯二甲酸二丁酯、聚乙二醇、柠檬酸三乙酯和三醋精。所述包衣还可包含其他包衣赋形剂，例如防粘剂、消泡剂、润滑剂(例如硬脂酸镁)和稳定剂(例如羟丙基纤维素、酸或碱)以溶解或分散包衣材料，并改善包衣性能和经包衣的产品。

用于口服给药的液体剂型包括一种或多种活性剂和配制为乳剂、溶液、悬浮剂、糖浆或酏剂的可药用的载体。本发明的组合物的液体剂型可包括着色剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、悬浮剂、甜味剂、调味剂或加香剂。

例如，用于肠胃外给药的组合物可配制为注射液。合适的水性和非水性载体的实例包括水，乙醇，多元醇如丙二醇、聚乙二醇、丙三醇等，及其合适的混合物；植物油如橄榄油；以及可注射的有机酯如油酸乙酯。可维持适当的流动性，例如，通过使用包衣如卵磷脂，在分散剂的情况下通过维持所需的粒径，和/或通过使用表面活性剂，如十二烷基硫酸钠。稳定剂任选包括例如蔗糖、EDTA、EGTA和抗氧化剂。

对于局部给药，组合物可被配制用于给药至皮肤如用于局部作用，和/或作为“贴剂(patch)”制剂用于经皮递送。适用于局部给药的药物制剂包括例如软膏剂、洗剂、霜剂、凝胶剂、糊剂、喷雾剂和粉剂。除一种或多种活性剂外，软膏剂、洗剂、霜剂、凝胶剂和糊剂还可包括基底如吸收基底、水可除去的基底、水溶性基底或油质基底以及赋形剂如增稠剂、胶凝剂、着色剂、稳定剂、乳化剂、悬浮剂、甜味剂、调味剂或加香剂。

经皮制剂可包括透皮吸收促进剂如丙酮、氮酮、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙醇、油酸、聚乙二醇、丙二醇和十二烷基硫酸钠。离子电渗和/或超声促渗可用于增强经皮递送。

用于一种或多种活性剂的局部给药的粉剂和喷雾剂可包括赋形剂例如滑石、乳糖和一种或多种硅酸。喷雾剂可包括药物推进剂如氟化烃推进剂、二氧化碳或合适的气体。或者，喷雾剂可由不需要推进剂的泵型喷雾装置递送。喷雾装置递送包含于其中的计量剂量的组合物，例如，使用调节递送量的阀。

一种或多种活性剂的眼用剂型可包括组分如防腐剂、缓冲剂和增稠剂。

可用作本发明的药物组合物中的可药用的载体或赋形剂的合适的表面活性剂包括非离子的、阳离子的和/或阴离子的表面活性剂，其具有良好的乳化、分散和/或润湿性。合适的阴离子表面活性剂包括水溶性肥皂和水溶性的合成的表面活性剂。合适的肥皂是碱金属盐或碱土金属盐、高级脂肪酸(C10-C22)的未取代的或取代的铵盐，例如油酸或硬脂酸的钠盐或钾盐、或可获自椰油或牛油的天然脂肪酸混合物的钠盐或钾盐。合成的表面活性剂包括聚丙烯酸的钠盐或钙盐；脂肪磺酸盐和硫酸盐；磺化苯并咪唑衍生物和烷基芳基磺酸盐。脂肪磺酸盐或硫酸盐通常是碱金属盐或碱土金属盐、未取代的铵盐或被具有8至22个碳原子的烷基或芳基基团取代的铵盐的形式，例如木素磺酸或十二烷基磺酸或获自天然脂肪酸的脂肪醇硫酸盐的混合物的钠盐或钙盐、硫酸酯或磺酸酯和脂肪醇/环氧乙烷加合物的磺酸的碱金属盐或碱土金属盐(例如十二烷基硫酸钠)。合适的磺化苯并咪唑衍生物优选包含8至22个碳原子。烷基芳基磺酸盐的实例是十二烷基苯磺酸或二丁基萘磺酸或萘磺酸/甲醛缩合产物的钠盐、钙盐或链烷醇胺(alcanolamine)盐。相应的磷酸盐也是合适的，例如磷酸酯和对壬基苯酚与环氧乙烷和/或环氧丙烷的加合物的盐，或磷脂的盐。用于此目的的合适的磷脂是天然的(来源于动物或植物细胞)或合成的脑磷脂或卵磷脂类型的磷脂，例如磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰丙三醇、溶血卵磷脂、心磷脂、二辛基磷脂酰胆碱、二棕榈酰基磷脂酰胆碱及其混合物。

