CN104938869B - 一种保护石斑鱼仔稚鱼免于神经坏死病毒侵害的天然免疫增强剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种保护石斑鱼仔稚鱼免于神经坏死病毒侵害的天然免疫增强剂，由下列重量百分比含量的原料组成：茶多酚26‑57％、黄芪多糖25‑40％、维生素C磷酸酯5‑15％、蛋黄粉7‑30％。本发明优点在于：1、本发明的天然免疫增强剂能显著提高石斑鱼仔稚鱼的免疫水平，护石斑鱼仔稚鱼免于神经坏死病毒侵害，促进石斑鱼生长速度，降低死亡率；2、本发明的天然免疫增强剂原料数目少，简单易得，配制方法简单，而且成本较低；3、本发明的天然免疫增强剂可以直接添加到石斑鱼仔稚鱼开口饵料中，也可以直接在水中泼洒，使用简单方便；4、本发明的天然免疫增强剂无毒副残留性、无抗药性、环保，对饲料适口性无任何不良影响。

Description

一种保护石斑鱼仔稚鱼免于神经坏死病毒侵害的天然免疫增 强剂

技术领域

本发明涉及一种复合免疫增强剂，属于水产养殖技术领域，具体地说，是一种保护石斑鱼仔稚鱼免于神经坏死病毒侵害的天然免疫增强剂。

背景技术

鱼类神经坏死病毒(nervous necrosis virus，NNV)是一种世界范围内流行的海水鱼类病毒病，主要发生在海水鱼种苗生产阶段。近年来，石斑鱼种苗繁育过程中神经坏死病频发，且鱼苗死亡率高达90％以上，给石斑鱼种苗繁育造成了巨大的经济损失。到目前为止，有关石斑鱼神经坏死病毒的研究还局限在疾病诊断及检测阶段，这些研究成果也相应的申请了发明专利。如中国专利03114369.5，石斑鱼病毒性神经坏死病毒基因诊断试剂盒及检测方法；专利200910039534.4，一种赤点石斑鱼神经坏死病毒检测用引物组、检测方法和快速诊断试剂盒。上述发明提供了神经坏死病毒(VNNV，Viral Nervous NecrosisVirus)的基因诊断及检测方法，可以在实际生产中通过有效的管理和监控减少神经坏死病的传播和感染几率。但对于在实际生产中神经坏死病毒感染后引起的石斑鱼苗大量死亡，目前尚无较好的的解决方案。

有研究显示，可以通过改善石斑鱼健康水平来提高其免疫力和对抗疾病感染的能力。中国专利文献200810219368.1，公开了一种石斑鱼强肝剂，其组分为：维生素C-聚磷酸酯20-30％、维生素E 15-20％、胆碱10-20％、左旋肉碱5-10％、卵磷脂5-10％、蛋氨酸硒5-10％、二十碳五烯酸5-10％、二十二碳六烯酸5-10％。中国专利文献200810219367.7，公开了一种石斑鱼用复方中草药免疫增强剂，其组分为：黄芪10-20％、金银花10-20％、大黄10-15％、杜仲叶粉10-15％、甘草10-15％、山楂10-15％、白术5-10、红花5-10。以上发明提供的药物能有效增进石斑鱼肝脏机能、提高石斑鱼免疫力，提高饲料效率和促进生长。但是这些药物是非特异性的，而且是针对石斑鱼幼鱼或成鱼阶段设计的，其对于石斑鱼苗神经坏死病的免疫保护方面没有明确的作用。因此，研制一种专用的复合免疫增强剂以提高石斑鱼仔稚鱼的免疫力，尤其针对石斑鱼种苗阶段的神经坏死病毒提供免疫保护，以降低石斑鱼苗种期间的死亡率，对石斑鱼养殖业的健康可持续发展具有十分重要的意义。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种保护石斑鱼仔稚鱼免于神经坏死病毒侵害的天然免疫增强剂。

