CN104906108A

CN104906108A - 白桦脂醇、白桦脂酸的新用途

Info

Publication number: CN104906108A
Application number: CN201410092538.XA
Authority: CN
Inventors: 乔卫; 段宏泉; 孙燕; 孟飞; 杨金荣
Original assignee: Tianjin Medical University
Current assignee: Tianjin Medical University
Priority date: 2014-03-13
Filing date: 2014-03-13
Publication date: 2015-09-16

Abstract

本发明公开了一种白桦脂醇、白桦脂酸镇静催眠和抗抑郁的新用途。试验证明，白桦脂醇、白桦脂酸镇静催眠和抗抑郁药效显著。见效快、安全性好、无毒副作用、无成瘾性、适合长期使用。可为预防和治疗失眠症、抑郁症提供了一种新的药物来源。

Description

白桦脂醇、白桦脂酸的新用途

技术领域

本发明涉及医药领域，确切地说涉及一种白桦脂醇、白桦脂酸作为镇静催眠药、抗抑郁药物的应用。

背景技术

随着社会竞争加剧、生活节奏加快，失眠、抑郁症的发病率正急剧上升。临床研究表明：抑郁症患者常表现出严重的失眠。而失眠又会造成注意力不集中、全身不适、无精打采、反应迟钝、头痛及精神异常。严重者又会导致抑郁症、焦虑症和精神分裂，植物神经紊乱等功能性疾病。但目前大部分西药都存在抗抑郁谱窄、毒副作用较大，病人依从性较差、易产生耐药性、容易复发和费用较高的缺点，使其临床应用受限。而中药具有多成分、多靶点的特点，可通过多环节起作用，具有协同效应，及毒副作用低等优势。所以，研制和开发具有高效无毒、多环节作用的中药有效成分药物，已成为国际制药业开发抗抑郁、镇静催眠药物的趋势。

在筛选解郁安神天然活性成分过程中，本发明人发现酸枣仁皂苷的化学成分中含有白桦脂醇、白桦脂酸，具有明显的抗抑郁及镇静催眠作用。白桦脂醇（betulin）、白桦脂酸（betulinicacid）均属于羽扇豆烷型五环三萜类化合物，广泛存在于自然界中，在酸枣仁、白桦树、滇刺枣等植物中均有存在。白桦脂醇、白桦脂酸具有多种生物活性，具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、防治衰老等作用。授权公告号为CN200610119542的发明专利公开了一种桦树皮中白桦脂醇的提取纯化方法，授权公告号为CN200610067268的发明专利公开了包括白桦脂醇、白桦脂酸等五环三萜类化合物作为糖原磷酸化酶抑制剂的制药用途。但至今未见白桦脂醇、白桦脂酸在制备镇静催眠药、抗抑郁药物中的应用。

白桦脂醇、白桦脂酸结构式：

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供了白桦脂醇、白桦脂酸抗抑郁、镇静催眠的新用途，可为预防和治疗失眠症、抑郁症提供了一种新的药物来源。

本发明的技术方案是：

白桦脂醇在制备预防和治疗失眠症、抑郁症药物中的应用。

白桦脂酸在制备预防和治疗失眠症、抑郁症药物中的应用。

一种包含白桦脂醇的抗失眠、抑郁的药物制剂，剂型为口服剂型或吸入剂。所述口服剂型为口腔崩解片。

一种包含白桦脂酸的抗失眠、抑郁的药物制剂，剂型为口服剂型或吸入剂。所述口服剂型为口腔崩解片。

在本发明中，所述白桦脂醇、白桦脂酸可通过市售或已知方法制备得到。

其中所述的白桦脂醇、白桦脂酸的纯度≥50%，优选为≥80%，进一步优选为≥95%。

本发明的优点是：本发明揭示了具有预防和治疗失眠症、抑郁症的作用。无常规抗抑郁药及镇静催眠药物的兴奋不安、震颤、成瘾性等缺点，安全性好，适宜长期适宜，可以对抑郁症兼失眠患者进行调理性治疗，显示两个化合物具有开发应用前景。

本发明白桦脂醇、白桦脂酸既可采用单一成分制备预防和治疗失眠症、抑郁症的药物，又可以与其它活性成分（例如酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、酸李碱等化合物）等共同组方，制备多靶点的抗抑郁、镇静催眠药物。

