CN104928346A - 牛奶中细菌总数的检测方法 - Google Patents

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熊开胜
张海防
谢建庭
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Abstract

本发明公开了一种牛奶中细菌总数的检测方法，先将牛奶倒入无菌生理盐水中，100～150prm震荡2min，在所得混合液中加入二甲苯，搅拌，1000～1500rpm离心5～15min，去除上层；然后在所得下层留存液中加入含胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的混合酶液，40℃水浴5min，所得酶解液用纳滤膜浓缩，浓缩液经次甲基蓝染色液染色后，用微生物检测仪检测计数。本发明的检测方法与国标方法进行比较不存在显著性差异，其相关性高，检测结果准确，检测时间短（2h），检出限为20～106cfu/mL，可以应用于实际检测。

Description

牛奶中细菌总数的检测方法
技术领域
本发明属于食品分析技术领域，具体涉及一种牛奶品中细菌总数的检测方法。
背景技术
牛奶是最古老的天然饮料之一，也是现代人类生活中不可或缺的高营养价值食品。目前，我国乳制品行业发展迅速，2012年我国液态乳制品消费量约达2200万吨，乳品生产技术和设备更新快，市场竞争激烈。同发达国家相比，我国在规模、技术、产品质量方面都存在较大差距，外国品牌进入中国市场给本土产业造成很大冲击。产品质量方面的差距，究其根本原因是原料奶质量参差不齐，我国目前80％是手工挤奶，奶牛的散养和个体户不注意奶牛疫病防治，导致原料奶细菌超标、抗生素含量过高等问题突出，严重制约着乳制品质量的提高。
对于依赖于市场的企业来说，乳品的质量安全事关乳品企业的生死存亡。近年来，食品变质和食物中毒事件屡有发生，不断有一些企业倒台或者遭到重创，也严重削弱了消费者对国内食品企业的信心，对整个行业造成不利影响。原料奶中细菌微生物的多少，直接决定了后续加工保藏投入和产品的质量，企业对原料奶的要求不断提高，质量差的原料奶越来越难以进入企业的生产线。
目前我国现行的牛奶中微生物检验标准有食品卫生微生物学检验国家标准GB47892-2010和进出口商品检验行业标准SN0330-94，另外国际上的主流检测标准有AOAC990.12和FDA BAM Chapter 3-2001。这些标准检测方法都是基于平板培养和菌落计数，需要时间48h左右，对于厂家收购生鲜牛奶和评价分级来说，检测过程费时费力，浪费大量人力、物力、财力，大大提高了奶制品的生产成本，并且容易导致在原料奶的储藏和运输环节造成二次污染，难以进行监测和控制，影响了生鲜奶源的及时使用，对食品企业、国家和社会造成很大的经济损失。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足而提供一种牛奶中细菌总数的检测方法，该检测方法检测结果准确，检测时间短(2h)，检出限为20～106cfu/mL，可以应用于实际检测。
牛奶中细菌总数的检测方法，包括以下步骤：
步骤1，将牛奶倒入无菌生理盐水中，100～150prm震荡2min，得混合液；
步骤2，在步骤1所得混合液中加入二甲苯，搅拌，1000～1500rpm离心5～15min，去除上层；
步骤3，在步骤2所得下层留存液中加入含胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的混合酶液，40℃水浴5min；
步骤4，将步骤3所得酶解液用纳滤膜浓缩；
步骤5，取步骤4所得浓缩液，经次甲基蓝染色液染色后，用微生物检测仪检测计数。
作为上述发明的进一步改进，步骤1中牛奶和无菌生理盐水的体积比为5～15：50～100。
作为上述发明的进一步改进，步骤2中混合液和二甲苯的体积比为5～15：2～7。
作为上述发明的进一步改进，步骤3中下层留存液和混合酶液的体积比为50～100：3～9。
作为上述发明的进一步改进，步骤3中混合酶液中胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的浓度分别为0.2～0.6g/mL、0.1～0.7g/mL、0.3～0.9g/mL。
作为上述发明的进一步改进，步骤4中采用孔径为0.45μm、截流液体积为70μL的聚醚砜微孔滤膜浓缩。
作为上述发明的进一步改进，步骤5中次甲基蓝染色液浓度为0.01wt％。
本发明的检测方法与国标方法进行比较不存在显著性差异，其相关性高，检测结果准确，检测时间短(2h)，检出限为20～106cfu/mL，可以应用于实际检测。
具体实施方式
实施例1
牛奶中细菌总数的检测方法，包括以下步骤：
步骤1，将牛奶倒入无菌生理盐水中，100prm震荡2min，得混合液；