本发明的再一的目的是，提供上述天然免疫增强剂的用途。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种保护石斑鱼仔稚鱼免于神经坏死病毒侵害的天然免疫增强剂，由下列重量百分比含量的原料组成：茶多酚26-57％、黄芪多糖25-40％、维生素C磷酸酯5-15％、蛋黄粉7-30％。

所述的天然免疫增强剂由下列重量百分比含量的原料组成：茶多酚45-55％、黄芪多糖25-30％、维生素C磷酸酯10-15％、蛋黄粉7-15％。

所述的天然免疫增强剂由下列重量百分比含量的原料组成：茶多酚50％，黄芪多糖25％，维生素C磷酸酯15％，蛋黄粉10％。

所述的然免疫增强剂能提高石斑鱼仔稚鱼的SOD和NBT白细胞比例，提高石斑鱼仔稚鱼在感染神经坏死病毒条件下的抵抗力，提高石斑鱼仔稚鱼的成活率。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

如上任一所述的天然免疫增强剂在制备防治石斑鱼仔稚鱼病毒性神经坏死病的复合免疫增强剂药物中的应用。本发明免疫增强剂所制备的药物可以直接添加到仔稚鱼开口饵料中，也可以直接在水中泼洒。

所述的药物在饲料中添加量为2000-4000mg/kg。

所述的药物在水中泼洒浓度为0.1-0.5ppm。

所述的药物能提高石斑鱼仔稚鱼的SOD和NBT白细胞比例。

所述的药物能提高石斑鱼仔稚鱼在感染神经坏死病毒条件下的抵抗力，提高石斑鱼仔稚鱼的成活率。

本发明优点在于：

1、本发明的天然免疫增强剂能显著提高石斑鱼仔稚鱼的免疫水平，护石斑鱼仔稚鱼免于神经坏死病毒侵害，促进石斑鱼生长速度，降低死亡率；

2、本发明的天然免疫增强剂原料数目少，简单易得，配制方法简单，而且成本较低；

3、本发明的天然免疫增强剂可以直接添加到石斑鱼仔稚鱼开口饵料中，也可以直接在水中泼洒，使用简单方便；

4、本发明的天然免疫增强剂无毒副残留性、无抗药性、环保，对饲料适口性无任何不良影响。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明所记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1 本发明的天然免疫增强剂的制备(一)

按重量比为茶多酚50％、黄芪多糖25％、维生素C磷酸酯15％、蛋黄粉10％秤取物料，混合均匀后在超微粉碎机中进行粉碎，过300目筛网。

实施例2 本发明的天然免疫增强剂的制备(二)

按重量比为茶多酚26％、黄芪多糖40％、维生素C磷酸酯14％、蛋黄粉20％秤取物料，混合均匀后在超微粉碎机中进行粉碎，过300目筛网。

实施例3 本发明的天然免疫增强剂的制备(三)

按重量比为茶多酚57％、黄芪多糖25％、维生素C磷酸酯8％、蛋黄粉10％秤取物料，混合均匀后在超微粉碎机中进行粉碎，过300目筛网。

实施例4 本发明的天然免疫增强剂的制备(四)

按重量比为茶多酚53％、黄芪多糖35％、维生素C磷酸酯5％、蛋黄粉7％秤取物料，混合均匀后在超微粉碎机中进行粉碎，过300目筛网。

实施例5 本发明的天然免疫增强剂的制备(五)

按重量比为茶多酚29％、黄芪多糖26％、维生素C磷酸酯15％、蛋黄粉30％秤取物料，混合均匀后在超微粉碎机中进行粉碎，过300目筛网。

实施例6 本发明的天然免疫增强剂的制备(六)

按重量比为茶多酚40％、黄芪多糖30％、维生素C磷酸酯8％、蛋黄粉22％秤取物料，混合均匀后在超微粉碎机中进行粉碎，过300目筛网。

实施例7 本发明的天然免疫增强剂的制备(七)