附图说明

图1酸枣仁皂苷样品HPLC图；

其中3、4号峰分别为白桦脂酸、白桦脂醇。

具体实施方式

以下通过实施例来进一步阐述本发明，但不限制本发明。

实施例1白桦脂醇、白桦脂酸对阈上剂量戊巴比妥钠镇静催眠协同作用的影响

1.材料

1.1实验动物：实验动物：雄性ICR小鼠（SPF级，体重20±2g）购于北京华阜康生物科技股份有限公司中国医学科学院中国协和医科大学实验动物研究所，合格证号：SCXK（京）2009-0008。实验前在实验室饲养3天，适应环境。室温22±2℃，相对湿度65%～70%。光照12h，自由饮食、摄水。于每日上午9：00～10：00灌胃给药一次，连续灌胃5天。

1.2药物与试剂：白桦脂酸对照品，白桦脂醇对照品（质量分数均≥98%，上海顺勃生物工程技术有限公司提供）；戊巴比妥钠（广州化学试剂厂，批号：090601）解郁安神颗粒（吉林百姓堂药业有限公司，批号：20100103075）。

2.实验方法

各组小鼠灌胃给药0.5h后腹腔注射阈上剂量戊巴比妥钠，剂量为40mg/kg。注射后开始计时，记录睡眠潜伏期及睡眠时间。以翻正反射消失时为睡眠起始时间，翻正反射恢复为睡眠结束时间。腹腔注射后到睡眠起始这段时间为睡眠潜伏期，潜伏期超过15min，按15min记录。

数据以均值±标准差的形式表示。采用单因素方差分析法进行统计学分析。数据由SPSS软件处理，p<0.05或p<0.01具有显著性差异。

3.实验结果

实施例的白桦脂醇、白桦脂酸对阈上剂量戊巴比妥钠镇静催眠协同作用的影响

各组小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间结果见表1。

表1实施例的白桦脂醇、白桦脂酸对小鼠阈上剂量戊巴比妥钠镇静催眠协同作用影响

组别	剂量	睡眠潜伏期（min）	睡眠时间（min）
				模型对照组（蒸馏水）	0.1ml/10g	4.14±1.07	34.57±11.54
解郁安神颗粒组	1.25g/kg	4.01±0.98	83.72±20.32
				白桦脂醇低剂量组	2mg/kg	4.43±0.98	106.86±16.47**
白桦脂醇高剂量组	4mg/kg	4.29±2.69	127.57±43.07**
				白桦脂酸低剂量组	12mg/kg	4.71±1.25	89.67±19.47
白桦脂酸高剂量组	40mg/kg	5.00±1.41	101.71±59.80*

注：*与模型对照组比较p<0.05，**与模型对照组比较p<0.01

由表1结果显示：白桦脂酸高剂量组与模型对照组比较，睡眠时间差异有统计学意义（P<0.05）。白桦脂酸低剂量组、高剂量组均可以显著延长各给药组小鼠阈上剂量戊巴比妥钠所致睡眠时间，差异有显著统计学意义（P<0.01）。

实施例2白桦脂醇、白桦脂酸对小鼠强迫游泳不动时间的影响

1.材料

1.1实验动物：实验动物：雄性ICR小鼠（SPF级，体重20±2g）购于北京华阜康生物科技股份有限公司中国医学科学院中国协和医科大学实验动物研究所，合格证号：SCXK（京）2009-0008。实验前在实验室饲养3天，适应环境。室温22±2℃，相对湿度65%～70%。光照12h，自由饮食、摄水。于每日上午9：00～10：00灌胃给药一次，连续灌胃14天。

1.2药物与试剂：白桦脂酸对照品，白桦脂醇对照品（质量分数均≥98%，上海顺勃生物工程技术有限公司提供）；盐酸氟西汀片（Lilly S.A.进口药品注册证号：H20060027）

2.实验方法

将小鼠单独放入一直径18cm，高30cm的透明玻璃缸中。玻璃缸置于安静的房间，缸中水深10cm以上，水温45℃左右。实验进行6min。实验开始时小鼠试图挣扎逃跑，但感觉无望后即停止挣扎，仅将头露出水面，肢体漂浮维持一种不动状态。记录后4min内小鼠的不动时间，用小鼠的漂浮不动时间作为判断抑郁严重程度的指标。每次实验后冲洗水缸，换水，避免影响下一只动物测试。

