CN104961802A - 一种治疗癌症的活性肽及其用途 - Google Patents
一种治疗癌症的活性肽及其用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104961802A CN104961802A CN201510385150.3A CN201510385150A CN104961802A CN 104961802 A CN104961802 A CN 104961802A CN 201510385150 A CN201510385150 A CN 201510385150A CN 104961802 A CN104961802 A CN 104961802A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- polypeptide
- active peptide
- cone shell
- cancer
- application
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明提供了一种抗舌癌的系列多肽，同时提供了一种多肽的提取方法。该系列多肽具有较强的稳定性以及抑制舌癌细胞生长的能力。这些多肽可以用于癌症的治疗。
Description
技术领域
本发明涉及的是生物技术领域，具体涉及从芋螺中分离得到的治疗舌癌的活性肽。
背景技术
癌症是对人类生命健康危害最大的疾病之一，每年都有大量的人死于癌症。抗癌药物的研发一直是药学研究的热点。抗肿瘤药物中有74%是天然产物或其衍生物，如紫杉醇及其衍生物就是目前临床上应用效果比较好的抗肿瘤药物。因此，从天然产物中寻找抗癌化合物或先导化合物具有重要的意义。
舌癌早期可表现为溃疡、外生与浸润3种类型。有的病例的第一症状仅为舌痛，有时可反射至颞部或耳部。外生型可来自乳头状瘤恶变。浸润型表面可无突起或溃疡。溃疡型及浸润型癌常伴有自发性疼痛和程度不同的舌运动受限；外生型一般舌运动障碍不明显，较少自发痛。舌癌进入晚期可直接超越中线或侵犯口底，亦可浸润下颌骨舌侧骨膜、骨板或骨质。向后则可延及舌根或咽前柱和咽侧壁。此时舌运动可严重受限、固定、涎液增多外溢。进食、吞咽、言语均感困难。疼痛剧烈，可反射至半侧头部。关于舌癌早期诊断的医疗器械目前还未见报道。
芋螺，亦称鸡心螺，系软体动物门，腹足纲，前鳃亚纲，芋螺科(Conidae)动物之总称。壳呈圆锥形或纺锤形，表面常有各色花纹。壳口窄长，厣小而不能遮盖壳口。全球有约500种，我国有百余种。它们分布于热带海域中的浅水区，少数在广东、广西沿海，海南岛北部，个别种延伸到东海。芋螺虽然种类很多，个体大小和食物类型有很大差异，但它们都是食肉动物，而且是靠它们的毒液来捕食猎物。按照食性，芋螺大致可分为三类，食鱼芋螺、食其它软体动物的食螺芋螺和以蠕虫为食的食虫芋螺。其中食鱼芋螺毒液的毒性最高，食虫芋螺的毒性最低。
至今已有数种芋螺毒素申请美国专利，它们在镇痛、局部缺血性保护、癫痫治疗、某些疾病诊断和受体研究中具有广泛的应用价值，有的已进入临床研究或已被FDA正式批准为治疗新药，用作特异诊断试剂和镇痛药。如由Olivera等从幻芋螺(Conus magus)中分离的ω-CTX，MVIIA，已被美国FAD正式批准为治疗顽痛的药物，其商品名Ziconotide。
申请人通过研究发现，芋螺体内的一系列的小肽具有较好的抑制癌症的效果。
发明内容
一方面本发明涉及一类治疗舌癌的多肽。其结构具有以下形式：
CM-03：AQNDCGSSYQFSV
CM -05： GNNRSARRVDDSP
CM -06： DCCCPPMKLLIIGSSSRSR
CM -09： AAAYYSSVRRVWWTSPGEQ
CM -11： QPPEEGNDRCGSGRVPAM
CM -12： NRGSTWYILLPPGSSRPS
CM -14： VVGSSEEQGHIPARDCCRV
CM -16： IKDCMMPGSRAARRGSRLL
CM -19： QPTWGECDDQQHILARVPSS
CM -20： KKPARDDNRAGSKKSSVP
CM -21： DDARMMKLHGSSQQEPSRV
CM -23： APDDGSSRVPTKQEPR
CM -27： GRVILPDKRVPPSSAKW
CM -29： IGRMDKQQNRGSSW
CM -31： VRPGSRDKILLPPGAR
CM -34： GSNNPQTTSRVCPRSGGG
另一方面，本发明提供一种分离所述多肽的方法，(1)将芋螺先用PBS缓冲液清洗，然后用13mmol/L HCl溶液匀浆在10摄氏度条件下制备成粗制液；(2)将步骤(1)所得粗制液用8000转/分钟离心20分钟，收集上清液，将上清液用三层纱布过滤，而后加入木瓜蛋白酶（酶活力为800AU/g）1kg，继续保温并不断搅拌进行酶解反应3h，得到酶解液。用葡聚糖G-50(Sephadex G-50)(1.5cm×90cm)分离，19mmol/L HCl溶液洗脱，流速1.3mL/分钟，收集洗脱产物，调节溶液至pH6.8，10000转/分钟离心15分钟，上清液冷冻干燥备用；经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，回收小分子量的条带，经过验证，获得了40个小的多肽，经过试验证实了其中有16个具有较好的生物学活性。
另一方面，本发明提供一种药物组合物，所述的组合物含有如上所述的体多肽。
如上所述的药物组合物，其还含有还包含一种或多种药学上可接受的载体； 优选地，所述药学上可接受的载体选自：水溶性填充剂、pH调节剂、 稳定剂、注射用水和渗透压调节剂；
