CN104936607A - 稳定的TNFR:Fc融合蛋白药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种稳定的药物组合物，其包括肿瘤坏死因子受体Fc融合蛋白(TNFR:Fc)。更具体地，本发明涉及一种稳定的药物组合物，其包括肿瘤坏死因子受体Fc融合蛋白(TNFR:Fc)、磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液。本发明还涉及该组合物的制备方法、给药方法和包含该组合物的试剂盒。

Description

稳定的TNFR:Fc融合蛋白药物组合物
技术领域
本发明提供一种稳定的药物组合物，其包括肿瘤坏死因子受体Fc融合蛋白(TNFR:Fc)。本发明还涉及该组合物的制备方法、给药方法和包含该组合物的试剂盒。
背景技术
肿瘤坏死因子(TNF)α是一种细胞因子，其通过与受体结合促进炎症及相关症状。肿瘤坏死因子通过巨噬细胞和许多其它免疫细胞产生的，它涉及许多炎性疾病的发病机理，如类风湿性关节炎、牛皮癣关节炎、SLE、克罗恩氏疾病等。Hohmann等人鉴定了在TNF-α上的两个不同的受体，其存在于不同的细胞类型上，即骨髓细胞和上皮细胞(Hohmann et al.1989J Biol Chem.25,14927～34)。Brockhaus等人利用单克隆抗体证明了TNF-α和β都能与这两个具有高度亲和力的受体相结合(Brockhaus et al.1990ProcNatlAcadSci U S A.,87(8),3127～31)。
肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是炎症的中心调节器，TNF-α拮抗剂可有效地治疗炎性疾病，其中TNF-α起重要的致病作用。TNF的抑制已被证明是一种能有效治疗患有类风湿性关节炎和其它形式的炎性疾病的患者治疗方法，炎性疾病还包括银屑病、牛皮癣关节炎和强直性脊柱炎、炎性肠病等。这样的TNF-α拮抗剂有依那西普。
依那西普(Etanercept)是通过重组DNA技术产生的二聚体融合蛋白，其中可溶性基因、TNF受体2的配体结合部分与人体IgG1的Fc组分基因融合，从而得到所需的融合蛋白(US 7648702)。依那西普在CHO细胞中表达。依那西普的Fc成分缺少CH1结构域但具有CH2、CH3结构域和铰链区。该融合蛋白的分子量接近150KD，且由934个氨基酸组成。依那西普干扰TNF并充当TNF抑制剂，这是由于它可用作生物药物以治疗自身免疫疾病。它防止对患有类风湿性关节炎和牛皮癣关节炎的患者关节产生进行性破坏。
由于其独特的结构，依那西普与TNF-α的结合较内源受体更有效50～100倍(Gofeeet al.2003J Am AcadDermatol.49,S105～111,Strober 2005SeminCutan MedSurg.24；28～36)。另外，由于二聚体特性，相比内源受体而言，其可以结合2个TNFα分子，而内源受体只能结合一个。与内源性可溶形式相比，该分子与IgG的Fc区域的结合提高了半衰期。市售的依那西普有冻干和液体两种形式。
该组合物的最重要的特征是在于帮助蛋白质保持其结构构象或其活性。该组合物中蛋白质的稳定性可长期保持。也就是说，与刚开始存储时的药物组合物相比，药物组合物的多肽基本上不会失去其活性。
所有多肽都具有等电点(pI)，其通常被定义为pH，其中多肽不携带净电荷。本领域已经熟知的是，当溶液的pH等于该蛋白的等电点(pI)时，蛋白溶解度通常是最低。
蛋白质的Fab结构域的Tm是蛋白质热稳定性的良好指示器，且其还可以指示保存期限。蛋白质的Tm值由差示扫描量热法测定，从而能够了解蛋白质构象中的热-诱导变化，蛋白质解折叠机制和在溶液中的稳定性。较低的Tm表明给定溶液中蛋白质的稳定性较低，而较高Tm表示蛋白质的稳定性较好。蛋白质的Tm值基于所配制组合物而变化，其反过来反映在相应配方中的稳定性。
在长期储存期间，由于聚集或降解，蛋白质的含水和冻干组合物会失去蛋白质活性。蛋白质的聚集可导致免疫原性，而这并不是所期望的。由于在组合物中使用的依那西普浓度高，有可能在长期储存过程中使得蛋白质聚集。为了提高蛋白质的稳定性，可以改变现有的赋形剂的浓度，或者添加新的赋形剂来修饰该组合物。
美国专利US5,215,743、US7,648,702，美国申请US20070053906和WO2011141926公开了药物组合物，其包含水溶性组合物，水溶性组合物包含了TNF结合蛋白、缓冲液和等渗剂。
