CN104996301A - 一种短距槽舌兰快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开提供一种短距槽舌兰的快速繁殖方法，经种子萌发、原球茎的诱导、分化培养、壮苗培养、生根培养、炼苗移栽等步骤，即完成短距槽舌兰的快速繁殖。本发明与传统分株方法相比，短距槽舌兰的增殖系数提高5倍以上，成苗率达95%，移栽成活率达85%以上，同时具有增值系数大、分蘖能力强、生长速度快、植株健壮、褐变率低、移栽成活率高、培养基配制简单、成本低等问题，能适应大规模工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种珍稀濒危兰科植物的繁殖方法，特别涉及一种短距槽舌兰的快速繁殖方法，属于植物组织培养技术领域。
背景技术
短距槽舌兰（Holcoglossumflavescens(Schltr.)Z.H.Tsi）为兰科（Orchidaceae）槽舌兰属（Holcoglossum）植物。产于福建北部（武夷山、建阳）、湖北西南部（利川)、四川西南部（攀枝花）、云南北部（宾川、永胜）。生于海拔1200～2000米的常绿阔叶林中树干上。短距槽舌兰为兰科中的珍品，其形态优雅，花色艳丽，并散发出芳香。可用蕨根等附植置于浅盆中，或悬挂，十分典雅。槽舌兰属植物共有12种，分布于东南亚至越南、老挝、泰国、缅甸、印度东北部，我国有8种。由于过度采集、走私出境猖獗、生态环境破坏严重等原因，近十几年来野生槽舌兰属植物的数量急剧减少，分布区逐渐萎缩，不少种类已经到了灭绝的边缘。针对野生野生槽舌兰因受掠夺性采挖和贸易，而导致该类群植物迅速减少甚至灭绝的状况，目前，槽舌兰属植物已被《中国物种红色名录》列为珍稀濒危物种。
短距槽舌兰每一花枝有花朵1至数朵，花梗纤细，长1.5～2厘米，花苞片阔披针形，长3～5毫米，花色为白色，中萼片和花瓣相似，倒卵状长圆形。由于短距槽舌兰生长分布区域狭窄，且原始生态环境又受损严重，致使野生短距槽舌兰种质已变得极为稀少，同时，短距槽舌兰的种子与大多数兰花种子一样，没有胚乳，在自然环境下极难萌发。槽舌兰属植物若仍然采用传统兰花分株技术，即起苗、洗根、分株、消毒等步骤进行繁殖，则增殖困难、系数较低，使短距槽舌兰的有效繁殖形成一道屏障，难以达到保护及开发的要求。
发明内容
为有效繁殖短距槽舌兰，本发明提供一种短距槽舌兰的快速繁殖方法，通过对培养基、培养路径等的筛选、集成创新，使短距槽舌兰的增殖系数到达5倍以上，成苗率达95%，移栽成活率达85%以上，实现了短距槽舌兰的保护及开发。
本发明通过如下技术方案实现：一种短距槽舌兰的快速繁殖方法，其特征在于经过下列各步骤：
（1）种子萌发：以生长健壮、无病虫害的植株为母株，按常规对短距槽舌兰进行人工授粉，授粉120天后，将蒴果成熟、无病、未破裂的完整果实进行常规灭菌后，切开果实取出种子，将种子接种于下列诱导萌发培养基中：Ms＋0.03～0.05mg/L 6-BA＋10～15%体积比的椰乳＋80～100g/L的新鲜香蕉泥+30～35g/L的土豆泥＋花宝1号1～3g/L+3～5g/L的活性炭＋30g/L的蔗糖+6%质量比的琼脂，pH值为5.2～5.4，并进行暗培养至种子萌发，转入温度为22～24℃、光照时间为2～3小时/天、光照强度为1000lx的条件下培养30天，得到幼胚；