按重量比为茶多酚30％、黄芪多糖35％、维生素C磷酸酯12％、蛋黄粉23％秤取物料，混合均匀后在超微粉碎机中进行粉碎，过300目筛网。

需要说明的是，实施例1-7所制备增强剂可以直接添加到石斑鱼仔稚鱼开口饵料中，也可以通过往水体总泼洒进行给药，在饲料中添加量为2000-4000mg/kg，在水中泼洒浓度为0.11-0.5ppm。

实施例8

1、饲料准备

按茶多酚50％、黄芪多糖25％、维生素C磷酸酯15％、蛋黄粉10％的比例秤取原料，混合均匀后于超微粉碎机中进行粉碎，使所有物料能通过300目筛网，既得本发明的免疫增强剂。在上海艾美尔生物工程有限公司石斑鱼微囊饵料生产时按照每10kg物料30g的比例添加本发明的免疫增强剂，添加后混合均匀，并采用流化床工艺进行包被，制成石斑鱼微囊饵料。饵料粒径50μm-300μm不等。同时以不添加免疫增强剂的微囊饵料作为对照组饲料。

2、养殖试验

养殖试验在广东恒兴饲料实业股份有限公司863试验基地进行。试验所采用水族箱为体积200L的玻璃缸。养殖所用海水为沙滤水，采用循环流水系统，每个水族箱进水量为0.5L/min。试验期间水温控制为29.0±0.5℃，盐度为29‰，溶氧维持在7mg/L左右。选择刚刚孵化出，体长约0.5cm的石斑鱼仔稚鱼随机分配于6个水族箱(2个试验处理组，每组3个重复)，每个水族箱300尾。每天投饵6次，试验共进行4周。

3、样品收集及化学分析

养殖试验结束后，分别秤量每桶鱼体总重，记录鱼体个数，计算每桶石斑鱼的平均体重。此后，每桶随机抽取60尾石斑鱼仔稚鱼，均浆后测定溶菌酶、超氧化物歧化酶和头肾NBT阳性白细胞比例。所有数据采用单因素方差分析(ANOVA)，当处理之间差异显著(P<0.05)时，用Tukey’s检验进行多重比较分析。所有统计分析均在SPSS11.0软件中进行。

4、实验结果

表1

注：表中数据为平均值(n＝3)，同一列右上角不同英文上标字母表示有显著差异(P<0.05)。^a S.E.M.：标准误；^b ANOVA(One-way analysis of variance)：单因素方差分析。

实验结果见表1。通过实验组与对照组终末体重对比可以看出，本发明的免疫增强剂显著促进石斑鱼仔稚鱼的生长，提高其终末平均体重；添加有本发明免疫增强剂的微囊饵料，石斑鱼仔稚鱼成活率为87.3％，而饵料中不含免疫增强剂的对照组成活率仅为45.6％，说明本发明的免疫增强剂能显著提高石斑鱼仔稚鱼的成活率；通过实验组与对照组的溶菌酶活性与SOD对比可以看出，本发明的免疫增强剂能够显著提高石斑鱼仔稚鱼SOD和NBT白细胞比例，对溶菌酶活性也有一定的改善作用。上述结果表明：使用本发明的免疫增强剂能够显著提高石斑鱼仔稚鱼的免疫水平，促进石斑鱼生长速度，降低死亡率。

实施例9

取茶多酚26kg、黄芪多糖34kg、维生素C磷酸酯15kg、蛋黄粉25kg，混合均匀后，在超微粉碎机中进行超微粉碎，使所有物料能通过300目筛网。所有物料经塑料袋包装后置于-20℃冰箱中保存。2014年4月在海南省文昌县会文镇某石斑鱼苗培育场进行试验。该育苗场共有4口3亩左右池塘，放卵密度为3万受精卵/立方米。鱼苗培育从4月15日开始，至5月10出苗，出苗规格约2.8cm。其中2口池塘每天按照0.4ppm的浓缩泼洒该免疫增强剂。另外2口池塘作为对照组。5月10日出苗后，计算4口池塘石斑鱼的总体孵化率，结果见表2。