发明内容
在一实施例中，本发明是涉及一种稳定的药物组合物，其包含TNFR:Fc融合蛋白和磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种稳定的药物组合物，其包含TNFR:Fc融合蛋白、磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液和选自L-甘氨酸、尿素和2-羟丙基β-环糊精(HPBCD)的抗聚集剂。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种稳定的药物组合物，其包含TNFR:Fc融合蛋白、磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液、选自L-甘氨酸、尿素和HPBCD的抗聚集剂、以及张力剂和稳定剂。
在另一个实施方案中，本发明涉及采用本发明稳定的药物组合物治疗疾病的方法。该疾病可以是类风湿性关节炎、多关节幼年型特发性关节炎、牛皮癣性关节炎、强直性脊柱炎或斑块状银屑病。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种含有本发明的药物组合物的试剂盒或容器。
下面通过一个或多个实施例来具体阐述本发明，该具体阐述不用于限制于本发明的范围。本发明的其它特征、目的和优点将体现在说明书和权利要求书中。
具体实施方式
本发明提供了一种稳定的药物组合物，其包含了与人免疫球蛋白的Fc部分融合的TNFR分子(TNFR:Fc融合蛋白)。更具体地，本发明涉及一种在磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液中的稳定的依那西普药物组合物，该组合物具有较低的降解可能性。
在本发明的一个实施例中，TNFR:Fc融合蛋白是依那西普。
在美国专利US 7648702和WO2011141926申请中报道称:在依那西普药物组合物中，采用磷酸盐缓冲液，且以L-甘氨酸作为抗聚集剂的依那西普的稳定性不如采用磷酸盐缓冲液及以其它氨基酸，如精氨酸、脯氨酸、赖氨酸、天冬氨酸作为抗聚集剂的依那西普的稳定性。WO2011141926申请披露了所述组合物包括磷酸盐缓冲液、依那西普和作为抗聚集剂的L-甘氨酸，其表现出聚集和分裂产物。
研究在不同的缓冲液和使用不同的抗聚集剂中的依那西普组合物时发现:在5℃和40℃，包含了磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液和以L-甘氨酸作为抗聚集剂的依那西普组合物与包含了磷酸盐缓冲液和以L-甘氨酸作为抗聚集剂的依那西普组合物相比，前者表现出良好的稳定性。
如在具体的实施例中阐述的，对基本上由磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液和作为抗聚集剂的L-甘氨酸形成的依那西普的稳定性进行了评估，该组合物在5℃条件下经过了6个月稳定性试验和在40℃条件下存储2周后试验(应力条件下稳定性的研究)。通过SEC测定表明:相对于聚集产品％和降解产物可以确定，相比包含了磷酸盐缓冲液的组合物，包含了磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液系统的组合物被确定为更优良。
此处所用的稳定药物组合物是指TNFR:Fc融合蛋白，其具有以下特征:
1、相比包含了磷酸盐缓冲液、精氨酸和氯化钠的依那西普组合物，包含了磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液的TNFR:Fc融合蛋白的稳定药物组合物表现出改善的稳定性。在40℃条件下存储2周后，通过SEC测定表明:包含了磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液和作为抗聚集剂的L-甘氨酸的依那西普组合物的聚集％较少。
2、在40℃条件下存储2周后，通过SEC测定表明:类似于包括磷酸盐缓冲液、精氨酸和氯化钠的新型的组合物依那西普，包含了磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液的TNFR:Fc融合蛋白的稳定药物组合物表现出小于5％左右分子量杂质。