（2）原球茎的诱导：将步骤（1）所得幼胚转接到下列液体培养基中：1/2Ms+0.03～0.05mg/L的6-BA +0.1～0.3mg/L的TDZ+体积浓度10～15%的椰乳+80～100g/L的新鲜香蕉泥+50～55g/L的土豆泥+2～4g/L花宝1号+3～5g/L活性炭+30g/L的蔗糖，pH值为5.2～5.4；并在温度为22～24℃、光照时间为8～10小时/天、光照强度为1000lx、转速为120r/min的条件下进行摇床下培养35天，且每10天更换一次新的上述液体培养基，之后用无菌筛网过滤后，得诱导后的体细胞胚；体细胞胚在解剖镜下观察，呈现类似于球状的细胞集合体，在原球茎的顶端有类似于芽尖组织出现；
（3）分化培养：将步骤（2）诱导出的体细胞胚转接到下列液体分化培养基上：1/4Ms+0.5～1.0mg/L的6-BA+0.1～0.3mg/L的NAA+体积浓度10～15%的椰乳+80～85g/L的新鲜香蕉+50g/L的土豆泥+2～3g/L花宝1号+1～3g/L花宝2号+3～5g/L的活性炭+30g/L的蔗糖+6%质量比的琼脂，pH值为5.2～5.4；并在温度为22～24℃、光照时间为8～10小时/天、光照强度为2000lx的条件下培养90～120天，每20天更换一次新的上述液体分化培养基，直至培养出的膨大原球茎上分化出短距槽舌兰小苗；
（4）壮苗培养：切下步骤（3）的短距槽舌兰小苗，放置于下列壮苗培养基上：1/4Ms+0.5～1.0mg/L的6-BA+0.3～0.5mg/L的NAA+体积浓度10～15%的椰乳+80～85g/L的新鲜香蕉+50～55g/L的土豆泥+1～3g/L花宝1号+3～5g/L花宝2号+3～5g/L活性炭+30g/L的蔗糖，pH值为5.2～5.4；并在温度为22～24℃、光照时间为8～10小时/天、光照强度为2000lx的条件下培养，直至短距槽舌兰小苗长至2cm以上的高度，并具有2片及2片以上伸长叶片，即得壮苗；
（5）生根培养：从步骤（4）的壮苗基部黄褐色部位切下苗段，转接到下列生根培养基上：1/4Ms+0.1～0.3mg/L的6-BA+1.0～3.0mg/L的NAA+体积浓度10～15%的椰乳+100～120g/L的新鲜香蕉+50～55g/L的土豆泥+3～5g/L的活性炭+30g/L的蔗糖+6%质量比的琼脂，pH值为5.2～5.4；并在温度为22～24℃、光照时间为8～10小时/天、光照强度为2000lx的条件下培养，直至壮苗高度达4～5cm，具有2片以上叶片，且根长3cm以上，即得生根植株；该生根植株在植株的基部有肉质、绿色根，且根长至3cm以上，每植株生根3条以上；
（6）炼苗移栽：每年进入3月后，将步骤（5）所得生根植株置于自然光下，在遮阴度为30%的条件下炼苗7～10天，然后洗净生根植株，将生根植株整株捆绑至潮湿树皮上，生根植株的基部包裹苔藓，保持基部的水分为80%，空气湿度为90%以上，并通风，即得炼苗后的组培短距槽舌兰，按常规移栽至树皮和兰石按3:1混合所得的基质中，即完成短距槽舌兰的快速繁殖。
所述步骤（1）的人工授粉是在每年的5～6月份，即短距槽舌兰开花的季节，待开花后5～7天，选取健康无病植株于晴朗无雨的上午10～12点进行授粉自交，自交前1天及自交后1天不对植株进行水喷淋。这样的人工授粉，能在授粉后90天蒴果成熟，外表转为褐色，即得饱满、健康、无开裂的蒴果。
所述步骤（1）的常规灭菌是将短距槽舌兰的蒴果经流水冲洗30min后，在超菌工作台上用体积浓度为70%的酒精擦拭蒴果表面，然后依次用无菌水洗涤3次、用质量浓度为0.1%的升汞灭菌10min、无菌水洗涤3次，再用质量浓度为10%的次氯酸钠浸泡10min，最后用无菌水洗涤3次，用无菌纸吸干蒴果表面的水分。
所述步骤（6）的洗净生根植株是用1/1000倍的多菌灵浸泡生根植株的全株10分钟。