可用作本发明的药物组合物中的可药用的载体或赋形剂的合适的非离子表面活性剂包括烷基苯酚、脂肪醇、脂肪酸、脂肪胺或分子内包含至少12个碳原子的酰胺的聚乙氧基和聚丙氧基衍生物、烷基芳基磺酸酯(alkylarenesulphonate)和磺基琥珀酸二烷基酯，例如脂肪族和脂环族醇、饱和的和不饱和的脂肪酸和烷基苯酚的聚二醇醚衍生物，所述衍生物优选在(脂肪族)烃部分中包含3至10个二醇醚基团和8至20个碳原子，在烷基苯酚的烷基部分中包含6至18个碳原子。其他合适的非离子表面活性剂是聚环氧乙烷和在烷基链中包含1至10个碳原子的聚丙二醇、亚乙基二氨基聚丙二醇的水溶性加合物，所述加合物包含20至250个乙二醇醚基团和/或10至100个丙二醇醚基团。这样的化合物通常包含1至5个乙二醇单元/丙二醇单元。非离子表面活性剂的代表性实例是壬基苯酚-聚乙氧基乙醇、蓖麻油聚乙二醇醚、聚环氧丙烷/聚环氧乙烷加合物、三丁基苯氧基聚乙氧基乙醇、聚乙二醇和辛基苯氧基聚乙氧基乙醇。聚乙烯脱水山梨糖醇(如聚氧化乙烯山梨糖醇酐三油酸酯)、丙三醇、脱水山梨糖醇、蔗糖和季戊四醇的脂肪酸酯也是合适的非离子表面活性剂。

可用作本发明的药物组合物中的可药用的载体或赋形剂的合适的阳离子表面活性剂包括具有任选被卤素、苯基、取代的苯基或羟基取代的4个烃基基团的季铵盐，优选卤化物；例如包含至少一个C8-C22烷基基团(例如鲸蜡基、月桂基、棕榈基、肉豆蔻基、油基等)作为N-取代基，和未取代的或卤代的低级烷基、苄基和/或羟基-低级烷基基团作为其他取代基的季铵盐。

适用于此目的的表面活性剂的更详细的描述可参见例如“McCutcheon’sDetergents and Emulsifiers Annual”(MC Publishing Crop.,Ridgewood,New Jersey,1981)、“Tensid-Taschenbuch”,第二版.(Hanser Verlag,Vienna,1981)及“Encyclopaediaof Surfactants(Chemical Publishing Co.,New York,1981)。

结构形成剂、增稠剂或凝胶形成剂可包括于本发明的药物组合物和组合制剂中。合适的这类试剂特别是高度分散的硅酸，例如商品名为Aerosil的市售产品；膨润土；蒙脱石的四烷基铵盐(例如，商品名为Bentone的市售产品)，其中每一个烷基基团可包含1至20个碳原子；十六醇十八醇混合物和改性的蓖麻油产品(例如，商品名为Antisettle的市售产品)。

在具体的方面，可药用的载体是颗粒状载体，如脂质颗粒，其包括脂质体、胶束、单层或多层囊泡；聚合物颗粒，如水凝胶颗粒、聚乙醇酸颗粒或聚乳酸颗粒；无机颗粒，如记载于例如美国专利No.5,648,097中的磷酸钙颗粒；以及如记载于例如美国专利No.6,630,486中的无机/有机颗粒载体。

颗粒状可药用的载体可选自脂质颗粒；聚合物颗粒；无机颗粒；无机/有机颗粒。颗粒类型的混合物也可作为颗粒状的可药用的载体被包括在内。

通常这样配制颗粒状载体以使颗粒具有范围为约1nm-10微米的平均颗粒大小。在具体的方面，这样配制颗粒状载体以使颗粒具有范围为约1nm-100nm的平均颗粒大小。

有关用于制备剂型的常用成分、设备和方法的详细信息参见PharmaceuticalDosage Forms:Tablets,eds.H.A.Lieberman et al.,New York:Marcel Dekker,Inc.,1989；和L.V.Allen,Jr.et al.,Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and DrugDelivery Systems,第8版,Philadelphia,PA:Lippincott,Williams&Wilkins,2004；A.R.Gennaro,Remington:The Science and Practice of Pharmacy,LippincottWilliams&Wilkins,第21版,2005,特别是第89章；和J.G.Hardman et al.,Goodman&Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics,McGraw-Hill Professional,第10版,2001。

本发明的方面的商业包装物包括组合或单独配制的西妥昔单抗和ISC-4。根据本发明的方面，给予西妥昔单抗和ISC-4的说明书包括在内。本发明的商业包装物任选包括一种或多种辅助成分，例如缓冲剂或稀释剂。

在以下实施例中对本发明的组合物和方法进行举例说明。提供这些实施例是为了举例说明的目的，并且不应被认为是对本发明的组合物和方法的范围的限制。

实施例

细胞培养、细胞活力测定和试剂

细胞系获自ATCC，并在5％CO₂和37℃下，在湿润的孵育箱中的ATCC-推荐的培养基上培养。对于细胞活力测定，将细胞以1×10⁵个细胞/mL新鲜培养基的浓度，以及100μL/孔的体积接种于96孔避光(black-walled)板中。允许细胞粘附过夜，并在第二天如所指示的进行处理。在终点，根据生产商的说明书进行CellTiter-Glo(Promega)测定，并在IVIS成像系统(Xenogen)上记录生物发光读数。对于细胞同步化，在处理之前将细胞用200ng/mL诺考达唑孵育16小时。氯喹(Chloroquine)获自Sigma。zVAD-fmk获自Promega，并以25μM的工作浓度使用。如Sharma,A.K.,et al.,J.of Med.Chem.,2008,51(24):7820-7826中所述合成ISC-4。