步骤2，在步骤1所得混合液中加入二甲苯，搅拌，1000rpm离心15min，去除上层；
步骤3，在步骤2所得下层留存液中加入含胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的混合酶液，40℃水浴5min；
步骤4，将步骤3所得酶解液用纳滤膜浓缩；
步骤5，取步骤4所得浓缩液，经次甲基蓝染色液染色后，用微生物检测仪检测计数。
步骤1中牛奶和无菌生理盐水的体积比为5：50。
步骤2中混合液和二甲苯的体积比为5：2。
步骤3中下层留存液和混合酶液的体积比为50：3。
步骤3中混合酶液中胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的浓度分别为0.2g/mL、0.1g/mL、0.3g/mL。
步骤4中采用孔径为0.45μm、截流液体积为70μL的聚醚砜微孔滤膜浓缩。
步骤5中次甲基蓝染色液浓度为0.01wt％。
实施例2
牛奶中细菌总数的检测方法，包括以下步骤：
步骤1，将牛奶倒入无菌生理盐水中，110prm震荡2min，得混合液；
步骤2，在步骤1所得混合液中加入二甲苯，搅拌，1050rpm离心10min，去除上层；
步骤3，在步骤2所得下层留存液中加入含胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的混合酶液，40℃水浴5min；
步骤4，将步骤3所得酶解液用纳滤膜浓缩；
步骤5，取步骤4所得浓缩液，经次甲基蓝染色液染色后，用微生物检测仪检测计数。
步骤1中牛奶和无菌生理盐水的体积比为9：75。
步骤2中混合液和二甲苯的体积比为10：6。
步骤3中下层留存液和混合酶液的体积比为85：7。
步骤3中混合酶液中胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的浓度分别为0.4g/mL、0.3g/mL、0.6g/mL。
步骤4中采用孔径为0.45μm、截流液体积为70μL的聚醚砜微孔滤膜浓缩。
步骤5中次甲基蓝染色液浓度为0.01wt％。
实施例3
牛奶中细菌总数的检测方法，包括以下步骤：
步骤1，将牛奶倒入无菌生理盐水中，140prm震荡2min，得混合液；
步骤2，在步骤1所得混合液中加入二甲苯，搅拌，1250rpm离心8min，去除上层；
步骤3，在步骤2所得下层留存液中加入含胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的混合酶液，40℃水浴5min；
步骤4，将步骤3所得酶解液用纳滤膜浓缩；
步骤5，取步骤4所得浓缩液，经次甲基蓝染色液染色后，用微生物检测仪检测计数。
步骤1中牛奶和无菌生理盐水的体积比为14：95。
步骤2中混合液和二甲苯的体积比为13：6。
步骤3中下层留存液和混合酶液的体积比为65：8。
步骤3中混合酶液中胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的浓度分别为0.5g/mL、0.4g/mL、0.7g/mL。
步骤4中采用孔径为0.45μm、截流液体积为70μL的聚醚砜微孔滤膜浓缩。
步骤5中次甲基蓝染色液浓度为0.01wt％。
实施例4
牛奶中细菌总数的检测方法，包括以下步骤：
步骤1，将牛奶倒入无菌生理盐水中，150prm震荡2min，得混合液；
步骤2，在步骤1所得混合液中加入二甲苯，搅拌，1500rpm离心5min，去除上层；
步骤3，在步骤2所得下层留存液中加入含胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的混合酶液，40℃水浴5min；
步骤4，将步骤3所得酶解液用纳滤膜浓缩；
步骤5，取步骤4所得浓缩液，经次甲基蓝染色液染色后，用微生物检测仪检测计数。
步骤1中牛奶和无菌生理盐水的体积比为15：100。
步骤2中混合液和二甲苯的体积比为15：7。
步骤3中下层留存液和混合酶液的体积比为100：9。
步骤3中混合酶液中胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的浓度分别为0.6g/mL、0.7g/mL、0.9g/mL。
步骤4中采用孔径为0.45μm、截流液体积为70μL的聚醚砜微孔滤膜浓缩。
步骤5中次甲基蓝染色液浓度为0.01wt％。
将实施例1至4所得结果与国标GB/T4789.2-2010检测结果进行比较，结果如下：
实施例1 实施例2 实施例3 实施例4
本发明方法所测结果(cfu/mL) 83 7390 163700 6940000
国标法所测结果(cfu/mL) 91 6954 155171 6323493
由上表可知，本发明提供的牛奶中细菌总数的检测方法与国标GB/T4789.2-2010的检测方法不存在显著差异。