本发明具有下列优点和效果：本发明填补了珍稀濒危兰科植物——短距槽舌兰无性繁殖的技术空白，从根本上解决了短距槽舌兰的资源保护问题及产业化开发应用的难题。本发明与传统分株方法相比，短距槽舌兰的增殖系数提高5倍以上，成苗率达95%，移栽成活率达85%以上，同时具有增值系数大、分蘖能力强、生长速度快、植株健壮、褐变率低、移栽成活率高、培养基配制简单、成本低等问题，能适应大规模工业化生产。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
（1）种子萌发：以生长健壮、无病虫害的植株为母株，按常规对短距槽舌兰进行人工授粉，即在每年的5～6月份，即短距槽舌兰开花的季节，待开花后5～7天，选取健康无病植株于晴朗无雨的上午10～12点进行授粉自交，自交前1天及自交后1天不对植株进行水喷淋；授粉120天后，将蒴果成熟、无病、未破裂的完整果实进行常规灭菌，即将短距槽舌兰的蒴果经流水冲洗30min后，在超菌工作台上用体积浓度为70%的酒精擦拭蒴果表面，然后依次用无菌水洗涤3次、用质量浓度为0.1%的升汞灭菌10min、无菌水洗涤3次，再用质量浓度为10%的次氯酸钠浸泡10min，最后用无菌水洗涤3次，用无菌纸吸干蒴果表面的水分；切开果实取出种子，将种子接种于下列诱导萌发培养基中：Ms＋0.03mg/L 6-BA＋10%体积比的椰乳＋80g/L的新鲜香蕉泥+30g/L的土豆泥＋花宝1号1g/L+3g/L的活性炭＋30g/L的蔗糖+6%质量比的琼脂，pH值为5.2，并进行暗培养至种子萌发，转入温度为22℃、光照时间为2小时/天、光照强度为1000lx的条件下培养30天，得到幼胚；
（2）原球茎的诱导：将步骤（1）所得幼胚转接到下列液体培养基中：1/2Ms+0.03mg/L的6-BA +0.1mg/L的TDZ+体积浓度10%的椰乳+80g/L的新鲜香蕉泥+50g/L的土豆泥+2g/L花宝1号+3g/L活性炭+30g/L的蔗糖，pH值为5.2；并在温度为22℃、光照时间为8小时/天、光照强度为1000lx、转速为120r/min的条件下进行摇床下培养35天，且每10天更换一次新的上述液体培养基，之后用无菌筛网过滤后，得诱导后的体细胞胚；体细胞胚在解剖镜下观察，呈现类似于球状的细胞集合体，在原球茎的顶端有类似于芽尖组织出现；
（3）分化培养：将步骤（2）诱导出的体细胞胚转接到下列液体分化培养基上：1/4Ms+0.5mg/L的6-BA+0.1mg/L的NAA+体积浓度10%的椰乳+80g/L的新鲜香蕉+50g/L的土豆泥+2g/L花宝1号+1g/L花宝2号+3g/L的活性炭+30g/L的蔗糖+6%质量比的琼脂，pH值为5.2；并在温度为22℃、光照时间为8小时/天、光照强度为2000lx的条件下培养90天，每20天更换一次新的上述液体分化培养基，直至培养出的膨大原球茎上分化出短距槽舌兰小苗；
（4）壮苗培养：切下步骤（3）的短距槽舌兰小苗，放置于下列壮苗培养基上：1/4Ms+0.5mg/L的6-BA+0.3mg/L的NAA+体积浓度10%的椰乳+80g/L的新鲜香蕉+50g/L的土豆泥+1g/L花宝1号+3g/L花宝2号+3g/L活性炭+30g/L的蔗糖，pH值为5.2；并在温度为22℃、光照时间为8小时/天、光照强度为2000lx的条件下培养，直至短距槽舌兰小苗长至2cm以上的高度，并具有2片及2片以上伸长叶片，即得壮苗；
（5）生根培养：从步骤（4）的壮苗基部黄褐色部位切下苗段，转接到下列生根培养基上：1/4Ms+0.1mg/L的6-BA+1.0mg/L的NAA+体积浓度10%的椰乳+100g/L的新鲜香蕉+50g/L的土豆泥+3g/L的活性炭+30g/L的蔗糖+6%质量比的琼脂，pH值为5.2；并在温度为22℃、光照时间为8小时/天、光照强度为2000lx的条件下培养，直至壮苗高度达4～5cm，具有2片以上叶片，且根长3cm以上，即得生根植株；该生根植株在植株的基部有肉质、绿色根，且根长至3cm以上，每植株生根3条以上；
