CN104938769B - 一种制备米糠菌种制剂及其用于饲料发酵的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及米糠保质及动物饲料技术领域，尤其涉及一种制备米糠菌种制剂及其用于饲料发酵的方法，其步骤包括：①由4℃冰箱保存备用的菌种斜面接种制备一级液体菌种；②由其接种新鲜米糠固态发酵制备二级固态菌种；③用固态菌种接种新鲜米糠进行放大固态发酵制备米糠菌种制剂；④将米糠菌种制剂接入饲料来发酵饲料。其中饲料发酵可由用户自己完成，就近发酵就近使用。本发明的培养基成份简单、配制方便，生产工艺简单，产品含生物活性物质和益生菌，米糠菌种制剂常温贮存时间长达6‑8个月。用其发酵的饲料味香、适口性好，并能改善牲畜的肠道菌群，提高牲畜对疾病的抵抗力，不存在安全问题和药物残留问题，使米糠原料得到充分利用。

Description

一种制备米糠菌种制剂及其用于饲料发酵的方法

技术领域

本发明涉及米糠保质及动物饲料技术领域，具体是一种制备米糠菌种制剂及其用于饲料发酵的方法。

背景技术

我国南方盛产稻米，米糠资源丰富，其主要成分是果皮、种皮、外胚乳、糊粉层和胚，含水率12-14％，富含各种营养素和生理活性物质；平均含蛋白质15％，脂肪16-22％，糖3-8％，还含有大量的维生素、植物醇、膳食纤维、氨基酸及矿物质等，历来有用来养猪的传统。但是米糠脂肪中主要的脂肪酸大多为油酸、亚油酸等不饱和脂肪酸，因此很容易发生酸败而变质，特别是南方夏天的气候高温高湿，5-7天就酸败变质了。本发明利用产朊假丝酵母和乳酸乳球菌两种益生菌在生长过程中对油脂具有代谢同化作用原理，以及它们生长过程中会产生生物活性物，如：抗菌肽、维生素、谷胱甘肽、酶系、生香物质以及菌体蛋等的特点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备米糠菌种制剂及其用于饲料发酵的方法，通过在新鲜米糠中接入产朊假丝酵母和乳酸乳球菌，经过发酵处理不但能使米糠的保质期大幅度提高到6-8个月，同时也能使其成为了一种富含生物活性物和大量益生菌的米糠菌种制剂。通过在饲料中加入米糠菌种制剂，经微生物的发酵作用，所生产的饲料也可富含益生菌，生物活性物和菌体蛋白等，饲料味香、适口性好，并能改善牲畜的肠道菌群，提高牲畜对疾病的抵抗力，在一定程度上起到了类似瘦肉精、抗生素和生长激素的正面作用，而又不存在安全问题和药物残留问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种制备米糠菌种制剂及其用于饲料发酵的方法，包括以下步骤：

1)按无菌操作规程，取出4℃冰箱保存备用的酵母菌和乳酸菌两种斜面菌种，用接种铲铲下一铲酵母菌菌苔接入麦芽汁培养液中，铲下一铲乳酸菌菌苔接入LB培养液中，一起置28-32℃，160rpm震荡培养18-24小时，得到两种培养菌液；

2)按无菌操作规程，用上述步骤1)生产的培养菌液，按5wt％接种量分别接入各自对应的生产用麦芽汁培养液和生产用LB培养液，一起置28-32℃，160rpm震荡培养18-24小时，得到两种一级菌种；

3)将上述步骤2)生产的两种一级菌种按酵母菌：乳酸菌＝2：1的比例混合，得到联合一级菌种；

4)将上述步骤3)生产的联合一级菌种按6-8wt％接种量，用8-12wt％米糠分量、且含0.5-1.5wt％氮源物质的纯净水或自来水加以稀释，再均匀地拌入新鲜米糠中，使得米糠含水量达到30-34wt％，用塑料膜覆盖置28-32℃恒温室发酵3-5天，至总菌数计数达到108cfu/g数量级，即为二级固态菌种；