流式细胞术

对于亚G1DNA含量分析，将细胞在所示时间点进行胰蛋白酶化，在4℃下于80％乙醇中固定至少30分钟。然后将固定的细胞在RNase的存在下用碘化丙啶染色，并在EpicsElite流式细胞仪(Beckman Coulter)上分析。对于Ki-67表达，如上所述，将细胞用乙醇固定，并用1:500的抗-Ki-67抗体(Sigma)免疫染色30分钟。随后将细胞用1:500的Alexafluor488-缀合的抗体在PBS中孵育30分钟，并重悬于PBS中用于分析。

蛋白质印迹分析

在对数生长期处理细胞，通过细胞刮擦收集细胞，离心，并用细胞裂解缓冲液在冰上裂解2小时。离心后收集上清液，使用Bio-Rad蛋白测定(Bio-Rad Laboratories)确定蛋白浓度。使样本在还原条件下在NuPAGE 4-12％Bis-Tris凝胶(Invitrogen)上电泳，转移至PVDF，在溶于TBST的10％脱脂牛奶中封闭1小时。然后将膜用1:1000的获自Cell Signaling的初级抗体在溶于TBST的2％脱脂牛奶中于4℃孵育过夜。将膜在TBST中洗涤，并用合适的HRP-缀合的次级抗体(Thermo-Scientific)孵育1小时，在TBST中洗涤，使用ECL-Plus(Amersham)和X-射线胶片(Thermo-Scientific)显影。

体内研究

用1×10⁶的具有5-FU-抗性的RKO或HT-29细胞以200μL 1:1Matrigel(BD):PBS的悬浮液在每一个后侧翼处接种无胸腺的雌性裸鼠(Charles River Laboratories)。一旦肿瘤达到～1650mm³的平均体积，即开始治疗，以总体积200μL的DMSO进行腹腔注射或静脉注射。对于组织分析，从安乐死的小鼠中收集组织，在溶于PBS的4％多聚甲醛中固定48小时。对组织进行石蜡包埋并切片。根据生产商的说明书进行H&E染色(Daiko)和TUNEL染色(Millipore)。对于血清化学测定，通过左心室的末端心脏穿刺从麻醉的小鼠中获得1mL血液。对于血清化学，将500μL置于微量离心管中，允许其在室温下凝结30分钟，然后离心。去除血清，再次离心以在分析前去除任何其他碎片。

统计学

在Microsoft Excel中通过Student’s双尾t-检验评估成对比较。使用Chou,T.-C.,Pharmacological Reviews,2006,58(3):621-681中所述的Chou-Talalay方法用CalcuSyn软件(BioSoft)计算组合指数。

确定ISC-4的体外活性谱

在一组人类癌细胞系中测试ISC-4的体外活性以表征它的活性谱。

图1A示出了用ISC-4或DMSO处理(72hr，n＝3)的所示细胞系的细胞活力测定结果和经计算的EC₅₀值。在所测试的细胞系中，就如图1A中所示的EC₅₀值而言，人淋巴瘤细胞系Daudi和Granta是最敏感的，人前列腺癌细胞系PC3和DU145是最不敏感的。除HT-29之外，人结肠癌细胞系对ISC-4处理是中度敏感的。等基因的HCT116细胞系表明ISC-4活性可能是p53和Bax非依赖性的。

示出了ISC-4处理对同步和异步的HCT116(图1B)和HT-29(图1C)细胞系的细胞周期特征的影响。对ISC-4治疗的同步的HCT116和HT-29人结肠癌细胞系的细胞周期分析揭示出如图1B所示的亚G1含量的适中增加和细胞周期进程速率的降低。如图1C所示，ISC-4诱导的亚G1含量是剂量依赖性的，并且通常在>8μM时变得显而易见。因此，ISC-4通过引起细胞死亡和减少增殖而具有针对人结肠癌细胞的适中的单一药剂活性。图1D示出了用0、1、2、4、8或16μM ISC-4进行ISC-4处理之后所示的结肠癌细胞系的亚G1含量。

协同的药物结合物的鉴定

基于SW480和RKO人结肠癌细胞系的异质致瘤的遗传改变，将它们用于起始分析。SW480具有突变型p53、突变型KRAS和野生型BRAF，而RKO具有野生型p53、野生型KRAS和突变型BRAF基因，参见Ikediobi,O.N.,et al.,Molecular Cancer Therapeutics,2006,5(11):2606-2612。图2示出了单独或组合使用ISC-4(1、2或4μM)以及所示治疗剂以推定的EC_12.5、EC₂₅和EC₅₀处理的SW480和RKO结肠癌细胞系的细胞活力测定结果(n＝3)。使用的剂量示于表I中。在化疗和目标药剂的测试组中，当ISC-4与索拉菲尼、吉非替尼、吉西他滨、顺铂、硼替佐米、伊马替尼或西妥昔单抗组合时，在至少一种细胞系中观察到结合活性，如图2、表I和表II所示。