（6）炼苗移栽：每年进入3月后，将步骤（5）所得生根植株置于自然光下，在遮阴度为30%的条件下炼苗7～10天，然后用1/1000倍的多菌灵浸泡生根植株的全株10分钟进行洗净，将生根植株整株捆绑至潮湿树皮上，生根植株的基部包裹苔藓，保持基部的水分为80%，空气湿度为90%以上，并通风，即得炼苗后的组培短距槽舌兰，按常规移栽至树皮和兰石按3:1混合所得的基质中，即完成短距槽舌兰的快速繁殖。
本例与传统分株方法相比，短距槽舌兰的增殖系数提高6倍，成苗率达95%，移栽成活率达90%，增值系数达5；且分蘖能力强、生长速度快、植株健壮、褐变率低。
实施例2
（1）种子萌发：以生长健壮、无病虫害的植株为母株，按常规对短距槽舌兰进行人工授粉，即在每年的5～6月份，即短距槽舌兰开花的季节，待开花后5～7天，选取健康无病植株于晴朗无雨的上午10～12点进行授粉自交，自交前1天及自交后1天不对植株进行水喷淋；授粉120天后，将蒴果成熟、无病、未破裂的完整果实进行常规灭菌，即将短距槽舌兰的蒴果经流水冲洗30min后，在超菌工作台上用体积浓度为70%的酒精擦拭蒴果表面，然后依次用无菌水洗涤3次、用质量浓度为0.1%的升汞灭菌10min、无菌水洗涤3次，再用质量浓度为10%的次氯酸钠浸泡10min，最后用无菌水洗涤3次，用无菌纸吸干蒴果表面的水分；切开果实取出种子，将种子接种于下列诱导萌发培养基中：Ms＋0.04mg/L 6-BA＋12%体积比的椰乳＋90g/L的新鲜香蕉泥+32g/L的土豆泥＋花宝1号2g/L+4g/L的活性炭＋30g/L的蔗糖+6%质量比的琼脂，pH值为5.3，并进行暗培养至种子萌发，转入温度为23℃、光照时间为3小时/天、光照强度为1000lx的条件下培养30天，得到幼胚；
（2）原球茎的诱导：将步骤（1）所得幼胚转接到下列液体培养基中：1/2Ms+0.04mg/L的6-BA +0.2mg/L的TDZ+体积浓度12%的椰乳+90g/L的新鲜香蕉泥+52g/L的土豆泥+3g/L花宝1号+4g/L活性炭+30g/L的蔗糖，pH值为5.3；并在温度为23℃、光照时间为9小时/天、光照强度为1000lx、转速为120r/min的条件下进行摇床下培养35天，且每10天更换一次新的上述液体培养基，之后用无菌筛网过滤后，得诱导后的体细胞胚；体细胞胚在解剖镜下观察，呈现类似于球状的细胞集合体，在原球茎的顶端有类似于芽尖组织出现；
（3）分化培养：将步骤（2）诱导出的体细胞胚转接到下列液体分化培养基上：1/4Ms+0.8mg/L的6-BA+0.2mg/L的NAA+体积浓度12%的椰乳+82g/L的新鲜香蕉+50g/L的土豆泥+2g/L花宝1号+2g/L花宝2号+4g/L的活性炭+30g/L的蔗糖+6%质量比的琼脂，pH值为5.3；并在温度为23℃、光照时间为9小时/天、光照强度为2000lx的条件下培养100天，每20天更换一次新的上述液体分化培养基，直至培养出的膨大原球茎上分化出短距槽舌兰小苗；
（4）壮苗培养：切下步骤（3）的短距槽舌兰小苗，放置于下列壮苗培养基上：1/4Ms+0.8mg/L的6-BA+0.4mg/L的NAA+体积浓度12%的椰乳+82g/L的新鲜香蕉+52g/L的土豆泥+2g/L花宝1号+4g/L花宝2号+4g/L活性炭+30g/L的蔗糖，pH值为5.3；并在温度为23℃、光照时间为9小时/天、光照强度为2000lx的条件下培养，直至短距槽舌兰小苗长至2cm以上的高度，并具有2片及2片以上伸长叶片，即得壮苗；