5)将上述步骤4)生产的二级固态菌种按8-12wt％的接种量，与16-20wt％米糠分量、且含0.5-1.5wt％氮源物质的纯净水或自来水一起，均匀拌入新鲜米糠中，使得米糠含水量达到30-34wt％，用塑料膜覆盖或装入塑料编织袋中，置28-32℃恒温室发酵5-7天，至总菌数计数达到108cfu/g数量级，即为米糠菌种制剂；

6)将上述步骤5)生产的米糠菌种制剂按15wt％的接种量均匀拌入常规饲料中，用塑料膜覆盖或装入塑料编织袋中，置温室下保存一段时间进行饲料发酵，发酵时间随室温而定，约7-15天完成，即为发酵饲料。

作为本发明进一步的方案：所述步骤1)中使用的酵母菌是产朊假丝酵母，乳酸菌是乳酸乳球菌。

作为本发明进一步的方案：所述步骤2)中，产朊假丝酵母所用生产用麦芽汁培养液，为捣碎的干麦芽，加入4-5倍麦芽分量的水，在65℃水浴中糖化3-4小时，连同麦芽一起灭菌制得。

作为本发明进一步的方案：所述步骤3)中，产朊假丝酵母与乳酸乳球菌按2︰1的比例混合成联合一级菌种。

作为本发明进一步的方案：所述步骤5)中，产朊假丝酵母和乳酸乳球菌是在28-32℃联合固态发酵生成二级固态菌种。

作为本发明进一步的方案：所述步骤4)和5)中，米糠固态发酵接种时所补加的含0.5-1.5wt％氮源物质的纯净水或自来水，既可以增加湿度，又可以增加氮元素营养，其中的氮源物质为尿素或者铵盐，所述铵盐包括硫酸铵和硝酸铵。

作为本发明进一步的方案：所述步骤5)中，米糠菌种制剂是经过连续二次固态发酵，逐次放大生产的。

作为本发明进一步的方案：所述步骤4)至步骤6)中，新鲜米糠和含0.5-1.5wt％氮源物质的纯净水或自来水无需灭菌或预处理，减少了能耗。

作为本发明进一步的方案：所述步骤3)至步骤6)无需按无菌操作规程进行。

作为本发明进一步的方案：所述步骤6)中，米糠菌种制剂按15wt％的加入量均匀拌入常规饲料中，固态发酵7-15天，制成发酵饲料。

作为本发明进一步的方案：所述步骤6)中，米糠菌种制剂发酵饲料可由用户自己完成；就近发酵就近使用。

根据上述制备方法而需要的培养液和含氮源水，包括如下种类：

1、麦芽汁培养液；将干麦芽捣碎，加入4-5倍麦芽分量的水，在65℃水浴中糖化3-4小时，连同麦芽一起即为步骤2)所需的生产用麦芽汁培养液，糖化液搅拌煮沸后再过滤，将滤液稀释到5-6波美度，即为步骤1)所需的麦芽汁培养液，均需置121℃灭菌30min。

2、LB培养液；蛋白胨10.0克、酵母浸膏份10.0克、氯化钠5.0，加水溶解，调pH值至7，加水定容至1.0升，即为步骤1)和步骤2)所需的LB培养液，置121℃灭菌20min。

3、含0.5-1.5％氮源的纯净水或自来水：尿素，或者硫酸铵、硝酸铵……等铵盐50-150克溶于10升的纯水或自来水中，也可以用干净的山泉水、井水代替纯净水和自来水，无需灭菌处理。

从上述制备方法和所需要的培养液可以看出，本发明制备米糠菌种制剂及用于饲料发酵的方法的有益效果：

1.培养液成份简单、配制方便；

2.产品生物活性物质和益生菌含量高；

3.生产工艺简单，从步骤3开始无需无菌操作；

4.贮存时间长达5-8个月。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明通过在新鲜米糠中接入产朊假丝酵母和乳酸乳球菌两种益生菌，经过联合固态发酵，特别是对脂肪和脂肪酸的代谢或同化作用，极大地降低了米糠不饱和脂肪酸的含量，加上菌体代谢产生的生物活性物，如；抗菌肽、维生素、谷胱甘肽、酶系、生香物质和菌体蛋白，不但使米糠的保质期大幅度提高到6-8个月，同时也使之成为了一种富含生物活性物和大量益生菌的米糠，一种可用于饲料发酵的米糠菌种制剂。用其发酵的饲料味香、适口性好，并能改善牲畜的肠道菌群，提高牲畜对疾病的抵抗力。在一定程度上起到了类似瘦肉精、抗生素和生长激素的正面作用，而又不存在安全问题和药物残留问题。本发明使米糠原料得到充分利用，降低了发酵饲料成本和养殖成本。

