CN104991059A - 一种梯度胶体金免疫层析定量检测装置、方法及用途 - Google Patents

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张姝倩
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葛安山
陈宴霞
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Abstract

本发明属于生物检测技术领域，涉及一种快速梯度定量检测装置、方法及用途。一种梯度胶体金免疫层析定量检测装置，包括：试剂卡槽，衬板，样品垫，胶体金垫，硝酸纤维素膜，吸水纸；所述试剂卡槽包括上壳体和下壳体，上壳体与下壳体通过卡扣连接，所述上壳体设有第一孔洞和第二孔洞；所述衬板固定于试剂卡槽内部；所述样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次排列连接于衬板上表面；样品垫置于第一孔洞下方；硝酸纤维素膜置于第二孔洞下方；所述硝酸纤维素膜上设有检测线和对照线。本发明提供的梯度胶体金免疫层析定量检测装置及方法，检测装置的结构简单，检测方法步骤简便，易于操作，并且能够快速准确的检测出待测物质的浓度。

Description

一种梯度胶体金免疫层析定量检测装置、方法及用途
技术领域
本发明属于生物检测技术领域，涉及一种快速梯度定量检测装置、方法及用途。
背景技术
胶体金免疫层析技术在70年代初期由Faulk和Taylor始创，其特点是以胶体金作为标记物。这一技术最初用于免疫电镜技术。迄今为止，金标记仍主要用于免疫组织化学中。在免疫测定中，金标记常与膜载体配合，形成特定的测定模式，典型的如斑点免疫渗滤试验和斑点免疫层析试验等，已是目前应用广泛的简便、快速检验方法。胶体金免疫层析检测是以硝酸纤维素膜为载体，通过液体的渗移，利用抗原抗体结合，以及胶体金呈现颜色反应来检测抗原或者抗体。
自该技术出现以来发展十分迅速，应用也越来越广泛，目前几乎可应用于生物医学各研究领域，尤其是在医学检验中使用得更加普遍。该技术经过多年的使用，显示了众多的优势：操作简单易行，无需特殊设备，无毒无污染等；也存在一定的劣势：不易定量。
目前市场上常用的胶体金检测的定量方法为半定量，使得定量结果不够准确严谨；而精确的定量检测的方法包括化学发光法、时间分辨荧光法等，这些方法过程复杂，操作繁琐，需借助相应的分析检测仪器，耗时长；全自动的精密检测仪器虽能够实现对大样本量的快速检测，但仪器及试剂的耗费成本相当高，无法使快速定量检测的方法方便的应用于常规检测，普及推广，更无法达到个人的独立检测和实时便捷检测疾病的目的。对于众多的检测试剂，如HCG( 人绒毛膜促性腺激素)，LH( 人促黄体生成激素) 等激素系列；AFP( 甲胎蛋白)，PSA( 前列腺特异抗原) 等肿瘤系列等等，其检测结果阳性的高低意义相差甚远，代表了不同的疾病或者疾病的不同阶段。因此，实现定量检测的意义重大。
发明内容
为了弥补现有技术存在的上述缺陷，本发明提出一种通过胶体金免疫层析技术进行梯度定量的检测装置，能够快速测定样本中目标物质的含量。
本发明的技术方案是这样是实现的：一种梯度胶体金免疫层析定量检测装置，包括：试剂卡槽，衬板，样品垫，胶体金垫，硝酸纤维素膜，吸水纸；所述试剂卡槽包括上壳体和下壳体，上壳体与下壳体通过卡扣连接，所述上壳体设有第一孔洞和第二孔洞；所述衬板固定于试剂卡槽内部；所述样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次排列连接于衬板上表面；样品垫置于第一孔洞下方；硝酸纤维素膜置于第二孔洞下方；所述硝酸纤维素膜上设有检测线和对照线。
所述胶体金垫上含有胶体金颗粒，或者金标抗原或抗体。
所述检测线包被有已知量的抗原或抗体，浓度呈梯度分布。
所述对照线为常规胶体金层析技术所需要的抗原或二抗，对照线阳性，表明检测成立。
所述上壳体的第二孔洞外围设有浓度标示线，所述浓度标示线与检测线一一对应。
所述第一孔洞为加样孔，设计为长条状，目的是为了使液体检测物充分与金标抗原或抗体充分结合，样品检测时向加样孔中加入过量的样品。
一种采用上述梯度胶体金免疫层析定量检测装置的检测方法，包括以下步骤：
（1）根据检测样品初步设定检测线条数，并进行梯度浓度设置；
（2）在加样孔中加入过量体积的待测样品；
（3）经过10～20分钟后，观察梯度检测线的颜色变化情况，对照浓度标示线，显色的检测线浓度最高者即为样品中待测物质的最终浓度。
检测样品与胶体金颗粒结合形成复合物，复合物经过检测线的时候同相应的抗原或者抗体结合，出现的颜色变化可以作为指示，由于每条检测线上的抗原或者抗体量的浓度是已知的，所检测的物质需达到梯度检测线上标记的浓度才会显色，因而显色的最高检测线浓度即为样品中待检物质的最终浓度。
本发明还提供梯度胶体金免疫层析定量检测装置的用途，用于定量检测样品中病毒抗原或抗体、细菌或细菌毒素、激素、肿瘤标记物的含量。