（5）生根培养：从步骤（4）的壮苗基部黄褐色部位切下苗段，转接到下列生根培养基上：1/4Ms+0.2mg/L的6-BA+2mg/L的NAA+体积浓度12%的椰乳+110g/L的新鲜香蕉+52g/L的土豆泥+4g/L的活性炭+30g/L的蔗糖+6%质量比的琼脂，pH值为5.3；并在温度为23℃、光照时间为9小时/天、光照强度为2000lx的条件下培养，直至壮苗高度达4～5cm，具有2片以上叶片，且根长3cm以上，即得生根植株；该生根植株在植株的基部有肉质、绿色根，且根长至3cm以上，每植株生根3条以上；
（6）炼苗移栽：每年进入3月后，将步骤（5）所得生根植株置于自然光下，在遮阴度为30%的条件下炼苗7～10天，然后用1/1000倍的多菌灵浸泡生根植株的全株10分钟进行洗净，将生根植株整株捆绑至潮湿树皮上，生根植株的基部包裹苔藓，保持基部的水分为80%，空气湿度为90%以上，并通风，即得炼苗后的组培短距槽舌兰，按常规移栽至树皮和兰石按3:1混合所得的基质中，即完成短距槽舌兰的快速繁殖。
本例与传统分株方法相比，短距槽舌兰的增殖系数提高6倍，成苗率达95%，移栽成活率达90%，增值系数达5；且分蘖能力强、生长速度快、植株健壮、褐变率低。
实施例3
（1）种子萌发：以生长健壮、无病虫害的植株为母株，按常规对短距槽舌兰进行人工授粉，即在每年的5～6月份，即短距槽舌兰开花的季节，待开花后5～7天，选取健康无病植株于晴朗无雨的上午10～12点进行授粉自交，自交前1天及自交后1天不对植株进行水喷淋；授粉120天后，将蒴果成熟、无病、未破裂的完整果实进行常规灭菌，即将短距槽舌兰的蒴果经流水冲洗30min后，在超菌工作台上用体积浓度为70%的酒精擦拭蒴果表面，然后依次用无菌水洗涤3次、用质量浓度为0.1%的升汞灭菌10min、无菌水洗涤3次，再用质量浓度为10%的次氯酸钠浸泡10min，最后用无菌水洗涤3次，用无菌纸吸干蒴果表面的水分；切开果实取出种子，将种子接种于下列诱导萌发培养基中：Ms＋0.05mg/L 6-BA＋15%体积比的椰乳＋100g/L的新鲜香蕉泥+35g/L的土豆泥＋花宝1号3g/L+5g/L的活性炭＋30g/L的蔗糖+6%质量比的琼脂，pH值为5.4，并进行暗培养至种子萌发，转入温度为24℃、光照时间为3小时/天、光照强度为1000lx的条件下培养30天，得到幼胚；
（2）原球茎的诱导：将步骤（1）所得幼胚转接到下列液体培养基中：1/2Ms+0.05mg/L的6-BA +0.3mg/L的TDZ+体积浓度15%的椰乳+100g/L的新鲜香蕉泥+55g/L的土豆泥+4g/L花宝1号+5g/L活性炭+30g/L的蔗糖，pH值为5.4；并在温度为24℃、光照时间为10小时/天、光照强度为1000lx、转速为120r/min的条件下进行摇床下培养35天，且每10天更换一次新的上述液体培养基，之后用无菌筛网过滤后，得诱导后的体细胞胚；体细胞胚在解剖镜下观察，呈现类似于球状的细胞集合体，在原球茎的顶端有类似于芽尖组织出现；
（3）分化培养：将步骤（2）诱导出的体细胞胚转接到下列液体分化培养基上：1/4Ms+1.0mg/L的6-BA+0.3mg/L的NAA+体积浓度15%的椰乳+85g/L的新鲜香蕉+50g/L的土豆泥+3g/L花宝1号+3g/L花宝2号+5g/L的活性炭+30g/L的蔗糖+6%质量比的琼脂，pH值为5.4；并在温度为24℃、光照时间为10小时/天、光照强度为2000lx的条件下培养120天，每20天更换一次新的上述液体分化培养基，直至培养出的膨大原球茎上分化出短距槽舌兰小苗；