3、在40℃条件下储存2周后，通过SEC测定表明:包含了磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液、甘氨酸的TNFR:Fc融合蛋白的稳定药物组合物表现出约8％的左右分子量杂质。而包括磷酸盐缓冲剂，以甘氨酸作为抗聚集剂的依那西普组合物显示出有15％的杂质。
在另一个实施方案中，本发明涉及磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液中的依那西普药物组合物及其他抗聚集剂磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液，所述其他抗聚集剂为尿素、HPBCD。
在获得了改进了稳定性的包含了磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液的依那西普组合物后，对来自其他化合物(除了氨基酸以外)的其他抗聚集剂进行了试验。
可以观察到:包含了磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液的依那西普稳定药物组合物还包含尿素和HPBCD。可以理解，这意味着相比开始存储时的状态，依那西普药物组合物基本上不丧失其活性。术语“基本上”是指相比开始处存储时组合物的活性，其活性失去不会超过20％，或更优选不超过15％，或甚至更优选不超过10％，最优选不超过5％。本发明的药物组合物适合长期存储。这里所使用“长期存储的”是指该药物组合物可以稳定存储1个月以上、优选超过6个月或12个月，更优选超过24个月。
肿瘤坏死因子α(TNF-α)是细胞因子组的成员，该细胞因子可以刺激急性期反应，因此是参与全身性炎症的细胞因子。TNF-α能够诱导炎症，诱导凋亡细胞死亡，从而抑制肿瘤发生和病毒复制。TNF-α调节异常的生成已牵涉到的许多人类疾病，如自身免疫疾病、关节强硬性脊椎炎、幼年型类风湿性关节炎、银屑病、牛皮癣关节炎、类风湿性关节炎、Wegener's疾病(肉芽肿病)、克罗恩病或炎性肠病、慢性阻塞性肺病(COPD)、丙型肝炎、子宫内膜异位、哮喘、恶病质、特应性皮炎、阿尔茨海以及癌症。
TNFR:Fc的剂量取决于疾病、疾病的严重程度、患者的临床史和对(现有)治疗的响应，可以由医生调节和监控剂量。药物组合物可以通过肠胃外给药，如皮下给药、肌内注射、静脉注射、腹膜内给药、脑脊管水腔给药、关节内给药、滑膜内给药和/或鞘内通过快速浓注或连续输注给药。
在一个实施例中，TNFR:Fc可以给药于成人或青少年患者，其中给药量可以约为1～80mg。该剂量可以每周给药一次或一周给药两次。此外，所述剂量可每周给药一次、每两周给药一次，或分开几周给药，例如3周。该治疗剂量和持续时间可以根据每个患者的反应和要求变化。
在另一个实施方案中，对于青少年和小儿患者，合适的治疗方案可以为TNFR:Fc按照0.4mg/kg～5mg/kg剂量，每周一次或多次给药。
在治疗成人类风湿性关节炎的情况下，TNFR:Fc可以按照每周两次，每次25mg剂量给药或每周一次50mg剂量给药。
在治疗牛皮癣关节炎的情况下，TNFR:Fc可以按照每周两次，每次25mg剂量给药或每周一次50mg剂量给药。
在治疗强直性脊柱炎的情况下，TNFR:Fc可以按照每周两次，每次25mg剂量给药或每周一次50mg剂量给药。
在治疗成人斑块状银屑病的情况下，TNFR:Fc的推荐剂量是每周两次，每次25mg剂量给药或每周一次50mg剂量给药。在治疗儿科斑块状银屑病的情况下，TNFR:Fc的推荐剂量为每周0.8mg/Kg，每周最大用量为50mg。
在治疗多关节幼年型特发性关节炎的情况下，TNFR:Fc的推荐剂量为每周0.8mg/Kg，每周最大用量为50mg。
在肾和肝脏损伤的情况下不需要调节剂量。
在第二方面，本发明涉及一种试剂盒，其包括根据所述第一方面的组合物和本发明的组合物的使用说明。
在一个优选的实施方案中，该组合物容纳于预填充的注射器中。在另一个优选的实施方案中，该组合物容纳于预填充的小瓶中。所述试剂盒可以包括一个或多个单位剂型的含有本发明的药物组合物。
可以使用任何合适的注射器或小瓶或药筒。所述试剂盒还可以包括装在另一个辅助容器的本发明所述药物组合物，例如在自动注射器内。预充式注射器可包含水溶液形式组合物。注射器可以进一步为自动注射器，其通常是仅供单次使用的一次性物品，例如，其体积可以为0.1～1mL。然而，注射器或自动注射器也可以多次使用或多剂量使用。所述小瓶可含有冻干或水溶液状态组合物，并且可以用作为单个或多个使用装置。该小瓶体积可以为1～10mL。