表I：选择与ISC-4组合的经批准的抗肿瘤剂的剂量。根据文献估计EC_12.5、EC₂₅和EC₅₀值，实验中采用了其结果示于图2的剂量。

表I

疗法	EC_12.5	EC₂₅	EC₅₀
				拉帕替尼	1.75uM	3.5uM	7uM
顺铂	1.125uM	2.25uM	4.5uM
				帕尼单抗	0.75ug/mL	1.5ug/mL	3ug/mL
西妥昔单抗	0.25ug/mL	0.5ug/mL	1ug/mL
				索拉菲尼	8uM	16uM	32uM
曲妥珠单抗	62.5ng/mL	125ng/mL	250ng/mL
				吉非替尼	5.75uM	11.5uM	23uM
伊马替尼	1.25uM	2.5uM	5uM
				长春新碱	.035nM	.07nM	.14nM
培美曲塞	0.25ug/mL	0.5ug/mL	1ug/mL
				阿霉素	16.25uM	32.5uM	65uM
克拉屈滨	25nM	50nM	100nM
				多西他赛	2.5uM	5uM	10uM
紫杉醇	2.5nM	5nM	10nM
				依托泊苷	1.25uM	2.5uM	5uM
奥沙利铂	75nM	150nM	300nM
				伊立替康	3.38uM	6.75uM	13uM
5-氟尿嘧啶	4.5uM	9uM	18uM
				吉西他滨	0.5uM	1uM	2uM

表II示出了ISC-4与经批准的抗肿瘤剂的组合效果的总结。通过细胞活力测定将ISC-4和每一种所列药物的结合活性与单独每一种药物的单一药剂活性进行比较，确定其为非协作的(－)、协作的(+)、协同的(*)或不确定的(？)。在至少一种细胞系中显示出与ISC-4的协作活性的药物结合物是索拉菲尼、吉非替尼、吉西他滨、顺铂、硼替佐米和伊马替尼，而西妥昔单抗与ISC-4的结合物表现出协同作用。

表II

ISC-4和西妥昔单抗的结合物是在测试条件下观察到的唯一的协同的组合疗法。此外，在含有野生型KRAS的RKO细胞系中观察到这种协同作用，在含有KRAS^G12V的SW480细胞系中没有观察到。这个观察结果与如Lievre,A.,et al.,Cancer Res,2006,66(8):3992-3995；和Karapetis,C.S.,et al.,New England Journal of Medicine,2008,359(17):1757-1765中所述的结肠癌中西妥昔单抗的临床功效的野生型KRAS的要求一致。

ISC-4和西妥昔单抗协同抑制野生型KRAS肿瘤细胞增殖

在该实施例中在若干人结肠癌细胞系中评估了ISC-4和西妥昔单抗的协同活性。图3A-3D、3E和3F示出了ISC-4和西妥昔单抗在具有不依赖5-FU敏感度的野生型KRAS基因的人结肠癌细胞系中协同作用。图3A-3D示出了用ISC-4和西妥昔单抗以所示剂量处理72小时的人结肠癌细胞系的细胞活力测定结果(n＝3)。

如图3A-3D和表III所示，在具有野生型KRAS基因的HT-29和RKO细胞系中观察到协同活性，在HCT116、DLD-1以及其他具有突变型KRAS基因的结肠癌细胞系中没有观察到。

表III：ISC-4和西妥昔单抗在野生型KRAS人结肠癌细胞系中的组合指数。通过Chou-Talalay方法评估图3A-3D中示出的和量化的RKO和HT-29细胞系中的结合活性，结果示于表III中。

表III

为了在一种类型的临床相关情况中评估此结合活性，在具有进化的对5-FU的抗性的RKO克隆中测试ISC-4和西妥昔单抗的协同功效。如图3E和3F所示，尽管结肠癌细胞具有5-FU抗性，ISC-4和西妥昔单抗在该细胞中保持了协同活性。图3E示出了如所示使用5-FU处理24小时的野生型和具有5-FU抗性的RKO细胞的细胞活力测定结果(n＝3)。图3F示出了用ISC-4(2μM)和西妥昔单抗(1μg/mL)处理24小时的具有5-FU抗性的RKO细胞的结果(n＝3)。

确定了ISC-4和西妥昔单抗处理的协同功效的动力学，早在处理8小时后就发现了该活性，在12小时时协同作用更强，如图4A所示。图4A示出了单独或组合使用ISC-4(2μM)和西妥昔单抗(1μg/mL)处理所示时间段的RKO细胞的细胞活力测定结果(n＝3)。该观察结果表明ISC-4和西妥昔单抗的协同活性可能是细胞毒性的而非细胞抑制性的。经处理的癌细胞的细胞形态学以及DNA的荧光标记的变化揭示ISC-4和西妥昔单抗组合治疗导致明显的DNA片段化，如图4B和图7A所示。图4B示出了如图4A中处理12小时的RKO细胞的DAPI染色结果。白色箭头指示具有片段化的DNA的细胞。图7A示出了单独或组合使用ISC-4(2μM)和西妥昔单抗(1μg/mL)处理12小时的RKO细胞的相差显微镜图。