（4）壮苗培养：切下步骤（3）的短距槽舌兰小苗，放置于下列壮苗培养基上：1/4Ms+1.0mg/L的6-BA+0.5mg/L的NAA+体积浓度15%的椰乳+85g/L的新鲜香蕉+55g/L的土豆泥+3g/L花宝1号+5g/L花宝2号+5g/L活性炭+30g/L的蔗糖，pH值为5.4；并在温度为24℃、光照时间为10小时/天、光照强度为2000lx的条件下培养，直至短距槽舌兰小苗长至2cm以上的高度，并具有2片及2片以上伸长叶片，即得壮苗；
（5）生根培养：从步骤（4）的壮苗基部黄褐色部位切下苗段，转接到下列生根培养基上：1/4Ms+0.3mg/L的6-BA+3.0mg/L的NAA+体积浓度15%的椰乳+120g/L的新鲜香蕉+55g/L的土豆泥+5g/L的活性炭+30g/L的蔗糖+6%质量比的琼脂，pH值为5.4；并在温度为24℃、光照时间为10小时/天、光照强度为2000lx的条件下培养，直至壮苗高度达4～5cm，具有2片以上叶片，且根长3cm以上，即得生根植株；该生根植株在植株的基部有肉质、绿色根，且根长至3cm以上，每植株生根3条以上；
（6）炼苗移栽：每年进入3月后，将步骤（5）所得生根植株置于自然光下，在遮阴度为30%的条件下炼苗7～10天，然后用1/1000倍的多菌灵浸泡生根植株的全株10分钟进行洗净，将生根植株整株捆绑至潮湿树皮上，生根植株的基部包裹苔藓，保持基部的水分为80%，空气湿度为90%以上，并通风，即得炼苗后的组培短距槽舌兰，按常规移栽至树皮和兰石按3:1混合所得的基质中，即完成短距槽舌兰的快速繁殖。
本例与传统分株方法相比，短距槽舌兰的增殖系数提高6倍，成苗率达95%，移栽成活率达90%，增值系数达5；且分蘖能力强、生长速度快、植株健壮、褐变率低。
Claims (4)
1.一种短距槽舌兰的快速繁殖方法，其特征在于经过下列各步骤：
（1）种子萌发：以生长健壮、无病虫害的植株为母株，按常规对短距槽舌兰进行人工授粉，授粉120天后，将蒴果成熟、无病、未破裂的完整果实进行常规灭菌后，切开果实取出种子，将种子接种于下列诱导萌发培养基中：Ms＋0.03～0.05mg/L 6-BA＋10～15%体积比的椰乳＋80～100g/L的新鲜香蕉泥+30～35g/L的土豆泥＋花宝1号1～3g/L+3～5g/L的活性炭＋30g/L的蔗糖+6%质量比的琼脂，pH值为5.2～5.4，并进行暗培养至种子萌发，转入温度为22～24℃、光照时间为2～3小时/天、光照强度为1000lx的条件下培养30天，得到幼胚；
（2）原球茎的诱导：将步骤（1）所得幼胚转接到下列液体培养基中：1/2Ms+0.03～0.05mg/L的6-BA +0.1～0.3mg/L的TDZ+体积浓度10～15%的椰乳+80～100g/L的新鲜香蕉泥+50～55g/L的土豆泥+2～4g/L花宝1号+3～5g/L活性炭+30g/L的蔗糖，pH值为5.2～5.4；并在温度为22～24℃、光照时间为8～10小时/天、光照强度为1000lx、转速为120r/min的条件下进行摇床下培养35天，且每10天更换一次新的上述液体培养基，之后用无菌筛网过滤后，得诱导后的体细胞胚；
（3）分化培养：将步骤（2）诱导出的体细胞胚转接到下列液体分化培养基上：1/4Ms+0.5～1.0mg/L的6-BA+0.1～0.3mg/L的NAA+体积浓度10～15%的椰乳+80～85g/L的新鲜香蕉+50g/L的土豆泥+2～3g/L花宝1号+1～3g/L花宝2号+3～5g/L的活性炭+30g/L的蔗糖+6%质量比的琼脂，pH值为5.2～5.4；并在温度为22～24℃、光照时间为8～10小时/天、光照强度为2000lx的条件下培养90～120天，每20天更换一次新的上述液体分化培养基，直至培养出的膨大原球茎上分化出短距槽舌兰小苗；