本发明提供的梯度胶体金免疫层析定量检测装置及方法，检测装置的结构简单，检测方法步骤简便，易于操作，并且能够快速准确的检测出待测物质的浓度。
附图说明
图1 为本发明的梯度胶体金免疫层析定量检测装置的外部结构示意图；
 图2 为本发明的梯度胶体金免疫层析定量检测装置的内部结构示意图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明的梯度胶体金免疫层析定量检测装置、方法及用途做详细的说明。
实施例1 如图1和图2所示，梯度胶体金免疫层析定量检测装置，包括试剂卡槽1，衬板10，样品垫6，胶体金垫7，硝酸纤维素膜8，吸水纸9；试剂卡槽包括上壳体和下壳体，上壳体与下壳体通过卡扣连接，上壳体设有第一孔洞2和第二孔洞3；衬板10固定于试剂卡槽1内部；样品垫6、胶体金垫7、硝酸纤维素膜8和吸水纸9依次排列连接于衬板10上表面；样品垫6置于第一孔洞2下方；硝酸纤维素膜8置于第二孔洞3下方；胶体金垫7上含有胶体金颗粒，或者胶体金标记的抗原或抗体；硝酸纤维素膜8上设有检测线5和对照线4。
硝酸纤维膜8位于衬板的中部，该膜上依次为胶体金结合区、T-检测线、C-对照线。
胶体金垫7位于硝酸硝酸纤维膜8上部的一侧并与之重叠，吸水纸9位于硝酸硝酸纤维膜8上部的相对于胶体金垫的另一侧并与硝酸硝酸纤维膜部分重叠。
样品垫6位于与吸水纸9相对的一侧并与胶体金垫部分重叠。
检测线5包被已知量的抗原或抗体，由第1条线开始进行梯度稀释或按照实际需要进行不同浓度标记，理论上可检测1-∝条。
对照线4为常规胶体金层析技术所需要的抗原或二抗，对照线阳性，表明检测成立。
试剂卡槽1的上壳体上的第二孔洞3外围设有浓度标示线11，浓度标示线11与检测线5一一对应。
实施例2 采用本发明的梯度梯度胶体金免疫层析定量检测装置，检测尿液中人促黄体生成激素(LH) 的含量，具体步骤如下：
1、尿液中LH 的正常基数在20mlU/ml 左右，所以初步设定了范围为10U/ml～100U/ml的一系列梯度检测线，分别为10mlU/ml、20U/ml、30U/ml、40U/ml、50U/ml、60U/ml、70U/ml、80U/ml、90U/ml和100U/ml，根据实验设计的需要，检测线也可以是其他梯度范围的数值。
2、检测线中包被有上述梯度浓度的α-LH 单克隆抗体和抗β-LH 单克隆抗体 ，用于特异的与LH 进行结合；胶体金垫上含有胶体金颗粒，用于与LH结合；对照线上包被羊抗鼠LH多克隆抗体。
3、往第一孔洞中加入过量待检测尿液，然后进行观察，10 多分钟后，观察到，检测线10mlU/ml 至50mlU/ml均显示红色，检测线60mlU/ml 以上不显色，则可以得出，尿液中的LH 含量在大约50mlU/ml。
实施例3 采用本发明的梯度梯度胶体金免疫层析定量检测装置，检测血清中甲型肝炎病毒IgM抗体（HAV IgM）的含量，方法步骤如下：
1、检测线上包被有不同浓度的抗人-IgMμ 链抗体，检测线设置为五条，成梯度分布，由第1条线开始进行梯度稀释。
2、胶体金垫上固着胶体金标记的甲型肝炎病毒抗原（HAV），还包被有胶体金标记的兔IgG。
3、对照线上包被有抗兔IgG 多克隆抗体。检测线与对照线互相垂直，与吸水方向平行。
4、将待测血清加入到第一空洞即加样孔中，加入量尽可能过量，使待测物质与胶体金标抗原充分结合；等待10～20分钟，然后观察梯度检测线的颜色变化情况，对照浓度标示线，显色的检测线浓度最高者即为样品中HAV IgM的最终浓度。
以基因重组抗人-IgM μ 链抗体、抗兔IgG 多克隆抗体分别固相于硝酸纤维素膜检测区（T）和对照区（C），当样本中含有抗HAV IgM 时，抗HAV IgM 能与胶体金标记HAV 抗原结合形成复合物，该复合物在层析过程中又与（T）线区的抗人-IgM μ 链抗体结合形成红色沉淀条带。当样本中不含抗HAV IgM 时，胶体金标记的HAV 抗原无法与（T）线区的抗人-IgM μ 链抗体结合。无论样本中是否含有抗HAV IgM，（C）线区的抗兔IgG 多克隆抗体都会与胶体金标记的兔IgG 结合形成一条红色对照线。（C）线的显色是判定是否有足够样本，层析过程是否正常的标准，同时也作为该试剂的内控标准。
实施例4采用本发明的梯度梯度胶体金免疫层析定量检测装置，检测样品中金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）的含量，方法步骤如下：
1、检测线上包被有已知量的不同浓度的兔抗SEB型多克隆抗体，按梯度分布。
2、胶体金垫上固着胶体金标记的兔抗SEB型多克隆抗体。
3、对照线上包被羊抗兔IgG。检测线与对照线互相垂直，与吸水方向平行。
4、将待测样品加入到加样孔中，加入量尽可能过量，使待测物质与胶体金标抗原充分结合；等待10～20分钟，然后观察梯度检测线的颜色变化情况，对照浓度标示线，显色的检测线浓度最高者即为样品中金黄色葡萄球菌肠毒素B的最终浓度。