本发明的培养液成份简单、配制方便，米糠原料和含氮源水不需要灭菌等预处理，从步骤3)开始就无需按无菌操作规程进行操作了，所以生产工艺简单粗放。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

本发明实施例中，一种制备米糠菌种制剂及其用于饲料发酵的方法，具体步骤如下：

1)将1000g干麦芽捣碎，加入4300ml的水，在65℃水浴中糖化3h，取出500ml混悬糖化液搅拌煮沸后再过滤，将滤液稀释到5波美度，即为麦芽汁培养液，按2ml/支分装10支玻璃试管，用500ml三角烧瓶分装两瓶，一瓶装240ml，一瓶装250ml并加入5g琼脂粉即为麦芽汁培养基，剩下的连同麦芽一起用1000ml三角烧瓶按470ml/瓶分装8瓶，即为生产用麦芽汁培养液；

2)称取24g蛋白胨、12g酵母浸膏粉和12g氯化钠，加水溶解，用1N的NaOH调pH值至7，加水定容至2400ml，即为LB培养液，按2ml/支分装至10支玻璃试管，用500ml三角烧瓶分装两瓶，一瓶装120ml，一瓶装250ml并加入5g琼脂粉即为LB培养基，剩下的用1000ml三角烧瓶按470ml/瓶分装4瓶；

3)上述培养液或培养基连同六个茄子瓶、十块培养皿一起封口或包裹，置高压灭菌柜，在121℃下灭菌30min；

4)灭菌后，待自然冷却至45℃时取出，按无菌操作规程，将麦芽汁培养基和LB培养液基按30ml/瓶，各分装3个茄子瓶，按12ml/皿，各分装4块培养皿，平放静置凝固；连同上述培养液一起置37℃下培养18h，以确认培养基或培养液灭菌彻底且没有操作染菌；

5)按无菌操作规程，分别将产朊假丝酵母和乳酸乳球菌保藏菌种，划线接种在麦芽汁培养基和LB培养基平皿上，置28℃培养36h，挑选生长旺盛、形态正常的单菌落，接种在对应的培养液试管中，置28℃，160rpm震荡培养18h，得到两种菌的纯培养菌液，取0.1ml加至茄子瓶培养基上，用涂布棒涂布均匀菌液，两种菌各涂布茄子瓶3瓶，置28℃培养18h即为菌种斜面，置4℃冰箱保存备用，制作一次茄子瓶菌种可供多批次生产使用，一般2个月之内使用有效；

6)按无菌操作规程，从上述产生的产朊假丝酵母菌种斜面用接种铲铲下一铲菌苔，接入240ml麦芽汁培养液中，同样从乳酸乳球菌菌种斜面铲下一铲菌苔，接入120ml的LB培养液中，置28℃，160rpm震荡培养24h，再按30ml/瓶的接种量接入各自对应的470ml生产用麦芽汁培养液8瓶和470ml的LB培养液4瓶，置28℃，160rpm培养24h，制得一级菌种；

7)将上述产生的4000ml产朊假丝酵母一级菌种和2000ml乳酸乳球菌一级菌种混合，加入14kg含1.5wt％尿素的自来水混匀，再均匀地拌入100kg新鲜米糠中，至米糠总含水量约为34wt％，用塑料膜覆盖置32℃恒温室固态发酵3d后散发出香味，总菌数计数达到7×108cfu/g，制得二级固态菌种；

8)将上述产生的100kg二级固态菌种全部拌入1150kg新鲜米糠中，边搅拌边喷入230kg含1.5wt％尿素的自来水，使得米糠总含水量达到34wt％，用塑料膜覆盖或装入塑料编织袋中，置32℃恒温室发酵5d，总菌数计数达到了2.1×108cfu/g，即为米糠菌种制剂，也可装袋室温存放备用。