所述药物组合物在2～8℃可以保持长时间无菌和稳定性。而且，在25℃贮存时可以保持高达6个月是稳定的。本发明提供了药物组合物，其基本上包含依那西普、磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液、选自L-甘氨酸、尿素和HPBCD的抗聚集剂、张力剂、稳定剂和任选的其它适用于本组合物的赋形剂。
本发明还涉及一种稳定的药物组合物，其中所述组合物是液体或冻干状态。本发明还涉及一种在容纳于预填充的注射器、小瓶、盒、或笔中的稳定药物组合物。
本发明的一个实施方案中，所用的药物的活性成分是依那西普，其采用CHO细胞通过重组DNA技术获得。组合物中的依那西普的浓度为10mg/mL～100mg/mL。在本发明的一个优选实施例中，组合物中的依那西普的浓度是10mg/mL～60mg/mL。在本发明的最优选的实施方案中，组合物中的依那西普的浓度是20mg/mL～60mg/mL。
在本发明的另一实施方案中，所述缓冲剂是磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液。在本发明的一个实施例中，组合物中缓冲剂的浓度为10mM～100mM。在本发明的一个优选实施例，组合物中的缓冲剂的浓度为10mM～50mM。在本发明的另一个优选的实施方案中，组合物中的缓冲剂的浓度为20mM～40mM。
在另一个实施方案中，本发明的组合物的pH为5～8。
在本发明的另一个实施例中，依那西普组合物包括选自L-甘氨酸、尿素和HPBCD的抗聚集剂。
在本发明的一个实施例，当抗聚集剂是L-甘氨酸，组合物中L-甘氨酸的浓度为10mM～300mM。
在另一个实施方案中，当本发明的抗聚集剂为尿素，组合物中的尿素的浓度为20mM～50mM。
在本发明的另一个实施方案中，当抗聚集剂是HPBCD，HPBCD的浓度为10mM～100mM。
在本发明的另一个实施方案中，该稳定的药物组合物还含有非肠道可接受张力剂。该张力剂选自如下物质:盐，例如氯化钠、氯化钾、氯化钙；或选自糖，如甘露醇、蔗糖、葡萄糖，或选自氨基酸，如精氨酸、半胱氨酸、组氨酸等。优选地，该张力剂是氯化钠，其浓度范围在0mM～150mM之间变化。
在本发明的另一个实施方案中，稳定的药物组合物还包含稳定剂。所述稳定剂选自如下物质:蔗糖、海藻糖、乳糖、甘露醇。优选地，稳定剂是蔗糖。本发明的组合物中稳定剂的浓度为0.5wt％～10wt％。在最优选的实施方案中，本发明的组合物中的稳定剂的浓度为0.5wt％～1.5wt％。
在本发明的另一个实施方案中，稳定的药物组合物可任选地包含螯合剂。该螯合剂选自EDTA、DTPA、HEDTA、NTA和TSP。优选地，螯合剂是EDTA。在本发明的更优选的实施方案中，EDTA的浓度为0mM～10mM。
在本发明的另一实施例中，本发明的稳定药物组合物包含稳定的依那西普、磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液、选自L-甘氨酸、尿素或HPBCD的抗聚集剂、作为稳定剂的蔗糖，该稳定药物组合物在温度5℃可以有较长的保存期。
在本发明的另一实施例中，本发明的稳定药物组合物包含稳定的依那西普、磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液、选自L-甘氨酸、尿素或HPBCD的抗聚集剂、作为稳定剂的蔗糖，该稳定药物组合物在温度5℃可以有较长的保存期。
在本发明的另一实施例中，本发明的稳定药物组合物包含稳定的依那西普、磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液、选自L-甘氨酸、尿素或HPBCD的抗聚集剂、作为稳定剂的蔗糖，该稳定药物组合物在40℃可以有2周的保存期。
在本发明的另一实施例中，本发明的稳定药物组合物包含稳定依那西普、磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液、选自L-甘氨酸、尿素或HPBCD的抗聚集剂、作为稳定剂的蔗糖，这为药物组合物提供了更好的稳定性，使其可以在更长的时间段内维持活性，提供更长的保存期。