Claims (7)

1.牛奶中细菌总数的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1，将牛奶倒入无菌生理盐水中，100～150prm震荡2min，得混合液；
步骤2，在步骤1所得混合液中加入二甲苯，搅拌，1000～1500rpm离心5～15min，去除上层；
步骤3，在步骤2所得下层留存液中加入含胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的混合酶液，40℃水浴5min；
步骤4，将步骤3所得酶解液用纳滤膜浓缩；
步骤5，取步骤4所得浓缩液，经次甲基蓝染色液染色后，用微生物检测仪检测计数。
2.根据权利要求1所述的牛奶中细菌总数的检测方法，其特征在于：步骤1中牛奶和无菌生理盐水的体积比为5～15：50～100。
3.根据权利要求1所述的牛奶中细菌总数的检测方法，其特征在于：步骤2中混合液和二甲苯的体积比为5～15：2～7。
4.根据权利要求1所述的牛奶中细菌总数的检测方法，其特征在于：步骤3中下层留存液和混合酶液的体积比为50～100：3～9。
5.根据权利要求1所述的牛奶中细菌总数的检测方法，其特征在于：步骤3中混合酶液中胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的浓度分别为0.2～0.6g/mL、0.1～0.7g/mL、0.3～0.9g/mL。
6.根据权利要求1所述的牛奶中细菌总数的检测方法，其特征在于：步骤4中采用孔径为0.45μm、截流液体积为 70μL 的聚醚砜微孔滤膜浓缩。
7.根据权利要求1所述的牛奶中细菌总数的检测方法，其特征在于：步骤5中次甲基蓝染色液浓度为0.01wt%。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105671121A (zh) * 2016-03-10 2016-06-15 山东五洲检测有限公司 一种牛奶中微生物的检测方法
CN106367470A (zh) * 2016-08-30 2017-02-01 郑园 一种冷冻乳制品菌含量的检测方法
CN113136412A (zh) * 2021-04-22 2021-07-20 浙江珂瑞康生物医疗科技有限公司 用于含可溶性蛋白生物医用材料的生物负载测定处理液

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101287843A (zh) * 2005-07-21 2008-10-15 森永乳业株式会社 用于检测微生物的方法及试剂盒

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101287843A (zh) * 2005-07-21 2008-10-15 森永乳业株式会社 用于检测微生物的方法及试剂盒

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
郑东辉: "乳制品中细菌总数、酵母菌和霉菌快速检测方法的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技Ⅰ辑》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105671121A (zh) * 2016-03-10 2016-06-15 山东五洲检测有限公司 一种牛奶中微生物的检测方法
CN106367470A (zh) * 2016-08-30 2017-02-01 郑园 一种冷冻乳制品菌含量的检测方法
CN113136412A (zh) * 2021-04-22 2021-07-20 浙江珂瑞康生物医疗科技有限公司 用于含可溶性蛋白生物医用材料的生物负载测定处理液

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