Claims (8)

1.一种梯度胶体金免疫层析定量检测装置，包括：试剂卡槽，衬板，样品垫，胶体金垫，硝酸纤维素膜，吸水纸；其特征在于：所述试剂卡槽包括上壳体和下壳体，上壳体与下壳体通过卡扣连接，所述上壳体设有第一孔洞和第二孔洞；所述衬板固定于试剂卡槽内部；所述样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次排列连接于衬板上表面；样品垫置于第一孔洞下方；硝酸纤维素膜置于第二孔洞下方；所述硝酸纤维素膜上设有检测线和对照线。
2.根据权利要求1所述的梯度胶体金免疫层析定量检测装置，其特征在于：所述胶体金垫上含有胶体金颗粒，或者金标抗原或抗体。
3.根据权利要求1所述的梯度胶体金免疫层析定量检测装置，其特征在于：所述检测线包被有已知量的抗原或抗体，浓度呈梯度分布。
4.根据权利要求1所述的梯度胶体金免疫层析定量检测装置，其特征在于：所述对照线为抗原或二抗，对照线阳性，表明检测成立。
5.根据权利要求1所述的梯度胶体金免疫层析定量检测装置，其特征在于：所述上壳体的第二孔洞外围设有浓度标示线，所述浓度标示线与检测线一一对应。
6.根据权利要求1所述的梯度胶体金免疫层析定量检测装置，其特征在于：所述第一孔洞为加样孔，为长条状。
7.一种梯度胶体金免疫层析定量检测方法，采用如权利要求1所述的检测装置，包括以下步骤：
（1）根据检测样品初步设定检测线条数，并进行梯度浓度设置；
（2） 在加样孔中加入过量体积的待测样品；
（3） 经过10～20分钟后，观察梯度检测线的颜色变化情况，对照浓度标示线，显色的检测线浓度最高者即为样品中待测物质的最终浓度。
8.梯度胶体金免疫层析定量检测装置的用途，用于定量检测样品中病毒抗原或抗体、细菌或细菌毒素、激素、肿瘤标记物的含量。
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