表2

组别	试验组1	试验组2	对照组1	对照组2
					孵化率％	32.1	34	17.5	14.3

该试验结果说明使用本发明的免疫增强剂在水体中泼洒能够有效提高石斑鱼在生态育苗条件下的成活率，从而提高出苗数量。

实施例10

取茶多酚50g、黄芪多糖25g、维生素C磷酸酯15g、蛋黄粉10g、混合均匀后经超微粉碎机粉碎全部过300目筛网。按照4000mg/kg的添加量在石斑鱼膨化配合饲料中。膨化配合饲料在湛江恒兴珊瑚饲料有限公司生产，配合饲料直径为0.5mm。在3个1000L的玻璃缸水槽中养殖初始体重为0.5g的石斑鱼苗30天。另有3个水槽投喂不含免疫增强剂饲料作为对照组。每个水槽放养石斑鱼苗200尾。养殖30天后，选用感染石斑鱼神经坏死病毒而黑身死亡的石斑鱼苗(打成浆后冷冻保存)作为攻毒源，投喂给6个水族箱的石斑鱼苗。结果显示，攻毒15天后，对照组累计死亡率为75％，免疫增强剂组累计死亡率为32％。该试验结果表明本发明的免疫增强剂能够有效提高石斑鱼苗在感染神经坏死病毒条件下的抵抗力。

对比例

对比试验1所用的药物：茶多酚50g、维生素C磷酸酯15g、蛋黄粉10g；对比试验2所用的药物为：茶多酚50g、黄芪多糖25g、蛋黄粉10g。将上述药物混合均匀后在超微粉碎机中进行粉碎，过300目筛，按照4000mg/kg的添加量在石斑鱼膨化配合饲料中。膨化配合饲料在湛江恒兴珊瑚饲料有限公司生产，配合饲料直径为0.5mm。在2个1000L的玻璃缸水槽中养殖初始体重为0.5g的石斑鱼苗30天。每个水槽放养石斑鱼苗200尾。养殖30天后，选用感染石斑鱼神经坏死病毒而黑身死亡的石斑鱼苗(打成浆后冷冻保存)作为攻毒源，投喂给水族箱的石斑鱼苗，共投喂2天，表观饱食投喂。观察此后15天每个水族箱的累计死亡率，试验结果见表3。

表3

组别	实施例10	对比试验1	对比试验2	对照组
					死亡率％	32	60	55	75

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种保护石斑鱼仔稚鱼免于神经坏死病毒侵害的天然免疫增强剂，其特征在于，由下列重量百分比含量的原料组成：茶多酚26-57%、黄芪多糖25-40%、维生素C磷酸酯5-15%、蛋黄粉7-30%。

2.根据权利要求1所述的天然免疫增强剂，其特征在于，由下列重量百分比含量的原料组成：茶多酚45-55%、黄芪多糖25-30%、维生素C磷酸酯10-15%、蛋黄粉7-15%。

3.根据权利要求1所述的天然免疫增强剂，其特征在于，由下列重量百分比含量的原料组成：茶多酚50%，黄芪多糖25%，维生素C磷酸酯15%，蛋黄粉10%。

4.根据权利要求1-3任一所述的天然免疫增强剂，其特征在于，所述的天然免疫增强剂能提高石斑鱼仔稚鱼在感染神经坏死病毒条件下的抵抗力，提高石斑鱼仔稚鱼的成活率。

5.权利要求1-3任一所述的天然免疫增强剂在制备防治石斑鱼仔稚鱼病毒性神经坏死病的复合免疫增强药物中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的药物在饲料中添加量为2000-4000mg/kg。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的药物在水中泼洒浓度为0.1-0.5ppm。

8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的药物能提高石斑鱼仔稚鱼在感染神经坏死病毒条件下的抵抗力，提高石斑鱼仔稚鱼的成活率。