在另一个实施方案中，根据所述第一方面，本发明涉及一种药物组合物的制备方法，该药物组合物包含TNFR:Fc、磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液和选自L-甘氨酸、尿素和HPBCD的稳定剂。
在一个优选的实施方案中，该方法可以进一步包括以下步骤:加入至少一种张力剂，如氯化钠；稳定剂，如蔗糖和任选如上定义的螯合剂。
在另一实施方案中，所述方法还包括冻干步骤，其可在加入至少一种张力剂、和/或如上定义的赋形剂步骤之前或之后。
根据本发明的一个优选实施方案中，药物组合物包含10mg/mL～100mg/mL依那西普、约10mM～100mM的磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液、约10mM～300mM的L-甘氨酸、约0mM～150mM的氯化钠和0.5wt％～10wt％蔗糖，其pH范围约为5～7。
根据本发明的另一个优选实施例，该药物组合物包含10mg/mL～100mg/mL的依那西普、约10mM～100mM的磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液、约1mg/mL～18mg/mL尿素、约1mM～150mM的氯化钠，大约0.5wt％～2wt％的蔗糖和约0mM～10mM的EDTA，其pH范围为5～7。
在本发明另一个优选实施例中，药物组合物含有10mg/mL～100mg/mL的依那西普、约10mM～100mM的磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液、约20mg/mL～30mg/mL的HPBCD，约1mM～150mM的氯化钠，大约0.5wt％～2wt％的蔗糖和约0mM～10mM的EDTA，其pH范围为5～7。
以下通过参考下面的实施例以更全面地理解本发明。然而，这些实施例不应被解释为限制本发明的范围。
实验部分
所示的实施例中使用的活性成分依那西普是采用CHO细胞通过DNA重组获得的。将CHO细胞以分批补料方法培养。通过标准纯化和过滤过程纯化无细胞得到依那西普，包括亲和层析和进一步的色谱层析和过滤步骤。将来自不同的生产批次依那西普用于不同的实施例中，也就是实施例2和实施例5。
稳定的依那西普药物组合物的一般制备方法
依那西普药物组合物的制备方法包括2个步骤。即按配方批量配制和填充。该按配方批量配制是这样制备的:采用配方缓冲液稀释药物以得到所需浓度的药物产品。该配方缓冲液是通过将需要量的柠檬酸三钠二水合物和磷酸二氢钠二水合物加入到WFI然后混合得到的。此外，加入所需量的其它赋形剂至上述溶液中，调节pH之后采用WFI调整所需体积。然后将该配方缓冲液在无菌条件下采用消毒等级0.22μPVDF过滤器进行过滤。按照批次计算，在无菌条件下稀释所需量的依那西普(同一制剂中)。
通过大小排阻-高效液相层析法分析(SE-HPLC)分析在不同时间段存储在5℃，25℃和40℃状态下的组合物。采用SE-HPLC根据它们的大小将蛋白质和其相关杂质分离。因此，可以有效地检测依那西普聚集性和片段化。
下面的实施例是用于说明本发明而不是限制本发明的范围。
实施例1
依那西普药物组合物的制备方法包括两个步骤。即按配方批量配制和填充。该按配方批量配制是这样制备的:采用配方缓冲液稀释药物以得到所需浓度的药物产品。制备缓冲液是通过将所需量(如表1中所提到的)的柠檬酸三钠二水合物和磷酸二氢钠二水合物加入到WFI然后混合得到的。此外，将所需量的作为抗聚集药物的甘氨酸和其它赋形剂加入至上述溶液中，调节pH之后采用WFI调整所需体积。然后将该配方缓冲液在无菌条件下采用消毒等级0.22μPVDF过滤。按照批次计算，采用过滤后配制缓冲液稀释得到所需浓度50±5mg/m散装依那西普。散装配制是通过消毒等级0.22μPVDFF过滤器进行过滤，在无菌条件下装填至预填充注射器，然后将PFSs在各种温度上充电测得稳定性。表1描述了采用L-甘氨酸作为抗聚集剂获得的75mM浓度的组合物。
表1:实施例1的组合物
赋形剂 浓度 体积摩尔浓度
依那西普 50mg/mL 50mg/mL
NaH2PO4二水合物 2.6mg/mL 16.6mM
柠檬酸三钠二水合物 4.5mg/mL 15.3mM
蔗糖 10mg/mL 1％
NaCl 3.8mg/mL 65mM
L-甘氨酸 5.6mg/mL 75mM
实施例2