9)将上述米糠菌种制剂1200kg按15wt％的加入量均匀拌入6800kg常规饲料中，用塑料膜覆盖或装入塑料编织袋中码放在室内，在夏季室温平均26℃条件下。关上门窗，发酵7d后饲料散发出香味，即为发酵饲料。这一步饲料发酵可由用户自己完成，就近发酵就近使用。

实施例2

本发明实施例中，一种制备米糠菌种制剂及其用于饲料发酵的方法，具体步骤如下：

1)将1000g干麦芽捣碎，加入4300ml的水，在65℃水浴中糖化3.5h，取出600ml混悬糖化液搅拌煮沸后再过滤，将滤液稀释到5波美度，即为麦芽汁培养液，按2ml/支分装10支玻璃试管，用500ml三角烧瓶分装3瓶，2瓶各装160ml，一瓶装250ml并加入5g琼脂粉即为麦芽汁培养基，剩下的连同麦芽一起用1000ml三角烧瓶按460ml/瓶分装8瓶，即为生产用麦芽汁培养液；

2)称取24g蛋白胨、12g酵母浸膏粉和12g氯化钠，加水溶解，用1N的NaOH调pH值至7，加水定容至2400ml，即为LB培养液，按2ml/支分装至10支玻璃试管，用500ml三角烧瓶分装两瓶，一瓶装160ml，一瓶装250ml并加入5g琼脂粉即为LB培养基，剩下的用1000ml三角烧瓶按460ml/瓶分装4瓶；

3)、4)和5)步骤同实施例1；

6)按无菌操作规程，从上述产生的产朊假丝酵母菌种斜面用接种铲铲下2铲菌苔，依次接入2瓶160ml麦芽汁培养液中，同样从乳酸乳球菌菌种斜面铲下一铲菌苔，接入160ml的LB培养液中，置32℃，160rpm震荡培养18h，再按40ml/瓶的接种量接入各自对应的460ml生产用麦芽汁培养液8瓶和460ml的LB培养液4瓶，置32℃，160rpm培养18h，制得一级菌种；

7)将上述产生的4000ml产朊假丝酵母一级菌种和2000ml乳酸乳球菌一级菌种混合，加入6kg含0.5wt％硝酸铵的自来水混匀，再均匀地拌入75kg新鲜米糠中，米糠总含水量30wt％，用塑料膜覆盖置28℃恒温室固态发酵5d后散发出香味，总菌数计数达到5.4×108cfu/g，制得二级固态菌种；

8)将上述产生的75kg二级固态菌种全部拌入550kg新鲜米糠中，边搅拌边喷入88kg含0.5wt％硝酸铵的自来水，使得米糠总含水量达到30wt％，用塑料膜覆盖或装入塑料编织袋中，置28℃恒温室发酵7d，总菌数计数达到了1.5×108cfu/g，即为米糠菌种制剂，也可装袋室温存放备用。

9)将上述米糠菌种制剂600kg按15wt％的加入量均匀拌入3400kg常规饲料中，用塑料膜覆盖或装入塑料编织袋中码放在室内，在冬季室温平均8℃条件下。关上门窗，发酵15d后饲料散发出香味，即为发酵饲料。这一步饲料发酵可由用户自己完成，就近发酵就近使用。

本发明通过在新鲜米糠中接入产朊假丝酵母和乳酸乳球菌两种益生菌，经过联合固态发酵，特别是对脂肪和脂肪酸的代谢或同化作用，极大地降低了米糠不饱和脂肪酸的含量，加上菌体代谢产生的生物活性物，如；抗菌肽、维生素、谷胱甘肽、酶系、生香物质和菌体蛋白，不但使米糠的保质期大幅度提高到6-8个月，同时也使之成为了一种富含生物活性物和大量益生菌的米糠，一种可用于饲料发酵的米糠菌种制剂。用其发酵的饲料味香、适口性好，并能改善牲畜的肠道菌群，提高牲畜对疾病的抵抗力。在一定程度上起到了类似瘦肉精、抗生素和生长激素的正面作用，而又不存在安全问题和药物残留问题。本发明使米糠原料得到充分利用，降低了发酵饲料成本和养殖成本。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (8)