更优选地，所述水溶性填充剂选自以下的一种或几种：甘露醇、低分子右旋糖苷、山梨醇、聚乙二醇、葡萄糖、乳糖和半乳糖；
更优选地，所述pH调节剂为生理可接受的酸、碱和/或盐，优选选自以下的一种或几种：
非挥发性酸如枸橼酸、磷酸、乳酸、酒石酸或盐酸，碱如氢氧化钾、氢氧化钠或氢氧化钾或氢氧化铵，盐如碳酸钠或碳酸钾或碳酸铵盐，碳酸氢钠或碳酸氢钾或碳酸氢铵盐；
更优选地，所述稳定剂为选自以下的一种或几种：EDTA-2Na、硫代硫 酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、磷酸氢二钾、碳酸氢钠、碳酸钠、精氨酸、 谷氨酸、聚乙二醇6000、聚乙二醇4000、十二烷基硫酸钠或三羟甲基氨基 甲烷等，进一步优选自：焦亚硫酸钠、磷酸氢二钾、精氨酸、聚乙二醇6000、 三羟甲基氨基甲烷中的一种或几种；
更优选地，所述渗透压调节剂选自氯化钠和/或氯化钾。
本发明再一方面还提供上述多肽在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
并且，所述药物组合物优选为注射剂，更优选地为冻干粉针或溶液注射剂。
本发明的又一方面还提供一种药物组合物，包含上述所述的多肽。
优选地，还包含可接受的辅料成分。
本发明的优点在于：
提供了一种多肽能够抗肿瘤，同时具有较好的稳定性。
具体实施方式
实施例1 多肽的分离获得
(1) 将芋螺先用PBS缓冲液清洗，然后用13mmol/L HCl溶液匀浆在10摄氏度条件下制备成粗制液；(2)将步骤(1)所得粗制液用8000转/分钟离心20分钟，收集上清液，将上清液用三层纱布过滤，而后加入木瓜蛋白酶（酶活力为800AU/g）1kg，继续保温并不断搅拌进行酶解反应3h，得到酶解液。用葡聚糖G-50(Sephadex G-50)(1.5cm×90cm)分离，19mmol/L HCl溶液洗脱，流速1.3mL/分钟，收集洗脱产物，调节溶液至pH6.8，10000转/分钟离心15分钟，上清液冷冻干燥备用；经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，回收小分子量的条带，通过测序获得其中的40个小的多肽相应的氨基酸的序列。
实施例2 采用MTT法评价多肽对人舌癌细胞株的生长抑制作用
方法:处于生长对数期的细胞:人舌癌细胞株Tca8113和T6以2 X I04浓度种于96孔板中。细胞培养24 h贴壁后吸去原来的细胞培养基（为RPMI-1640培养基）。试验分为空白对照组、药物处理组。空白组更换含10%胎牛血清的1640培养基；药物处理组更换含多肽浓度为50 μ Μ的细胞培养基。培养48 h后，加入浓度5 mg/mL的MTT，继续放于CO2培养箱培养4 h，然后沿着培养液上部吸去100 μ L上清，加入100 μ L DMSO，暗处放置10 min，利用酶标仪(Sunrise公司产品)测定吸光值(波长570nm)，并根据吸光值计算细胞存活情况，每个处理设6个重复孔。细胞存活率(%)=△OD药物处理/ △OD空白对照X 100。结果:有16个多肽对人舌癌细胞株Tca8113和T6的生长具有显著的抑制作用，几乎完全不能生长。这16个多肽的序列分别如SEQ ID NO：1-16所示。
并且，这些多肽针对二种细胞的IC50具体结果如下：
| 名称 | Tca8113的IC50 | T6的IC50 |
| CM-03 | 1.84μM | 2.84μM |
| CM-05 | 2.52μM | 3.46μM |
| CM-06 | 2.41μM | 3.57μM |
| CM-09 | 2.64μM | 3.47μM |
| CM-11 | 2.81μM | 2.99μM |
| CM-12 | 2.15μM | 3.01μM |
| CM-14 | 2.36μM | 3.01μM |
| CM-16 | 1.96μM | 2.86μM |
| CM-19 | 2.02μM | 3.04μM |
| CM-20 | 1.18μM | 3.75μM |
| CM-21 | 2.07μM | 4.13μM |
| CM-23 | 2.52μM | 3.05μM |
| CM-27 | 2.34μM | 3.48μM |
| CM-29 | 2.69μM | 2.99μM |
| CM-31 | 1.88μM | 2.97μM |
| CM-34 | 2.01μM | 3.05μM |
由上述实施例表明，本发明的多肽对人舌癌细胞株Tca8113和Τ6的生长具有很好的抑制作用。由此证明，本发明的多肽具有抗舌癌活性，能用于制备抗舌癌药物。
实施例3 多肽在小鼠体内的稳定实验
将所述的多肽，以0.5mg/ml/kg的剂量注射到小鼠体内，经过一周的体内代谢，取小鼠尾血，通过SDS-PAGE检测，分析得到，血液中残余的多肽大多都浓度仍然可以平均达到0.2mg/ml/kg，这充分说明，多肽都具有较好的体内稳定性，可以用于后续的药物用途。
以上的结果明确说明，本发明提供了一种可用于治疗癌症的疾病。具有较好的治疗癌症的前景。
Claims (5)
1.一种抗肿瘤多肽，其特征在于：来源于芋螺。
2.如权利要求1所述的多肽，其特征在于：其氨基酸序列为SEQ ID NO：1-16任一项所示或者与其具有50%同源性的序列。
3.如权利要求1-2任一项所述的多肽在制备抑制肿瘤药物中的用途。
4.一种抗肿瘤药物制剂，它含有权利要求1-2任一项所述的多肽以及药学上合适的载体。