3.实验结果

实施例的白桦脂醇、白桦脂酸对小鼠强迫游泳不动时间的影响，结果见表2。

表2白桦脂醇、白桦脂酸对小鼠强迫游泳实验不动时间的影响

组别	剂量	累计不动时间（s）
			模型对照组（蒸馏水）	0.1ml/10g	91.1±29.2
阳性对照组（氟西汀）	7.5mg/kg	45.3±12.4*
			白桦脂醇低剂量组	2mg/kg	81.4±31.5
白桦脂醇高剂量组	4mg/kg	44.6±26.2*
			白桦脂酸低剂量组	12mg/kg	46.1±16.7*
白桦脂酸高剂量组	40mg/kg	92.3±23.2

注：*与模型对照组比较p<0.05，**与模型对照组比较p<0.01

小鼠在强迫游泳模型中表现的不动状态反映了动物的绝望行为，可模拟人类的抑郁状态。从表2中给药14天游泳实验结果看出，与模型对照组相比，阳性对照组、白桦脂酸低剂量组、白桦脂醇高剂量组差异有统计学意义（P<0.05）。

实施例3白桦脂醇、白桦脂酸对小鼠悬尾不动时间的影响

1.材料

1.1实验动物：实验动物：雄性ICR小鼠（SPF级，体重20±2g）购于北京华阜康生物科技股份有限公司中国医学科学院中国协和医科大学实验动物研究所，合格证号：SCXK（京）2009-0008。实验前在实验室饲养3天，适应环境。室温22±2℃，相对湿度65%～70%。光照12h，自由饮食、摄水。于每日上午9～10灌胃给药一次，连续灌胃14天。

1.2药物与试剂：白桦脂酸对照品，白桦脂醇对照品（质量分数均≥98%，上海顺勃生物工程技术有限公司提供）；盐酸氟西汀片（Lilly S.A.进口药品注册证号：H20060027）。

2.实验方法

于末次给药后1h，将小鼠尾部1-2cm处的部分贴在一水平木棍上，使动物成倒挂状态，其头部离台面约20cm，悬挂两侧用板隔开动物视线。观察6min，并记录后4min内小鼠的不动时间为失望时间。悬尾实验中动物不动行为的评判标准是小鼠头部向下，四肢自然下垂，脊背未向两侧弯曲。小鼠前肢有微幅移动仍视为不动。

3.实验结果

实施例的白桦脂醇、白桦脂酸对小鼠悬尾不动时间的影响

实施例的白桦脂醇、白桦脂酸对小鼠悬尾不动时间的影响，结果见表3。

表3实施例的白桦脂醇、白桦脂酸对小鼠悬尾实验不动时间的影响

组别	剂量	累计不动时间（s）
			模型对照组（蒸馏水）	0.1ml/10g	122.6±11.8
阳性对照组（氟西汀）	7.5mg/kg	78.5±20.2**
			白桦脂醇低剂量组	2mg/kg	95.0±24.5*
白桦脂醇高剂量组	4mg/kg	102.3±29.1
			白桦脂酸低剂量组	12mg/kg	73.4±25.2**
白桦脂酸高剂量组	40mg/kg	86.0±23.2**

注：*与模型对照组比较p<0.05，**与模型对照组比较p<0.01

从表中3可以看出，由给药14天悬尾结果得知，与模型对照组累计不动时间比较，白桦脂醇低剂量组有统计学意义（P<0.05）。阳性对照组、白桦脂酸低剂量组、白桦脂酸高剂量组与模型对照组相比差异存在显著统计学意义（P<0.01）。

实施例4白桦脂醇、白桦脂酸对慢性应激小鼠脑内单胺神经递质的影响

1.实验动物

雄性ICR小鼠（SPF级，体重20±2g）购于北京华阜康生物科技股份有限公司中国医学科学院中国协和医科大学实验动物研究所，合格证号：SCXK（京）2009-0008。实验前在实验室饲养1周，适应环境。室温22±2℃，相对湿度65%～70%。日光照12h，自由饮食、摄水。

2.药物与试剂

白桦脂醇对照品，白桦脂酸对照品（质量分数均≥98%，上海顺勃生物工程技术有限公司提供）；盐酸文拉法辛缓释胶囊（怡诺思，爱尔兰惠氏药厂，批号：0902052）。重酒石酸去甲肾上腺素（100169-199402，中国药品生物制品检定所）；多巴胺盐酸盐（A0305，梯希爱（上海）化成工业发展有限公司）；5-HT（157728，J&K CHEMICAL）；L-半胱氨酸（2010129，天津市博迪化工有限公司）；OPT（上海宝曼生物科技有限公司）；NaIO₄（20100715，天津市大茂化学试剂厂）。