（4）壮苗培养：切下步骤（3）的短距槽舌兰小苗，放置于下列壮苗培养基上：1/4Ms+0.5～1.0mg/L的6-BA+0.3～0.5mg/L的NAA+体积浓度10～15%的椰乳+80～85g/L的新鲜香蕉+50～55g/L的土豆泥+1～3g/L花宝1号+3～5g/L花宝2号+3～5g/L活性炭+30g/L的蔗糖，pH值为5.2～5.4；并在温度为22～24℃、光照时间为8～10小时/天、光照强度为2000lx的条件下培养，直至短距槽舌兰小苗长至2cm以上的高度，并具有2片及2片以上伸长叶片，即得壮苗；
（5）生根培养：从步骤（4）的壮苗基部黄褐色部位切下苗段，转接到下列生根培养基上：1/4Ms+0.1～0.3mg/L的6-BA+1.0～3.0mg/L的NAA+体积浓度10～15%的椰乳+100～120g/L的新鲜香蕉+50～55g/L的土豆泥+3～5g/L的活性炭+30g/L的蔗糖+6%质量比的琼脂，pH值为5.2～5.4；并在温度为22～24℃、光照时间为8～10小时/天、光照强度为2000lx的条件下培养，直至壮苗高度达4～5cm，具有2片以上叶片，且根长3cm以上，即得生根植株；
（6）炼苗移栽：每年进入3月后，将步骤（5）所得生根植株置于自然光下，在遮阴度为30%的条件下炼苗7～10天，然后洗净生根植株，将生根植株整株捆绑至潮湿树皮上，生根植株的基部包裹苔藓，保持基部的水分为80%，空气湿度为90%以上，并通风，即得炼苗后的组培短距槽舌兰，按常规移栽至树皮和兰石按3:1混合所得的基质中，即完成短距槽舌兰的快速繁殖。
2.根据权利要求1所述的快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤（1）的人工授粉是在每年的5～6月份，即短距槽舌兰开花的季节，待开花后5～7天，选取健康无病植株于晴朗无雨的上午10～12点进行授粉自交，自交前1天及自交后1天不对植株进行水喷淋。
3.根据权利要求1所述的快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤（1）的常规灭菌是将短距槽舌兰的蒴果经流水冲洗30min后，用体积浓度为70%的酒精擦拭蒴果表面，然后依次用无菌水洗涤3次、用质量浓度为0.1%的升汞灭菌10min、无菌水洗涤3次，再用质量浓度为10%的次氯酸钠浸泡10min，最后用无菌水洗涤3次，吸干蒴果表面的水分。
4.根据权利要求1所述的快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤（6）的洗净生根植株是用1/1000倍的多菌灵浸泡生根植株的全株10分钟。
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Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105284409A (zh) * | 2015-12-02 | 2016-02-03 | 云南希尔康种植有限公司 | 银杏林下套种油用牡丹的方法 |
| CN105340553A (zh) * | 2015-12-02 | 2016-02-24 | 云南希尔康种植有限公司 | 银杏林下套种板蓝根的方法 |
| CN105409546A (zh) * | 2015-12-02 | 2016-03-23 | 云南希尔康种植有限公司 | 银杏林下套种白芷的方法 |
| CN105613294A (zh) * | 2016-01-14 | 2016-06-01 | 金坛白鹭源生态农业科技有限公司 | 一种提高铁皮石斛茎段繁殖系数的培养基 |