对在包含不同的缓冲液和使用不同抗聚集剂的依那西普组合物进行研究。对包含磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液和以L-甘氨酸作为抗聚集剂，分析了在5℃保存6个月和在40℃保存2周的依那西普组合物的短期稳定性，及分析了包含磷酸盐缓冲液与以L-甘氨酸作为抗聚集剂的依那西普组合物的短期稳定性，其中其它赋形剂保持不变，通过使用SE-HPLC进行分析，分析结果见表2。表2示出了不同的依那西普组合物的稳定性。
表2:在5℃和40℃的稳定性研究
如表2所示，包含磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液和以L-甘氨酸作为抗聚集剂的依那西普组合物与包含磷酸盐缓冲液和L-甘氨酸作为抗聚集剂的依那西普组合物相比，前者在5℃和40℃表现出较好的稳定性。
实施例3
该依那西普药物组合物的制备方法与实施例1所述的方法类似，其中所用的抗聚集剂为尿素。采用尿素为抗聚集剂的组合物如表3所示。
实施例3的组合物
赋形剂 浓度 体积摩尔浓度
依那西普 50mg/mL 50mg/mL
NaH2PO4 2.6mg/mL 16.6mM
柠檬酸三钠 4.5mg/mL 15.3mM
蔗糖 10mg/mL 1％
NaCl 5.8mg/mL 100mM
EDTA 1.8mg/mL 5mM
尿素 1.5mg/mL 25mM
实施例4
该依那西普药物组合物的制备方法与实施例1所述的方法类似，其中抗聚集剂为HPBCD。采用HPBCD作为聚集剂的组合物如表4所示。
表4:实施例4的组合物
赋形剂 浓度 体积摩尔浓度
依那西普 50mg/mL 50mg/mL
NaH2PO4 2.6mg/mL 16.6mM
柠檬酸三钠 4.5mg/mL 15.3mM
蔗糖 10mg/mL 1％
NaCl 5.8mg/mL 100mM
EDTA 1.8mg/mL 5mM
HPBCD 25mg/mL 17.8mM
实施例5
将包含磷酸盐缓冲液和以精氨酸作为抗聚集剂的新型依那西普组合物(组合物1)和包括磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液和以L-甘氨酸作为抗聚集剂的依那西普组合物(组合物2)填装在PFSs中，并不间断地长期充电保持稳定性。采用SE-HPLC分析在5℃储存9个月后，在25℃存储6个月后，在40℃下储存2周后的蛋白质纯度的数据，结果见表5。
表5:对比稳定性数据
组合物1 组合物2
0天的纯度％ 97.5 97.6
在5℃储存9个月后的纯度％ 96.9 96.9
在25℃存储6个月后的纯度％ 94.1 93.5
在40℃下储存2周的纯度％ 95.3 95.1
类似地，在实施例3和实施例4的组合物中，即包含磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液和以尿素作为抗聚集剂的依那西普的组合物和包括磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液和以HPBCD作为抗聚集剂的依那西普的组合物，将上述组合物填充在在PFSs并研究了组合物在5°，25°和40℃的稳定性，对这些组合物的稳定性进行了评价，发现其可与所述组合物1保存2周的时间相媲美。
实施例6
配制用于冻干研究用的依那西普并采用表6中药物组合物进行充分透析。将分别配制的组合物装在小瓶中，半塞住并进行冻干。
表6:实施例6的组合物
赋形剂 组合物3 组合物4
依那西普 50mg/mL 50mg/mL
NaH2PO4二水合物 2.6mg/mL 2.6mg/mL
柠檬酸三钠 二水合物 4.5mg/mL 4.5mg/mL
蔗糖 3mg/mL 1mg/mL
L-甘氨酸 11.24mg/mL 22.48mg/mL
本申请中所有引用的专利、专利申请和出版物在此全文引入作为参考目的，其程度如同每个单独的专利、专利申请或出版物单独公开的效力。
虽然某些实施方案和实施例已经如上详细描述，但是本领域普通技术人员将清楚地理解，在不脱离本发明的教导下，可以对实施例进行许多修改。

Claims (20)

1.一种稳定的药物组合物，其特征在于，包含TNFR:Fc融合蛋白和磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液。