3.实验方法

3.1动物分组和给药

小鼠随机分成7组，每组10只，分别为空白组、模型组、阳性组、白桦脂醇低剂量组（2mg/kg）、白桦脂醇高剂量组（4mg/kg），白桦脂酸低剂量组（12mg/kg）、白桦脂酸高剂量组（40mg/kg）。

3.2造模方法

以慢性不可预见性的温和刺激（CUMS），在21天内按随机安排的方法应用10种应激因素：超声30s、冷水游泳（10℃）5min、热水游泳（45℃）5min、夹尾1min、潮湿饲养12h、禁食12h、禁水12h、无垫料饲养12h、昼夜颠倒24h、倾斜饲养12h。每天分别给予两种刺激，使小鼠不可预料刺激的发生，以避免产生适应，平均每种刺激给予4次。每次应激实验均在远离饲养间的另一实验室进行。

（1）超声：超声波刺激小鼠30s。

（2）潮湿饲养：将水加入垫料使其潮湿，让小鼠在潮湿的环境中生存12h。

（3）禁食：12h断食。

（4）禁水：12h断水。

（5）倾斜饲养：将鼠笼倾斜45°饲养小鼠12h。

（6）无垫料饲养：在无垫料的鼠笼中饲养小鼠，每次12h。

（7）夹尾：将小鼠放入固定笼中，用止血钳夹住距尾根1cm处，用力不要过大，使小鼠发出哀叫声即可，持续1min。

（8）昼夜颠倒：于早7:00时将大鼠的笼子盖上黑色的塑料袋，不开灯使动物处于黑暗状态；至晚19:00时将笼子上的黑色塑料袋去掉，置于开灯的房间，使动物处于光照状态，直至次日早7:00时。

（9）冷水游泳：将动物放在盛有10℃的水桶中（水深5cm），小鼠的足后尖刚好能触及桶底，5min后将小鼠取出放回笼中。

（10）热水游泳：将动物放在盛有45℃的水桶中（水深5cm），小鼠的足后尖刚好能触及桶底，5min后将小鼠取出放回笼中。

3.3小鼠脑组织内单胺类神经递质含量的测定

各组小鼠于末次给药30min后，除空白组外，其他各组均给予1min悬尾刺激。刺激后立即断头处死，取海马及皮层分别放入两支E.P管中。采用荧光分光光度法在激发光365nm，发射光480nm下测定海马区域中5-HT的含量。根据公式计算出含量。

含量（ng·g^-1）=（样品管荧光读数-组织空白荧光读数）/（标准管荧光读数-试剂空白荧光读数）标准浓度*标品体积*3/2.5*1/脑组织*1000

4.实验结果

实施例的白桦脂醇、白桦脂酸对慢性应激小鼠脑内单胺神经递质的影响，结果见表4。

表4实施例的白桦脂醇、白桦脂酸对慢性应激小鼠脑内单胺神经递质的影响

组别	剂量	5-HT(ng/g)
			空白对照组（蒸馏水）	0.1ml/10g	303.33±49.12
模型对照组（蒸馏水）	0.1ml/10g	233.43±35.61
			文拉法辛组	9.4mg/kg	308.34±82.59*
白桦脂醇低剂量组	2mg/kg	301.66±62.52
			白桦脂醇高剂量组	4mg/kg	326.96±65.75*
白桦脂酸低剂量组	12mg/kg	298.35±46.22*

白桦脂酸高剂量组

40mg/kg

311.49±71.14*

注：*与模型对照组比较P<0.05 **与模型对照组比较P<0.01

#与空白对照组比较P<0.05

从表中4结果可以看出，小鼠海马区域5-HT含量测定结果说明，与模型对照组相比，各给药组数值均有增高趋势。其中阳性组、白桦脂醇高剂量组、白桦脂酸低剂量组、白桦脂酸高剂量组存在统计学意义（P<0.05）。

Claims

1.白桦脂醇在制备预防和治疗失眠症、抑郁症药物中的应用。

2.白桦脂酸在制备预防和治疗失眠症、抑郁症药物中的应用。

3.一种包含白桦脂醇的抗失眠、抑郁的药物制剂，其特征在于，剂型为口服剂型或吸入剂。

4.一种包含白桦脂酸的抗失眠、抑郁的药物制剂，其特征在于，剂型为口服剂型或吸入剂。

5.根据权利要求3所述的含的白桦脂醇的抗失眠、抑郁的药物制剂，其特征在于，所述口服剂型为口腔崩解片。

6.根据权利要求4所述的含的白桦脂酸的抗失眠、抑郁的药物制剂，其特征在于，所述口服剂型为口腔崩解片。