| CN107646603A (zh) * | 2017-10-29 | 2018-02-02 | 防城港市奥氏蓝科技有限公司 | 大明山舌唇兰的分株繁殖方法 |
| CN109964817A (zh) * | 2019-04-16 | 2019-07-05 | 四川省自然资源科学研究院 | 峨眉槽舌兰的快速繁殖方法 |
| CN112293253A (zh) * | 2020-10-28 | 2021-02-02 | 中国科学院昆明植物研究所 | 一种福建莲座蕨离体保存培养基及离体保存方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103704138A (zh) * | 2013-12-25 | 2014-04-09 | 魏晓辰 | 一种兰科植物组织培养方法 |
| CN103999776A (zh) * | 2014-06-16 | 2014-08-27 | 南京工业大学大丰海洋产业研究院 | 一种兰科植物快速繁殖培养基配方 |
-
2015
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103704138A (zh) * | 2013-12-25 | 2014-04-09 | 魏晓辰 | 一种兰科植物组织培养方法 |
| CN103999776A (zh) * | 2014-06-16 | 2014-08-27 | 南京工业大学大丰海洋产业研究院 | 一种兰科植物快速繁殖培养基配方 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 周丽等: "短距槽舌兰的驯化栽培与快速繁殖", 《植物生理学报》 * |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105284409A (zh) * | 2015-12-02 | 2016-02-03 | 云南希尔康种植有限公司 | 银杏林下套种油用牡丹的方法 |
| CN105340553A (zh) * | 2015-12-02 | 2016-02-24 | 云南希尔康种植有限公司 | 银杏林下套种板蓝根的方法 |
| CN105409546A (zh) * | 2015-12-02 | 2016-03-23 | 云南希尔康种植有限公司 | 银杏林下套种白芷的方法 |
| CN105613294A (zh) * | 2016-01-14 | 2016-06-01 | 金坛白鹭源生态农业科技有限公司 | 一种提高铁皮石斛茎段繁殖系数的培养基 |
| CN107646603A (zh) * | 2017-10-29 | 2018-02-02 | 防城港市奥氏蓝科技有限公司 | 大明山舌唇兰的分株繁殖方法 |
| CN109964817A (zh) * | 2019-04-16 | 2019-07-05 | 四川省自然资源科学研究院 | 峨眉槽舌兰的快速繁殖方法 |
| CN109964817B (zh) * | 2019-04-16 | 2022-03-11 | 四川省自然资源科学研究院 | 峨眉槽舌兰的快速繁殖方法 |
| CN112293253A (zh) * | 2020-10-28 | 2021-02-02 | 中国科学院昆明植物研究所 | 一种福建莲座蕨离体保存培养基及离体保存方法 |
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