进一步的分析揭示与单独的ISC-4或单独的西妥昔单抗相比，ISC-4和西妥昔单抗的结合物协作地且显著地增加了亚G1含量，但结合的亚G1含量不足以完全解释观察到的协同作用，如图4C所示。图4C示出了单独或组合使用ISC-4(2μM)和西妥昔单抗(1μg/mL)处理12小时的RKO细胞的亚G1含量(n＝3)。通过Student’s双尾t检验，与所有处理组相比，*P<0.05。通过与泛-半胱天冬酶抑制剂zVAD-fmk共孵育显著抑制了ISC-4诱导的亚G1含量，表明ISC-4和西妥昔单抗的结合物诱导半胱天冬酶依赖性的细胞凋亡。为支持该观察结果，ISC-4和西妥昔单抗的结合物协同诱导半胱天冬酶-3激活，如图4D所示。图4D示出了用ISC-4(2μM)与西妥昔单抗(0、0.25、0.5或1μg/mL)组合处理的RKO细胞在处理24小时后的Caspase-Glo测定结果。图4D的底部图示出了对ISC-4(2μM)和西妥昔单抗(1μg/mL)的定量(n＝3)。

蛋白质印迹分析表明ISC-4与西妥昔单抗协作地将磷酸-Akt水平在处理24小时后降低至非常适中的水平，而不降低磷酸-ERK水平，如图5A所示。图5A示出了单独或组合使用ISC-4(2μM)和西妥昔单抗(1μg/mL)处理24小时的RKO细胞的蛋白质印迹分析结果。时程分析揭示处理4小时后所述结合物就协作地去除了磷酸-Akt水平，如图5B所示。图5B示出了单独或组合使用ISC-4(2μM)和西妥昔单抗(1μg/mL)处理所示时间段的RKO细胞的蛋白质印迹分析结果。Ran被示为负载对照。对ISC-4和西妥昔单抗显示出协同响应的人结肠癌细胞系也以磷酸-Akt的显著降低进行响应，如图5C所示。图5C示出了用ISC-4(2μM)与西妥昔单抗(1μg/mL)的结合物(Rx)处理8小时之后所示的人结肠癌细胞系的蛋白质印迹分析结果。与对照相比，*P<0.05。

对所述组合疗法没有协同响应的含有突变型KRAS的人结肠癌细胞系在响应处理的磷酸-Akt水平上也没有显示出任何变化。因此，磷酸-Akt水平与对ISC-4和西妥昔单抗的抗肿瘤响应有关。

没有观察到所述结合物对Ki-67表达或LC3B裂解物——一种自体吞噬的标记物——的作用，如图7B、7C和7D所示。图7B示出了单独或组合使用ISC-4(2μM)和西妥昔单抗(1μg/mL)处理的RKO细胞中Ki-67表达的流式细胞术分析结果。图7C示出了单独或组合使用ISC-4(2μM)和西妥昔单抗(1μg/mL)处理的RKO细胞中Ki-67表达的蛋白质印迹分析。图7D示出了单独或组合使用ISC-4(2μM)和西妥昔单抗(1μg/mL)处理24小时的RKO细胞的蛋白质印迹分析结果。将氯喹(C；10μM)作为自体吞噬的阳性对照包括在内。β肌动蛋白被示为负载对照。

这些观察结果表明ISC-4与西妥昔单抗组合导致磷酸-Akt和细胞活力的协作性降低，其伴随着细胞凋亡的增加。

ISC-4和西妥昔单抗在体内发挥协同抗肿瘤作用而无毒性

在该实施例中在晚期的具有5-FU抗性的RKO皮下异种移植物中测试了ISC-4与西妥昔单抗组合的抗肿瘤作用。ISC-4和西妥昔单抗的组合疗法对肿瘤进展有协同的初始作用，并造成在治疗第一周的肿瘤停滞，如图6A所示。图6A示出了在用单一剂量的ISC-4(3mg/kg，腹腔注射)、西妥昔单抗(10mg/kg，静脉注射)或其结合物(“组合”(“combo”))处理后4天具有5-FU抗性的RKO异种移植物的相对肿瘤大小(n≥5)。将单个肿瘤标准化为在第0天测量的它们的基线大小，使用Student’s双尾t检验，与所有处理组相比，*P<0.05。组织分析揭示接受ISC-4和西妥昔单抗的组合疗法的异种移植物比接受单独的ISC-4或单独的西妥昔单抗的异种移植物具有更高的通过组织学确定的坏死水平以及通过TUNEL染色确定的细胞凋亡水平，如图6B所示。图6B示出了处理后24小时收集的异种移植瘤的苏木精和伊红(H&E)染色以及TUNEL染色的结果。这些研究中采用的治疗剂量方案被良好地耐受，并且没有改变小鼠体重或改变肝脏组织学，如图8A和8B所示。图8A示出了每周两次，持续2周接受ISC-4(3mg/kg，腹腔注射)、西妥昔单抗(10mg/kg，静脉注射)、或其组合的小鼠的体重变化(n≥5)。体重变化以相对于在治疗前每个个体小鼠在第0天的体重来表示(n≥3)。图8B示出了在用ISC-4(3mg/kg，腹腔注射)、西妥昔单抗(10mg/kg，静脉注射)、或其结合物处理后24小时从小鼠中收集的肝组织的H&E染色结果。