2.一种稳定的药物组合物，其特征在于，包含TNFR:Fc融合蛋白、磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液和抗聚集剂，所述抗聚集剂选自如下物质:L-甘氨酸、尿素和2-羟丙基β-环糊精(HPBCD)。
3.如权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述组合物的pH范围为5～7。
4.如上述权利要求任意一项所述的组合物，其特征在于，所述TNFR:Fc融合蛋白为依那西普。
5.一种稳定的药物组合物，其特征在于，包含TNFR:Fc融合蛋白、磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液、抗聚集剂、张力剂和稳定剂，所述抗聚集剂选自L-甘氨酸、尿素和2-羟丙基β-环糊精(HPBCD)。
6.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述张力剂选自如下盐:氯化钠、氯化钾和氯化钙；或所述张力剂选自如下糖类:甘露醇、蔗糖、葡萄糖和氨基酸。
7.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述稳定剂选自蔗糖和海藻糖。
8.如权利要求5所述稳定的药物组合物，其特征在于，包括依那西普、磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液、作为抗聚集剂的L-甘氨酸、作为张力剂的氯化钠和作为稳定剂的蔗糖。
9.如权利要求5所述稳定的药物组合物，其特征在于，包含依那西普、磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液、作为抗聚集剂的尿素、作为张力剂的氯化钠、作为稳定剂的蔗糖和作为螯合剂的EDTA。
10.如权利要求5所述的稳定的医药组合物，其特征在于，包含依那西普、磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液、作为抗聚集剂的HPBCD、作为张力剂的氯化钠、作为稳定剂的蔗糖和作为螯合剂的EDTA。
11.如上述权利要求中任意一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物是无菌的并以肠胃外给药。
12.如权利要求11所述的组合物，其特征在于，所述组合物为液体。
13.如权利要求11所述的组合物，其特征在于，所述组合物为冻干的。
14.如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，包含10mg/mL～100mg/mL的依那西普、约10mM～100mM的磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液、约10μM～300μM的L-甘氨酸、约0mM～150mM的氯化钠和约0.5wt％～10wt％的蔗糖。
15.如权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，包含10mg/mL～100mg/mL的依那西普、约10mM～100mM的磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液、约1mg/mL～18mg/mL的尿素，约1mM～150mM的氯化钠、约0.5wt％～2wt％的蔗糖和约0mM～10mM的EDTA。
16.如权利要求10所述的药物组合物，其特征在于，包含10mg/mL～100mg/mL依那西普、约10mM～100mM的磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液、约20mg/mL～30mg/mL的HPBCD、约1mM～150mM的氯化钠、约0.5wt％～2wt％的蔗糖和约0mM～10mM的EDTA。
17.一种试剂盒，其特征在于，包含上述任意一项权利要求所述的组合物和所述组合物的使用说明。
18.如权利要求17所述的试剂盒，其特征在于，所述组合物为液体或冻干粉末。
19.如权利要求17所述的试剂盒，其特征在于，所述组合物贮存在预填充的无菌注射器或小瓶或药筒中。
20.一种治疗有此需求的哺乳动物的方法，其特征在于，包括施用治疗有效量的如权利要求1至16中任意一项所述的药物组合物。
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