1.一种制备米糠菌种制剂及其用于饲料发酵的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)按无菌操作规程，取出4℃冰箱保存备用的酵母菌和乳酸菌两种斜面菌种，用接种铲铲下一铲酵母菌菌苔接入麦芽汁培养液中，铲下一铲乳酸菌菌苔接入LB培养液中，一起置28-32℃,160rpm震荡培养18-24小时，得到两种培养菌液；使用的酵母菌是产朊假丝酵母，乳酸菌是乳酸乳球菌；

2)按无菌操作规程，用上述步骤1)生产的培养菌液，按5wt％接种量分别接入各自对应的生产用麦芽汁培养液和生产用LB培养液，一起置28-32℃,160rpm震荡培养18-24小时，得到两种一级菌种；产朊假丝酵母所用生产用麦芽汁培养液，为捣碎的干麦芽，加入4-5倍麦芽分量的水，在65℃水浴中糖化3-4小时，连同麦芽一起灭菌制得；

3)将上述步骤2)生产的两种一级菌种按酵母菌：乳酸菌＝2：1的比例混合，得到联合一级菌种；

4)将上述步骤3)生产的联合一级菌种按6-8wt％接种量，用8-12wt％米糠分量、且含0.5-1.5wt％氮源物质的纯净水或自来水加以稀释，再均匀地拌入新鲜米糠中，使得米糠含水量达到30-34wt％，用塑料膜覆盖置28-32℃恒温室发酵3-5天，至总菌数计数达到10⁸cfu/g数量级，即为二级固态菌种；

5)将上述步骤4)生产的二级固态菌种按8-12％的接种量，与16-20wt％米糠分量、且含0.5-1.5wt％氮源物质的纯净水或自来水一起，均匀拌入新鲜米糠中，使得米糠含水量达到30-34wt％，用塑料膜覆盖或装入塑料编织袋中，置28-32℃恒温室发酵5-7天，至总菌数计数达到10⁸cfu/g数量级，即为米糠菌种制剂；

6)将上述步骤5)生产的米糠菌种制剂按15wt％的接种量均匀拌入常规饲料中，用塑料膜覆盖或装入塑料编织袋中，置温室下保存一段时间进行饲料发酵，发酵时间随室温而定，7-15天完成，即为发酵饲料。

2.如权利要求1所述的制备米糠菌种制剂及其用于饲料发酵的方法，其特征在于，所述步骤3)中，产朊 假丝酵母与乳酸乳球菌按2：1的比例混合成联合一级菌种。

3.如权利要求1所述的制备米糠菌种制剂及其用于饲料发酵的方法，其特征在于，所述步骤4)和5)中，米糠固态发酵接种时所补加的含0.5-1.5wt％氮源物质的纯净水或自来水，其中的氮源物质为尿素或者铵盐，所述铵盐包括硫酸铵和硝酸铵。

4.如权利要求1所述的制备米糠菌种制剂及其用于饲料发酵的方法，其特征在于，所述步骤5)中，米糠菌种制剂是经过连续二次固态发酵，逐次放大生产的。

5.如权利要求1所述的制备米糠菌种制剂及其用于饲料发酵的方法，其特征在于，所述步骤4)至步骤6)中，新鲜米糠和含0.5-1.5wt％氮源物质的纯净水或自来水无需灭菌或预处理，减少了能耗。

6.如权利要求1所述的制备米糠菌种制剂及其用于饲料发酵的方法，其特征在于，所述步骤3)至步骤6)无需按无菌操作规程进行。

7.如权利要求1所述的制备米糠菌种制剂及其用于饲料发酵的方法，其特征在于，所述步骤6)中，米糠菌种制剂按15wt％的加入量均匀拌入常规饲料中，固态发酵7-15天，制成发酵饲料。

8.如权利要求1所述的制备米糠菌种制剂及其用于饲料发酵的方法，其特征在于，所述步骤6)中，米糠菌种制剂发酵饲料能由用户自己完成；就近发酵就近使用。