检查了小鼠的HT-29异种移植物中ISC-4和西妥昔单抗的结合物以与单独的ISC-4、单独的西妥昔单抗、以及西妥昔单抗和5-FU的结合物比较。如通过肿瘤体积和肿瘤重量测量可非常明显看出的，当作为每周静脉内剂量给予时，ISC-4和西妥昔单抗的组合治疗有力地减缓了肿瘤进展，这与单独的ISC-4或单独的西妥昔单抗不同，如图6C和图8C所示。图6C示出了使用ISC-4(3mg/kg，静脉注射)、西妥昔单抗(10mg/kg，静脉注射)、其结合物、或西妥昔单抗和5-FU(25mg/kg，静脉注射)从第0天开始每周一次治疗包含所建立的HT-29异种移植肿瘤的无胸腺的雌性裸鼠的结果(n≥8)，误差线表示重复测试的SEM，与对照相比，*P<0.05。图8C示出了图6C中描述的HT-29异种移植物的最终肿瘤体积和肿瘤重量。治疗组包括ISC-4(3mg/kg，静脉注射)、西妥昔单抗(10mg/kg，静脉注射)、其结合物、或西妥昔单抗和5-FU(25mg/kg，静脉注射)，每周一次(n≥8)。

相比于5-FU和西妥昔单抗的结合物，ISC-4和西妥昔单抗的结合物显示出优异的抗肿瘤活性。如图8D所示，ISC-4和西妥昔单抗的组合治疗被良好地耐受。图8D示出了终点(其为最后一次剂量后三天)的小鼠体重(n≥8)，误差线表示重复测试的SEM。血清化学分析显示电解质、肝功能、或其他与肾脏或心脏毒性相关的分子标记物在慢性剂量给药下没有明显变化，如表IV所示。

表IV示出了接受ISC-4和西妥昔单抗组合治疗的小鼠的血清化学特征。无胸腺的雌性8周大裸鼠接受ISC-4(3mg/kg，腹腔注射)、西妥昔单抗(10mg/kg，静脉注射)或其结合物(n≥5)，每周两次，持续2周。在最后一次剂量后2天收集血清。

表IV

T.Bil，总胆红素；BUN，血尿素氮；Alk.Phos.，碱性磷酸酶；LDH，乳酸脱氢酶；AST，天冬氨酸转氨酶；ALT，丙氨酸转氨酶

本说明书提及的任何专利或出版物都以引用的方式纳入本文，其程度如同每一个单独的出版物被具体地并且单独地被指明以引用的方式纳入本文一样。

项列表1

项1：在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括将西妥昔单抗和ISC-4的结合物作为组合制剂给予，或单独给予，其中所述结合物的给予提供协同效应。

项2：项1的治疗癌症的方法，其中所述癌症以野生型KRAS为表征。

项3：项1或2的治疗癌症的方法，其中所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌。

项4：项1-3中任一项的治疗癌症的方法，其进一步包括：在给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物之前，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第一样本；在给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物之后，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第二样本；以及分析所述第一和第二样本的一个或多个细胞凋亡的标记物，从而监测给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物的功效。

项5：项1-3中任一项的治疗癌症的方法，其进一步包括：在给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物之前，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第一样本；在给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物之后，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第二样本；以及分析所述第一和第二样本的磷酸-Akt，从而监测给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物的功效。

项6：项1-5中任一项的治疗癌症的方法，其中西妥昔单抗和ISC-4是同时给予的。

项7：项1-5中任一项的治疗癌症的方法，其中西妥昔单抗和ISC-4是按顺序给予的。

项8：项7的治疗癌症的方法，其中西妥昔单抗和ISC-4在选自如下的时间段内按顺序给予：一小时、两小时、四小时、八小时、十二小时和二十四小时。

项9：包含西妥昔单抗和ISC-4的药物组合物。

项10：包含西妥昔单抗和ISC-4的商业包装物。

项11：项10的商业包装物，其中西妥昔单抗和ISC-4作为单一的药物制剂提供。

项12：项10的商业包装物，其中西妥昔单抗和ISC-4作为单独的药物制剂提供。

项13：基本如本文所述的在受试者中治疗癌症的方法。

项14：基本如本文所述的药物组合物

项15：基本如本文所述的商业包装物。

项16：在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括：将西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物作为组合制剂给予，或单独给予，其中所述结合物的给予提供协同效应。