5.如权利要求3所述的用途，其特征在于：所述肿瘤为舌癌。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510385150.3A CN104961802A (zh) | 2015-07-05 | 2015-07-05 | 一种治疗癌症的活性肽及其用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510385150.3A CN104961802A (zh) | 2015-07-05 | 2015-07-05 | 一种治疗癌症的活性肽及其用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104961802A true CN104961802A (zh) | 2015-10-07 |
Family
ID=54215919
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510385150.3A Pending CN104961802A (zh) | 2015-07-05 | 2015-07-05 | 一种治疗癌症的活性肽及其用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104961802A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020035079A1 (zh) * | 2018-08-13 | 2020-02-20 | 山东省科学院生物研究所 | 具有心脑血管保护功能的多肽及其制备方法与应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101557820A (zh) * | 2006-11-04 | 2009-10-14 | 安奈根株式会社 | ω芋螺毒素 |
-
2015
- 2015-07-05 CN CN201510385150.3A patent/CN104961802A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101557820A (zh) * | 2006-11-04 | 2009-10-14 | 安奈根株式会社 | ω芋螺毒素 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| GOWD KH 等: "Novel peptides of therapeutic promise from Indian Conidae", 《ANN N Y ACAD SCI》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020035079A1 (zh) * | 2018-08-13 | 2020-02-20 | 山东省科学院生物研究所 | 具有心脑血管保护功能的多肽及其制备方法与应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104109193B (zh) | 一种抗癌活性肽变体及其应用 | |
| CN112386678B (zh) | 多肽或其衍生物的应用 | |
| AU2021236518B2 (en) | A highly concentrated seawater mineral extract and uses thereof | |
| CN1961957A (zh) | 一种抗衰老结肠吸收制剂 | |
| CN101020715B (zh) | 鹿茸神经生长因子(deer ngf)提取及其制备方法 | |
| CN104531818A (zh) | 金钱龟抗肿瘤多肽的制备方法 | |
| CN104961802A (zh) | 一种治疗癌症的活性肽及其用途 | |
| CN107805282A (zh) | 一种靶向疗法和免疫疗法联合的多肽 | |
| JP4896332B2 (ja) | 担子菌類とウコギ科植物の有効成分に基づく生理活性組成物 | |
| CN102453079B (zh) | 特异性结合碱性成纤维细胞生长因子受体的肽 | |
| JPH02117698A (ja) | 血管内皮細胞成長因子 | |
| CN102020710A (zh) | 人表皮生长因子一个新的突变体en-46 | |
| CN103484519A (zh) | 一种小麦蛋白肽及其制备方法和其应用 | |
| CN109550056B (zh) | 基质金属蛋白酶抑制性多肽金纳米颗粒组合物及其应用、制备方法 | |
| CN108350030A (zh) | 皮肤可渗透肽及其使用方法 | |
| CN114605517B (zh) | 一种具有广谱抗癌作用的多肽lxp-7及其应用 | |
| CN106749592A (zh) | 一种抗癌活性肽变体及其应用 | |
| CN106831970A (zh) | 一种抗癌活性肽变体及其应用 | |
| CN106699865A (zh) | 一种抗癌活性肽变体及其应用 | |
| CN106699863A (zh) | 一种抗癌活性肽变体及其应用 | |
| CN106699864A (zh) | 一种抗癌活性肽变体及其应用 | |
| JP2005239585A (ja) | 冬虫夏草より見出された新規抗酸化活性物質とその利用 | |
| CN1171594C (zh) | 含珍珠粉和抗坏血酸的组合物 | |
| CN104547353B (zh) | 一种预防鼻咽癌放疗后并发症的药物组合物 | |
| CN109293759A (zh) | 一种抗癌活性肽变体及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20151007 |