项17：项16的治疗癌症的方法，其中所述癌症以野生型KRAS为表征。

项18：项16或17的治疗癌症的方法，其中所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌。

项19：项16-18中任一项的治疗癌症的方法，其进一步包括：在给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物之前，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第一样本；在给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物之后，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第二样本；以及分析所述第一和第二样本的一个或多个细胞凋亡的标记物，从而监测给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物的功效。

项20：项16-18中任一项的治疗癌症的方法，其进一步包括：在给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物之前，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第一样本；在给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物之后，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第二样本；以及分析所述第一和第二样本的磷酸-Akt，从而监测给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物的功效。

项21：项16-20中任一项的治疗癌症的方法，其中西妥昔单抗和ISC-4前药是同时给予的。

项22：项16-20中任一项的治疗癌症的方法，其中西妥昔单抗和ISC-4前药是按顺序给予的。

项23：项22的治疗癌症的方法，其中西妥昔单抗和ISC-4前药在选自如下的时间段内按顺序给予：一小时、两小时、四小时、八小时、十二小时和二十四小时。

项24：项16-23中任一项的治疗癌症的方法，其中所述ISC-4前药是具有如下结构式的ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐：

项25：包含西妥昔单抗和ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐的药物组合物，所述ISC-4硫代葡糖酸盐前药具有如下的结构式：

项26：包含西妥昔单抗和ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐的商业包装物，所述ISC-4硫代葡糖酸盐前药具有如下的结构式：

项27：项26的商业包装物，其中西妥昔单抗和ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐作为单一的药物制剂提供。

项28：项26的商业包装，其中西妥昔单抗和ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐作为单独的药物制剂提供。

项29：包含ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐的组合物，所述ISC-4硫代葡糖酸盐前药具有如下的结构式：

项列表2

项30：在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括：将西妥昔单抗和ISC-4的结合物作为组合制剂给予，或单独给予。

项31：权利要求30的方法，其中所述结合物的给予提供协同效应。

项32：权利要求30或31的治疗癌症的方法，其中所述癌症以野生型KRAS为表征。

项33：权利要求30-32中任一项的治疗癌症的方法，其中所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌。

项34：权利要求30-33中任一项的治疗癌症的方法，其进一步包括：在给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物之前，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第一样本；在给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物之后，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第二样本；以及分析所述第一和第二样本的一个或多个细胞凋亡的标记物，从而监测给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物的功效。

项35：权利要求30-34中任一项的治疗癌症的方法，其进一步包括：在给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物之前，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第一样本；在给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物之后，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第二样本；以及分析所述第一和第二样本的磷酸-Akt，从而监测给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物的功效。

项36：权利要求30-35中任一项的治疗癌症的方法，其中西妥昔单抗和ISC-4是同时给予的。

项37：权利要求30-35中任一项的治疗癌症的方法，其中西妥昔单抗和ISC-4是按顺序给予的。

项38：权利要求30-35和37中任一项的治疗癌症的方法，其中西妥昔单抗和ISC-4在选自如下的时间段内按顺序给予：一小时、两小时、四小时、八小时、十二小时和二十四小时。

项39：在需要其的受试者中治疗癌症的方法，其包括：将西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物作为组合制剂给予，或单独给予。

项40：权利要求39的治疗癌症的方法，其中所述结合物的给予提供协同效应。

项41：权利要求39或40中任一项的治疗癌症的方法，其中所述癌症以野生型KRAS为表征。

项42：权利要求39-41中任一项的治疗癌症的方法，其中所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌。

项43：权利要求39-42中任一项的治疗癌症的方法，其进一步包括：在给予西妥昔单抗和ISC-4前药的组合之前，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第一样本；在给予西妥昔单抗和ISC-4前药的组合之后，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第二样本；以及分析所述第一和第二样本的一个或多个细胞凋亡的标记物，从而监测给予西妥昔单抗和ISC-4前药的组合的功效。

项44：权利要求39-43中任一项的治疗癌症的方法，其进一步包括：在给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物之前，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第一样本；在给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物之后，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第二样本；以及分析所述第一和第二样本的磷酸-Akt，从而监测给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物的功效。

项45：权利要求39-44中任一项的治疗癌症的方法，其中西妥昔单抗和ISC-4前药是同时给予的。

项46：权利要求39-44中任一项的治疗癌症的方法，其中西妥昔单抗和ISC-4前药是按顺序给予的。

项47：权利要求39-44和46中任一项的治疗癌症的方法，其中西妥昔单抗和ISC-4前药在选自如下的时间段内按顺序给予：一小时、两小时、四小时、八小时、十二小时和二十四小时。

项48：权利要求39-47中任一项的治疗癌症的方法，其中所述ISC-4前药是ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐，所述ISC-4硫代葡糖酸盐前药具有如下的结构式：

项49：权利要求30-48中任一项的治疗癌症的方法，其中所述癌症对5-氟尿嘧啶具有抗性。

项50：权利要求30-49中任一项的治疗癌症的方法，其中所述癌症是对5-氟尿嘧啶具有抗性的结直肠癌。

项51：权利要求30-50中任一项的治疗癌症的方法，其中所述癌症对5-氟尿嘧啶具有抗性，并且以野生型KRAS为表征。

项52：权利要求30-51中任一项的治疗癌症的方法，其中所述癌症对5-氟尿嘧啶具有抗性，并且以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS在密码子12、13或61中不具有激活的KRAS突变。

项53：权利要求30-52中任一项的治疗癌症的方法，其中所述癌症对5-氟尿嘧啶具有抗性，并且以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变Q61H、G12S、G12V、G12A或G13D。

本文所述的组合物和方法目前代表优选的实施方案，其为示例性的且不意欲对本发明的范围进行限制。本领域技术人员会了解其中的改变和其他用途。可在不脱离如权利要求中所述的本发明的范围的情况下做出这类改变和其他用途。

Claims

1.一种药物组合物，其包括：西妥昔单抗和ISC-4；或西妥昔单抗和ISC-4前药。

2.权利要求1的药物组合物，其中所述ISC-4前药是ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐，所述ISC-4硫代葡糖酸盐前药具有如下的结构式：

3.一种商业包装物，其包括西妥昔单抗和ISC-4；或西妥昔单抗和ISC-4前药。

4.权利要求3的商业包装物，其中所述ISC-4前药是ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐，所述ISC-4硫代葡糖酸盐前药具有如下的结构式：

5.权利要求3的商业包装物，其中西妥昔单抗和ISC-4作为单一的药物制剂提供。

6.权利要求3的商业包装物，其中西妥昔单抗和ISC-4作为单独的药物制剂提供。

7.权利要求3或4的商业包装物，其中西妥昔单抗和ISC-4前药作为单一的药物制剂提供。

8.权利要求3或4的商业包装物，其中西妥昔单抗和ISC-4前药作为单独的药物制剂提供。

9.西妥昔单抗和ISC-4的结合物在制备在需要其的受试者中治疗癌症的药物中的用途，其中：

将西妥昔单抗和ISC-4的结合物作为组合制剂给予，或单独给予。

10.权利要求9的用途，其中所述结合物的给予提供协同效应。

11.权利要求9的用途，其中所述癌症以野生型KRAS为表征。

12.权利要求11的用途，其中所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌。

13.权利要求9的用途，其中：

在给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物之前，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第一样本；

在给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物之后，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第二样本；以及

分析所述第一和第二样本的一个或多个细胞凋亡的标记物，从而监测给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物的功效。

14.权利要求9的用途，其中：

分析所述第一和第二样本的磷酸-Akt，从而监测给予西妥昔单抗和ISC-4的结合物的功效。

15.权利要求13或14的用途，其中西妥昔单抗和ISC-4是同时给予的。

16.权利要求13或14的用途，其中西妥昔单抗和ISC-4是按顺序给予的。

17.权利要求16的用途，其中西妥昔单抗和ISC-4在选自如下的时间段内按顺序给予：一小时、两小时、四小时、八小时、十二小时和二十四小时。

18.西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物在制备在需要其的受试者中治疗癌症的药物中的用途，其包括：

将西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物作为组合制剂给予，或单独给予。

19.权利要求18的用途，其中所述结合物的给予提供协同效应。

20.权利要求18的用途，其中所述癌症以野生型KRAS为表征。

21.权利要求20的用途，其中所述癌症是以野生型KRAS为表征的结直肠癌。

22.权利要求18的用途，其中：

在给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物之前，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第一样本；

在给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物之后，从所述受试者中获得包含或疑似包含癌细胞的第二样本；以及

分析所述第一和第二样本的一个或多个细胞凋亡的标记物，从而监测给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物的功效。

23.权利要求18的用途，其中：

分析所述第一和第二样本的磷酸-Akt，从而监测给予西妥昔单抗和ISC-4前药的结合物的功效。

24.权利要求22或23的用途，其中西妥昔单抗和ISC-4前药是同时给予的。

25.权利要求22或23的用途，其中西妥昔单抗和ISC-4前药是按顺序给予的。

26.权利要求25的用途，其中西妥昔单抗和ISC-4前药在选自如下的时间段内按顺序给予：一小时、两小时、四小时、八小时、十二小时和二十四小时。

27.权利要求18用途，其中所述ISC-4前药是ISC-4硫代葡糖酸盐前药或其可药用盐，所述ISC-4硫代葡糖酸盐前药具有如下的结构式：

28.权利要求9或18的用途，其中所述癌症对5-氟尿嘧啶具有抗性。

29.权利要求28的用途，其中所述癌症对5-氟尿嘧啶具有抗性，并且以野生型KRAS为表征。

30.权利要求29的用途，其中所述癌症对5-氟尿嘧啶具有抗性，并且以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS在密码子12、13或61中不具有激活的KRAS突变。

31.权利要求30的用途，其中所述癌症对5-氟尿嘧啶具有抗性，并且以野生型KRAS为表征，参照人类KRAS，使所述野生型KRAS不具有激活的KRAS突变Q61H、G12S、G12V、G12A或G13D。